Laboratoř Topelex s.r.o. Praha

Transkript

1 PCR DIAGNOSTIKA INFEKČNÍCH AGENS V LIKVORU A EVT MUDr. Zuzana Bílková Ing. Jana Dudlová Laboratoř Topelex s.r.o. Praha

2 ZÁKLADNÍ DG ALGORITMUS V LIKVORU A EVT Základní dg algoritmus vychází: klinický obraz, epikríza, odběr biologického materiálu cytologický obraz (kvantitativní + kvalitativní) základní biochemická vyšetření (CB,glu+lak=energetika/KEB) imunologické parametry (zánětlivé markerycytokiny) Dg. floridního zánětlivého procesu přímý průkaz patogenu (kultivační vyšetření, PCR) nepřímý průkaz stanovení specifických protilátek

3 KULTIVACE MIKROBIÁLNÍCH AGENS Výhody Široké spektrum zachycených mikroorg. na dg půdách (selektivní dg půdy) Moţnost další práce s vykultivovaným kmenem (identifikace, aglutinace, sérotypizace, citlivost k atb) Nevýhody problémy s růstem bc na kult. půdách (po ATB) časová náročnost nemoţnost kultivace některých agens (rutinně se neprovádí u virů, leptospiry, borelie (spirochety), toxoplasma, chlamydie, mykoplazmy)

4 PCR DETEKCE MIKROB. AGENS Výhody rychlá, citlivá, průkaz nekultivovatelných a obtíţně kultivovatelných patogenů u kritických pacientů, riziko prodlení, empirická th, eskalační - deeskalační th MOŢNOST PRŮKAZU I VIRŮ (resp. libovolného mikrobiálního agens) Nevýhody nelze dále pracovat s kmenem dg spektrum (moţnost multiplexů) vyšší cena Vhodné obě moţnosti diagnostiky kombinovat.

5 KAZUISTIKA Č. 1 EPIKRÍZA: 39-letá pacientka, hosp. na neurochirurgii, likvor zaslán měsíce po resekci kraniofaryngeomu, opakovaná likvorea,hydrocefalus, zavedený shunt, mok kultivačně negativní, susp. neuroinfekce cytologie: 2.6. Elementy: 200 ; Barvení: M-G: převaha neutrof. granulocytů, přítomny známky aktivace v lymfocytární řadě, v monocytární řadě bez substrátu fagocytózy; GRAM: bez průkazu bakteriálních a mykotických partikulí. KEB : -125,13 oxidační vzplanutí profesion. fagocytů

6 KAZUISTIKA Č. 1 PCR: Candida albicans Kultivace: bez nálezu 8.6.: ELE: 206; trvající převaha granulocytů, plazmocyty;v monocyt. řadě ojed. pěnité buňky; KEB: 4,86; PCR: CAAL pozitivní; kultivace: bbn 14.6.: ELE: 115; granulocytátní pleocytóza, lymfocytární reakce; KEB: -14,35; PCR: CAAL pozitivní; kultivace: bbn

7 KAZUISTIKA Č : ELE 275; granulocytární pleocytóza, zhoršení nálezu KEB: 3,38, PCR: CAAL pozitivní; kultivace: bbn 23.6.: ELE: 180; trvající granulocytární pleiocytóza s plazmocytární reakcí, trvající obraz hnisavého zánětu KEB: 2,12; PCR: CAAL pozitivní; kultivace: bbn 30.6.: ELE: 11; KEB: 22,37; PCR: CAAL- NEGATIVNÍ Th: Diflucan

8 KAZUISTIKA Č. 2 EPIKRÍZA: 40-ti letá ţena, 4 dny trvající cefalea, nauzea, vomitus, klin. vyjádřený meningeální sy, susp. serózní neuroinfekce Cytologie: Kvantitativní: elementy: 357/mikroliltr Kvalitativní: převaha aktivovaných lymfocytů, přítomny nečetné plazmocyty; Ré: obraz serózního zánětu KEB: 22,79 v mezích serózního zánětu

9 KAZUISTIKA Č. 2 Zánětl. markery: elevace: IL6, IL8, IL10, CXCL13, BMG, AAG Destrukční markery: elevace S-100- známky buněčné léze Serologie: Anti- HSV1+2,-VZV,-CMV,-EBV zvýšená hladina ve třídě IgG, IgM bez nálezu, v.s. anamnestické protilátky PCR: POZITIVNÍ PRŮKAZ PŘÍTOMNOSTI DNA VIRU HSV2!

10 CYTOLOGICKÝ OBRAZ SEROZNÍHO ZÁNĚTU

11 KAZUISTIKA Č. 3 EPIKRÍZA: 78-letý muţ, st. po přeléčené pneumónii, prokázaný empyém, pozoroval velký váhový úbytek VZOREK : HRUDNÍ PUNKTÁT- dodaná nazelenalá zkalená tekutina z pleurální dutiny, zpracováno cytocentrifugací, barveno: MGG, H-E, PAS, Gram, Ziehl-Neelsen CYTOLOGIE: kvantitativní: elementy: /ul, ery 0 kvalitativní: smíšená zánětlivá celulizace s účastí neutrofilních granulocytů, lymfocytů a makrofágů, v pozadí hojné buněčné stíny. GRAM + Z-N: bez průkazu bakterií

12 KAZUISTIKA Č. 3 KEB: -574 KULTIVACE: bbn PCR: neindikováno ZÁVĚR: cytol. obraz odpovídá pleuritis, sloţením celulizace kompatibilní s anamnesticky udaným odeznívajícím empyémem. Susp. nádorové bb. nenalezeny.

13 KAZUISTIKA Č. 3 VZOREK : HRUDNÍ PUNKTÁT materiál- silně zakalená hnědá tekutina z pleurální dutiny; zpracováno cytocentrifugací, barveno: MGG, H-E, GRAM, PAS CYTOLOGIE: kvantitativní: elementy: 3242/ul, ery: 512/ul kvalitativní: záplava neutrofilních granulocytů, zčásti regresivně změněných, makrofágů a mezotelií. V barvení dle GRAMa řídce koky (převáţně intracelulárně). KEB: -844

14 KAZUISTIKA Č. 3 KULTIVACE: bbn PCR: AEROBIC PANEL COMPLEX- POZITIVNÍ NÁLEZ Streptococcus sp.! MENINGO I- POZITIVNÍ NÁLEZ Streptococcus pneumoniae! ZÁVĚR: cytologický obraz odpovídá hnisavé pleuritis, susp. nádorové bb. nalezeny nebyly.

15 CYTOLOGICKÝ OBRAZ PURULENTNÍHO ZÁNĚTU

16 PŘEHLED VÝZNAMNÝCH NÁLEZŮ NEUROINFEKCÍ Rok NB (serol.) PCR B.B. TBE (serol) 2015 (VI- IX) PCR ENTE (VI Typický laboratorní obraz NB: IX) Cyto více neţ 100 E, kvalitativně lymfocytární pleocytóza s plazmocytární reakcí obraz rozvinutého serózního zánětu KEB většinou hodnoty pod (ale i v normálních hodnotách nebo dokonce v záporných) Perm. HLB/Qalb od mírně zvýšené aţ po výrazně zvýšenou permeabilitu Ab/AI/WB Výrazná pozitivita IgG s pozit. WB a vypoč. AI a někdy i pozit. IgM PCR pozitivní průkaz DNA Zán.markery výrazná elevace IL6,8,10, CXCL13

17 KAZUISTIKA Č. 4 EPIKRÍZA: 6-ti letá holčička, klin. 3 dny trvající febrilie, výrazný otok levé poloviny tváře s erytémem, zarudnutím levého oka a paresou n. VII vlevo - porucha mimiky, lehce pokleslý levý koutek, asymetricky špulí rty, klíště asi ano CYTOLOGIE: kvantitativní: elementy: 484/ul, Lymfo 66, Mono 12, PMN 16 kvalitativní: neprovedena KEB: neprovedeno

18 KAZUISTIKA Č. 4 HLB Mírně zvýšená Qalb. 4,32 SEROLOGIE: v likvoru: IgG 8,244 (AI 2,09), IgM 0,01 v séru: IgG 6,298, IgM 0,1 PCR: Pozitivní průkaz B. burgdorferi

19 KAZUISTIKA Č. 4 Zánětlivé markery neindikováno Terapie: Ceftriaxon

20 ZÁVĚR Komplexně pojatý diagnostický algoritmus Vhodné je PCR a kultivační metody kombinovat Preference PCR v těchto případech: Průkaz obtíţně kultivovatelných agens Nutnost rychlého průkazu Klinické podezření na konkrétní patogen- PCR potvrdí nebo vyloučí Dostupné PCR metodiky viz.