Využití metody kryoterapie pro ozdravení chmele od virových patogenů
|
|
- Eduard Kovář
- před 8 lety
- Počet zobrazení:
Transkript
1 Ing. Miloš Faltus, Ph.D. Ing. Jiří Zámečník, CSc. Ing. Petr Svoboda, CSc. Využití metody kryoterapie pro ozdravení chmele od virových patogenů CERTIFIKOVANÁ METODIKA Výzkumný ústav rostlinné výroby, v.v.i. Chmelařský institut s.r.o., Žatec 2012
2 Metodika je výstupem řešení výzkumného projektu NAZV QH91164 Využití kryoterapie k ozdravení bramboru a chmele od vybraných patogenů. Metodika proběhla oponentním řízením. O uplatnění metodiky byla dne uzavřena smlouva podle ustanovení 269 zákona č. 513/1991 Sb., obchodního zákoníku. UKZUZ Brno, jako certifikační orgán, vydal dne Osvědčení č.j /KÚ/UKZUZ/2012 o uznání uplatněné certifikované metodiky. Výzkumný ústav rostlinné výroby, v.v.i., Praha, 2012 ISBN:
3 Autoři: Ing. Miloš Faltus, Ph.D. (40%) Ing. Jiří Zámečník, CSc. (30%) Ing. Petr Svoboda, CSc. (30%) Název: Využití metody kryoterapie pro ozdravení chmele od virových patogenů Vydal: Výzkumný ústav rostlinné výroby, v.v.i. Drnovská 507, , Praha 6 Ruzyně Metodika je veřejně přístupná na adrese Náklad: 250 výtisků Vyšlo v roce 2012, první vydání Vydáno bez jazykové úpravy Kontakt na autory: faltus@vurv.cz zamecnik@vurv.cz p.svoboda@chmi.cz Autor fotografií: Miloš Faltus Výzkumný ústav rostlinné výroby, v.v.i., Praha, 2012 ISBN:
4 VYUŽITÍ METODY KRYOTERAPIE PRO OZDRAVENÍ CHMELE OD VIROVÝCH PATOGENŮ Vydal Výzkumný ústav rostlinné výroby, v.v.i
5 Miloš Faltus a kol. Využití metody kryoterapie pro ozdravení chmele od virových patogenů CERTIFIKOVANÁ METODIKA Vydal Výzkumný ústav rostlinné výroby, v.v.i
6 Využití metody kryoterapie pro ozdravení chmele od virových patogenů Tato metodika představuje moderní a velice účinnou metodu eliminace virových patogenů chmele pomocí působení kryogenních teplot. V metodice jsou popsány základní principy metody, postup přípravy rostlinného materiálu, vystavení kryogenním teplotám i princip následného hodnocení zdravotního stavu explantátů chmele pomocí metod ELISA. Tato metodika bude využita pro získání ozdraveného výchozího materiálu chmele pro produkci bezvirózní sadby chmele. Use of the cryotherapy for virus elimination in hop This method is a novel and highly effective method for elimination of some viral pathogens in hop by means of a cryogenic temperature treatment. Basic principles of the method, steps of explants preparation, cryogenic treatment and presence of viral pathogens evaluation are described. This method will be utilized for an improvement of virus-free planting material production efficiency in hop. Vydal Výzkumný ústav rostlinné výroby, v.v.i
7 Obsah: I. Cíl metodiky... 8 II. Vlastní popis metodiky... 8 A. Princip metody... 8 B. Materiál Přístrojové vybavení Chemikálie Drobné pomůcky Rostlinný materiál a kultivační podmínky Kultivační media Příprava sterilního silikagelu pro dehydrataci vzorků Metody diagnostiky a kontroly virových a viroidních patogenů C. Postup metody kryoterapie pro ozdravení chmele od virových patogenů Namnožení explantátů Předkultivace a otužování explantátů Izolace vzrostných vrcholů a jejich sycení sacharosou Dehydratace vzrostných vrcholů nad silikagelem Vystavení explantátů kryogenním teplotám Regenerace explantátů Testování zdravotního stavu III. Srovnání novosti postupů IV. Popis uplatnění metodiky V. Ekonomické aspekty VI. Seznam použité související literatury VII. Seznam publikací, které předcházely metodice VIII. Dedikace IX. Jména oponentů:
8 I. Cíl metodiky Cílem metodiky je definovat postup pro eliminaci virových patogenů pomocí metody kryoterapie. II. Vlastní popis metodiky A. Princip metody Tato metoda je založena na poznatku, že rostliny, respektive některé jejich části, jsou za jistých okolností schopny tolerovat působení ultranízkých teplot (bod varu tekutého dusíku, cca -196 C). Podstatou metody kryoterapie je vystavení zavirovaných explantátů ultranízké teplotě, které vede k poškození zpravidla diferencovaných rostlinných buněk. Pokud je distribuce viru v rostlinách omezena na diferencované buňky a meristém explantátu není viry zasažen, lze takto zbavit explantát přítomnosti virů. Ultranízká teplota tedy neničí samotný vir, ale pouze rostlinou buňku, která obsahuje vir. Tím dojde k eliminaci dalšího šíření viru v rostlině a při regeneraci explantátů dochází v optimálním případě k regeneraci pouze meristematické části, která je viruprostá. Účinnost této metody je závislá na distribuci viru v rostlině a na její toleranci vůči působení kryogenních teplot. B. Materiál 1. Přístrojové vybavení Pro provedení metody kryoterapie je třeba disponovat následujícím přístrojovým vybavením: Práce s tkáňovými kulturami rostlin v in vitro podmínkách: kultivační box laminární box Vybavení pro sterilizaci materiálu a kultivačních médií: autokláv horkovzdušný sterilizátor třepačka Přístroje pro přípravu a uchování kultivačních médií: analytické váhy přesné váhy ph-metr laboratorní míchačka mikrovlnná trouba chladnička Přístroje pro ELISA diagnostiku ELISA-reader vymývačka mikrotitračních destiček 8
9 Nádoby na tekutý dusík: Dewarova nádoba pro uchování tekutého dusíku polystyrénová nádoba na tekutý dusík polystyrénová nádoba na kryozkumavky v lázni tekutého dusíku Záznamy a výpočty: počítač tiskárna 2. Chemikálie V následujícím seznamu jsou uvedeny všechny chemikálie potřebné pro metodu kryoterapie pro ozdravení chmele od virových patogenů: Kultivační média: destilovaná voda makroelementy dusičnan amonný, dusičnan draselný, dusičnan vápenatý, dihydrogen fosforečnan draselný, chlorid vápenatý, síran hořečnatý mikroelementy - chlorid kobaltnatý, síran měďnatý, síran draselný, síran železnatý, kyselina boritá, jodid draselný, síran manganatý, molybdenan disodný, síran zinečnatý, železito-sodná sůl kyseliny etylendiaminotetraoctové vitamíny a další účinné látky thiamin, pyridoxin, kyselina nikotinová, glycin fytohormony kyselina indolyl-3-máselná, 6-benzylaminopurin, kyselina giberelová glukosa (P.A.) agar (Sigma Aldrich) Úprava ph média: hydroxid - hydroxid draselný kyselina - kyselina chlorovodíková Kryoprotektivní roztok: destilovaná voda sacharóza (P.A.) Chladící médium: tekutý dusík ELISA: imunodiagnostické soupravy pro detekci jednotlivých virů metodou ELISA (včetně pufrů, protilátek a substrátu) 3. Drobné pomůcky Následující pomůcky jsou potřebné pro realizaci metody kryoterapie pro ozdravení chmele od virových patogenů: Příprava médií, roztoků a jejich dávkování: Erlenmeyerova baňka 500 ml odměrný válec 1000 ml 9
10 Pasteurova pipeta 3 ml střička váženky dávkovač magnetické míchadlo kopisťka jednokanálové pipety, vícekanálové pipety a špičky Práce se sterilním materiálem: skalpel nůžky pinzety stojánek na nástroje hliníková folie Kultivace rostlin: kultivační zkumavky s hliníkovým uzávěrem (rozměry 12 x 1,7 cm) stojánek na zkumavky plastové kultivační nádoby (rozměry 10 x 10 x 9 cm, Duchefa) plastové Petriho misky (průměr 6 cm) skleněné Petriho misky (průměr 15 cm) Erlenmeyerova baňka (objem 25 ml) Izolace a dehydratace vzrostných vrcholů: injekční jehly (rozměry 0,7 x 40 mm) stříkačky (objem 10 ml) filtrační papír (průměr 11 cm) skleněné Petriho misky (průměr 4, 12, 15 a 20 cm) hliníkové plíšky (rozměr 20 x 6 x 0,05 mm) nádobky na silikagel (objem 200 ml) Kryoterapie: kryozkumavky (objem 1,8 ml, NUNC) polystyrénový džbán (objem 1L) stojánek na kryozkumavky Odtání vzorků: Erlenmeyerova baňka (objem 100 ml) nerezová miska parafilm ELISA: mikrotitrační destičky stojánky a kyvety 10
11 4. Rostlinný materiál a kultivační podmínky Pro metodu kryoterapie použijeme explantátové kultury chmele. Explantáty pěstujeme v aseptických podmínkách na pevném agarovém mediu v kultivačním boxu při teplotě 25 ± 1 C, hustotě světelného toku 80 µmol m -2 s -1 a fotoperiodě 16/8 h. Do kultivačních zkumavek s 5 ml média vložíme po jednom nodálním segmentu; do plastových krabiček se 100 ml media vložíme třicet nodálních segmentů. Otužování explantátů provádíme při stejném světelném režimu jako při kultivaci rostlin, ale při snížené teplotě (2 ± 1 C). 5. Kultivační media Pro kultivaci rostlin použijeme agarové kultivační medium podle Murashige a Skooga (1964) se sníženým obsahem dusíku (Tab. 1), bez rostlinných fytohormonů s 20 g l -1 glukosy a 6 g l -1 agaru (Faltus et al. 2007). Toto medium použijeme jak pro multiplikaci rostlin, tak pro otužování explantátů před kryoterapií. Pro regeneraci rostlin použijeme regenerační medium, které má shodné složení živin a vitamínů jako kultivační medium, ale obsah glukosy je zvýšený na 40 g l -1 a navíc do média přidáme směs fytohormonů (0,1 mg l benzylaminopurinu, 0,02 mg l -1 kyseliny giberelové a 0,01 mg l -1 kyseliny indolyl-3-máselné) (Faltus et al. 2007). Tab. 1: Složení modifikovaného kultivačního média podle Murashige a Skooga (1964) Složky média Chemický vzorec/ zkratka* Zastoupení jednotlivých složek v kultivačním médiu (mg l -1 ) MAKROELEMENTY Chlorid vápenatý CaCl 2 332,02 Dihydrogenfosforečnan draselný KH 2 PO Dusičnan draselný KNO Síran hořečnatý MgSO 4 180,54 Dusičnan amonný NH 4 NO 3 412,5 MIKROELEMENTY Chlorid vápenatý, hexahydrát CoCl 2.6H 2 O 0,025 Síran měďnatý, pentahydrát CuSO 4.5H 2 O 0,025 Železito-sodná sůl kyseliny FeNaEDTA * 36,7 etylendiaminotetraoctové Kyselina fosforečná H 3 PO 4 6,2 Jodid draselný KI 0,83 Síran manganatý, dihydrát MnSO 4.H 2 O 16,9 Molybdenan disodný Na 2 MoO 4.2H 2 O 0,25 Síran zinečnatý, heptahydrát ZnSO 4.7H 2 O 8,6 VITAMÍNY A DALŠÍ LÁTKY Glycin C 2 H 5 NO 2 2 Kyselina nikotinová C 6 H 5 NO 2 0,5 Myo-inositol C 6 H 12 O Pyridoxin C 8 H 11 NO 3 0,5 Thiamin C 12 H 17 N 4 OS 0,1 11
12 6. Příprava sterilního silikagelu pro dehydrataci vzorků Dehydrataci explantátů chmele provádíme ve skleněných nádobkách (200 ml) s 50 g vysušeného sterilního silikagelu. Silikagel sušíme dva dny v horkovzdušném sterilizátoru při teplotě 170 C. Po vysušení silikagelu nádobky uzavřeme a sterilujeme v horkovzdušném sterilizátoru dalších 10 hodin. 7. Metody diagnostiky a kontroly virových a viroidních patogenů Diagnostiku přítomnosti virových patogenů provádíme v první fázi hodnocení imunoenzymatickou metodou ELISA - Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay) (Svoboda 1993, Svoboda 2009) a následně bezvirózní stav ověřujeme pomocí molekulární metody PCR, která je velmi citlivá a umožňuje identifikovat genetickou sekvenci, typickou pro daný testovaný patogen (Petrzik, Svoboda 1997, Komínek, Svoboda 2003). Pro identifikaci viroidů použijeme molekulárně hybridizační metodu dot blot nebo metodu RT PCR (Svoboda 2009, Svoboda et al. 2009). C. Postup metody kryoterapie pro ozdravení chmele od virových patogenů Postup kryoterapie explantátů chmele lze rozdělit do sedmi postupných kroků: Namnožení explantátů Předkultivace a otužování explantátů Izolace vzrostných vrcholů a jejich sycení sacharosou Dehydratace vzrostných vrcholů nad silikagelem Vystavení explantátů kryogenním teplotám Regenerace explantátů Hodnocení přítomnosti virových patogenů Postup využití metody kryoterapie pro ozdravení chmele od virových patogenů je schematicky znázorněn na Obr Namnožení explantátů Explantáty chmele ve stáří 6 až 8 týdnů použijeme pro přípravu jedno-nodálních segmentů. Nodální segmenty kultivujeme v počtu 30-ti kusů v krabičkách se 100 ml multiplikačního media. Při první multiplikaci vysadíme jednu krabičku s třiceti nodálními segmenty a při druhé multiplikaci z třiceti explantátů odvodíme sto nodálních segmentů a vysadíme je do třech krabiček. 2. Předkultivace a otužování explantátů Nodální segmenty v počtu 100 kusů vysadíme do krabiček s 50 ml multiplikačního media. Od každého genotypu vysadíme 300 nodálních segmentů. Po 7 až 10 dnech kultivace při 25 C krabičky s nodálními segmenty přeneseme do kultivačního boxu s teplotou 2 C. Po 7 až 10 dnech otužování nízkou teplotou aplikujeme do krabiček s nodálními segmenty 25 ml 0,7 M roztoku sacharosy, který necháme působit dalších 7 až 10 dní. 12
13 Namnožení explantátů Předkultivace nodálních segmentů Otužování nízkou teplotou Aplikace 0,7 M sacharosy Umístění vrcholů na plíšky Sycení vrcholů 0,7 M sacharosou Izolace vzrostných vrcholů Dehydratace vrcholů nad silikagelem Vystavení explantátů kryogenním teplotám (vlastní kryoterapie) Odtátí vzorků ve vodní lázni Regenerace explantátů pro testy zdravotního stavu Vysázení na regenerační medium Obr. 1. Postup kryoterapie explantátových kultur chmele. 13
14 3. Izolace vzrostných vrcholů a jejich sycení sacharosou Vzrostné vrcholy (o velikosti 1 až 2 mm) izolujeme z nodálních segmentů pomocí injekční jehly, kterou použijeme jako mikroskalpel. Vrcholy chmele umístíme do Petriho miskek (12 cm) na sterilní filtrační papír nasycený 0,7 M roztokem sacharosy (14 ml) s fytohormony (0,02 mg l -1 kyseliny giberelové, 0,1 mg l -1 kyseliny indolyl-3-máselné, 0,01 mg l benzylaminopurinu) po dobu 20 hodin při teplotě 22 C. 4. Dehydratace vzrostných vrcholů nad silikagelem Vrcholy chmele nasycené sacharosou umístíme na hliníkové plíšky po deseti kusech a vždy dva plíšky umístíme do jedné Petriho misky (4 cm). Spodní díl Petriho misky s plíšky a explantáty umístíme pomocí sterilní pinzety do nádoby se silikagelem. Dehydrataci vzrostných vrcholů chmele provádíme při teplotě C. Po 1,5 až 2 hodinách dehydratace explantátů vysušíme materiál přibližně na obsah vody 0,4 g v 1 g sušiny. Uvedená doba dehydratace platí pouze pro nádoby a množství silikagelu a rostlinného materiálu, které jsou uvedeny v této metodice; jakákoliv změna způsobuje změnu doby dehydratace vzrostných vrcholů. Obsah vody ve vzorcích stanovíme vážením u kontrolních vzorků, které vysušíme v sušárně. Nejprve stanovíme hmotnost vzorků před dehydratací, poté hmotnost vzorků po dehydrataci a nakonec hmotnost sušiny po dosušení vzorků v sušárně při 105 C po dobu 72 hodin. 5. Vystavení explantátů kryogenním teplotám Po vysušení jsou explantáty přilepeny k plíškům zaschlým přebytkem roztoku sacharosy. Díky tomu můžeme s plíšky manipulovat, aniž by došlo k náhodnému odpadnutí explantátu. Nejprve si připravíme polystyrenovou nádobu, která slouží jako stojánek pro kryozkumavky a zároveň jako nádoba na tekutý dusík. Tuto nádobu naplníme tekutým dusíkem a pak do ní umístíme kryozkumavky a i ty naplníme tekutým dusíkem. Plíšky s explantáty pomocí pinzety co nejrychleji ponoříme do tekutého dusíku v polystyrenové nádobě. Po ochlazení explantátů na teplotu tekutého dusíku (-196 C) plíšky umístíme do kryozkumavky a uzavřeme je víčkem. Víčko kryozkumavky nedotahujeme, ale mohl tekutý dusík pronikat přes závit do kryozkumavky. 6. Regenerace explantátů Standardní doba pobytu vzorků v tekutém dusíku je 60 minut. Po otevření víčka hliníkové plíšky rychle vytáhneme pinzetou z kryozkumavek a i s vrcholy je ponoříme do vodní lázně o laboratorní teplotě. Explantáty, po jejich odlepení z plíšků, vyjmeme z vody a přeneseme je na regenerační medium s fytohormony (0,1 mg l -1 6-benzylaminopurinu, 0,02 mg l -1 kyseliny giberelové a 0,01 mg l -1 kyseliny indolyl-3-máselné). Hodnocení životnosti rostlin provedeme po dvou týdnech a hodnocení regenerace po osmi týdnech od vysazení. Za živé považujeme explantáty, u nichž je patrný růst a nedochází u nich ke ztrátě chlorofylu. Apikální růst spojený s tvorbou stonku označujeme jako regeneraci. 7. Testování zdravotního stavu Rostliny chmele in vitro, které zregenerovaly po kryoterapii otestujeme pomocí testu ELISA na konkrétní vir. Toto hodnocení, které považujeme jen za předběžné, umožňuje provést první selekci ozdravených a neozdravených materiálů. Koncentrace viru může být v důsledku 14
15 terapie dočasně snížena až pod hranici detekčního limitu a je zde vážné nebezpečí zpětné reinfekce, tzn., že vzniká falešný negativní výsledek, který může být pro další rozhodování a práci velmi nebezpečný. Vlastní diagnostiku provádíme pomocí metody ELISA podle Svobody (2009) a Svobody et al. (2010). U materiálů, u nichž jsme neprokázali virovou infekci při orientačním prvním hodnocení přímo z rostlinek in vitro, provedeme komplexní hodnocení zdravotního stavu rostlin po následujících 8-12 týdnech pěstování ve skleníku v izolované kóji. Hodnocení provádíme opět pomocí metody ELISA na konkrétní viry, přičemž u materiálů, které jsou i po druhém hodnocení negativní, provedeme hodnocení pomocí molekulárně-genetické metody PCR (Petrzik, Svoboda 1997, Komínek, Svoboda 2003, Svoboda et al. 2010). Materiály, které jsou opakovaně negativní, přeneseme do technického izolátu a zahájíme jejich množení pro kontrolní výsadbu ve chmelnici, kde bude provedeno komplexní sledování a hodnocení z pohledu fenologicko-genetického, zdravotního stavu a výnosových parametrů. III. Srovnání novosti postupů Zdravotní stav má rozhodující úlohu v systému pěstování dané plodiny. Chmel množený vegetativním způsobem a pěstovaný mnoho let na jednom stanovišti je silně vystaven infekci ze strany virových a viroidních patogenů. Proto byla vždy jeho zdravotnímu stavu věnována značná pozornost. V České republice je tato problematika velmi významná, protože na rozdíl od jiných zemí pěstujících chmel, v České republice z celkové plochy chmele ha zaujímá ha tj % (stav k ) pouze jedna odrůda a to světově proslavený Žatecký poloraný červeňák. Získání zdravé sadby a její pěstování má proto mimořádný hospodářský význam pro celé české chmelařství. Žatecký poloraný červeňák jako stará původní odrůda, je plně infikován viry a viroidy. Nové moderní odrůdy získané křížením jsou již relativně zdravé, protože většina těchto patogenů se nepřenáší semeny. Proto také v ostatních zemích, kde se takové odrůdy ve zvýšené míře pěstují, nemá ozdravování takový význam, nebo se provádí pouze v omezené míře. Všeobecné podmínky pro přípravu výchozího sadbového materiálu a systému hodnocení zdravotního stavu uvádí schémata Evropské organizace pro ochranu rostlin (European and Mediterranean Plant Protection Organization - EPPO). Ta uvádí přehled jednotlivých nežádoucích patogenů, metody jejich diagnostiky a limity jejich možného výskytu v sadbovém materiálu. Na základě hodnocení zdravotního stavu proto rozlišujeme tzv. zdravotní třídu VF (virus free) rostlinný materiál prostý všech známých patogenů pro danou plodinu a třídu VT (virus tested) rostlinný materiál bez přítomnosti vybraných závažných patogenů, které schémata EPPO uvádí. Na tyto všeobecné a závazné předpisy navazuje národní legislativa. Zákon o osivu a sadbě č. 316/2006 Sb. a dále vyhláška č. 332/2006 Sb. o množitelských porostech a rozmnožovacím materiálu chmele, révy, ovocných rodů a druhů a okrasných druhů a jejich uvádění do oběhu, stanoví základní podmínky pro množení sadby chmele a její uvádění do pěstitelské praxe. V minulosti byla u chmele popsána celá řada chorob virového původu (Blatný a Osvald, 1950). Název chorob vycházel ze symptomatologického hodnocení. Jejich výskyt byl dán původem pěstovaného chmele a způsobem rozmnožování sadby chmele. Jednalo se především o choroby mosaikového typu, které bylo možno postihnout na základě vizuálních symptomů. Proto bylo v padesátých letech minulého století zavedeno uznávací řízení matečných chmelnic, z kterých byla odebírána sadba pro množení. Byl prováděn tzv. 15
16 negativní výběr, což znamenalo fyzickou likvidaci napadených nebo podezřelých rostlin z porostu, který byl určen pro odběr sadbového materiálu. Prakticky to znamenalo soustavné ozdravování, protože sadba byla odebírána z chmelnic, které neobsahovaly viditelně napadené rostliny. Tím byla celá řada onemocnění prakticky zlikvidována a v porostech chmele zůstaly pouze rostliny bez příznaků, vizuálně zdravé. Bylo to na svou dobu velmi účinné řešení, ale na druhou stranu to ale znamenalo, že nadále byl odbírán sadbový materiál z rostlin latentně infikovaných tj. bez vizuálních příznaků a virové infekce byly dále šířeny pomocí sadby. Nástup moderních a objektivních diagnostických metod v 80. letech umožnil v praxi rychle a spolehlivě identifikovat původce skrytých infekcí tj. viry a dále také viroidy a zahájit jejich eliminaci. U chmele na území České republiky byly identifikovány následující viry a viroidy, viz. Tab.2. Tab.2. Přehled virových chorob chmele Český název Vědecký název Označení Viry Virus mozaiky jabloně Apple mosaic virus ApMV Virus nekrotické kroužkovitosti Prunus necrotic ringspot virus PNRSV slivoně Virus mozaiky chmele Hop mosaic virus HpMV Latentní virus chmele Hop latent virus HpLV Viroidy Latentní viroid chmele Hop latent viroid HLVd Na základě vědeckého rozvoje v oblasti diagnostiky a biotechnologických metod bylo možné přistoupit k odstranění patogenů, které latentně infikují chmel a nevytváří viditelné příznaky. Proto bylo přistoupeno v 80. letech minulého století k ozdravovacímu procesu českého chmele. Vrcholová pletiva rostlin, která obsahují aktivní dělicí buňky tzv. meristémy, neobsahují viry a je z nich možné kultivací ve zkumavkách získat ozdravené rostliny bez virů. Pro zdokonalení ozdravení a zvýšení úspěšnosti se tato technika kombinuje s termoterapií, kdy ve speciálním zařízení tzv. termokomoře, jsou rostliny udržovány při teplotách nad 35 C a vlivem působení tepla dojde k omezení množení termolabilních virů a jejich následnému odstranění, v našem případě viru mozaiky jabloně ApMV (Svoboda 2003). Další metodou, která využívá speciálních chemických látek omezujících množení viru, je tzv. chemoterapie. K získání ozdravených materiálů chmele je dnes v ČR nejčastěji využíván odběr vrcholových meristematických pletiv a jejich kultivace v in vitro podmínkách kombinovaná s termoterapií, při které však dochází v důsledku teplotního stresu k vysokému úhynu ozdravovaného materiálů. Nově navržená metoda kryoterapie zvyšuje efektivnost procesu ozdravování chmele ve srovnání s tradičními metodami ozdravování u vybraných virů. Tato metoda je účinná pro eliminaci virů ApMV a HpMV (15 až 88 %). Hlavní předností metody je však zkrácení doby ozdravování, protože pro ozdravení stačí pouze jeden cyklus působení kryogenních teplot. 16
17 IV. Popis uplatnění metodiky Uživatelem metodiky Kryoterapie je Svaz pěstitelů chmele. Využitím této metodiky pro ozdravení chmele od virových patogenů dojde ke zkrácení a zefektivnění procesu ozdravování sadbového materiálu chmele. V. Ekonomické aspekty Náklady na zavedení metody Náklady na zavedení postupů uvedených v metodice závisí na tom, jestli se zavádí nově celý provoz pro práci s rostlinami v aseptických podmínkách nebo se pouze implementuje metodika ozdravování explantátů pomocí kryoterapie do stávajících provozů tkáňových kultur. V případě, že laboratoř již postup kultivace explantátů používá, jsou náklady na zavedení postupu dané pouze nákupem chemikálií a pomůcek pro kryoterapii, pokud nejsou již k dispozici. Náklady na zavedení celého aseptického provozu jsou následující: Vybavení pro sterilizaci materiálu a kultivačních médií: autokláv od 105 tis. Kč (repasovaný do 40 tis. Kč) horkovzdušný sterilizátor od 34 tis. Kč třepačka od 38 tis. Kč Celkem od 177 tis. Kč (112 tis. Kč) Práce s tkáňovými kulturami rostlin v in vitro podmínkách: kultivační box od 300 tis. Kč (repasovaný od 200 tis. Kč) laminární box od 150 tis. Kč Celkem od 450 tis. Kč (350 tis. Kč) Přístroje pro přípravu a uchování kultivačních médií: analytické váhy od 43 tis. Kč (bez interní kalibrace od 23 tis. Kč) přesné váhy od 7,5 tis. Kč stolní ph-metr od 25 tis. Kč laboratorní míchačka od 5 tis. Kč chladnička cca 4 tis. Kč mikrovlnná trouba cca 1 tis. Kč dávkovač od 4 tis. Kč pipety (3 ks) od 7 tis. Kč Celkem od 96,5 tis. Kč (76,5 tis. Kč) Přístroje pro ELISA diagnostiku ELISA reader Vymývačka mikrotitr. destiček Vícekanálové pipety Celkem od 200 tis. Kč od150 tis. Kč od 20 tis. Kč od 370 tis. Kč 17
18 Spotřební materiál Sklo Plasty Chemikálie Pinzety, nůžky, skalpely Celkem Cena za zavedení celého provozu cca 10 tis. Kč cca 12 tis. Kč cca 35 tis. Kč cca 5 tis. Kč cca 62 tis. Kč 1156 tis. Kč (971 tis. Kč) Z uvedeného přehledu je patrné, že zavedení celého provozu ozdravování explantátů chmele v in vitro podmínkách začíná na částce přibližně 970 tis. Kč, která je odvozena od nákladů za vybavení laboratoře přístroji pro práci s materiálem v aseptických podmínkách a ELISA diagnostiky. Protože se předpokládá, že nová metodika nahradí stávající postupy eliminace některých patogenů chmele, lze konstatovat, že náklady na zavedení celého provozu nepřekročí náklady na spotřební materiál potřebný pro metodu kryoterapie bez diagnostiky virů, tedy přibližně do 40 tis. Kč. Ekonomický přínos pro uživatele Rozsah uplatnění metodiky je daný efektivitou metody pro jednotlivé druhy virů chmele. Bylo zjištěno, že metoda kryoterapie je účinná na eliminaci viru mozaiky jabloně (ApMV) a viru mozaiky chmele (HpMV). Tyto viry se vyskytují v ozdravované sadbě; tím je podmíněna i míra rozsahu uplatnění metodiky kryoterapie pro eliminaci virů chmele. Předpokládané ekonomické přínosy a další přínosy jsou odvozeny od zkrácení doby vedení explantátů ve specifikovaných podmínkách in vitro o cca 50% oproti původním postupům (zejména termoterapie v kombinaci s kulturou vrcholových meristémů). Kalkulované náklady na ozdravování lze tak snížit v rozsahu odpovídajícímu zkrácení doby vedení a pasážování v podmínkách in vitro. Vzhledem k tomu, že nová metodika povede ke zkrácení postupu ozdravování sadby, předpokládá se úspora nákladů ve výši 1 tis. Kč na jeden ozdravovaný genotyp. Další ekonomické přínosy se předpokládají po předání ozdravené sadby odrůdy Kazbek pěstitelům. Jedná se o novou odrůdu, s jejímž pěstováním se začíná. Při roční výměře 2 ha a průměrném výnosu 2t/ha suchého chmele s průměrnou cenou 90 tis. Kč na tunu lze očekávat počáteční tržby u pěstitelů na úrovni 360 tis. Kč, což za 10 let užívání porostu v chmelnici představuje přínos tis Kč. VI. Seznam použité související literatury Blattný, C., Osvald, V., 1950: Jen zdravý a jakostní chmel. Praha nakl. Brázda, 366 s. Faltus M., Bilavčík A., Zámečník J., Svoboda P., 2007: Effect of phytohormone composition of nutrient medium on in vitro plant regeneration in hop clones with different sensitivity to indole-3-butyric acid, Advances in Horticultural Science, 21(4), Murashige T., Skoog F.A., 1962: A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures. Physiol. Plant 15,
19 VII. Seznam publikací, které předcházely metodice Komínek, P., Svoboda, P., Ghanem-Sabanadzovic, N, 2003: Improved detection of Arabis mosaic virus in grapevine and hop plants, Acta virologica 47, Petrzik, K., Svoboda, P., 1997: Screening of Apple mosaic virus in hop cultivars in the Czech republic by reverse transcription polymerase chain reaction. Acta virologica 41, 1997, Svoboda P., 1993: Zjištění přítomnosti carlavirů a ilarvirů u českých odrůd chmele, Ochrana rostlin, 4, Svoboda, P. Patzak, J., Matoušek J., 2009: Metodika diagnostiky latentního viroidu chmele HLVd (Hop latent viroid), Metodika pro praxi 04/2009 b, ISBN Svoboda, P., Brynda, M., 2010: Technologie množení chmele. Metodika pro praxi, 6/2010, IBSN Svoboda, P., 2009: Metodika diagnostiky virů chmele a ochrana proti virovým chorobám. Metodika pro praxi 3/2009 a, ISBN Svoboda, P., 2003: Ozdravovací proces českého chmele. Mezinárodní vydání Český chmel 2003 Zámečník J., Faltus M., Bilavčík A., 2007: Cryoprotocols used for cryopreservation of vegetatively propagated plants in the Czech cryobank, Advances in Horticultural Science, 21(4), s Zámečník J., Bilavčík A., Faltus M., 2007: Metody dehydratace vzrostných vrcholů pro kryoprezervaci vegetativně množených plodin, ISBN , In: Vliv abiotických a biotických stresů na vlastnosti rostlin 2007, Praha , s Zámečník J., Faltus M., Bilavčík A., 2006: Conservation of biodiversity of vegetative propagated crops by cryopreservation methods, In: Plenary papers of the Conference "Biotechnology 2006", 15th-16th February 2006, University of South Bohemia, České Budějovice, s VIII. Dedikace Metodika je výstupem řešení výzkumného projektu NAZV QH91164 Využití kryoterapie k ozdravení bramboru a chmele od vybraných patogenů. IX. Jména oponentů: Odborný oponent: Ing. Břetislav Křižan, Ph.D. Mendelova univerzita v Brně, Zahradnická fakulta, Valtická 337, Lednice Oponent ze státní správy: Ing. Vladimír Barborka ÚKZÚZ - Sekce rostlinné výroby, Oddělení chmele, Chmelařské náměstí 1612, Žatec 19
Kryokonzervace révy vinné
Ing. Miloš Faltus, Ph.D. Ing. Renata Kotková RNDr. Alois Bilavčík, Ph.D. Ing. Jiří Zámečník, CSc. Kryokonzervace révy vinné CERTIFIKOVANÁ METODIKA Výzkumný ústav rostlinné výroby, v.v.i. 2012 Metodika
VíceVyužití metody kryoterapie pro ozdravení bramboru od virových patogenů
Ing. Miloš Faltus, Ph.D. Ing. Jiří Zámečník, CSc. Ing. Petr Dědič, CSc. Ing. Vendulka Horáčková, CSc. Využití metody kryoterapie pro ozdravení bramboru od virových patogenů CERTIFIKOVANÁ METODIKA Výzkumný
VíceKonzervace genetických zdrojů chmele (Humulus lupulus, L.) pomocí metody kryoprezervace
Ing. Miloš Faltus, Ph.D. Ing. Jiří Zámečník, CSc. Konzervace genetických zdrojů chmele (Humulus lupulus, L.) pomocí metody kryoprezervace METODIKA PRO PRAXI Výzkumný ústav rostlinné výroby, v.v.i. 2008
VíceKultivace révy vinné v in vitro podmínkách
Ing. Miloš Faltus, Ph.D. RNDr. Ondřej Skala RNDr. Alois Bilavčík, Ph.D. Ing. Jiří Zámečník, CSc. Kultivace révy vinné v in vitro podmínkách CERTIFIKOVANÁ METODIKA Výzkumný ústav rostlinné výroby, v.v.i.
VíceMetodika kryokonzervace genetických zdrojů chmele
Ing. Miloš Faltus, Ph.D. Ing. Petr, Svoboda, CSc. RNDr. Alois Bilavčík, Ph.D. Ing. Jiří Zámečník, CSc. UPOZORNĚNÍ! Uvedená metodika neprošla dosud oponentním řízením a certifikací a její text není definitivní.
VíceKryokonzervace bramboru (Solanum tuberosum, L.)
Ing. Miloš Faltus, Ph.D. Ing. Jiří Zámečník, CSc. Kryokonzervace bramboru (Solanum tuberosum, L.) METODIKA PRO PRAXI Výzkumný ústav rostlinné výroby, v.v.i. 2008 Metodika je výstupem řešení výzkumného
VíceTkáňové kultury rostlin. Mikropropagace
Tkáňové kultury rostlin Mikropropagace IN VITRO KULTURY (EXPLANTÁTOVÉ KUTLURY, ROSTLINNÉ EXPLANTÁTY) Izolované rostliny, jejich orgány, pletiva či buňky pěstované in vitro ve sterilních podmínkách Na kultivačních
VíceMetodika kryokonzervace citlivých genotypů bramboru
Ing. Miloš Faltus, Ph.D. RNDr. Alois Bilavčík, Ph.D. Ing. Jiří Zámečník, CSc. Metodika kryokonzervace citlivých genotypů bramboru CERTIFIKOVANÁ METODIKA Výzkumný ústav rostlinné výroby, v.v.i. 2016 Metodika
VíceMetodika kryokonzervace genetických zdrojů chmele
Ing. Miloš Faltus, Ph.D. Ing. Petr, Svoboda, CSc. RNDr. Alois Bilavčík, Ph.D. Ing. Jiří Zámečník, CSc. Metodika kryokonzervace genetických zdrojů chmele METODIKA Výzkumný ústav rostlinné výroby, v.v.i.
VíceMetodika kryokonzervace bramboru pomocí vitrifikace METODIKA. Výzkumný ústav rostlinné výroby, v.v.i.
Ing. Miloš Faltus, Ph.D. Ing. Jaroslava Domkářová, Ph.D., MBA, LL.M. Ing. Vendulka Horáčková, CSc. RNDr. Alois Bilavčík, Ph.D. Ing. Jiří Zámečník, CSc. UPOZORNĚNÍ! Uvedená metodika neprošla dosud oponentním
VíceMetodika kryokonzervace bramboru pomocí vitrifikace METODIKA. Výzkumný ústav rostlinné výroby, v.v.i.
Ing. Miloš Faltus, Ph.D. Ing. Jaroslava Domkářová, Ph.D., MBA, LL.M. Ing. Vendulka Horáčková, CSc. RNDr. Alois Bilavčík, Ph.D. Ing. Jiří Zámečník, CSc. Metodika kryokonzervace bramboru pomocí vitrifikace
VíceJiří Zámečník Martin Grospietsch Renata Kotková Miloš Faltus Konzervace genetických zdrojů Allium pomocí metody kryoprezervace
Jiří Zámečník Martin Grospietsch Renata Kotková Miloš Faltus Konzervace genetických zdrojů Allium pomocí metody kryoprezervace CERTIFIKOVANÁ METODIKA Výzkumný ústav rostlinné výroby, v.v.i. 2012 Autorský
VíceÚSTŘEDNÍ KONTROLNÍ A ZKUŠEBNÍ ÚSTAV ZEMĚDĚLSKÝ
ÚSTŘEDNÍ KONTROLNÍ A ZKUŠEBNÍ ÚSTAV ZEMĚDĚLSKÝ Rostlinolékařská diagnostika pověřování externích laboratoří Václav Čermák Odbor diagnostiky Pověřování rostlinolékařskou diagnostikou Pověřování v rámci
VíceMetodika fotoautotrofní kultivace rostlin za podmínek in vitro. Dostupný z
Ševčíková, Hana Dostupný z http://www.nusl.cz/ntk/nusl-263431 Dílo je chráněno podle autorského zákona č. 121/2000 Sb. Tento dokument byl stažen z Národního úložiště šedé literatury (NUŠL). Datum stažení:
VíceNárodní ozdravovací program pro ozdravení rozmnožovacího materiálu (dále jen NOPRM )
Ministerstvo zemědělství Čj.: 74248/2014-MZE-17221 V Praze, dne 9. prosince 2014 Národní ozdravovací program pro ozdravení rozmnožovacího materiálu (dále jen NOPRM ) ovocných rostlin, révy a chmele v České
VíceSpektrofotometrické stanovení fosforečnanů ve vodách
Spektrofotometrické stanovení fosforečnanů ve vodách Úkol: Spektrofotometricky stanovte obsah fosforečnanů ve vodě Chemikálie: 0,07165 g dihydrogenfosforečnan draselný KH 2 PO 4 75 ml kyselina sírová H
Vícein vitro biotechnologií v ovocnářství
Metodické listy OPVK Využití moderních in vitro biotechnologií v ovocnářství 19. ZALOŽENÍ IN VITRO KULTURY Založení in vitro kultury sterilizace výchozího explantátu Úvod Ovocné druhy lze kromě přirozených
VíceINDUKCE TVORBY MIKROHLÍZEK BRAMBORU IN VITRO
Úloha č. 14 Indukce tvorby hlíz in vitro na jednonodálních segmentech rostlin bramboru -1 - INDUKCE TVORBY MIKROHLÍZEK BRAMBORU IN VITRO TUBERIZACE BRAMBOR (Solanum tuberosum) Tuberizace je morfogenetický
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU PROBIOTICKÝCH BAKTERIÍ RODU ENTEROCOCCUS
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU PROBIOTICKÝCH BAKTERIÍ RODU ENTEROCOCCUS 1 Rozsah a účel Postup slouží ke stanovení počtu probiotických bakterií v doplňkových látkách, premixech
VíceNárodní ozdravovací program pro ozdravení RM (dále jen NOPRM )
Ministerstvo zemědělství Čj.: 64262/2017-MZE-17221 V Praze, dne 26/10/2017 Národní ozdravovací program pro ozdravení RM (dále jen NOPRM ) ovocných rostlin, révy a chmele v České republice (dále jen ČR
VíceMetodika ozdravování česneku od virů pomocí kultivace meristému a in vitro kultur
Metodika ozdravování česneku od virů pomocí kultivace meristému a in vitro kultur Břetislav Křižan, Eva Ondrušiková, Martina Kudělková Lenka Wasserbauerová, Jana Krajíčková Kateřina Smékalová, Karel Dušek
VíceNávod k laboratornímu cvičení. Bílkoviny
Úkol č. 1: Důkazy bílkovin ve vaječném bílku a) natvrdo uvařené vejce s kyselinou dusičnou Pomůcky: Petriho miska, pipeta, nůž. Návod k laboratornímu cvičení Bílkoviny Chemikálie: koncentrovaná kyselina
VíceKultivační metody stanovení mikroorganismů
Kultivační metody stanovení mikroorganismů Základní rozdělení půd Syntetická, definovaná media, jednoduché sloučeniny, známé sloţení Komplexní media, vycházejí z ţivočišných nebo rostlinných tkání a pletiv,
VíceZPRÁVA ZA VÝSLEDKY ŘEŠENÍ VÝZKUMNÉHO PROGRAMU 3.d ZA ROK Tagro Červený Dvůr spol. s r.o. (IČO: )
ZPRÁVA ZA VÝSLEDKY ŘEŠENÍ VÝZKUMNÉHO PROGRAMU 3.d ZA ROK 2008-2013 Tagro Červený Dvůr spol. s r.o. (IČO: 49050656) 1. TITULNÍ LIST Podpora tvorby rostlinných genotypů s vysokou rezistencí k biotickým i
VíceKladné saldo zahraničního obchodu s českým chmelem zůstává
Kladné saldo zahraničního obchodu s českým chmelem zůstává ::: České obchodní firmy v kalendářním roce 2013 vyvezly celkem 3.531 tun českého chmele. ::: ::: Hodnota českého vývozu dosáhla téměř tři čtvrtě
VíceTermochemie. Úkol: A. Určete změnu teploty při rozpouštění hydroxidu sodného B. Určete reakční teplo reakce zinku s roztokem měďnaté soli
1. Termochemie Úkol: Určete změnu teploty při rozpouštění hydroxidu sodného B. Určete reakční teplo reakce zinku s roztokem měďnaté soli Pomůcky : a) kádinky, teploměr, odměrný válec, váženka, váhy, kalorimetr,
VíceZÁVĚREČNÁ ZPRÁVA PROJEKTU DOTAČNÍHO TITULU 3.d. za dobu řešení 2008-2013
ZÁVĚREČNÁ ZPRÁVA PROJEKTU DOTAČNÍHO TITULU 3.d. za dobu řešení 2008-2013 1. TITULNÍ LIST Podpora tvorby rostlinných genotypů s vysokou rezistencí k biotickým i abiotickým faktorům a diferencovanou kvalitou
VíceNávod k laboratornímu cvičení. Efektní pokusy
Návod k laboratornímu cvičení Efektní pokusy Úkol č. 1: Chemikova zahrádka Pomůcky: skleněná vana, lžička na chemikálie. Chemikálie: vodní sklo, síran zinečnatý ZnSO 4 (X i ), síran železnatý FeSO 4, chlorid
VíceAktuální situace v oblasti ekologických osiv v ČR. Ing. Petr KONVALINA, Ph.D. Jihočeská univerzita v Českých Budějovicích
Aktuální situace v oblasti Ing. Petr KONVALINA, Ph.D. Jihočeská univerzita v Českých Budějovicích Úvod: Ekologické zemědělství v ČR (31.12.2010) 3 517 registrovaných podniků 448 202 ha zemědělské půdy
VíceMetodické postupy mikropropagace a rhizogeneze zvonovce liliolistého
MGSII-17 Záchranný program pro zvonovec liliolistý (Adenophora liliifolia) Metodické postupy mikropropagace a rhizogeneze zvonovce liliolistého Závěrečná zpráva Zpracoval Výzkumný ústav lesního hospodářství
VíceMetodika stanovení kyselinové neutralizační kapacity v pevných odpadech
Metodika stanovení kyselinové neutralizační kapacity v pevných odpadech 1 Princip Principem zkoušky je stanovení vodného výluhu při různých přídavcích kyseliny dusičné nebo hydroxidu sodného a následné
VíceÚLOHA 1: Stanovení koncentrace kyseliny ve vzorku potenciometrickou titrací
UPOZORNĚNÍ V tabulkách pro jednotlivé úlohy jsou uvedeny předpokládané pomůcky, potřebné pro vypracování experimentální části úlohy. Některé pomůcky (lžička, váženka, stopky, elmag. míchadélko, tyčinka
VíceZÁVĚREČNÁ ZPRÁVA PROJEKTU DOTAČNÍHO TITULU 3.d. za dobu řešení 2008 2013
ZÁVĚREČNÁ ZPRÁVA PROJEKTU DOTAČNÍHO TITULU 3.d. za dobu řešení 2008 2013 1. TITULNÍ LIST Podpora tvorby rostlinných genotypů s vysokou rezistencí k biotickým i abiotickým faktorům a diferencovanou kvalitou
VíceCvičení ke kurzu Obecná ekotoxikologie. Úloha A - Stanovení ekotoxicity v testu klíčení rostlin
Cvičení ke kurzu Obecná ekotoxikologie Nutné potřeby, které studenti přinesou s sebou do cvičení: - Tento návod - Poznámkový sešit, psací potřeby - Nůžky - Pravítko (s milimetrovým rozlišením) - Přezůvky
VíceZPRÁVA ZA DÍLČÍ VÝSLEDKY ŘEŠENÍ VÝZKUMNÉHO PROGRAMU 3.d ZA ROK 2014
ZPRÁVA ZA DÍLČÍ VÝSLEDKY ŘEŠENÍ VÝZKUMNÉHO PROGRAMU 3.d ZA ROK 2014 1. TITULNÍ LIST Podpora tvorby rostlinných genotypů s vysokou rezistencí k biotickým i abiotickým faktorům a diferencovanou kvalitou
VíceNávod k laboratornímu cvičení. Kovy a elektrochemická(beketovova) řada napětí kovů
Návod k laboratornímu cvičení Kovy a elektrochemická(beketovova) řada napětí kovů Úkol č. 1: Barvení plamene Pomůcky: kahan, zápalky, tuha upevněná ve verzatilce nebo platinový drátek Chemikálie: nasycené
VíceMetodika řízkování podnoží vybraných ovocných druhů
Výzkumný a šlechtitelský ústav ovocnářský Holovousy s.r.o. Mendelova univerzita v Brně, Zahradnická fakulta v Lednici Metodika řízkování podnoží vybraných ovocných druhů Tomáš Nečas, Jan Náměstek, Luděk
VíceOdběr a transport biologického materiálu do mikrobiologické laboratoře. Jana Juránková OKM FN Brno
Odběr a transport biologického materiálu do mikrobiologické laboratoře Jana Juránková OKM FN Brno Správný výsledek mikrobiologického vyšetření začíná správným odběrem biologického materiálu a jeho správným
VíceVýzkumný a šlechtitelský ústav ovocnářský Holovousy, s.r.o.
Výzkumný a šlechtitelský ústav ovocnářský Holovousy, s.r.o. Výzkumný a šlechtitelský ústav ovocnářský Holovousy, s.r.o. Výzkumný a šlechtitelský ústav ovocnářský Holovousy, s.r.o. Výzkumný a šlechtitelský
VíceVLIV OTUŽOVÁNÍ ROSTLIN NA ZMĚNY JEJICH TERMICKÝCH VLASTNOSTÍ PŘI KRYOPREZERVACI
VLIV OTUŽOVÁNÍ ROSTLIN NA ZMĚNY JEJICH TERMICKÝCH VLASTNOSTÍ PŘI KRYOPREZERVACI Miloš Faltus A, Eva Žižková B, Alois Bilavčík A, Jiří Zámečník A A Výzkumný ústav rostlinné výroby, Praha 6 Ruzyně B Výzkumný
VíceLESNICKÝ PRŮVODCE METODIKA PRO BEZPEČNÉ UCHOVÁNÍ IN VITRO KULTUR TOPOLU ŠEDÉHO (POPULUS CANESCENS AITON SM.) V ULTRANÍZKÝCH TEPLOTÁCH
METODIKA PRO BEZPEČNÉ UCHOVÁNÍ IN VITRO KULTUR TOPOLU ŠEDÉHO (POPULUS CANESCENS AITON SM.) V ULTRANÍZKÝCH TEPLOTÁCH LESNICKÝ PRŮVODCE C er ti f i k ov a n é METODIKY Ing. EVA POKORNÁ, Ph.D. a kol. 5/2018
VíceZPRÁVA ZA DÍLČÍ VÝSLEDKY ŘEŠENÍ VÝZKUMNÉHO PROGRAMU 3.d ZA ROK 2015
ZPRÁVA ZA DÍLČÍ VÝSLEDKY ŘEŠENÍ VÝZKUMNÉHO PROGRAMU 3.d ZA ROK 2015 1. TITULNÍ LIST Podpora tvorby rostlinných genotypů s vysokou rezistencí k biotickým i abiotickým faktorům a diferencovanou kvalitou
VíceJazykové gymnázium Pavla Tigrida, Ostrava-Poruba Název projektu: Podpora rozvoje praktické výchovy ve fyzice a chemii
Datum: Jazykové gymnázium Pavla Tigrida, Ostrava-Poruba Název projektu: Podpora rozvoje praktické výchovy ve fyzice a chemii Laboratorní cvičení č. Tlak vzduchu: Teplota vzduchu: Bílkoviny(proteiny) Vlhkost
VíceVýsledky v roce 2017
Ústřední kontrolní a zkušební ústav zemědělský Oddělení mezilaboratorních porovnávacích zkoušek Poskytovatel zkoušení způsobilosti č.7005 akreditovaný ČIA podle ČSN EN ISO/IEC 17043 Mezilaboratorní porovnávací
VíceVLIV POVĚTRNOSTNÍCH PODMÍNEK NA RŮST A VÝVOJ OZDRAVENÝCH A NEOZDRAVENÝCH KLONŮ CHMELE.
VLIV POVĚTRNOSTNÍCH PODMÍNEK NA RŮST A VÝVOJ OZDRAVENÝCH A NEOZDRAVENÝCH KLONŮ CHMELE. Türkott Luboš Suary On experimental hop-garden Hop Research Institute in Žatec, were monitored influence of weather
VíceAktuální výskyt škodlivých organismů a metodická doporučení v ochraně chmele k
Aktuální výskyt škodlivých organismů a metodická doporučení v ochraně chmele k 2.7. 212 Peronospora chmelová Podle krátkodobé prognózy výskytu této choroby byly splněny podmínky pro růst a vývoj peronosporového
VícePraktické ukázky analytických metod ve vinařství
Praktické ukázky analytických metod ve vinařství Ing. Mojmír Baroň Stanovení v moštu Stanovení ph a veškerých titrovatelných kyselin Stanovení ph Princip: Hodnota ph je záporný dekadický logaritmus aktivity
VíceÚstřední komise Chemické olympiády. 56. ročník 2019/2020 ŠKOLNÍ KOLO. Kategorie A. Praktická část Zadání 40 bodů
Ústřední komise Chemické olympiády 56. ročník 2019/2020 ŠKOLNÍ KOLO Kategorie A Praktická část Zadání 40 bodů PRAKTICKÁ ČÁST 40 BODŮ Autor Doc. Ing. Petr Exnar, CSc. Technická univerzita v Liberci Recenze
VíceZÁVĚREČNÁ ZPRÁVA PROJEKTU DOTAČNÍHO TITULU 3.d. za dobu řešení
ZÁVĚREČNÁ ZPRÁVA PROJEKTU DOTAČNÍHO TITULU 3.d. za dobu řešení 2008-2013 1. TITULNÍ LIST Podpora tvorby rostlinných genotypů s vysokou rezistencí k biotickým a abiotickým faktorům a diferencovanou kvalitou
VíceI N V E S T I C E D O R O Z V O J E V Z D Ě L Á V Á N Í LABORATORNÍ PRÁCE Č. 14 SRÁŽECÍ REAKCE
LABORATORNÍ PRÁCE Č. 14 SRÁŽECÍ REAKCE PRINCIP Srážecí reakce je reakce, při níž se alespoň jeden z produktů vylučuje z reakční směsi ve formě tuhé fáze (sraženiny). A + (aq) + B - (aq) AB (s) (Reakce
VíceKrása TC. mé zkušenosti s technikami mikropropagace v obrazech.
Krása TC mé zkušenosti s technikami mikropropagace v obrazech. Kultivace stonkových segmentů. Meristémové kultury. Kultivace vzrostných vrcholků. Kultivace rostlin z axilárních pupenů. Hegemonie vrcholu.
VíceChelatometrie. Stanovení tvrdosti vody
Chelatometrie Stanovení tvrdosti vody CHELATOMETRIE Cheláty (vnitřně komplexní sloučeniny; řecky chelé = klepeto) jsou komplexní sloučeniny, kde centrální ion je členem jednoho nebo více vznikajících kruhů.
VíceLegislativa. Hradec Králové, 2012
Legislativa Hradec Králové, 2012 Novela zákona č. 219 /2003 Sb. Zákon č. 331/2010 Sb. ze dne 27.10.2010 Účinnost od 30.9.2012 s výjimkou vyjmenovaných ustanovení 1.1.2012 3 Uvádění RM do oběhu Odst.7 nový
VíceZPRÁVA ZA DÍLČÍ VÝSLEDKY ŘEŠENÍ VÝZKUMNÉHO PROGRAMU 3.d ZA ROK 2014
ZPRÁVA ZA DÍLČÍ VÝSLEDKY ŘEŠENÍ VÝZKUMNÉHO PROGRAMU 3.d ZA ROK 2014 1. TITULNÍ LIST Podpora tvorby rostlinných genotypů s vysokou rezistencí k biotickým i abiotickým faktorům a diferencovanou kvalitou
VíceVirus mozaiky pepina. Pepino mosaic virus (PepMV)
Virus mozaiky pepina Pepino mosaic virus (PepMV) Virus mozaiky pepina byl poprvé popsán v roce 1974, kdy byl objeven ve dvou porostech pepina (Solanum muricatum) v údolí Canete pobřežní oblasti Peru. Další
VíceVETERINÁRNÍ A FARMACEUTICKÁ UNIVERZITA BRNO FAKULTA VETERINÁRNÍ HYGIENY A EKOLOGIE ÚSTAV EKOLOGIE A CHOROB ZVĚŘE, RYB A VČEL
VETERINÁRNÍ A FARMACEUTICKÁ UNIVERZITA BRNO FAKULTA VETERINÁRNÍ HYGIENY A EKOLOGIE ÚSTAV EKOLOGIE A CHOROB ZVĚŘE, RYB A VČEL Standardní operační postup - SOP 02 Terestrické testy ekotoxicity Stanovení
VíceVyjadřuje poměr hmotnosti rozpuštěné látky k hmotnosti celého roztoku.
Koncentrace roztoků Hmotnostní zlomek w Vyjadřuje poměr hmotnosti rozpuštěné látky k hmotnosti celého roztoku. w= m A m s m s...hmotnost celého roztoku, m A... hmotnost rozpuštěné látky Hmotnost roztoku
VícePožadavky na množitelské porosty vybraných plodin a jejich přehlídky. Ing. Jaroslav Schenk
Požadavky na množitelské porosty vybraných plodin a jejich přehlídky Ing. Jaroslav Schenk Přehled současné legislativy Zákon č. 219/2003 Sb., o uvádění do oběhu osiva a sadby pěstovaných rostlin a o změně
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU KVASINEK RODU SACCHAROMYCES
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU KVASINEK RODU SACCHAROMYCES 1 Rozsah a účel Metodika slouží ke stanovení počtu probiotických kvasinek v doplňkových látkách, premixech a krmivech.
VíceAktuální výskyt škodlivých organismů a metodická doporučení v ochraně chmele k
Aktuální výskyt škodlivých organismů a metodická doporučení v ochraně chmele k 9.7. 212 Peronospora chmelová Podle krátkodobé prognózy výskytu této choroby jsou splněny podmínky pro růst a vývoj peronosporového
VíceTento projekt je spolufinancován Evropským sociálním fondem a Státním rozpočtem ČR InoBio CZ.1.07/2.2.00/28.0018
Tento projekt je spolufinancován Evropským sociálním fondem a Státním rozpočtem ČR InoBio CZ.1.07/2.2.00/28.0018 METODY ZJIŠŤOVÁNÍ KVALITY SUBSTRÁTŮ PRO PĚSTOVÁNÍ SADEBNÍHO MATERIÁLU LESNÍCH DŘEVIN (pomocný
VíceI N V E S T I C E D O R O Z V O J E V Z D Ě L Á V Á N Í
I N V E S T I C E D O R O Z V O J E V Z D Ě L Á V Á N Í TENTO PROJEKT JE SPOLUFINANCOVÁN EVROPSKÝM SOCIÁLNÍM FONDEM A STÁTNÍM ROZPOČTEM ČESKÉ REPUBLIKY Laboratorní práce č. 10 Bílkoviny Pro potřeby projektu
VíceOPTIMALIZOVANÝ POSTUP PRO DETEKCI GLOMERELLA CINGULATA VE VĚTVÍCH A KMENECH JABLONÍ POMOCÍ MIKROBIOLOGICKÝCH METOD.
DAVID NOVOTNÝ, IVA KŘÍŽKOVÁ A JIŘINA KRÁTKÁ OPTIMALIZOVANÝ POSTUP PRO DETEKCI GLOMERELLA CINGULATA VE VĚTVÍCH A KMENECH JABLONÍ POMOCÍ MIKROBIOLOGICKÝCH METOD. METODIKA PRO ÚTVARY STÁTNÍ SPRÁVY Výzkumný
VíceJméno autora: Mgr. Ladislav Kažimír Datum vytvoření: 27.03.2013 Číslo DUMu: VY_32_INOVACE_18_Ch_OB Ročník: I. Vzdělávací oblast: Přírodovědné
Jméno autora: Mgr. Ladislav Kažimír Datum vytvoření: 27.03.2013 Číslo DUMu: VY_32_INOVACE_18_Ch_OB Ročník: I. Vzdělávací oblast: Přírodovědné vzdělávání Vzdělávací obor: Chemie Tematický okruh: Obecná
VíceUchazečem nabízené plnění (obchodní název) Nabídková cena za kus bez DPH. Předpokládaná hodnota celkem v Kč bez DPH
Příloha č. 3 Zadávací dokumentace - laboratorní spotřební materiál 1. část veřejné zakázky: Počet kusů v Počet 1 Oasis HLB 6cc (200mg) SPE kolonky 30 6 chromatografická kolona typu Kinetex 2.6u C18 nebo
VíceAktuální výskyt škodlivých organismů a metodická doporučení v ochraně chmele k
Aktuální výskyt škodlivých organismů a metodická doporučení v ochraně chmele k 2.7. 215 V období od 29.6. do 5.7. byl na Tršicku i Žatecku ukončen přelet 6. mšice chmelové (Phorodon humuli Schrank) ze
VíceVybraná vyšetření u pacientů s diabetes mellitus
ÚSTAV LÉKAŘSKÉ BIOCHEMIE A LABORATORNÍ DIAGNOSTIKY 1. LF UK Vybraná vyšetření u pacientů s diabetes mellitus Praktické cvičení z lékařské biochemie Všeobecné lékařství Martin Vejražka 2018/19 Obsah 1.
VíceVliv různých druhů cytokininů na zakořeňování moruše černé in vitro
STŘEDOŠKOLSKÁ ODBORNÁ ČINNOST Vliv různých druhů cytokininů na zakořeňování moruše černé in vitro Michaela Medková Tišnov 2013 STŘEDOŠKOLSKÁ ODBORNÁ ČINNOST Obor SOČ: Zemědělství, potravinářství, lesní
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU LC-MS - FUMONISIN B 1 A B 2
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU LC-MS - FUMONISIN B 1 A B 2 1 Rozsah a účel Metoda je vhodná pro stanovení fumonisinů B 1 a B 2 v krmivech. 2 Princip Fumonisiny
VíceANALYTICKÉ ZKUŠEBNICTVÍ
Ústřední kontrolní a zkušební ústav zemědělský ANALYTICKÉ ZKUŠEBNICTVÍ DEN ZEMĚDĚLSKÉHO ZKUŠEBNICTVÍ, LÍPA, 12.7.2012 Základní legislativa Zákon č. 147/2002 Sb. ze dne 20. března 2002 o Ústředním kontrolním
VíceProtokol 04. pšeničná bílkovina. masné výrobky. zkrácená verze
1 Popis vzorku Podle protokolu č. 04 lze vyšetřit vzorky různých druhů masných výrobků na přítomnost pšeničné bílkoviny. 2 Detekční limit vyšetření Přítomnost pšeničné bílkoviny lze spolehlivě prokázat,
VíceKritické body při produkci osiv / obilovin. Sy tém HACCP. Kateřina Pazderů
Kritické body při produkci osiv / obilovin Sy tém HACCP Kateřina Pazderů HACCP Hazard Analysis and Critical Control Points Principy: 1. Analýza rizik 2. Identifikace kritických bodů 3. Definování kritických
Vícenázev soli tvoří podstatné a přídavné jméno
OPAKOVÁNÍ název soli tvoří podstatné a přídavné jméno podstatné jméno charakterizuje anion soli a jeho náboj: chlorid Cl - přídavné jméno charakterizuje kation soli a jeho oxidační číslo: sodný Na + podstatné
VíceÚstřední komise Chemické olympiády. 42. ročník. KRAJSKÉ KOLO Kategorie D. SOUTĚŽNÍ ÚLOHY TEORETICKÉ ČÁSTI Časová náročnost: 60 minut
Ústřední komise Chemické olympiády 42. ročník 2005 2006 KRAJSKÉ KOLO Kategorie D SOUTĚŽNÍ ÚLOHY TEORETICKÉ ČÁSTI Časová náročnost: 60 minut Institut dětí a mládeže Ministerstva školství, mládeže a tělovýchovy
Více5. Bioreaktory. Schematicky jsou jednotlivé typy bioreaktorů znázorněny na obr. 5.1. Nejpoužívanějšími bioreaktory jsou míchací tanky.
5. Bioreaktory Bioreaktor (fermentor) je nejdůležitější částí výrobní linky biotechnologického procesu. Jde o nádobu různého objemu, ve které probíhá biologický proces. Dochází zde k růstu buněk a tvorbě
VíceVzdělávání středoškolských pedagogů a studentů středních škol jako nástroj ke zvyšování kvality výuky přírodovědných předmětů CZ.1.07/1.1.00/14.
Praktické cvičení z chemie 1) Stanovení lipofilních listových barviv pomocí adsorpční chromatografie. 2) Stanovení proteinů v roztoku. 3) Homogenizace rostlinného materiálu pomocí tekutého dusíku a stanovení
VíceStanovení celkové kyselosti nápojů potenciometrickou titrací
Stanovení celkové kyselosti nápojů potenciometrickou titrací Princip metody U acidobazických titrací se využívají dva druhy indikace bodu ekvivalence - vizuální a instrumentální. K vizuální indikaci bodu
VíceMTI Cvičení č. 2 Pasážování buněk / Jana Horáková
MTI Cvičení č. 2 Pasážování buněk 15.11./16.11.2016 Jana Horáková Doporučená literatura M. Vejražka: Buněčné kultury http://bioprojekty.lf1.cuni.cz/3381/sylabyprednasek/textova-verze-prednasek/bunecnekultury-vejrazka.pdf
VíceVYUŽITÍ A VALIDACE AUTOMATICKÉHO FOTOMETRU V ANALÝZE VOD
Citace Kantorová J., Kohutová J., Chmelová M., Němcová V.: Využití a validace automatického fotometru v analýze vod. Sborník konference Pitná voda 2008, s. 349-352. W&ET Team, Č. Budějovice 2008. ISBN
VíceROLE ETYLENU PŘI KULTIVACI ČESNEKU V PODMÍNKÁCH IN VITRO VITRO
ROLE ETYLENU PŘI KULTIVACI ČESNEKU V PODMÍNKÁCH IN VITRO ROLE ETYLENU PŘI KULTIVACI ČESNEKU V PODMÍNKÁCH IN VITRO Fišerová, H., 1 Spálovský, M., 1 Staňková, Z., 1 Kozák, V., 1 Křižan, B., 2 Havel, L. 1
Více9 Ověření agrochemických účinků kalů z výroby bioplynu (tekuté složky digestátu) pro aplikaci na půdu
9 Ověření agrochemických účinků kalů z výroby bioplynu (tekuté složky digestátu) pro aplikaci na půdu V letech 2005 a 2006 byly získány pro VÚRV Praha od spoluřešitelské organizace VÚZT Praha vzorky kalů
VíceVšechna agarová média se sterilizují v autoklávu při 121 C po dobu 15 minut (při tlaku 1,2.10 5 Pa).
Média pro identifikaci mikroskopických hub Všechna ová média se sterilizují v autoklávu při 121 C po dobu 15 minut (při tlaku 1,2.10 5 Pa). AFPA Aspergillus flavus/parasiticus médium (Aspergillus flavus
VíceScreeningová metoda stanovení celkové alfa aktivity ve vodě
SÚJCHBO, v.v.i. Certifikovaná metodika Screeningová metoda stanovení celkové alfa aktivity ve vodě Ing. Zdeňka Veselá, Ing. Josef Vošahlík, Mgr. Jan Merta, Jaroslava Buštová, Ing. Ivo Burian, CSc., Mgr.
VíceDotační program 3. Podpora ozdravování polních a speciálních plodin. u předmětu dotace 3.a. biologická ochrana jako náhrada chemické ochrany rostlin
Zpřesnění Zásad, kterými se stanovují podmínky pro poskytování dotací pro rok 2019 na základě 1, 2 a 2d zákona č. 252/1997 Sb., o zemědělství, ve znění pozdějších předpisů dotační programy 3. (předměty
Vícezadání příkladů 10. výsledky příkladů 7. 3,543 litru kyslíku
zadání Jaký bude objem vodíku při tlaku 105 kpa a teplotě 15 stupňů Celsia, který vznikne reakcí 8 gramů zinku s nadbytkem kyseliny trihydrogenfosforečné? Jaký bude objem vodíku při tlaku 97 kpa a teplotě
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ AKTIVITY FYTÁZY
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ AKTIVITY FYTÁZY 1 Rozsah a účel Postup specifikuje stanovení fytázové aktivity ve vzorcích krmiva. Tímto postupem se nestanoví rozdíl mezi fytázou přidanou
Více2.07 Krystalizace. Projekt Trojlístek
2. Vlastnosti látek a chemické reakce 2.07 Krystalizace. Projekt úroveň 1 2 3 1. Předmět výuky Metodika je určena pro vzdělávací obsah vzdělávacího předmětu Chemie. Chemie 2. Cílová skupina Metodika je
Více13/sv. 8 (85/503/EHS) Tato směrnice je určena členským státům.
62 31985L0503 L 308/12 ÚŘEDNÍ VĚSTNÍK EVROPSKÝCH SPOLEČENSTVÍ 20.11.1985 PRVNÍ SMĚRNICE KOMISE ze dne 25. října 1985 o metodách pro analýzu potravinářských kaseinů a kaseinátů (85/503/EHS) KOMISE EVROPSKÝCH
VíceNávod k laboratornímu cvičení. Vitamíny
Úkol č. 1: Přítomnost vitaminu C v ovoci a zelenině Návod k laboratornímu cvičení Vitamíny Pomůcky: třecí miska s tloučkem, filtrační kruh, nálevka, filtrační papír, zkumavky, stojan na zkumavky Chemikálie:
VíceOPTIMALIZACE PROCESU KULTIVACE ZELENÝCH ŘAS S VYUŽITÍM DIGESČNÍCH ZBYTKŮ ZE ZEMĚDĚLSKÝCH BIOPLYNOVÝCH STANIC. Ing. Pavla Hrychová
OPTIMALIZACE PROCESU KULTIVACE ZELENÝCH ŘAS S VYUŽITÍM DIGESČNÍCH ZBYTKŮ ZE ZEMĚDĚLSKÝCH BIOPLYNOVÝCH STANIC Ing. Pavla Hrychová Cíl Optimalizace růstu zelené řasy Scenedesmus cf. acutus v připravených
VícePufry, pufrační kapacita. Oxidoredukce, elektrodové děje.
ÚSTAV LÉKAŘSKÉ BIOCHEMIE A LABORATORNÍ DIAGNOSTIKY 1. LF UK Pufry, pufrační kapacita. Oxidoredukce, elektrodové děje. Praktické cvičení z lékařské biochemie Všeobecné lékařství Martin Vejražka, Tomáš Navrátil
VícePufry, pufrační kapacita. Oxidoredukce, elektrodové děje.
ÚSTAV LÉKAŘSKÉ BIOCHEMIE A LABORATORNÍ DIAGNOSTIKY 1. LF UK Pufry, pufrační kapacita. Oxidoredukce, elektrodové děje. Praktické cvičení z lékařské biochemie Všeobecné lékařství Martin Vejražka 2018/19
VíceZÁKLADNÍ CHEMICKÉ VÝPOČTY
ZÁKLADNÍ CHEMICKÉ VÝPOČTY Látkové množství - vyjadřování množství: jablka pivo chleba uhlí - (téměř každá míra má svojí jednotku) v chemii existuje univerzální veličina pro vyjádření množství látky LÁTKOVÉ
VíceStanovení kvality vody pomocí kompaktní laboratoře Aquamerck
NÁVOD K PROVEDENÍ PRAKTICKÉHO CVIČENÍ Stanovení základních parametrů ve vodách Stanovení kvality vody pomocí kompaktní laboratoře Aquamerck Princip Kompaktní laboratoř Aquamerck je vhodná zejména na rychlé
VíceAktuální výskyt škodlivých organismů a metodická doporučení v ochraně chmele k
Aktuální výskyt škodlivých organismů a metodická doporučení v ochraně chmele k... Jak je patrné z přiložených tabulek a grafů s meteo-daty z období od.. do.., je stávající charakter počasí vhodný pro šíření
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU KOBALTU METODOU ICP-MS
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU KOBALTU METODOU ICP-MS 1 Rozsah a účel Metoda specifikuje podmínky pro stanovení celkového obsahu kobaltu v krmivech metodou hmotnostní spektrometrie
VíceRUŠENÁ KRYSTALIZACE A SUBLIMACE
LABORATORNÍ PRÁCE Č. 5 RUŠENÁ KRYSTALIZACE A SUBLIMACE KRYSTALIZACE PRINCIP Krystalizace je důležitý postup při získávání čistých tuhých látek z jejich roztoků. Tuhá látka se rozpustí ve vhodném rozpouštědle.
VícePozn.: Pokud není řečeno jinak jsou pod pojmem procenta míněna vždy procenta hmotnostní.
Sebrané úlohy ze základních chemických výpočtů Tento soubor byl sestaven pro potřeby studentů prvního ročníku chemie a příbuzných předmětů a nebyl nikterak revidován. Prosím omluvte případné chyby, překlepy
VíceÚloha č. 1 Odměřování objemů, ředění roztoků Strana 1. Úkol 1. Ředění roztoků. Teoretický úvod - viz návod
Úloha č. 1 Odměřování objemů, ředění roztoků Strana 1 Teoretický úvod Uveďte vzorec pro: výpočet směrodatné odchylky výpočet relativní chyby měření [%] Použitý materiál, pomůcky a přístroje Úkol 1. Ředění
VíceVážení, odměřování objemů
Vážení, odměřování objemů Vážení K nezbytnému vybavení každé laboratoře patří váhy, pomocí kterých určujeme množství dané látky. Princip vážení je znám po staletí. Jde o srovnávací metodu, kdy se srovnává
Více