IMMUNOZYM FSME IgM IVD 1. ÚVOD 2. APLIKACE 3. PRINCIP TESTU

Transkript

1 IMMUNOZYM FSME IgM Enzymatická imunoanalýza ke stanovení IgM protilátek proti viru klíšťové encefalitis v lidském séru, citrátové plazmě a likvoru Produkt č.: testů Skladování: 2 8 C IVD PROGEN Biotechnik GmbH Maaßstraße 30 D Heidelberg info@progen.de Tel Fax Návod k použití / Gebrauchsanweisung / Carnet d instruction / instrucciones de uso / gebruiksaanwijzing / istruzioni per l'uso / σελίδα οδηγιών / bruksanvisning / modo de emprego: 1. ÚVOD Mezi významná onemocnění, která jsou přenášená klíšťaty, patří v Evropě Středoevropská klíšťová meningoencefalitis (německy FSME) a Lymská borelióza. Zatímco borelióza je ubivalentní, je výskyt klíšťové encefalitis především vázán na endemické oblasti (jižní Německo, Durinsko, Rakousko, Švýcarsko, Maďarsko, Švédsko, Česko, Slovensko, Chorvatsko, Slovinsko, určité oblasti dřívějšího Sovětského svazu a další). Obě infekční onemocnění vykazují typický dvou event. více fázový průběh. Inkubační doba viremické fáze klíšťové encefalitis je od 3 do 14 dnů. První fáze onemocnění (1 8 dnů) se projevuje chřipkovými symptomy. Po klidové fázi bez teplot (cca 1 týden) může onemocnění přestoupit do druhé fáze s neurologickými symptomy různé závažnosti a může trvat několik týdnů. Na začátku druhé fáze onemocnění lze obvykle prokazovat IgM protilátky proti klíšťové encefalitidě. IgM protilátky dosahují nejvyšších hodnot po 2 6 týdnech a v některých případech teprve po 10 měsících mohou klesnout pod průkaznou hranici. IgG protilátky proti klíšťové encefalitidě lze prokazovat současně s IgM nebo o několik dní později. Po prodělané infekci je získána přirozená, většinou celoživotní imunita. Ochranu proti klíšťové encefalitidě lze získat také očkováním. Taková ochrana je omezena několika lety a musí být pravidelně obnovována (pokud možno po serologické kontrole; dáno očkovacím schématem). Specifické protilátky proti klíšťové encefalitidě v likvoru mohou být prokázány v důsledku poškození hematoencefalické bariéry, po nebo během probíhající imunitní reakce proti antigenu nebo v důsledku lokální imunitní reakce. Přičemž dynamika tvorby protilátek v likvoru může být odlišná od dynamiky protilátek v séru/plazmě). Testem IMMUNOZYM FSME IgM a IMMUNOZYM FSME IgG lze rozlišovat specifické protilátky proti klíšťové encefalitis jak třídy IgM tak IgG. Určení IgM protilátek testem IMMUNOZYM FSME IgM není ovlivněno revmatoidním faktorem nebo specifickými IgG protilátkami přidáním RF/IgG absorbentů. Kombinaci obou testů je možné využít k průkazu humorálních protilátek imunitního stavu proti klíšťové encefalitidě po očkování, nebo po infekci (IgM, IgG) nebo pro včasnou diagnozu primoinfekce (IgM) a pro monitorování hladiny IgM/IgG protilátek v séru, citrátové plazmě a likvoru. 2. APLIKACE Včasná diagnóza při primoinfekci (přítomnost viru klíšť. encefalitis po kousnutí klíštětem) popřípadě v souvislosti s průkazem IgG protilátek po klíšťové encefalitidě. Diferenciální diagnostika při jiných virem podmíněných meningitidách, meningo-encefalitidách a encefaloradikulitidách. Diferenciální diagnostika při borelioze, při symptomech podobných chřipce (letní chřipka), v první fázi onemocnění a při symptomatice CNS ve druhé fázi onemocnění. 3. PRINCIP TESTU IMMUNOZYM FSME IgM je dvoukroková ELISA. Jednotlivé jamky ELISA proužků jsou potaženy inaktivovaným virem klíšť. encefalitidy. Pro odstranění specifických IgG protilátek a revmatoidního faktoru jsou naředěné vzorky ošetřeny RF/ antilidským IgG absorbentem. Během 15 min inkubace vzorku dochází k precipitaci IgG protilátek a revmatoidního faktoru a k navázání výlučně IgM protilátek proti klíšťové encefalitidě na pevnou fázi. Nespecifické částice vzorku jsou odstraněny promytím. Ve druhém inkubačním kroku následuje reakce s konjugátem. Peroxidázový konjugát proti lidským IgM protilátkám ozřejmí navázané IgM protilátky proti klíšťové encefalitidě. V dalším promývacím kroku se nenavázaný konjugát odstraní. Ve třetím inkubačním kroku následuje reakce substrátu, peroxidáza konjugátu za použití peroxidu vodíku oxiduje TMB substrát za vzniku modré substance. Následným přidáním kyseliny sírové je reakce zastavena a je dosaženo žlutého zbarvení. Extinkce se měří při vlnové délce 450 nm na ELISA readru (fotometru). Hodnocení FSME IgM cz_v7 1 / 6

2 IMMUNOZYM FSME IgM ELISA testu pro vzorky séra/plazmy je možné zvolit jak kvantitativní tak kvalitativní, pro likvor kvalitativní pomocí kontrolních sér NEG, a POS HL 4. Potřebné pomůcky, které nejsou součástí vybavení destilovaná voda zkumavky k ředění vzorků odměrný válec (1000 ml) mikropipety (5, 50, 200, 300, 500 μl) jednokanálové pipety (10 a 20ml) vícekanálové pipety (50 a 200 a 250 μl) třepačka vzorků časový spínač čtecí zařízení ELISA-reader, filtr pro 450 nm Software IMMUNOZYM One Point Calibration pro hodnocení pomocí Microsoft Exel 5.0 nebo vyšší verze (software bude poskytnuto na požádání zdarma). 5. Materiál a reagencie dodávané v testu MTP, 12 x 8 ELISA (12 testovacích proužků s 8 odlamovacími jamkami) potažených inaktivovaným virem FSME v zataveném hliníkovém sáčku s pohlcovačem vlhkosti. Připravené k použití! WASH 10x, koncentrát promývacího roztoku (10x), 1 lahvička, 100 ml v každé lahvičce; 0,1 M Tris/HCl ph 7,4, obsahuje detergent. Před použitím nařeďte! DIL, inkubační pufr; 0,01 M Tris/HCl; ph 7,4; obsahuje detergent; zbarvený červeně; 2 x 75 ml. Připraven k použití! ABS 20x, RF/IgG-absorbent (20x); proti lidským IgG protilátkám se stabilizátory a konzervačním prostředkem; červeně zbarvený; 1 lahvička; 5 ml. Před použitím nařeďte!, POS HL, NEG kontrolní séra, LL, Low Level = Nízká koncentrace, HL, High Level = Vysoká koncentrace a negativní. Negativní k testování přesnosti; lidská séra se stabilizátory a konzervačními látkami; 1 lahvička od každého séra, lyofilizováno. Před použitím rekonstitujte! CON, konjugát; FSME-peroxidázový (100x); 1 lahvička, lyofilizováno. Před použitím rekonstitujte! S, Substrát; tetrametylbenzidin (TMB); 2 x 12 ml. Připravené k použití! STOP, Stop roztok (zastavuje reakci); 0,5 M kyselina sírová; 1 lahvička, 12 ml. Připraven k použití! Adhezivní fólie; pro přikrytí testovacích proužků ELISA; 2 kusy. Pacientský protokol, 1 kus. Protokol pacienta kvantitativní (pro vzorky séra, plazmy a likvoru) pro bodovou kalibraci IMMUNOZYM; specifické pro každou šarži; 1 ks Protokol pacienta kvalitativní (pro vzorky séra, plazmy a likvoru) pro bodovou kalibraci IMMUNOZYM; specifické pro každou šarži; 1 ks 6. PROVEDENÍ TESTU 6.1. Materiál vzorku a uchovávání Lidské sérum, citrátová plazma a likvor. Vzorky mohou být skladovány při teplotě 2-8ºC po dobu 6 týdnů [9]. Nezředěné vzorky se mohou skladovat při teplotě minimálně 20ºC až několik měsíců. Zamezte opakovanému zmrazení/rozmrazení Příprava Než začnete s vyšetřováním, vytemperujte všechny potřebné složky na pokojovou teplotu (20-26 ºC). Příprava RF/IgG-absorbent pufru, 1+20: Přidejte 2,5 ml RF/IgG absorbentu k 50 ml inkubačního pufru. Připrava je dostačující pro 96 stanovení. Pro 8 testovacích jamek: smíchejte 200 μl RF/IgG absorbentu s 4 ml inkubačního pufru. Připravený RF/IgG-absorbent pufr je stabilní po 24 hodin při teplotě 2 8ºC nebo při 20ºC po dobu 6 měsíců. Ředění kontrolního sera vzorků plazmy, 1+100: Rekonstitujte lyofilizované kontrolní serum, každé s 350 μl inkubačního pufru, ponechte 15 min při pokojové teplotě (20-26ºC) a promíchejte 10 sec v třepačce vzorků ( zabraňte vzniku pěny). Napipetujte 500 μl připraveného RF/IgG- absorbent pufru do zkumavky k ředění vzorků, přidejte 5 μl rekonstituovaného kontrolního séra nebo vzorku, dobře promíchejte a ponechte 15 min při pokojové teplotě (20-26ºC). Ředění vzorku likvoru 1+9: Zřeďte 50 μl likvoru 450 μl připraveného FR/IgGabsorbent pufru a ponechte 15 min při pokojové teplotě (20-26ºC). Příprava pracovního roztoku konjugátu, 1+100: Rekonstitujte 300 μl inkubačního pufru. Připravte bezprostředně před použitím. Příklad pro 8 jamek: smíchejte 20 μl konjugátu s 2000 μl inkubačního pufru. Připravený roztok je stabilní po dobu 60 min při pokojové teplotě (20-26ºC). Příprava promývacího pufru, 1+9: Příklad pro 12 x 8 proužků jamek: Přidejte 30 ml koncentrátu promývacího roztoku (10x) k 270 ml destilované vody. Řádně promíchejte! Roztok připravený k použití je možno uchovávat při 2 8 C po dobu 2 měsíců FSME IgM cz_v7 2 / 6

3 6.3. Stabilita reagencií Testovací soupravu a jednotlivé komponenty uchovávejte při 2-8 C. Nenačaté reagencie jsou stabilní až do vyznačeného data expirace. Stabilita po otevření: 6 měsíců po otevření při 2-8 C: WASH 10x, S, MTP, DIL (umístěte nepoužité stripy v plastikovém sáčku poskytnutém v soupravě) 2 týdny při 2-8 C nebo 6 měsíců při -20 C:, POS HL, NEG, CON, ABS 20x 6.4. Průběh testu Inkubace vzorku: Do každé jamky napipetujte 200 μl kontroly/vzorku. Kontrolní séra by měla být umístěna v proužku 1 a 2. Testovací proužky přikryjte fólií. Inkubujte při pokojové teplotě (20-26 C) po dobu 60 min. Promytí: Vyprázdněte mikrotitrační proužky a všechny jamky naplňte 250 µl promývacího pufru připraveného k použití. Jamky opět vyprázdněte a tento promývací krok dvakrát opakujte. Přebytečnou tekutinu odstraňte oklepnutím proužků na absorpční papír. Inkubace konjugátu: Do každé jamky napipetujte 200 µl konjugátu připraveného k použití. Přikryjte adhezívní fólií. Inkubujte při pokojové teplotě (20-26 C) po dobu 60 min. Promytí: Vyprázdněte mikrotitrační proužky, promyjte podle postupu uvedeného výše (3x250 µl na každou jamku). Substrátová reakce: Do každé jamky napipetujte 200 µl substrátu připraveného k použití, inkubujte při pokojové teplotě (20-26 C) po dobu 30 min (BEPIII 20 min). Stop reakce: Do každé jamky napipetujte 50 µl stoproztoku, třepejte po dobu 10 sekund, za 10 min změřte zbarvení při 450 nm (referenční vlnová délka 650 nm). 7. Upozornění pro uživatele Pro odborné použití. Promývací pufr, inkubační pufr, substrát a stop roztok je možno vyměnit za tyto roztoky z následujících produktů IMMUNOZYM: FSME IgG, Tetanus a Diphtherie. Přesnost a výtěžnost (recovery) závisí na následujících důležitých faktorech: Mikrobiologicky kontaminované vzorky mohou být příčinou chybných výsledků. Inkubace provádějte při pokojové teplotě (20-26 C). Dodržujte přesné pořadí pipetování. Inkubační doby by neměly být překročeny o více než 10%. Inkubační doba začíná po posledním kroku pipetování. Doba pipetování vzorků by neměla přesahovat 60 sekund pro každý jednotlivý testovací proužek ELISA. Doba pipetování konjugátu, substrátu a stop-roztoku by neměla přesahovat 10 sekund pro každý jednotlivý testovací proužek ELISA. Bezpečnostní upozornění: Stop-roztok (kyselina sírová) a složky substrátu (metylpyrolidon) mohou způsobit podráždění kůže. Pokud by kyselina či substrát zasáhly oči, okamžitě oči vypláchněte velkým množstvím vody a obraťte se na lékaře! Lidská plazma použitá v tomto produktu byla vyšetřena na virus lidské imunodeficience HIV (HIV 1 + 2), hepatitidu B a C s negativním výsledkem (ne opakovaně reaktivní). Všechny produkty z lidské krve však musí být považovány za potenciálně infekční. Dodržujte obecně platná bezpečnostní opatření týkající se manipulace s potenciálně infekčním materiálem. Některé reagencie obsahují konzervační látky. Nepolykejte! Zamezte jakémukoli styku s kůží či sliznicemi! Bezpečnostní list je k dispozici na požádání! Likvidace Produkt: Chemické látky musí být likvidovány v souladu s platnými národními předpisy. Likvidace biologických složek musí být v souladu s existující praxí likvidace, která se uplatňuje pro vzorky séra pacientů a infekční odpad. Obal: Obal musí být zlikvidován v souladu s platnými národně specifickými předpisy. S kontaminovaným obalem zacházejte stejným způsobem jako s produktem samotným. Pokud není úředně stanoveno jinak, pak je možno s nekontaminovaným obalem zacházet jako s domácím odpadem nebo je možno jej recyklovat. Opatření při poškození během přepravy Pokud je souprava vážně poškozená, kontaktujte prosím výrobce či místního distributora. Vážně poškozené složky pro provedení testu nepoužívejte. Tyto složky či sety uschovejte až do doby vyřízení reklamace. 8. VYHODNOCENÍ TESTU 8.1. Kvantitativní vyhodnocení vzorků sera a plazmy Výpočet koncentrace Použijte průměrné hodnoty kontrolních sér NEG,, POS HL a vzorků. Udané hodnoty a extinkce kontrolního séra musí ležet v udané toleranční oblasti ( viz Protokol pro IMMUNOZYM One Point Calibration quantitave ). Výpočet testově specifického korekčního faktoru F pro všechny nasazené vzorky: Rovnice 1: OD 450 nm (udaná hodnota kontrolního séra ) F = OD 450 nm (naměřená hodnota kontrolního séra ) FSME IgM cz_v7 3 / 6

4 Vynásobte extinkci kontrol a vzorků korekčním faktorem F. Odečtěte koncentrace kontrol a vzorků na přiložené referenční křivce, která je specifická pro každou šarži. Příklad výpočtu: udaná hodnota OD kontrolní sérum naměřená hodnota kontrolní sérum korekční faktor naměřená hodnota vzorku naměřená hodnota vzorku zkorigovaná korekčním faktorem odečtená koncentrace vzorku OD450 nm=0,993 OD450 nm=1,012 F=0,981 OD450 nm=0,706 OD450 nm=0, VIEU/ml Automatické určení koncentrace pro kvantitativní bodovou kalibraci Otevřete excelový modul IMMUNOZYM One Point Calibration a vložte následující data do připravených políček: extinkční udanou hodnotu kontrolního séra, optickou denzitu toleranční oblasti kontrolního séra, koeficienty referenční křivky A,B,C a D, průměrnou hodnotu extinkce, identifikaci a extinkce kontrolních sér a vzorků, Korekce optických denzit a výpočet koncentrace proběhnou automaticky. Použijte údaje z protokolu IMMUNOZYM One Point Calibration quantitave pro specifickou šarži. Extinční hodnota musí být ve vyznačeném rozmezí pro danou šarži. Korekce extinkce a výpočet koncentrací proběhne automaticky Validita průběhu testu Extinkce kontrolního séra musí ležet v udané toleranční oblasti dané šarže. Koncentrace v rozsahu VIEU/ml je považována za hraniční. Kontrolní sérum NEG musí být menší než 63 VIEU/ml, kontrolní sérum POS HL musí být větší než 126 VIEU/ml Vyhodnocení naměřených výsledků IgM protilátky proti klíšťové encefalitidě hladina: <63 VIEU/ml * negativní VIEU/ml hraniční 126 VIEU/ml *VIENNA UNITS (podle prof. Ch. Kunze / Vídeň) 8.2. Kvalitativní vyhodnocení vzorků likvoru, séra a plazmy Výpočet Použijte průměrných hodnot kontrolních sér NEG,, POS HL a vzorků séra/plazmy/likvoru. Extinkce kontrolního séra musí ležet v udané toleranční oblasti pro danou šarži. Výpočtěte korekční faktor F specifický pro každé provedení testu (rovnice 1). Udaná hodnota OD kontrolního séra a udaná hodnota OD prahových hodnot 1 a 2 jsou specifické pro každou šarži (viz Protokol pro IMMUNOZYM One Point Calibration FSME IgM qualitative ). Vynásobte extinkce kontrol a vzorků korekčním faktorem F. Příklad výpočtu: udaná hodnota OD kontrolního séra OD450nm=0,993 udaná hodnota OD prahové hodnoty 1 OD450nm=0,240 (cut-off) udaná hodnota OD prahové hodnoty 2 OD450nm=0,420 naměřená hodnota kontrolního séra OD450nm=1,012 korekční faktor F F=0,981 Naměřená hodnota vzorku OD450nm=0,380 Opravená hodnota vzorku OD450nm=0,373 Vyhodnocení vzorku hraniční Automatické vyhodnocení bodové kalibrace-kvalitativní Otevřete excelový modul IMMUNOZYM bodová kalibrace FSME IgM kvalitativní. Vložte data do připravených políček: - extinkci udané hodnoty kontrolního séra, - OD toleranční hranice kontrolního séra, - extinkci udané hodnoty prahových hodnot 1 a 2. Extinkce kontrolního séra musí ležet v uvedené toleranční oblasti pro danou šarži ( Použijte údaje z protokolu pro IMMUNOZYM One Point Calibration qualitative). Dále zaneste: - naměřenou extinkční hodnotu kontrolního séra (průměr), - identifikace a průměrné hodnoty extinkce kontrolního séra a vzorků OD-korekce a vyhodnocení vzorků probíhá automaticky Validita průběhu testu Extinkce kontrolního séra musí ležet v uvedené toleranční oblasti. Oblast optické denzity mezi prahovými hodnotami 1 a 2 se nazývá hraniční zóna FSME IgM cz_v7 4 / 6

5 Kontrolní sérum NEG musí být menší než prahová hodnota 1 Kontrolní sérum POS HL musí být větší než prahová hodnota Kvalitativní vyhodnocení naměřených výsledků Korigovaná optická denzita vzorku se posuzuje podle obsahu IgM protilátek proti klíšťové encefalitidě: OD< prahová hodnota 1 negativní 1< OD > 2 hraniční OD>prahová hodnota 2 9. INTERPRETACE Pro potvrzení infekce klíšťovou encefalitidou se musí nejprve stanovit IgM protilátky ze séra/plazmy. Pro potvrzení diagnózy by se též měly určit IgG protilátky proti klíšťové encefalitidě. Pokud jsou k dispozici vzorky likvoru, přítomnost IgM protilátek a IgG protilátek může být ověřena Posouzení sérových/plazmových výsledků Při interpretaci serologických výsledků se musí zohlednit anamnéza pacienta (pobyt v lesních oblastech, kousnutí klíštětem, nedávno provedené očkování atd.). IgM protilátky proti klíšťové encefalitidě negativní a IgG protilátky proti klíšťové encefalitidě negativní Pravděpodobně se nejedná o infekci klíšťové encefalitidy. Při opodstatněném podezření na infekci se s velkou jistotou vyloučí resp. potvrdí infekce dalším odběrem krve po 7-10 dnech a následným určením hladiny protilátek. Diferenciálně diagnosticky by se měly zohlednit ostatní infekce CNS, po kousnutím klíštětem obzvláště borelióza. IgM protilátky proti klíšťové encefalitidě negativní a IgG protilátky proti klíšťové encefalitidě Jedná se buďto o přirozenou imunizaci anebo před týdny či měsíci proběhlou infekci. Při odůvodněném podezření se s velkou jistotou potvrdí čerstvá infekce dalším odběrem krve s dalším určením hladiny protilátek. IgM protilátky proti klíšťové encefalitidě a IgG protilátky proti klíšťové encefalitidě negativní Pravděpodobně se jedná o infekci klíšťové encefalitidy. Po infekci virem klíšťové encefalitidy dojde nejprve k tvorbě protilátek IgM s následnou tvorbou IgG. V období časné fáze infekce klíšťovou encefalitidou mohou být IgG protilátky negativní nebo hraniční. Opakováním vyšetření IgG protilátek (séra/plazmy) po dalším odběru krve během 7-10 dnů se ověří změna koncentrace protilátek. IgM protilátky proti klíšťové encefalitidě a IgG protilátky proti klíšťové encefalitidě S vysokou pravděpodobností se jedná o infekci virem klíšťové encefalitidy, může-li se vyloučit očkování proti klíšťové encefalitidě. Pacient může různými způsoby vykazovat typické příznaky klíšťové encefalitidy. Při hraničních výsledcích se musí ověřit přítomnost a hladina protilátek dalším odběrem krve během 7-10 dnů. Veškeré změny koncentrace protilátek se musí kontrolovat Posouzení výsledků séra, plazmy a likvoru Je-li k dispozici likvor, je možné dodatečně určit IgG a IgM protilátky v tomto vzorku. Dodatečná serologická diagnostika z likvoru má význam jen tehdy, byly-li v séru/plazmě nalezeny IgG a IgM protilátky. Pozitivní likvorový nález musí být ověřen vyloučením poruchy hematoencefalické bariéry. Při interpretaci výsledků se musí zohlednit anamnéza pacienta. negativní a v likvoru negativní Nejedná se o virovou infekci klíšťové encefalitidy. Může se jednat o primoinfekci virem klíšťové encefalitidy, jestliže vyšetření bylo provedeno za 1-13 dní po doloženém kousnutí klíštětem (v inkubační fázi). Během této doby nejsou průkazné IgM protilátky. Dalším měřením IgM protilátek během dalších 7-14 dnů se může s jistotou vyloučit infekce klíšťové encefalitidy. Pokud nejsou pochybnosti o zdokumentování přisátí klíštěte a pacient má chřipce podobné symptomy s počínající symptomatikou CNS, lze po vyloučení infekce klíšťovou encefalitidou předpokládat infekci boreliemi nebo jinými neurotropními viry. negativní a v likvoru hraniční Takový výsledek je nepravděpodobný, protože po viremické fázi se nejdříve očekává tvorba protilátek v krvi. Probíhá-li infekce v CNS (srovnej 4., 6., 7.), dochází následně k tvorbě intrathekálních protilátek (IgG, IgM). Infekce klíšťovou encefalitidou, při kterých dochází primárně k manifestaci onemocnění CNS dosud nebyly popsány. Doporučuje se opakovat test. hraniční a v likvoru negativní dní po infekci nastává manifestace CNS symptomů onemocnění. Na počátku onemocnění zpravidla dochází ke zvýšení koncentrace IgM protilátek v séru. Za 1-13 dní po infekci (1. fáze onemocnění FSME IgM cz_v7 5 / 6

6 chřipková) může být hladina IgM protilátek v séru negativní nebo hraniční. Opakované vyšetření IgM protilátek během následujících 7-10 dní udává dynamiku tvorby protilátek. hraniční a v likvoru hraniční Jako 3. Zde se předpokládá včasná manifestace onemocnění CNS nebo porucha hematoencefalické bariéry. Pro určení IgM (sérum/likvor) nutno opakovat. a v likvoru negativní Značí výskyt primoinfekce virem klíšťové encefalitidy po kousnutí klíštětem. U pacienta jde při rozdílném obraze o typickou symptomatiku první fáze onemocnění (chřipková fáze) bez známek manifestace onemocnění CNS. Pro vyloučení postižení (účasti) CNS se doporučuje opakování vyšetření IgM v likvoru. Bylo provedeno očkování vakcinou FSME proti klíšťové encefalitidě (1./2. dávkou). Očkování bylo provedeno nejdéle před 10 měsíci. a v likvoru hraniční Výskyt při primoinfekci virem klíšťové encefalitidy po kousnutí klíštětem. U pacienta se mohou už objevit symptomy infekce CNS. Zřejmě se objevuje poškození hematoencefalické bariery. V případě podezření musí být poškození hematoencefalické bariéry potvrzeno laboratorně biochemickými metodami. K vyloučení resp. potvrzení postižení CNS se doporučuje další vyšetření IgM protilátek z likvoru během 7 dní, jestliže byl proveden další odběr likvoru. a v likvoru Výskyt při primoinfekci virem klíšťové encefalitidy po kousnutí klíštětem. U pacienta se jedná o typickou symptomatiku infekce klíšť. encefalitidou v první fázi onemocnění s postižením CNS. Při m nálezu likvoru a inaparentním projevu onemocnění CNS se pravděpodobně jedná o poškození hematoencefalické bariery. Podezření na toto postižení musí být ověřeno laboratorně biochemickými metodami. 10. ÚDAJE O TESTU Výtěžnost (recovery) vzorků séra: odchylka od teoretické hodnoty je 8%. Pro odchylku v rámci testu (n = 16) založeném na hodnotách extinkcí byl koeficient odchylky stanoven 7%. Pro odchylku mezi různými provedeními testu (4 vzorky, 4 různe dny) byl koeficient odchylky stanoven 7%. Sensitivita: Ze 68 přirozeně infikovaných a očkováno 16 testovaných osob byl jeden testovaný falešně negativní. Toto odpovídá 99% sensitivitě. Specifita: Bylo vyšetřeno 235 zdravých, u kterých bylo anamnesticky vyloučeno čerstvé očkování nebo infekce klíšťovou encefalitidou. Vyšetření bylo provedeno 1 šarží ve dvou jamkách. 2 testovaní byla falešně. To odpovídá specificitě od 99 %. Poruchy: Hemolytické a lipemické vzorky neinterferují s testem. Nelze vyloučit zkříženou reakci protilátek proti jiným Flaviviridae (Dengue Virus, virus Žluté horečky, West Nile Virus). 11. LITERATURA Hofmann, H. et al.; Rapid Diagnosis of Tick-Borne Encephalitis by Means of Enzyme Linked Immunosorbent Assay. J. Gen. Virol., 42, 505 (1979) Hofmann, H. et al.; Immunoglobulins of Tick-Borne Encephalitis in Cerebrospinal Fluid of Men; J. Med. Virol., 4, 241 (1979) Roggendorf, M. et al.: Serological Diagnosis of Acute Tick-Borne Encephalitis by Demonstration of Antibodies of the IgM Class, J. Med. Virol., 7, 41 (1981) Heinz, F. et al.; Comparison of Two Different Enzyme Immunoassays for the Detection of Immunoglobulin M Antibodies against Tick-Borne Encephalitis Virus in Humanserum and Cerebrospinal Fluid. J. Clin. Microbiol., 14, 141 (1981) Hofmann, H. et al.; ELISA for IgM Antibodies against Tick-Borne-Encephalitis Virus: Quantification and Standardization of Results; Zbl. Bakt. I. Orig., 255, 448 (1983) Hofmann, H. et al.; Detectability of IgM Antibodies against TBE Virus after Natural Infection and after Vaccination. Infection, 11/3, 164 (1983) Feldner, J.; RF-Absorbens: IgM-Antikörperbestimmung ohne Rheumafaktor-Interferenz; Lab. med., 14, 283 (1990) Roggendorf, M.: Frühsommer-Meningoenzephalitis - Wer soll geimpft werden? Therapiewoche, 40, 1173 (1990) Die Frühsommer-Meningoenzephalitis und ihre Immunprophylaxe,IMMUNO GMBH, Heidelberg (1992) Berater FSME-Prophylaxe. IMMUNO GMBH, Heidelberg (1993) Togni, G. u. a.: Präanalytik. Schweiz. Med. Forum (2002) Jääskeläinen A. et al., Diagnosis of Tick-Borne Encephalitis by a µ-capture Immunoglobulin M-Enzyme Immunoassay Based on Secreted Recombinant Antigen Produced in Insect Cells. J. Clin. Microbiol., Vol. 41, 9, (2003) PROGEN Biotechnik GmbH Maaßstraße 30, D Heidelberg Německo Datum vytvoření: FSME IgM cz_v7 6 / 6