Vliv selenu na metabolismus laboratorního potkana

Rozměr: px

Začít zobrazení ze stránky:

Download "Vliv selenu na metabolismus laboratorního potkana"

Robert Tichý
před 7 lety
Počet zobrazení:

1 Vysoká škola chemicko-technologická v Praze Vliv selenu na metabolismus laboratorního potkana Klára Truhlářová, FPBT BL 342

2 Vliv selenu na metabolismus laboratorního potkana Laboratoř živočišné biochemie B211 Ústav biochemie a mikrobiologie (320) FPBT Vedoucí práce: Zídková Jarmila RNDr. CSc. Konzultant: Melčová Magdalena Ing. 1

3 Selen esenciální stopový prvek antioxidační, chemopreventivní, protizánětlivé a antivirové účinky, pozitivní účinek na plodnost vyšší koncentrace: toxický, kancerogenní v organismu ve formě selenoproteinů 2

4 Selen hlavním zdrojem potrava + doplňky stravy DDD: 55 μg (zdravý dospělý člověk) max. denní příjem 400 μg nedostatek: poruchy plodnosti chronický nedostatek: onemocnění Keshan, Kashin-Beck chronický nadbytek: selenosa 3

5 Selenoproteiny enzymy, v aktivním centru AMK selenocystein (Sec) označení jako 21. kódovaná AMK především redoxní reakce selenocystein funkce při ochraně proti oxidačnímu stresu, při metabolismu štítné žlázy, ovlivnění tvorby hormonů štítné žlázy protizánětlivé funkce vliv na správný růst, vývoj a rozmnožování 4

6 Selenoproteiny a. glutathionperoxidasy (GPx) redukce peroxidu vodíku a organických hydroperoxidů ochrana buňky proti oxidačnímu stresu u člověka 5 typů (GPx1, GPx2, GPx3, GPx4, GPx6) b. thioredoxinreduktasy (TrxR) glutathion (γ-glu-cys-gly) součást redoxního systému 2 formy - pouze 1 selenoprotein (vyšší eukaryota) antioxidační ochrana, kontrola buněčného cyklu 5

7 Vybrané antioxidační enzymy a. katalasa (CAT) 2H 2 O 2 2H 2 O + O 2 ochrana před vyššími koncentracemi peroxidu vodíku katalasová + peroxidasová aktivita erytrocyty, játra b. glutathion-s-transferasy (GST) katalýza napojení GSH na xenobiotické substráty detoxikační funkce (toxické, karcinogenní látky, léky) 6

8 Vybrané antioxidační enzymy c. glutathionreduktasa (GR) redukce GSSG na GSH (udržení požadovaného poměru) ochrana proti oxidačnímu stresu 7

9 Cíl práce stanovení aktivity antioxidačních enzymů ve vybraných tkáních laboratorního potkana po podávání diety s různým obsahem řepkových pokrutin vybrané tkáně: stanovení v plasmě, erytrocytech samci kmene Wistar krmeni 63 dní 4 testovací skupiny (po 8): 1. standardní krmná dieta 2. obohacení řepkovou pokrutinou (30%) 3. obohacení řepkovou pokrutinou (60%) 4. obohacení řepkovou pokrutinou (100%) řepková pokrutina pěstována na půdě obohacené Se 8

10 Schéma Řepka olejná pěstovaná na Se obohacené půdě obohacené řepkové pokrutiny plasma erytrocyty 9 stanovení aktivity Wistar Kyoto

11 Stanovované parametry, metody stanovení specifických aktivit: 1. katalasy 2. glutathionperoxidasy 3. glutathionreduktasy 4. thioredoxinreduktasy 5. glutathion-s-transferasy 6. (superoxiddismutasy) spektrofotometrické měření při příslušné vlnové délce: úbytek absorbance nárůst absorbance 10

12 Metody 1. katalasa CAT 2H2O2 O2 2H2O pokles A při 240 nm (2 min., 25 C) 2. glutathionperoxidasa pokles A při 340 nm (5 min., 25 C) 3. glutathionreduktasa plasma: GPx ROOH 2GHS GSSG ROH H2O GSSG 2NADPH erytrocyty: NADPH GSH NADPH H DTNB H GR 2NADP 2GSH GR GSSG NADP GS TNB TNB GR GSSG NADP 2GSH 2GSH nárůst A při 412 nm (5 min., 25 C) pokles A při 340 nm (5 min., 25 C) 11

13 Metody 4. thioredoxinreduktasa redukce disulfidové vazby v DTNB vznik TNB přírůstek A při 412 nm (mezi 1. a 2. minutou, 25 C) 5. glutathion-s-transferasa GST GSH CDNB GS DNB HCl přírůstek A při 340 nm (5 min., 25 C) 12

14 a sp (U.mg -1 proteinů) Výsledky-plasma Specifická aktivita CAT Výběrová směrodatná odchylka testovací skupina 13

15 a sp (U.mg -1 proteinů) Výsledky-plasma Specifická aktivita GPx Výběrová směrodatná odchylka testovací skupina 14

16 a sp (U.mg -1 proteinů) Výsledky-plasma Specifická aktivita GR 0,40 0,35 0,30 0,25 0,20 Výběrová směrodatná odchylka 0,15 0,10 0,05 0, testovací skupina 15

17 a sp (U.mg -1 proteinů) Výsledky-plasma Specifická aktivita TrxR 0,25 0,20 0,15 Výběrová směrodatná odchylka 0,10 0,05 0, testovací skupina 16

18 a sp (U.mg -1 proteinů) Výsledky-plasma Specifická aktivita GST 6,0 5,0 4,0 3,0 Výběrová směrodatná odchylka 2,0 1,0 0, testovací skupina 17

19 Plány do budoucna stanovení specifické aktivity enzymů v lyzátech erytrocytů změření koncentrace bílkovin (popř. hemoglobinu) v lyzátech erytrocytů změření koncentrace redukovaného glutathionu v lyzátech erytrocytů stanovení obsahu selenu ve standardní krmné dietě, v řepkové pokrutině zahrnutí a proměření specifické aktivity dalšího antioxidačního enzymu: superoxiddismutasa (SOD) 18

20 Poděkování Zídková Jarmila RNDr. CSc. Melčová Magdalena Ing. kolektiv laboratoře B211 Fyziologický ústav AV ČR Česká zemědělská univerzita v Praze Děkuji za pozornost. Financováno z účelové podpory na specifický vysokoškolský výzkum MŠMT č.20/2014 a grantem GAČR S.

Podobné dokumenty

Antioxidační ochrana. Stárnutí. Antioxidanty v potravě

Antioxidační ochrana. Stárnutí. Antioxidanty v potravě MUDr. Jan Pláteník, PhD Ústav lékařské biochemie a laboratorní diagnostiky 1.LF UK Ionizační záření: Hydroxylový radikál vzniká ionizací vody: H 2