Enzymy. Vladimíra Kvasnicová

Transkript

1 Enzymy Vladimíra Kvasnicová

2 Enzym je biokatalyzátor: enzym vychází z reakce nezměněn Obrázek převzat z (prosinec 2006)

3 Obrázek převzat z (prosinec 2006)

5 Obrázek převzat z učebnice: Devlin, T. M. (editor): Textbook of Biochemistry with Clinical Correlations, 4th ed. Wiley-Liss, Inc., New York, ISBN

6 Enzymy snižují aktivační energii reakce (E A ) zkracují čas dosažení rovnovážných koncentrací nespotřebovávají se, z reakce vycházejí nezměněny umožňují uskutečnění reakce při T, p a ph lidského těla jsou specifické mohou být regulovány nemění G dané reakce nemění rovnovážné koncentrace

7 Struktura a vlastnosti - většina enzymů jsou proteiny Obrázek převzat z (prosinec 2006)

10 Každý enzym má teplotní optimum ph optimum určitou afinitu k substrátu Obrázek převzat z (prosinec 2006)

12 Některé enzymy jsou produkovány ve formě prekurzorů (= PROENZYMY nebo ZYMOGENY) Obrázek převzat z : (prosinec 2006)

13 nebo musí být nejprve aktivovány (např. fosforylací): Obrázek převzat z (prosinec 2006)

14 Izoenzymy (izozymy) jsou enzymy, které katalyzují stejnou reakci, ale liší se strukturou a fyzikálně-chemickými vlastnostmi. Izoenzymy jsou kódovány různými geny (= pravé izoenzymy) nebo vznikají různou posttranslační modifikací (= izoformy) se nachází v různých kompartmentech buňky se nachází v různých tkáních organismu mohou být oligomery různých podjednotek

15 př. 5 izozymů (různý poměr jednotlivých monomerů) Obrázek převzat z (prosinec 2006)

16 samostatné enzymy mtb dráhy multienzymové komplexy Figure 17.6 z Garrett, R.H.; Grisham, C.M. Biochemistry; Saunders: Orlando,1995; str. 553, nalezený na (prosinec 2006)

17 př. multienzymový komplex dehydrogenázy 2-oxokyselin Obrázek převzat z (prosinec 2006)

18 př. multienzymový komplex dehydrogenázy 2-oxokyselin Obrázek převzat z (prosinec 2006)

19 Alosterický enzym: a) monomerní, b) oligomerní Obrázek převzat z učebnice: Devlin, T. M. (editor): Textbook of Biochemistry with Clinical Correlations, 4th ed. Wiley-Liss, Inc., New York, ISBN

20 Alosterický enzym v T a R konformaci: modulátory ovlivňují rovnováhu reakce inhibitory mají vyšší afinitu k T-konformaci aktivátory a substráty mají vyšší afinitu k R-konformaci Obrázek převzat z učebnice: Devlin, T. M. (editor): Textbook of Biochemistry with Clinical Correlations, 4th ed. Wiley-Liss, Inc., New York, ISBN

21 Enzymy v medicíně stanovení aktivity enzymů v krvi enzymové analytické metody enzymoterapie

22 Stanovení aktivity enzymů z diagnostických důvodů nejčastěji je vyšetřována krev (sérum, plazma) zjištění přítomnosti a závažnosti tkáňového poškození jednotky: µkat/l (= katalytická koncentrace enzymu) kat = katal 1 katal = 1 mol substrátu přeměněný enzymem za 1 sec. 1 µkat = 10-6 kat

23 Enzymy nacházející se v plazmě: a) enzymy specifické pro plazmu (př. srážecí faktory) b) sekreční enzymy (př. amyláza, lipáza) c) buněčné enzymy Důležité je znát: 1) intracelulární lokalizaci enzymů 2) distribuci enzymů v orgánech a tkáních 3) zdroj enzymů nacházejících se v plazmě 4) cesty eliminace enzymů z krve

24 srdeční enzymy Obrázek převzat z učebnice: Devlin, T. M. (editor): Textbook of Biochemistry with Clinical Correlations, 4th ed. Wiley-Liss, Inc., New York, ISBN

25 ENZYMY Žádanka na biochemické vyšetření: (prosinec 2006)

26 Názvosloví enzymů -áza nebo -asa / -in IUMB nomenklatura enzymů doporučené názvy

27 IUMB nomenklatura enzymů EC nomenklatura * každý enzym má své EC číslo (Enzyme Commission of IUBMB) 6 tříd enzymů: EC 1.x.x.x EC 2.x.x.x EC 3.x.x.x EC 4.x.x.x EC 5.x.x.x EC 6.x.x.x oxidoreduktázy transferázy hydrolázy lyázy izomerázy ligázy (syntetázy) vychází z typu enzymem katalyzované reakce

28 systematické názvy * tvoří se podle specifických pravidel, specifikují reakci katalyzovanou enzymem příklad: ATP : D-glukóza fosfotransferáza (EC ) přenáší (2) fosfát (7) na alkoholovou sk. (1) ATP + D-Glc ADP + D-Glc-6-fosfát (Glc-6-P)

29 doporučené názvy (= akceptované) * jednodušší než systematické, běžně se používají * velmi důležité! příklad: EC = glukokináza (viz výše)

30 staré triviální názvy * bez vztahu ke katalyzované reakci * koncovka -in (pepsin, trypsin) * používají se pro enzymy objevené již dávno (dlouho používané názvy) zkratky enzymů * běžné v medicíně př. LD, ALT, ALP

31 Většina názvů enzymů obsahuje koncovku -áza a) název substrátu + -áza (př. amyláza) b) typ reakce + -áza (př. dehydrogenáza) = skupinový doporučený název, nejde o název konkrétního enzymu

32 IUBMB Enzyme Nomenclature Accepted name: hexokinase EC Reaction: ATP + D-hexose = ADP + D-hexose 6-phosphate Other name(s): hexokinase type IV glucokinase; hexokinase D; hexokinase type IV; hexokinase (phosphorylating); ATP-dependent hexokinase; glucose ATP phosphotransferase Systematic name: ATP:D-hexose 6-phosphotransferase Comments: D-Glucose, D-mannose, D-fructose, sorbitol and D- glucosamine can act as acceptors; ITP and datp can act as donors. The liver isoenzyme has sometimes been called glucokinase. Příklad odkazu z databáze enzymů:

33 Doporučené (triviální) názvy enzymů (používají se v biochemii) 1) oxidoreduktázy: A ox + B red A red + B ox * dehydrogenáza (H - nebo H) * reduktáza * oxidáza * peroxidáza (různé peroxidy) * oxygenáza (O 2 ) * hydroxyláza (= monoxygenáza; -OH) * desaturáza (-CH 2 CH 2 - -CH=CH-)

34 2) transferázy: A-x + B A + B-x * skupinatransferáza (př. aminotransferáza) * kináza (= fosfotransferáza) * fosforyláza * transketoláza * transaldoláza

35 3) hydrolázy: A-B + H 2 O A-H + B-OH * esteráza (R 1 -CO-O-R 2 ) * fosfatáza (fosfát-o-r) P i!!! * fosfodiesteráza (R 1 -O-fosfát-O-R 2 ) * nukleáza, peptidáza, glykosidáza, lipáza

36 4) lyázy: A-x B + x * dekarboxyláza ( CO 2 ) * dehydratáza ( H 2 O) * hydratáza (-CH=CH- + H 2 O -CH(OH) CH 2 -) * syntáza

37 5) izomerázy: A izo-a * epimeráza (monosacharid jeho epimer) * mutáza (změna polohy fosfátové skupiny v molekule)

38 6) ligázy: A + B + ATP A-B + ADP + P i * syntetáza * karboxyláza

39 ENZYMY Žádanka na biochemické vyšetření: (prosinec 2006)

40 Doplňte třídu, do níž každý z enzymů patří: AST ALT GMT ALP ACP AMS LPS CK CHE LD aspartátaminotransferáza alaninaminotransferáza gamaglutamyltranspeptidáza alkalická fosfatáza kyselá fosfatáza α-amyláza lipáza kreatinkináza cholinesteráza laktátdehydrogenáza

41 Kofaktory enzymů oxidoreduktázy: NAD + nikotinamidadenindinukleotid NADP + nikotinamidadenindinukleotid fosfát (prekurzor: niacin = kyselina nikotinová) H - FAD flavinadenindinukleotid FMN flavinmononukleotid (prekurzor: riboflavin = vitamin B2) 2 H hem Fe 3+ + e - Fe 2+ e -

42 transferázy: ATP adenosinetrifosfát / fosfát GTP guanosintrifosfát / fosfát TDP thiamindifosfát / C-fragment (prekurzor: thiamin = vitamin B1) PALP pyridoxalfosfát / -NH 2 (prekurzor: pyridoxin = vitamin B6) THF tetrahydrofolate / C1-fragment (prekurzor: kyselina listová) CoA PAPS koenzym A (HS-Co-A) / acyl fosfoadenosinfosfosulfát / sulfát

43 3 -fosfoadenosin-5 -fosfosulfát (PAPS) přenáší sulfát do substrátu při konjugačních reakcích (sulfatace) Obrázek je převzat z (leden 2007)

44 Koenzym A = CoA-SH Obrázky převzaty z a (leden 2008)

45 Deriváty tetrahydrofolátu Obrázek převzat z (leden 2008)

46 lyázy: PALP pyridoxalfosfát (dekarboxylázy) ligázy: ATP adenosintrifosfát acyl-coa-syntetázy aminoacyl-trna-syntetázy biotin = vitamin H (karboxylázy)

47 Enzymová kinetika aktivita, jednotky 1 katal = 1 mol substrátu přeměněný enzymem za 1 sec. 1 IU = 1 µmol substrátu přeměněný enzymem za 1 min. 1 katal = 1 mol / 1 sec. = 10 6 µmol / 1 sec. = 60 x 10 6 µmol / 1 min (= 60 sec.) 1 katal = 6 x 10 7 IU IU = international unit = mezinárodní jednotka

48 Aktivita se vztahuje na konstantní koncentraci enzymu: [E] = konstantní Obrázek převzat z (prosinec 2006)

49 ! DŮLEŽITÉ! Obrázek převzat z (prosinec 2006)

50 Kinetika Michaelis-Mentenové průběh křivky (hyperboly) může být popsán rovnicí: Obrázek převzat z (prosinec 2006)

51 K m popisuje afinitu enzymu k danému substrátu! nepřímá úměrnost! Obrázek převzat z (prosinec 2006)

52 linearizace hyperboly (reciproké hodnoty): y = k x + q Obrázek převzat z (prosinec 2006)

54 Inhibice enzymů Obrázek převzat z (prosinec 2006)

55 1) Kompetitivní inhibice inhibitor je strukturně podobný substrátu váže se do aktivního centra, ale není enzymem přeměňován zvyšuje K m ( afinity enzymu k substrátu) zvýšením koncentrace substrátu lze inhibici potlačit inhibice je vratná Obrázek převzat z (prosinec 2006)

56 2) Nekompetitivní inhibice inhibitor se váže na jiné místo enzymu než substrát inhibici nelze potlačit zvýšením koncentrace substrátu (nemění se K m ) V max klesá (protože došlo ke snížení aktuální koncentrace aktivního enzymu) vratná pouze pokud se inhibitor neváže na enzym kovalentně Obrázek převzat z (prosinec 2006)

57 Shrnutí inhibice enzymu Obrázek převzat z (prosinec 2006)

58 Některé enzymy mohou být také inhibovány nadbytkem substrátu Obrázek převzat z (prosinec 2006)

59 Inhibice léky a jedy a) vratná (reverzibilní) nebo b) nevratná (ireverzibilní) inhibitor se váže na enzym kovalentně (pevně)

60 Inhibice jako regulace metabolických drah inhibice produktem nebo meziproduktem a) inhibice zpětnou vazbou (feedback regulace) b) zkřížená regulace c) regulace krokem vpřed (feedforward regulace) inhibice d) reverzibilní kovalentní modifikací (př. fosforylace / defosforylace enzymu)

61 Reverzibilní kovalentní modifikace: A) fosforylace proteinkinázou defosforylace proteinfosfatázou B) fosforylovaný enzym je buď aktivní nebo inaktivní (různé enzymy jsou ovlivňovány různě) Obrázek převzat z (prosinec 2006)

62 Inhibice enzymů využívaná při regulacích je buď kompetitivní (K m se zvyšuje nad koncentraci substrátu, který je v buňce k dispozici) nebo alosterická (dochází ke konformační změně ovlivňující aktivní centrum enzymu)

63 Alosterická regulace aktivátor je pozitivním modulátorem inhibitor je negativním modulátorem! Křivka alosterických enzymů je sigmoidální, ne hyperbolická! Obrázek převzat z (prosinec 2006)

64 SOUHRN Regulace aktivity enzymů dostupnost substrátu a jeho koncentrace indukce syntézy regulačního enzymu aktivace prekurzorů enzymu kovalentní modifikace enzymů kompetitivní inhibice alosterická regulace