a v moči i u pacientů s karcinomem chýře

Transkript

1 Stanovení katepsinu B v séru s a v moči i u pacientů s karcinomem močov ového měchým chýře Kotaška, K. 1, Dušek P. 2, Průša, R. 1, Veselý, Š. 2, Babjuk, M 2. 1) Ústav lékařské chemie a klinické biochemie 2 LF UK a FN v Motole, Praha 2)Urologická klinika 2. LF UK a FN v Motole, Praha

2 Katepsin B Papainová cysteinová proteáza lokalizovaná v lysozómech (33-35kDa), těžký řetězec (29kDa) + lehký řetězec (6 kda) MPR- aktivace Preprokatepsin B Prokatepsin B (46 kda) Katepsin B (33 kda) Endoplazmatické retikulum Lysozóm Glykosylace a exkrece (5 %) Gen 8p22 (11 exonů) Exprimován u nádorových procesů, podílí se na progresi řady tumorů (prsa, plíce, kolorektální karcinom, gliomy, prostata)? Jaká je koncentrace katepsinu B u karcinomu močov ového měchým chýře?

3 Katepsin B Metabolizmus proteinů a udržování normálního metabolizmu buněk (štěpení membránových proteinů, aktivace antigen prezentujících buněk, degradace extracelulární matrix, remodelace tkání) Prokatepsin B Katepsin B Katepsin D, Katepsin G, upa, tpa,elastáza Degradace extracelulární matrix aktivace prekurzorů přímá aktivace Yan a Sloane, 2003

4 Karcinom močov ového měchým chýře - nejčastější malignita močového traktu - Uroteliální karcinom - 90%, 10% karcinom skvamózních buněk, adenokarcinom, sarkom, karcinom malých buněk - V České republice se jedná o 6. nejčastější malignitu u mužů a 13. u žen. - Incidence v ČR se pohybuje okolo 23/ obyvatel a stoupá s věkem - Mortalita 9/ Diferencovanost, invazivita a metastázy (lymfatické uzliny, prostata, děloha, GIT-břicho)? Jaký je vztah koncetrace katepsinu B k diferencovanosti a invazivitě tumoru?

5 Rizikové faktory, symptomy a léčba l karcinomu močov ového měchýře Rizikové faktory - Muži - Věk > 50 let - Evropská (Kavkazská) populace - Kouření - Strava (lipidy, mražené) - Práce v chemickém průmyslu (barvy, laky) - Bakteriální infekce - Historie infekcí močového měchýře - Dlouhodobé zavedení močových katétrů - Cyklofosfamid, auramin, fenacetin - Radioterapie Ca prostaty Symptomy a příznaky - mikroskopická i makroskopická hematurie se zánětem - anemie, hubnutí, nechutenství - časté a bolestivé močení - dysurie, hydronefróza Léčba Dle závažnosti - operativně - chemoterapie - imunoterapie

6 Klasifikace nádorn dorů močov ového měchým chýře Dělení podle diferenciace GX G1 G2 G3 stupeň diferenciace nelze hodnotit pomalu rostoucí (dobře diferencované) (LG) Středně rychle rostoucí Rychle rostoucí (málo diferencované) (HG) neoplazma Low grade (LG) High grade (HG) G1 G2 G3

7 Klasifikace nádorn dorů močov ového měchýře - diferencovanost Papilární neoplazma Dobře diferencovaný (LG) Málo diferencovaný (HG)

8 Typy nádorn dorů močov ového měchým chýře Močovody Lamina propria Urotelium (mukóza Močová trubice T2-T4 invazivní tumory Ta,Tis,T1 neinvazivní tumory Vnitřní svalovina Perivezikální tuková vrstva Metastázy (Rektum, GIT aj.) T1-T4 - diferencované Ta, Tis - nediferencované

9 Klasifikace nádorn dorů močov ového měchýře Stadium 0a Ta N0 M0 Stadium 0is Tis N0 M0 Stadium I T1 N0 M0 Stadium II T2a N0 M0 T2b N0 M0 Stadium III T3a N0 M0 T3b N0 M0 T4a N0 M0 Stadium IV T4b N0 M0 jakékoliv T N1-3 M0 jakékoliv Ta N M1 Karcinomy Ta, T1 a Tis tvoří % všech nádorů močového měchýře

10 Mechanizmus tumorogeneze uroteliáln lního karcinomu močov ového měchým chýře pta Regulace exprese buněk uroteliální tkáně 9pDel (INK4A) RAS FGFR3 PI3K 9pDel povrchový papilární karcinom (LG) superficiální papilární 15% karcinom (HG) pt1 pt2 Uroteliální tkáň TP53 RB PTEN ptis 60-80% 5qDel, 3pDel,10qDel 6qDel 11pDel 18qDel Invazivní karcinom Karcinom in situ (HG) Castillo-Martin et al., 2010 modifikováno

11 Imunohistochemické metody Histologické řezy tkáně fixované formolem a zalité do parafinu. Primární myší monoklonální protilátka proti katepsinu B (klon CB131) Antigen prokaryotický rekombinantní protein komplementární s celou molekulou lidského katepsinu B Rozsah nádoru Cystoskopie, zobrazovací metody (CT, NMR), histopatologie z operačního preparátu

12 Imunohistochemická detekce katepsinu B A B C Eijan et al, 2003 A- normální nález, katepsin B exprimován v cytoplazmě buněk lumina B- Málo diferencovaný TCC tumor s nízkou expresí katepsinu B v cytoplazmě C- invazivní tumor s intenzivní expresí katepsinu B

13 Charakteristika pacientů 78 pacientů, bez metastáz (M0) Invazivní Neinvazivní Celkem Nediferencované tumory (HG) Diferencované tumory (LG) (N 1) 22 (N 0) 3 (T2a, NX, M0) (T2, NX, MX) (T3a,N0, M0)

14 Biochemické metody Stanovení koncentrace katepsinu B v séru a v moči EIA (RD Biosystems) Referenční rozmezí: Sérum: ng/ml Moč: do 2,54 ng/ml U- kreatinin enzymatická kreatinázová kolorimetrická metoda - ref. rozmezí 5,7 14,7 mmol/l Kontrolní skupina N = 94 Pacienti N = 78 Muži/ženy 40/54 57/21 p Prům.. věk v (rozp ozpětí) 55 (34-85) 68 (26-91) S-katepsin B (μg/l)( (median+sem) 58,04+3,10 70,28+4,80 4,80 0,002 U-katepsin B (μg/l)( (median+sem) SEM) 1,35+0,45 4,37+1,43 <0,0001 U-kreatinin (mmol/l)( (median+sem) 8,40 +0,70 8,61+0,83 0,99 U-katepsin B/U-krea reatinin (μg/mmol kreatininu) 0,17 + 0,04 0,56+ 0,13 <0,0001

15 Výsledky S enzitivita % % - Specificita% U-Katepsin B S-Katepsin B U-katepsin B/U-kreatinin AUC S- katepsin B 0,64 p<0,05 U-katepsin B 0,78 NS U-katepsin B/kreatinin 0,79 NS p Cut off (ng/ml) Specificita % Senzitivita % NPV% PPV% OR S-katepsin B 90, ,11 U-Katepsin B 3, ,33 U-katepsin B/U-krea reatinin 0, ,1

16 Výsledky Diferencované vs. Nediferencované tumory S- Katepsin B (ng/ml) Diferencované (LG) Serum p = 0,0018 Nediferenceované (HG) U- Katepsin B (ng/ml) Diferencované (LG) Moč p = Nediferencované (HG) U-katepsin B/U-kreatinin (μg/mmol) Diferencované (LG) p = 0,0081 Nediferencované (HG) Diferencované (LG) N = 272 Nediferencované (HG) N = 51 S-katepsin B (ng( ng/ml) 52,07+6,06 86,0+6,2 6,2 p = 0,00180 U-katepsin B (ng( ng/ml) 3,17+1,14 1,14 5,94 + 1,53 p = 0,02400 U-katepsin B/ kreatinin (μg/mmolg/mmol kreatininu) 0,33+0,12 0,12 0,82 +0,18 p = 0, P

17 Výsledky Invazivní tumory vs. Neinvazivní tumory U- Katepsin B (ng/ml) neinvazivní Moč P<0,0001 invazivní S-Katepsin B (ng/ml) neinvazivní Serum p = invazivní U-katepsin B/U-kreatinin (μ g/mmol) neinvazivní P<0,0001 invazivní Neinvazivní tumory N = 37 Invazivní tumory N = 41 S-katepsin B (ng( ng/ml) 57,90 + 6,94 85,78 + 6,54 p = 0,06100 U-katepsin B (ng( ng/ml) 2,68 + 0,78 10,47 + 1,49 p < 0, U-katepsin B/ kreatinin (μg/mmol kreatininu) 0,31 + 0,10 1,33 + 0,21 p < 0, P

18 Další výsledky DIFERENCOVANÉ TUMORY (LG) INVAZIVNÍ (Mediány) NEINVAZIVNÍ (Mediány) S-katepsin B (ng( ng/ml) 30,1 55, 10 U-katepsin B (ng( ng/ml) 10,8 3,32 p<0,05 U- katepsin B/kreatinin (μg/mmol( kreatininu) 1,53 0,33 p<0,05 p Nelze hodnotit NEDIFERENCOVANÉ TUMORY (HG) INVAZIVNÍ NEINVAZIVNÍ (Mediány) (Mediány) S-katepsin B (ng( ng/ml) 85,4 75,3 p p<0,05 U-katepsin B (ng( ng/ml) 6,7 3,57 p<0,05 U- katepsin B/kreatinin (μg/mmol( kreatininu) 1,04 0,50 p<0,05

19 Srovnání s literaturou Reference Katepsin materiál metoda invazivita Staack et al B,H,L moč fluorimetrie ano L, ne B, H diferenciace HG - Ano L, ne B, H Staack et al B,H,L Tkáňová kultura fluorimetrie ---- HG ne všechny LG ano všechny Eiján et al B tkáň Imunohistochemie, WB Korelace s progresí Svatek et al B,L moč ELISA ne B, ano L Ne B (HG i LG) Ano L (HG i LG) Akpolat et al B tkáň imunohistochemie ano INV ano Ueda et al B tkáň imunohistochemie ano INV ano HG Kotaška et al B Sérum moč EIA Ano (Moč) Ano (Sérum)

20 Závěry 1. Koncentrace katepsinu B jsou zvýšené v séru i v moči pacientů s karcinomem močového měchýře Nejlepším ukazatelem je stanovení poměru U-katepsin B/kreatinin 2. U diferencovaných tumorů je vhodné vyšetřit hladinu sérového katepsinu B 3. U invazivních tumorů je vhodné vyšetřit hladinu katepsinu B v moči eventuelně poměr U-katepsin B/kreatinin

21 Současnost Vliv včasného chirurgického zákroku na koncentraci katepsinu B Může zvýšená koncentrace katepsinu B znamenat riziko remise nádoru? Vliv genetických faktorů na koncentrace katepsinu B Analýza přežívání pacientů (dlouhodobého i krátkodobého)

22 Děkuji za pozornost