Tabulka 1 Přehled zdrojů a biologických účinků ROS (Piterková et al., 2005)
|
|
- Lubomír Tábor
- před 8 lety
- Počet zobrazení:
Transkript
1 ÚLOHA 17 Stanovení koncentrace peroxidu vodíku fluorimetricky s činidlem Amplex Red. Stanovení aktivity enzymu xanthinoxidasy v purifikované formě a v buněčném extraktu. Teoretický úvod Reaktivní formy kyslíku (ROS, reactive oxygen species) jsou chemicky reaktivní molekuly obsahující kyslík. Jejich reaktivita je způsobena přítomností nepárového elektronu ve valenční vrstvě. Tento nepárový elektron vzniká homologickým štěpením vazby, přijetím nebo naopak ztrátou elektronu. ROS vznikají jako vedlejší metabolické produkty a hrají důležitou roli v buněčné signalizaci a v udržení homeostázy. Reaktivní formy kyslíku se dělí na dvě skupiny, a to na skupinu volných radikálů a skupinu látek, které nejsou volné radikály. K volným radikálům reaktivních forem kyslíku patří: superoxid (. O - 2 ), hydroxylový radikál (. OH), peroxyl (. ROO), alkoxyl (. RO), hydroperoxyl (. HO 2 ). K látkám, které nejsou volné radikály a patří ke skupině reaktivních forem kyslíku řadíme: peroxid vodíku (H 2 O 2 ), kyselinu chlornou (HOCl), ozon (O 3 ), singletový kyslík ( 1 O 2 ). V Tabulce 1 je uveden přehled zdrojů a biologických účinků ROS. Nejbohatším zdrojem metabolitů kyslíku jsou membránově vázané reduktasy. Nejvýznamnější je cytochromoxidasa v mitochondriích, která provádí čtyřelektronovou redukci kyslíku. Další reduktasy dýchacího řetězce endoplazmatického retikula a membrán jsou schopny jednoelektronově a dvouelektronově redukovat kyslík. Superoxid se tvoří v mitochondriích z koenzymů ubisemichinonu a semiflavinu, v endoplazmatickém retikulu vzniká z oxykomplexu cytochromu P450 a v leukocytech a v makrofázích je produkován NADPH oxidasou obsaženou v cytoplasmatické membráně jako součást baktericidního ochranného systému. Tyto buňky obsahují také myeloperoxidasu, která produkuje kyselinu chlornou. Peroxid vodíku vzniká ve tkáni hlavně dismutací superoxidu nebo je tvořen také přímo působením oxidas, jako je monoaminoxidasa, glutathionoxidasa a xanthinoxidasa. Proces vzniku volných kyslíkových radikálů a jejich působení na buňky organismu se souhrnně nazývá oxidativní stres. Mezi reakce charakteristické pro oxidativní stres patří oxidace polynenasycených mastných kyselin (významný důsledek oxidativního stresu, typická radikálová řetězová reakce, vedoucí ke vzniku poměrně široké škály často toxických produktů, jako jsou aldehydy - malondialdehyd, 4-hydroxy-2-nonenal, dienaly; alkany; izoprostany; konjugované dieny), oxidace nukleotidů (oxidace DNA je charakterizována oxidací deoxyribosy, změnou struktury dusíkatých bází - zejména guaninu a rozrušením dusíkové vazby, snížení metabolické přeměny proteinů, snížení syntézy specifických enzymů a receptorů ústící v nadprodukci příslušných genů, poškození mitochondriálních funkcí, buněčné membrány. Zejména v důsledku snížení fluidity fosfolipidové dvojvrstvy, zvýšení výměny fosfolipidů mezi vrstvami a zvýšení propustnosti membrány výše zmíněné děje ústí v buněčnou smrt. Tabulka 1 Přehled zdrojů a biologických účinků ROS (Piterková et al., 2005) Forma kyslíku Zdroj Biologický efekt O 2.- osvětlené chloroplasty, PSII a PSI, mitochondrie v přítomnosti NADH, Fe-S proteiny, cytochrom P450 elektronový transportní řetězec v endoplasmatickém retikulu, herbicidy (paraquat a nitrofen), enzymové reakce: xanthinoxidasa, NAD(P)H oxidasa, aldehydoxidasa, urikasa (EC ). peroxidace lipidů, inaktivace enzymů, depolymerizace polysacharidů, reakce s H 2 O 2 za tvorby OH., schopnost oxidovat síru, askorbát a NADPH, redukovat cytochrom c a ionty kovů
2 H 2 O 2 glykolátoxidasa v glyoxysomech, osvětlené chloroplasty - PSII, mitochondrie v přítomnosti NADH, β-oxidace mastných kyselin, Fe-S proteiny a enzymové reakce (SOD, glykolátoxidasa, aminoxidasa, oxalátoxidasa (EC ), peroxidasy ) inhibice fixace CO 2, inaktivace enzymů Calvinova cyklu, oxidace sulfhydrylů a flavonolů, substrát oxidační reakce OH. Haberova-Weissova reakce, Fentonova reakce velmi silné oxidační činidlo, poškození DNA, peroxidace lipidů, degradace 1 O 2 excitované chlorofylové molekuly v tripletovém stavu, znečištění vzduchu (NO 2, O 3, atd.) proteinů, produkce C 2 H 4 mutageneze, peroxidace lipidů, fotooxidace aminokyselin Dvouelektronovou redukcí kyslíku vzniká peroxid vodíku (H 2 O 2 ), který je řazen mezi ROS i přesto, že není volným radikálem. V nepřítomnosti přechodných kovů je vysoce stabilní a nereaktivní, dokonce i v tak vysokých koncentracích, než mohou být produkovány v živých systémech. Díky této vlastnosti je více mobilní v pletivech a lze jej potencionálně využívat jako substrát v různých reakcích i jako molekulu zapojenou v ROS signalizaci. V rostlinných buňkách je peroxid vodíku produkován zejména v mitochondriích, chloroplastech, peroxisomech/glyoxysomech, dále v cytoplasmě, plasmatické membráně a v buněčné stěně. Poměr produkce H 2 O 2 v chloroplastech a peroxisomech je 1:2,5; a v chloroplastech/peroxisomech a mitochondriích 35:1. Tyto hodnoty byly stanoveny z rychlosti produkce H 2 O 2 podle Foyer & Noctor (2003). H 2 O 2 je produkován disproporcionační reakcí katalyzovanou superoxiddismutasou (SOD), redukcí superoxidového aniontu redukčními činidly jako jsou např. askorbát, thioly, ferredoxiny atd. K uvolňování H 2 O 2 dochází aktivitou i jiných oxidas, např. glykolátoxidasami, glukosaoxidasami nebo sulfitoxidasami. Mezi další enzymové zdroje O - 2 / H 2 O 2 patří peroxidasy vázané na buněčnou stěnu, oxalátoxidasy, aminooxidasy a NADPH oxidasy plasmatické membrány. Produkce H 2 O 2 a ROS může probíhat v mnoha reakcích fotosyntézy a respirace, což má za následek tvorbu nežádoucích vedlejších produktů normálního aerobního metabolismu. NADPH-dependentní oxidasa plasmatické membrány rostlinných buněk patří mezi nejintenzivněji studovaný oxidasový systém. Jedná se o enzym katalyzující produkci superoxidového anion radikálu jednoelektronovou redukcí kyslíku, kde NADPH funguje jako donor elektronu. Tvorba superoxidového anion radikálu probíhá v prostoru apoplastu a následně dochází k přeměně na H 2 O 2, která může být buď spontánní, nebo způsobena aktivitou extracelulární SOD. Úloha H 2 O 2 v rostlinné biochemii a fyziologii byla popsána v řadě studií. Po vystavení rostliny stresovému faktoru dochází ke zvýšení koncentrace H 2 O 2, rychlost produkce H 2 O 2 je závislá na intenzitě a době působení stresového faktoru. Byla také pozorována odlišnost produkce H 2 O 2 pro různé typy stresu v různých částech buňky, např. stres z nadbytečného světla způsobuje nadprodukci H 2 O 2 hlavně v chloroplastu. Rostlinné buňky vykazují vyšší rezistenci k vyšším koncentracím H 2 O 2 než živočišné buňky, pro které je peroxid vodíku toxický v rozmezí koncentrací μm. U rostlinných buněk byla prokázána tolerance x10 5 μm. V rostlinných systémech má peroxid vodíku dvojí roli, v nízkých koncentracích působí jako signální molekula při spouštění tolerance na různé typy stresových faktorů (abiotické, biotické) a v příliš vysokých koncentracích vede k oxidativnímu stresu, který spouští programovanou buněčnou smrt. V širokém spektru fyziologických procesů jako je růst
3 a vývoj rostliny, fotorespirace a fotosyntéza, pohyb stomat, senescence byla prokázána úloha H 2 O 2 jako klíčového regulátoru. Evoluce všech aerobních organismů je závislá na vývoji účinných H 2 O 2 odstraňujících mechanismů. Pro eliminaci H 2 O 2 je nutné odstranění všech ostatních ROS, rovnovážná hladina buněčného H 2 O 2 je závislá na redoxním stavu buňky. U rostlinných buněk je proces produkce a eliminace H 2 O 2 přísně regulován a koordinován ve stejných nebo různých kompartmentech buňky. Antioxidační systém rostlin je vícestupňový, skládající se z antioxidantů jako je askorbát, α-tokoferol nebo glutathion a celé řady ROS detoxifikujících enzymů jako je askorbátperoxidasa, glutathionperoxidasa, superoxiddismutasa, katalasa a enzymy askorbátglutathionového cyklu. Enzym xanthinoxidoreduktasa (XOR) se vyskytuje ve dvou formách, xanthinoxidasa (XOD, EC ) a xanthindehydrogenasa (XDH, EC ). Nejvyšší aktivita xanthinoxidoreduktasy byla zaznamenána v játrech, střevní sliznici, v mléčné žláze a může se uvolnit i z orgánů a zachytit na povrchu malých cév a kapilár. Za fyziologických podmínek převažuje jeho dehydrogenasová forma XDH, zvaná D-forma. Za patologických podmínek se reversibilní sulfhydrylovou oxidací D-forma enzymu přemění na O-formu (xanthinoxidasu), která není schopna se vázat na NAD + a elektrony pak předává na molekulární kyslík za vzniku superoxidu nebo peroxidu vodíku. Irreversibilní přeměna probíhá tryptickou proteolýzou. XDH je složena ze dvou identických podjednotek o velikosti asi 150 kda, které jsou na sobě katalyticky nezávislé. V každé podjednotce je obsažen jeden molybdopterin, dva Fe-S klastry a jeden FAD. Redoxní centrum se nachází ve třech doménách: dva Fe-S klastry v 20 kda doméně, FAD v 40 kda doméně, molybdopterin v 40 kda doméně. Xanthinoxidasa hraje významnou roli v metabolismu purinů, katalyzuje oxidaci hypoxanthinu na xanthin a dále oxidaci xanthinu na kyselinu močovou. U savců bylo objeveno, že XOD má vztah k signální molekule oxidu dusnatého (NO). XOD i XDH jsou inaktivovány NO a za určitých podmínek se může XOD podílet na tvorbě peroxynitritu. Peroxynitrit pak může regulovat přeměnu XDH na XOD a zpětně tak regulovat aktivitu XOD. Mnoho rostlinných extraktů má inhibiční efekt na aktivitu XOD nebo má schopnost ničit superoxidový radikál. XOD má také klinický význam. Při patologických stavech, např. při poškození jater, je hladina XOD v krevním séru zvýšena. Inhibitor XOD allopurinol má význam při léčbě dny. Dna je onemocnění, při kterém se kyselina močová a krystaly jejích solí hromadí v kloubech a vyvolávají prudké bolesti, otoky a zarudnutí. Krystaly se také mohou ukládat i v ledvinách a kůži. Kvantifikace peroxidu vodíku fluorescenčními sondami Fluorescenční sondy jsou fluorofory (tj. přidávají se ke vzorkům, které nemají vhodné fluorescenční vlastnosti), které se vážou ke sledované látce a často přitom mění své fluorescenční vlastnosti. Jsou známy tisíce sond, jejichž relativně nejúplnější přehled lze
4 nalézt na webových stránkách firmy Molecular Probes, avšak podrobnější informace jsou dostupné jen v primární literatuře. Existuje rozsáhlá řada fluorogenních substrátů sloužících jako donor atomu vodíku, které se často používají ve spojení s křenovou peroxidasou (HRP, EC ). Mezi nejčastěji používané substráty patří diacetyldichlorofluorescein, homovanilová kyselina a Amplex Red. Řada kolorimetrických substrátů jako tetramethylbenzidin (TMB) nebo fenolová červeň byly také používány ve spojení s HRP pro stanovení koncentrace peroxidu vodíku. Kolorimetrické metody jsou méně citlivé než fluorescenční metody detekce, avšak přístrojové náklady jsou výrazně nižší. Amplex Red neboli N-acetyl-3,7-dihydroxfenoxazin reaguje s peroxidem vodíku v přítomnosti peroxidasy za tvorby resorufinu. Produkt lze stanovit měřením absorbance při 570 nm nebo také měřením fluorescence (excitační/emisní maximum 571/585 nm). Homovanilová kyselina se vyskytuje v podobě monomeru, který nevykazuje fluorescenci. Při oxidaci peroxidu vodíku za katalýzy HRP dochází k dimerizaci a vzniklý produkt lze stanovit měřením fluorescence (excitace 315 nm, emise 425 nm). Při použití polystyrénových titračních mikrodestiček v blízké UV oblasti byl pozorován vysoký falešně pozitivní signál.
5 Pro kvantifikaci peroxidu vodíku pomocí substrátů přeměňovaných HRP je nutné brát na vědomí následující fakta: některé sloučeniny uvnitř buňky (např. thioly) mohou být substrátem pro HRP endogenní katalasová aktivita může snížit množství H 2 O 2 v buňce některé buněčné komponenty mohou ovlivnit fluorescenční signál v závislosti na excitační a emisní vlnové délce. Pro detekci ROS a RNS se používá nespecifická fluorescenční sonda 2,7- dichlorodihydrofluorescein diacetát (H 2 DCF DA) nebo její acetomethylový ester (H 2 DCFDA- AM) umožňující lokalizaci a případně i kvantifikaci. Tato sonda má schopnost procházet skrz buněčné membrány, esterasy H 2 DCF DA přeměňují na H 2 DCF, které se oxiduje pomocí H 2 O 2, HO., ROO.,. NO a NOO - na fluorescenční 2,7-dihydrofluorescein DCF (excitace 498 nm, emise 522 nm). Původně se předpokládalo, že DCF je specifickým činidlem pro stanovení H 2 O 2, avšak nedávno bylo prokázáno, že může docházet k jeho autooxidaci a tím ke zvýšení fluorescence bez ohledu na přítomnost ROS. Navíc není dostatečně selektivní, protože reaguje jak s různými druhy ROS, tak s některými druhy RNS. Pro umožnění přímé selektivní reakce s H 2 O 2 bylo vyvinuto několik nových fluorescenčních prób např. Peroxy Green 1 (PG1) a Peroxy Crimson 1 (PC1). Tyto próby obsahující boronátovou skupinu vykazující vysokou selektivitu a dobrou prostupnost membránami. Pro PG1 je excitační vlnová délka 460 nm, emisní maximum 510 nm. PC1 má excitační vlnovou délku 480 nm a emisní 584 nm. Peroxy Green 1 Peroxy Crimson 1
6 Materiál a chemikálie 1. Rostlinný materiál: etiolované a zelené rostliny Pisum sativum 2. Komerční enzym XOD z podmáslí (Sigma 67684, 50 mg 0,068 U/mg rozpustit v 340 μl pufru s 20% glycerolem výsledný preparát 0,01 U/μl) 3. Zásobní roztoky: - 5x reakční pufr: 500 mm Tris-HCl, ph=7,6 (TRIS MW = 121,4, navážka 12,1 g na 200 ml) - 20 mm xanthin rozpuštěný v 40 mm NaOH (MW = 174,1, navážka 34,8 mg/10 ml) - 3% roztok peroxidu vodíku stabilizovaný (k 1 ml 30% peroxidu vodíku přidat 9 ml vody) 4. Před měřením aktivity připravit roztoky (množství na 100 jamek s objemem 100 μl): - Amplex Red roztok rozpustit 0,26 mg AR v 100 μl DMSO (chránit před světlem a uchovávat při -20 C) - 1x reakční pufr naředit 4ml 5x pufru se 16 ml deionizované H 2 O - křenová peroxidasa HRPX připravit 200 μl roztoku s aktivitou 0,4 U/ml v 50 mm Na- Pi, ph 7,4 (komerční preparát Fluka aktivita 560 U/mg) - 20 mm H 2 O 2 naředit 23μl 3% roztoku s 977μl vody - XOD naředit na 0,01 mu/μl 5. Příprava kalibrační křivky pro XOD: - ze zásobního roztoku XOD (0,01 mu/μl) připravit řadu roztoků o aktivitě 0,06-1,25 mu/ml (ředění 1x reakčním pufrem, do jedné jamky mikrotitrační destičky se pipetuje 50 μl pro trojí opakování připravit 150 μl, do jedné kyvety se pipetuje 0,5 ml pro trojí opakování připravit 1,5 ml) 6. Pracovní činidlo AR/HRPX/xanthin: V 50ml zkumavce smíchat: μl roztoku Amplex Red v DMSO μl roztoku peroxidasy μl roztoku xanthinu - 24,4 ml 1x reakčního pufru Jednokanálové pipety s nastavitelným objemem μl, μl, 1-5ml, multikanálová pipeta s nastavitelným objemem μl, termostat, třepačka pro mikrotitrační destičky Reader mikrotitračních destiček Biotek Synergy HT, software KC4 Kyvetový fluorimer Aminco Bowman 2, software Ab2 Postup 1. Příprava rostlinného extraktu 2 g nadzemní části etiolovaného a zeleného hrachu homogenizujeme na ledu s 0,1 M Tris-HCl pufrem v poměru 1:2 (w:v). Extrakt centrifugujeme po dobu 10 minut při 5000 g a teplotě 4 C. Odebereme supernatant do předem připravených a popsaných eppendorfek. Pro měření aktivity XOD je nutné vzorky uchovávat na ledu. Pro měření je nutné extrakty vhodně naředit 0,1 M Tris-HCl pufrem (opt. 5-10x).
7 2. Měření na readru Synergy HT (použít černé destičky pro fluorescenci!) Kalibrační křivka XOD: do jamek postupně pipetujeme ve třech opakováních : 50 μl blanku (1x reakční pufr), 50 μl roztoků pro kalibrační křivku XOD. Přidáme 50 μl pracovního činidla AR/HRPX/xanthin a inkubujeme 30 minut v termostatu na třepačce při 37 C. Poté změříme nárůst fluorescence (excitace 530 nm, emise 590 nm) při citlivosti 50. Kinetická metoda: v programu ovládání mikrodestičkového readru vytvoříme nový protokol a provedeme nastavení parametrů: excitace 530 nm, emise 590 nm, citlivost 50, kinetika: celková doba měření 15 minut, interval měření 15 s. 3. Měření na kyvetovém fluorimetru Aminco Bowman 2 Upozornění: - nutno používat speciální křemenné kyvety pro fluorescenci opatrné zacházení - po ukončení měření je nutno nechat min. několik minut běžet přístroj před vypnutí lampy, jinak může dojít k jejímu přehřátí a nevratnému poškození Spuštění přístroje 1) Přepněte vypínač lampy na levé straně přístroje nahoru do polohy LAMP ENABLE 2) Zapněte přístroj přepnutím vypínače na levé straně přístroje (za napájecím kabelem) při správné funkci se indikátorová dioda na pravé straně rozsvítí žlutě a po cca 15 s svítí zeleně, indikátorová dioda lampy na čelní straně svítí červeně 3) Zapněte řídící PC, spusťte software Ab2 kliknutím na ikonu na ploše monitoru 4) Proveďte kalibraci štěrbin - v programu Ab2 vyberte menu Setup/Instrument Setup/Send Commands a do příkazového řádku napište: EX:SLITCAL a stiskněte Send, poté napište EM: SLITCAL a opět stiskněte Send. Měření kalibrační křivky 1) Po spuštění přístroje a softwaru vyberte v menu Channels v boxu Source 1 Emmission left, v boxu Source 2 Reference, v boxu Operator / (lomítko) a v boxu Available Channels emisní kanál Eml/Ref. 2) Otevřte menu Monochromators, nastavte hodnoty Exc a Em vlnové délky, šířky štěrbin ( Bandpass ) a otevřte uzávěrky ( Open shutters ) 3) Otevřte menu Sensitivity a vložte do přístroje kyvetu s nejvyšší koncentrací standardu (s očekávanou nejvyšší hodnotou fluorescence). 4) Nastavte automaticky citlivost stisknutím Auto-range 5) Vložte do přístroje kyvetu s blankem nebo standardem s nejnižší koncentrací a vyberte Offset used 6) V menu Applications vyberte možnost Make quantitative standard 7) Odlikněte box u výběru Use standard list pro aktivaci možnosti vkládat údaje o standardech postupně během měření 8) Zvolte parametry: metoda vyhodnocení kalibrační závislosti ( Method total peak height ), rozměr koncentrace ( Conc. Label ), měřeného kanálu ( Channel Eml/Ref ), typ proložení kalibrační křivky ( Degree of Fit hodnota 1 pro lineární regresi) 9) Pro zahájení vlastního měření standardů zvolte Applications/Start application 10) Vyplňte v dialogovém boxu název souboru a klikněte na Start 11) V boxu Make quantitative standard Manual control klikněte na Acquire next standard 12) V boxu vyplňte hodnotu koncentrace standardu a potvrďte OK
8 13) Po změření vzorku přístroj zobrazí výslednou hodnotu v tabulce grafu a grafu kalibrace 14) Stejný postup jako v bodech 11-13, opakujte postupně pro všechny standardy 15) Po ukončení měření uložte soubor v boxu Make Quantitative Standard vyberte v menu Standard/Store v dialogovém boxu zadejte jméno souboru a klikněte OK Měření vzorků s použitím uložené kalibrační křivky 1) V menu Applications vyberte Quantitative Analysis 2) V dialogovém boxu Quantitative Analysis vyberte uloženou kalibraci klikněte na tlačítko Retrieve a vyberte uložený kalibrační soubor 3) Vyberte možnost Enter standards at run time pro možnost vkládání údajů o vzorcích během měření a klikněte na OK po uzavření dialogového okna 5) V menu Applications zvolte Start Application, zadejte jméno souboru a klikněte na Start 6) Otevře se box Manual Quantitative Analysis a klikněte na Acquire 7) Zadejte označení vzorku a případně další parametr, klikněte na OK - naměřená data se zobrazí ve výsledkové tabulce 9) Postup 5-8 opakujte postupně pro všechny vzorky -po ukončení uložte soubor v menu File/Store Měření kinetiky TIME TRACE 1) V dialogovém boxu Setup/Setup Instrument/Monochromators otevřete uzávěrky a nastavte hodnoty excitační a emisní vlnové délky 2) Doporučené výchozí parametry: krok 1 nm ( Step size ), 16 nm šířka štěrbiny ( Bandpass ) 3) V dialogovém boxu Sensitivity nastavte citlivost (nutno emipircky stanovit pro každou metodu a rozsah měření daného parametru koncentrace látky, aktivita enzymu atd.) 4) Dialogové okno Instrument Status nechte během měření otevřené pro kontrolu intenzity signálu 5) Vyberte v menu Applications možnost Time Trace 6) V dialogovém okně nastavte hodnoty rozsahu časové osy ( Range tj. jak dlouho bude měření probíhat), hodnotu časového rozlišení ( Resolution tj. v jakých intervalech se bude měřit během zadané doby) a případného opakování měření v každém časovém bodě ( Repetition data opakovaných měření se poté průměrují) - stiskněte OK Kalibrační křivka XOD end-point metoda: do 2ml eppendorfek pipetujeme ve třech opakováních: 0,5 ml blanku/roztoku pro kalibrační křivku XOD/vzorku. Přidáme 0,5 ml pracovního činidla AR/HRPX/xanthin a inkubujeme 30 minut v termostatu na třepačce při 37 C. Spuštění přístroje, kontrolu správné funkce přístroje a vlastní měření provedeme podle výše uvedeného postupu. Vyhodnocení 1. Porovnejte použité metody z hlediska pracnosti, rychlosti, meze detekce a lineárního rozsahu odezvy naměřené na mikrodestičkovém readru a kyvetovém fluorimetru. Literatura 1. Piterková J., Tománková K., Luhová L., Petřivalský M., Peč P. (2005) Oxidativní stres: Lokalizace tvorby aktivních forem kyslíku a jejich degradace v rostlinném organismu. Chem. Listy 99, Protokol firmy InVitrogen :
Abiotický stres - sucho
FYZIOLOGIE STRESU Typy stresů Abiotický (vliv vnějších podmínek) sucho, zamokření, zasolení půd, kontaminace prostředí toxickými látkami, chlad, mráz, vysoké teploty... Biotický (způsobený jiným druhem
2) Připravte si 3 sady po šesti zkumavkách. Do všech zkumavek pipetujte 0.2 ml roztoku BAPNA o různé koncentraci podle tabulky.
CVIČENÍ Z ENZYMOLOGIE 1) Stanovení Michaelisovy konstanty trypsinu pomocí chromogenního substrátu. Aktivita trypsinu se určí změřením rychlosti hydrolýzy chromogenního substrátu BAPNA (Nα-benzoyl-L-arginin-p-nitroanilid)
2) Připravte si 7 sad po pěti zkumavkách. Do všech zkumavek pipetujte 0.2 ml roztoku BAPNA o různé koncentraci podle tabulky.
CVIČENÍ Z ENZYMOLOGIE 1) Stanovení Michaelisovy konstanty trypsinu pomocí chromogenního substrátu. Aktivita trypsinu se určí změřením rychlosti hydrolýzy chromogenního substrátu BAPNA (Nα-benzoyl-L-arginin-p-nitroanilid)
Určení koncentrace proteinu fluorescenční metodou v mikrotitračních destičkách
Určení koncentrace proteinu fluorescenční metodou v mikrotitračních destičkách Teorie Stanovení celkových proteinů Celkové množství proteinů lze stanovit pomocí několika metod; například: Hartree-Lowryho
METABOLISMUS SACHARIDŮ
METABOLISMUS SACHARIDŮ PRINCIP Rozštěpené sacharidy vstřebávání střevní sliznicí do krevního oběhu dopraveny vrátnicovou žílou do jater. V játrech enzymaticky hexózy štěpeny na GLUKÓZU vyplavována do krve
Eva Benešová. Dýchací řetězec
Eva Benešová Dýchací řetězec Dýchací řetězec Během oxidace látek vstupujících do různých metabolických cyklů (glykolýza, CC, beta-oxidace MK) vznikají NADH a FADH 2, které následně vstupují do DŘ. V DŘ
Metody výzkumu patofyziologie volných radikálů. Milan Číž
Metody výzkumu patofyziologie volných radikálů Milan Číž 1 Metody detekce Chemiluminiscence Spektrofotometrie NBT-test redukce cytochromu C Elektronová spinová resonance Elektrochemie stanovení spotřeby
FOTOSYNTÉZA. Princip, jednotlivé fáze
FOTOSYNTÉZA Princip, jednotlivé fáze FOTOSYNTETICKÉ PIGMENTY - chlorofyl a modrozelený - chlorofyl b žlutozelený + karoteny, xantofyly žluté a oranžové zbarvení CHLOROFYL a, b CHLOROFYL a - nejdůležitější
Antioxidanty vs. volné radikály
Antioxidanty vs. volné radikály Souboj dobra a zla? Jana Kubalová Brainstorming Volné radikály Antioxidanty Volné radikály jakákoliv molekula, atom nebo ion s nepárovými elektrony ve valenční vrstvě vzniká
VYSOKÉ UČENÍ TECHNICKÉ V BRNĚ BRNO UNIVERSITY OF TECHNOLOGY
VYSOKÉ UČENÍ TECHNICKÉ V BRNĚ BRNO UNIVERSITY OF TECHNOLOGY FAKULTA ELEKTROTECHNIKY A KOMUNIKAČNÍCH TECHNOLOGIÍ ÚSTAV BIOMEDICÍNSKÉHO INŽENÝRSTVÍ FACULTY OF ELECTRICAL ENGINEERING AND COMMUNICATION DEPARTMENT
Úloha č. 15 Stanovení antiradikálové aktivity metodou DPPH
Úloha č. 15 Stanovení antiradikálové aktivity metodou DPPH Úvod Mezi inhibitory oxidace patří sloučeniny s rozličnou chemickou strukturou a různými mechanismy účinku. Principem účinku primárních antioxidantů
1. ročník Počet hodin
SOUSTAVY LÁTEK A JEJICH SLOŽENÍ rozdělení přírodních látek a vlastnosti chemických látek soustavy látek a jejich složení STAVBA ATOMU historie pohledu na atom složení a struktura atomu stavba atomu VELIČINY
STANOVENÍ ANTIOXIDAČNÍ KAPACITY METODOU FOTOCHEMILUMINISCENCE NA PŘÍSTROJI PHOTOCHEM
STANOVENÍ ANTIOXIDAČNÍ KAPACITY METODOU FOTOCHEMILUMINISCENCE NA PŘÍSTROJI PHOTOCHEM ANTIOXIDAČNÍ KAPACITA RŮZNÝCH DRUHŮ MASA (drůbeží, rybí) Princip metodiky: Analyzátor Photochem je určen pro stanovení
Stanovení antioxidační aktivity a redukční síly na ječmeni jarním (Hordeum vulgare, L. cv. Bonus)
Stanovení antioxidační aktivity a redukční síly na ječmeni jarním (Hordeum vulgare, L. cv. Bonus) Autor: Bc. Ursula Ferretti Spoluautor: Mgr. Jakub Nezval Ostravská Univerzita v Ostravě Přírodovědecká
METABOLISMUS SACHARIDŮ
METABOLISMUS SAHARIDŮ A. Odbourávání sacharidů - nejdůležitější zdroj energie pro heterotrofy - oxidací sacharidů až na. získávají aerobní organismy energii ve formě. - úplná oxidace glukosy: složitý proces
Fytoremediace III. Petr Soudek Laboratoř rostlinných biotechnologií Ústav experimentální botaniky AV ČR, v.v.i.
Fytoremediace III. Petr Soudek Laboratoř rostlinných biotechnologií Ústav experimentální botaniky AV ČR, v.v.i. DEFINICE STRESU Stresové faktory (stresory) nepříznivé vlivy vnějšího prostředí Stres obvykle
Lékařská chemie a biochemie modelový vstupní test ke zkoušce
Lékařská chemie a biochemie modelový vstupní test ke zkoušce 1. Máte pufr připravený smísením 150 ml CH3COOH o c = 0,2 mol/l a 100 ml CH3COONa o c = 0,25 mol/l. Jaké bude ph pufru, pokud přidáme 10 ml
STANOVENÍ ANTIOXIDAČNÍ KAPACITY METODOU FOTOCHEMILUMINISCENCE NA PŘÍSTROJI PHOTOCHEM
STANOVENÍ ANTIOXIDAČNÍ KAPACITY METODOU FOTOCHEMILUMINISCENCE NA PŘÍSTROJI PHOTOCHEM ANTIOXIDAČNÍ KAPACITA ČAJŮ Princip metodiky: Analyzátor Photochem je určen pro stanovení antioxidační kapacity vybraných
Reaktivní formy kyslíku v lidském těle Výzbroj fagocytů. MUDr. Jan Pláteník, PhD. Ústav lékařské biochemie a laboratorní diagnostiky 1.
Reaktivní formy kyslíku v lidském těle Výzbroj fagocytů MUDr. Jan Pláteník, PhD. Ústav lékařské biochemie a laboratorní diagnostiky 1.LF UK Co je volný radikál? - molekula, atom, nebo ion schopný samostatné
Ukázka knihy z internetového knihkupectví www.kosmas.cz
Ukázka knihy z internetového knihkupectví www.kosmas.cz (elektronická (tištěná ISBN Grada 978-80-247-6352-8 Publishing, verze verze) formátu a.s. 2011 PDF) U k á z k a k n i h y z i n t e r n e t o v
Charakteristika složky 3) cytochrom-c NADH-Q-reduktasa cytochrom-c- oxidasa ubichinon cytochromreduktasa
8. Dýchací řetězec a fotosyntéza Obtížnost A Pomocí následující tabulky charakterizujte jednotlivé složky mitochondriálního dýchacího řetězce. SLOŽKA Pořadí v dýchacím řetězci 1) Molekulový typ 2) Charakteristika
Fotosyntéza (2/34) = fotosyntetická asimilace
Fotosyntéza (2/34) = fotosyntetická asimilace FOTO - protože k fotosyntéze je třeba fotonů Jedná se tedy o zachycování sluneční energie a přeměnu jednoduchých anorganických látek (CO 2 a H 2 O) na složitější
nastavení real-time PCR cykleru Rotor Gene 3000
Verze: 1.4 Datum poslední revize: 25. 3. 2015 nastavení real-time PCR cykleru Rotor Gene 3000 (Corbett Research) generi biotech OBSAH: 1. Nastavení teplotního profilu a spuštění cykleru... 3 2. Zadání
Izolace genomové DNA ze savčích buněk, stanovení koncentrace DNA pomocí absorpční spektrofotometrie
Izolace genomové DNA ze savčích buněk, stanovení koncentrace DNA pomocí absorpční spektrofotometrie IZOLACE GENOMOVÉ DNA Deoxyribonukleová kyselina (DNA) představuje základní genetický materiál většiny
1 Metody stanovení antioxidantů
1 Metody stanovení antioxidantů Antioxidanty nazýváme látky schopné i v relativně nízkých koncentracích konkurovat ostatním potenciálně oxidovatelným substrátům, a tím oddálit či zcela inhibovat jejich
Fluorescence (luminiscence)
Fluorescence (luminiscence) Patří mezi luminiscenční metody fotoluminiscence. Luminiscence efekt, kdy excitované molekuly či atomy vyzařují světlo při přechodu z excitovaného do základního stavu. Podle
1 Metody stanovení antioxidantů
1 Metody stanovení antioxidantů Antioxidanty nazýváme látky schopné i v relativně nízkých koncentracích konkurovat ostatním potenciálně oxidovatelným substrátům, a tím oddálit či zcela inhibovat jejich
Inovace profesní přípravy budoucích učitelů chemie
Inovace profesní přípravy budoucích učitelů chemie I n v e s t i c e d o r o z v o j e v z d ě l á v á n í CZ.1.07/2.2.00/15.0324 Tento projekt je spolufinancován Evropským sociálním fondem a státním rozpočtem
Aspartátaminotransferáza (AST)
1 Aspartátaminotransferáza (AST) AST je buněčný enzym přítomný v řadě tkání, jako jsou srdce, kosterní svaly, ledviny, mozek, játra, pankreas či erytrocyty. Vyskytuje se ve dvou izoformách, cytoplazmatické
OXIDATIVNÍ FOSFORYLACE
OXIDATIVNÍ FOSFORYLACE OBSAH Mitochondrie Elektronový transport Oxidativní fosforylace Kontrolní systém oxidativního metabolismu. Oxidace a syntéza ATP jsou spojeny transmembránovým tokem protonů Dýchací
Energetický metabolizmus buňky
Energetický metabolizmus buňky Buňky vyžadují neustálý přísun energie pro tvorbu a udržování biologického pořádku (život). Tato energie pochází z energie chemických vazeb v molekulách potravy (energie
Sekunda (2 hodiny týdně) Chemické látky a jejich vlastnosti Směsi a jejich dělení Voda, vzduch
Sekunda (2 hodiny týdně) Chemické látky a jejich vlastnosti Směsi a jejich dělení Voda, vzduch Atom, složení a struktura Chemické prvky-názvosloví, slučivost Chemické sloučeniny, molekuly Chemická vazba
FYZIOLOGIE ROSTLIN VÝŽIVA ROSTLIN 1) AUTOTROFNÍ VÝŽIVA ROSTLIN 2) HETEROTROFNÍ VÝŽIVA ROSTLIN
FYZIOLOGIE ROSTLIN Fyziologie rostlin, Biologie, 2.ročník 25 Podobor botaniky, který studuje životní funkce a individuální vývoj rostlin. Využívá poznatků z dalších odvětví biologie jako je morfologie,
Fyziologie buňky. RNDr. Zdeňka Chocholoušková, Ph.D.
Fyziologie buňky RNDr. Zdeňka Chocholoušková, Ph.D. Přeměna látek v buňce = metabolismus Výměna látek mezi buňkou a prostředím Buňka = otevřený systém probíhá výměna látek i energií s prostředím Některé
Voltametrie (laboratorní úloha)
Voltametrie (laboratorní úloha) Teorie: Voltametrie (přesněji volt-ampérometrie) je nejčastěji používaná elektrochemická metoda, kdy se na pracovní elektrodu (rtuť, platina, zlato, uhlík, amalgamy,...)
OXIDAČNÍ STRES JOŠKO IVICA
OXIDAČNÍ STRES JOŠKO IVICA VOLNÉ RADIKÁLY Volný radikál je jakákoli částice schopná samostatné existence, která má jeden nebo více nespárovaných elektronů Chemicky vysoce reaktivní X e - X + (radikálový
Katabolismus - jak budeme postupovat
Katabolismus - jak budeme postupovat I. fáze aminokyseliny proteiny polysacharidy glukosa lipidy Glycerol + mastné kyseliny II. fáze III. fáze ETS itrátový cyklus yklus trikarboxylových kyselin, Krebsův
1. Napište strukturní vzorce aminokyselin D a Y a vzorce adenosinu a thyminu
Test pro přijímací řízení magisterské studium Biochemie 2019 1. Napište strukturní vzorce aminokyselin D a Y a vzorce adenosinu a thyminu U dalších otázek zakroužkujte správné tvrzení (pouze jedna správná
Hořčík. Příjem, metabolismus, funkce, projevy nedostatku
Hořčík Příjem, metabolismus, funkce, projevy nedostatku Příjem a pohyb v rostlině Příjem jako ion Mg 2+, pasivní, iont. kanály Mobilní ion v xylému i ve floému, možná retranslokace V místě funkce vázán
DÝCHÁNÍ. uložená v nich fotosyntézou, je z nich uvolňována) Rostliny tedy mohou po určitou dobu žít bez fotosyntézy
Dýchání 2/38 DÝCHÁNÍ Asimiláty vzniklé v rostlinných buňkách fotosyntézou mají různé funkce: stavební, zásobní, enzymatické aj. Zásobní látky jsou v případě potřeby využívány (energie, uložená v nich fotosyntézou,
Respirace. (buněčné dýchání) O 2. Fotosyntéza Dýchání. Energie záření teplo BIOMASA CO 2 (-COO - ) = -COOH -CHO -CH 2 OH -CH 3
Respirace (buněčné dýchání) Fotosyntéza Dýchání Energie záření teplo chem. energie CO 2 (ATP, NAD(P)H) O 2 Redukce za spotřeby NADPH BIOMASA CO 2 (-COO - ) = -COOH -CHO -CH 2 OH -CH 3 oxidace produkující
VYUŽITÍ UV ZÁŘENÍ A OZONIZACE PŘI ODSTRAŇOVÁNÍ LÉČIV
VYUŽITÍ UV ZÁŘENÍ A OZONIZACE PŘI ODSTRAŇOVÁNÍ LÉČIV JIŘÍ PALARČÍK Univerzita Pardubice Fakulta chemicko-technologická Ústav environmentálního a chemického inženýrství Centralizovaný rozvojový projekt
Štěpení lipidů. - potravou přijaté lipidy štěpí lipázy gastrointestinálního traktu
METABOLISMUS LIPIDŮ ODBOURÁVÁNÍ LIPIDŮ - z potravy nebo z tukových rezerv - hydrolytické štěpení esterových vazeb - vznik glycerolu a mastných kyselin - hydrolytické štěpení LIPÁZY (karboxylesterázy) -
Publikováno z 2. lékařská fakulta Univerzity Karlovy v Praze (http://www.lf2.cuni.cz)
Publikováno z 2. lékařská fakulta Univerzity Karlovy v Praze (http://www.lf2.cuni.cz) Biochemie Napsal uživatel Marie Havlová dne 8. Únor 2012-0:00. Sylabus předmětu Biochemie, Všeobecné lékařství, 2.
Vliv selenu na metabolismus laboratorního potkana
Vysoká škola chemicko-technologická v Praze Vliv selenu na metabolismus laboratorního potkana Klára Truhlářová, FPBT BL 342 Vliv selenu na metabolismus laboratorního potkana Laboratoř živočišné biochemie
Stanovení biomarkerů oxidativního stresu u kapra obecného (Cyprinus carpio L.) po dlouhodobém působení simazinu Hlavní řešitel Ing.
Stanovení biomarkerů oxidativního stresu u kapra obecného (Cyprinus carpio L.) po dlouhodobém působení simazinu Hlavní řešitel Ing. Alžběta Stará Vedoucí projektu dr. hab. Ing. Josef Velíšek, Ph.D. 1 Úvod
Nové metody v průtokové cytometrii. Vlas T., Holubová M., Lysák D., Panzner P.
Nové metody v průtokové cytometrii Vlas T., Holubová M., Lysák D., Panzner P. Průtoková cytometrie Analytická metoda využívající interakce částic a záření. Technika se vyvinula z počítačů částic Počítače
DIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIDUÁLNÍ CHOROBY U KOLOREKTÁLNÍHO KARCINOMU
Úvod IntellMed, s.r.o., Václavské náměstí 820/41, 110 00 Praha 1 DIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIDUÁLNÍ CHOROBY U KOLOREKTÁLNÍHO KARCINOMU Jednou z nejvhodnějších metod pro detekci minimální
Sacharidy a polysacharidy (struktura a metabolismus)
Sacharidy a polysacharidy (struktura a metabolismus) Sacharidy Živočišné tkáně kolem 2 %, rostlinné 85-90 % V buňkách rozličné fce: Zdroj a zásobárna energie (glukóza, škrob, glykogen) Výztuž a ochrana
jako markeru oxidativního
Monitoring koncentrace 8-isoprostanu jako markeru oxidativního stresu v kondenzátu vydechovaného vzduchu Lukáš Chytil Ústav organické technologie Úvod Cíl: - nalezení vhodného analytické metody pro analýzu
Vyjádření fotosyntézy základními rovnicemi
FOTOSYNTÉZA Fotochemický proces, při němž fotosynteticky aktivní pigmenty v zelených částech rostlin přijímají energii světelného záření a přeměňují ji na energii chemickou. Ta je dále využita při biologických
Chemie 2018 CAUS strana 1 (celkem 5)
Chemie 2018 CAUS strana 1 (celkem 5) 1. Vápník má atomové číslo 20, hmotnostní 40. Kolik elektronů obsahuje kationt Ca 2+? a) 18 b) 20 c) 40 d) 60 2. Kolik elektronů ve valenční sféře má atom Al? a) 1
Úvod. Náplň práce. Úkoly
Název práce: Zkouška disoluce pevných lékových forem Vedoucí práce: Doc. Ing. Petr Zámostný, Ph.D. Jméno zástupce: Ing. Jan Patera Umístění práce: S25b Úvod Uvolňování léčiva z tuhých perorálních lékových
OXIDATIVNÍ STRES: LOKALIZACE TVORBY AKTIVNÍCH FOREM KYSLÍKU A JEJICH DEGRADACE V ROSTLINNÉM ORGANISMU
OXIDATIVNÍ STRES: LOKALIZACE TVORBY AKTIVNÍCH FOREM KYSLÍKU A JEJICH DEGRADACE V ROSTLINNÉM ORGANISMU JANA PITERKOVÁ a, KATEŘINA TOMÁNKOVÁ a,b, LENKA LUHOVÁ a, MAREK PETŘIVALSKÝ a a PAVEL PEČ a a Katedra
Fytoremediace III. Oxidativní stres. Petr Soudek Laboratoř rostlinných biotechnologií ÚEB AV ČR, v.v.i.
Fytoremediace III. Oxidativní stres Petr Soudek Laboratoř rostlinných biotechnologií ÚEB AV ČR, v.v.i. DEFINICE STRESU Stresové faktory (stresory) nepříznivé vlivy vnějšího prostředí Stres obvykle se
BIOLOGICKÁ MEMBRÁNA Prokaryontní Eukaryontní KOMPARTMENTŮ
BIOMEMRÁNA BIOLOGICKÁ MEMBRÁNA - všechny buňky na povrchu plazmatickou membránu - Prokaryontní buňky (viry, bakterie, sinice) - Eukaryontní buňky vnitřní členění do soustavy membrán KOMPARTMENTŮ - za
Energetický metabolismus rostlin. respirace
Energetický metabolismus rostlin Zdroje E: fotosyntéza respirace Variabilní využívání: - orgánové a pletivové rozdíly (kořen, prýt, pokožka, ) - změny při vývoji a diferenciaci - vliv dostupnosti vody,
NaLékařskou.cz Přijímačky nanečisto
alékařskou.cz Chemie 2016 1) Vyberte vzorec dichromanu sodného: a) a(cr 2 7) 2 b) a 2Cr 2 7 c) a(cr 2 9) 2 d) a 2Cr 2 9 2) Vypočítejte hmotnostní zlomek dusíku v indolu. a) 0,109 b) 0,112 c) 0,237 d) 0,120
Prokaryota x Eukaryota. Vibrio cholerae
Živočišná buňka Prokaryota x Eukaryota Vibrio cholerae Dělení živočišných buněk: buňky jednobuněčných organismů (volně žijící samostatné jednotky) buňky mnohobuněčných větší morfologické i funkční celky
ANALYTICKÝ SYSTÉM PHOTOCHEM
ANALYTICKÝ SYSTÉM PHOTOCHEM Analytický systém Photochem (firmy Analytik Jena, Německo) je vhodný pro stanovení celkové antioxidační kapacity (tj. celkové schopnosti vzorku vychytávat volné radikály) různých
Monitorování hladiny metalothioneinu a thiolových sloučenin u biologických organismů vystavených působení kovových prvků a sloučenin
Laboratoř Metalomiky a Nanotechnologií Monitorování hladiny metalothioneinu a thiolových sloučenin u biologických organismů vystavených působení kovových prvků a sloučenin Ing. Kateřina Tmejová, Ph. D.,
DIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIDUÁLNÍ CHOROBY U KARCINOMU PANKREATU
Úvod IntellMed, s.r.o., Václavské náměstí 820/41, 110 00 Praha 1 DIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIDUÁLNÍ CHOROBY U KARCINOMU PANKREATU Jednou z nejvhodnějších metod pro detekci minimální reziduální
Intermediární metabolismus. Vladimíra Kvasnicová
Intermediární metabolismus Vladimíra Kvasnicová Vztahy v intermediárním metabolismu (sacharidy, lipidy, proteiny) 1. po jídle (přísun energie z vnějšku) oxidace CO 2, H 2 O, urea + ATP tvorba zásob glykogen,
FLUORESCENČNÍ MIKROSKOP
FLUORESCENČNÍ MIKROSKOP na gymnáziu Pierra de Coubertina v Táboře Pavla Trčková, kabinet Biologie, GPdC Tábor Co je fluorescence Fluorescence je jev spočívající v tom, že některé látky (fluorofory) po
Kyslík a vodík. Bezbarvý plyn, bez chuti a zápachu, asi 14krát lehčí než vzduch. Běžně tvoří molekuly H2. hydridy (např.
1 Kyslík a vodík Kyslík Vlastnosti Bezbarvý reaktivní plyn, bez zápachu, nejčastěji tvoří molekuly O2. Kapalný kyslík je modrý. S jinými prvky tvoří sloučeniny oxidy (např. CO, CO2, SO2...) Výskyt Nejrozšířenější
BUŇKA ZÁKLADNÍ JEDNOTKA ORGANISMŮ
BUŇKA ZÁKLADNÍ JEDNOTKA ORGANISMŮ SPOLEČNÉ ZNAKY ŽIVÉHO - schopnost získávat energii z živin pro své životní potřeby - síla aktivně odpovídat na změny prostředí - možnost růstu, diferenciace a reprodukce
Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv
Národní referenční laboratoř Strana KVANTITATIVNÍ STANOVENÍ GENETICKÝCH MODIFIKACÍ METODOU qpcr POMOCÍ ROTOR-GENE PROBE PCR KITU Účel a rozsah Postup slouží ke kvantitativnímu stanovení genetických modifikací
Test pro přijímací řízení magisterské studium Biochemie Napište vzorce aminokyselin Q a K
Test pro přijímací řízení magisterské studium Biochemie 2017 1. Napište vzorce aminokyselin Q a K Dále zakroužkujte správné tvrzení (pouze jedna správná odpověď) 2. Enzym tyrozinkinasu řadíme do třídy
7. Měření fluorescence při excitaci kontinuálním světlem ( steady-state )
7. Měření fluorescence při excitaci kontinuálním světlem ( steady-state ) Steady-state měření Excitujeme kontinuálním světlem, měříme intenzitu emise (počet emitovaných fotonů) Obvykle nedetekujeme všechny
1. Příloha 1 Návod úlohy pro Pokročilé praktikum z biochemie I
1. Příloha 1 Návod úlohy pro Pokročilé praktikum z biochemie I Vazba bromfenolové modři na sérový albumin Princip úlohy Albumin má unikátní vlastnost vázat menší molekuly mnoha typů. Díky struktuře, tvořené
5. Příjem, asimilace a fyziologické dopady anorganického dusíku. 5. Příjem, asimilace a fyziologické dopady anorganického dusíku
5. Příjem, asimilace a fyziologické dopady anorganického dusíku Zdroje dusíku dostupné v půdě: Amonné ionty + Dusičnany = největší zdroj dusíku v půdě Organický dusík (aminokyseliny, aminy, ureidy) zpracování
Obecný metabolismus.
mezioborová integrace výuky zaměřená na rostlinnou biochemii a fytopatologii CZ.1.07/2.2.00/28.0171 Obecný metabolismus. Regulace glykolýzy a glukoneogeneze (5). Prof. RNDr. Pavel Peč, CSc. Katedra biochemie,
ení s chemickými látkami. l rní optiky
OPTICKÉ SENSORY Základem je interakce světeln telného zářenz ení s chemickými látkami. l Při i konstrukci katalytických biosensorů se používaj vají: optické techniky: absorbance fluorescence luminiscence
12-Fotosyntéza FRVŠ 1647/2012
C3181 Biochemie I 12-Fotosyntéza FRVŠ 1647/2012 Petr Zbořil 10/6/2014 1 Obsah Fotosyntéza, světelná fáze. Chlorofyly, struktura fotosyntetického centra. Komponenty přenosu elektronů (cytochromy, chinony,
Nejmenší jednotka živého organismu schopná samostatné existence. Výměnu látek Růst Pohyb Rozmnožování Dědičnost
BUŇKA Nejmenší jednotka živého organismu schopná samostatné existence Buňka je schopna uskutečňovat základní funkce organismu: obrázky použity z Nečas: BIOLOGIE LIDSKÉ TĚLO Alberts: ZÁKLADY BUNĚČNÉ BIOLOGIE
Adsorpce barviva na aktivním uhlí
Adsorpce barviva na aktivním uhlí TEORIE ABSORBANCE Prochází-li světelný tok monochromatických paprsků o intenzitě I 0 určitým prostředím dojde k pohlcení jisté části záření a intenzita záření se sníží
AMINOKYSELINY REAKCE
CHEMIE POTRAVIN - cvičení AMINOKYSELINY REAKCE Milena Zachariášová (milena.zachariasova@vscht.cz) Ústav chemie a analýzy potravin, VŠCHT Praha REAKCE AMINOKYSELIN část 1 ELIMINAČNÍ REAKCE DEKARBOXYLACE
Oxidace proteinů, tuků a cukrů jako zdroj energie v živých organismech
Citrátový cyklus Oxidace proteinů, tuků a cukrů jako zdroj energie v živých organismech 1. stupeň: OXIDACE cukrů, tuků a některých aminokyselin tvorba Acetyl-CoA a akumulace elektronů v NADH a FADH 2 2.
BUNĚČ ORGANISMŮ KLÍČOVÁ SLOVA:
BUNĚČ ĚČNÁ STAVBA ŽIVÝCH ORGANISMŮ KLÍČOVÁ SLOVA: Prokaryota, eukaryota, viry, bakterie, živočišná buňka, rostlinná buňka, organely buněčné jádro, cytoplazma, plazmatická membrána, buněčná stěna, ribozom,
aneb Fluorescence chlorofylu jako indikátor stresu
Měření fotosyntézy rostlin pomocí chlorofylové fluorescence aneb Fluorescence chlorofylu jako indikátor stresu Fotosyntéza: Fotosyntéza je proces, ve kterém je světelná energie zachycena světlosběrnými
FOTOSYNTÉZA Správná odpověď:
FOTOSYNTÉZA Správná odpověď: 1. Mezi asimilační barviva patří 1. chlorofyly, a) 1, 2, 4 2. antokyany b) 1, 3, 4 3. karoteny c) pouze 1 4. xantofyly d) 1, 2, 3, 4 2. V temnostní fázi fotosyntézy dochází
Projekt realizovaný na SPŠ Nové Město nad Metují
Projekt realizovaný na SPŠ Nové Město nad Metují s finanční podporou v Operačním programu Vzdělávání pro konkurenceschopnost Královéhradeckého kraje Modul 02 Přírodovědné předměty Hana Gajdušková 1 Viry
PATOBIOCHEMIE ve schématech
Marta Kalousová a kolektiv PATOBIOCHEMIE ve schématech Pořadatelka díla: Marta Kalousová Autorský kolektiv: Lenka Fialová, Marta Kalousová, Jiří Kraml, Evžen Křepela, Kateřina Mrázová, Jan Pačes, Jan Pláteník,
Téma: Testy životaschopnosti a Počítání buněk
LRR/BUBV vičení z buněčné biologie Úloha č. 3 Téma: Testy životaschopnosti a Počítání Úvod: Při práci s buňkami je jedním ze základních sledovaných parametrů stanovení jejich životaschopnosti (viability).
CHEMIE POTRAVIN - cvičení REAKCE LIPIDŮ
CHEMIE POTRAVIN - cvičení REAKCE LIPIDŮ TÉMATA Oxidační reakce (oxidační žluknutí) Oxidace vzdušným (tripletovým) kyslíkem (=AUTOOXIDACE) Oxidace singletovým kyslíkem (=FOTOOXIDACE) Oxidace katalyzovaná
LRR/BUBCV CVIČENÍ Z BUNĚČNÉ BIOLOGIE 3. TESTY ŽIVOTASCHOPNOSTI A POČÍTÁNÍ BUNĚK
LRR/BUBCV CVIČEÍ Z BUĚČÉ BILGIE 3. TESTY ŽIVTASCHPSTI A PČÍTÁÍ BUĚK TERETICKÝ ÚVD: Při práci s buňkami je jedním ze základních sledovaných parametrů stanovení jejich životaschopnosti (viability). Tímto
Metabolismus krok za krokem - volitelný předmět -
Metabolismus krok za krokem - volitelný předmět - Vladimíra Kvasnicová pracovna: 411, tel. 267 102 411, vladimira.kvasnicova@lf3.cuni.cz informace, studijní materiály: http://vyuka.lf3.cuni.cz Sylabus
Automatická potenciometrická titrace Klinická a toxikologická analýza Chemie životního prostředí Geologické obory
Automatická potenciometrická titrace Klinická a toxikologická analýza Chemie životního prostředí Geologické obory Titrace je spolehlivý a celkem nenáročný postup, jak zjistit koncentraci analytu, její
IZOLACE DNA (KIT DNeasy Plant Mini)
17.1 Izolace DNA (kit DNeasy Plant Mini) Strana 1 IZOLACE DNA (KIT DNeasy Plant Mini) 1 Účel a rozsah Postup slouží k získání deoxyribonukleové kyseliny (DNA) ze vzorku pomocí komerčního kitu DNeasy Plant
Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU DEKOCHINÁTU METODOU HPLC
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU DEKOCHINÁTU METODOU HPLC 1 Rozsah a účel Tato metoda specifikuje podmínky pro stanovení dekochinátu metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie
Otázka: Metabolismus. Předmět: Biologie. Přidal(a): Furrow. - přeměna látek a energie
Otázka: Metabolismus Předmět: Biologie Přidal(a): Furrow - přeměna látek a energie Dělení podle typu reakcí: 1.) Katabolismus reakce, při nichž z látek složitějších vznikají látky jednodušší (uvolňuje
Oligobiogenní prvky bývají běžnou součástí organismů, ale v těle jich již podstatně méně (do 1%) než prvků makrobiogenních.
1 (3) CHEMICKÉ SLOŢENÍ ORGANISMŮ Prvky Stejné prvky a sloučeniny se opakují ve všech formách života, protože mají shodné principy stavby těla i metabolismu. Např. chemické děje při dýchání jsou stejné
Moderní nástroje pro zobrazování biologicky významných molekul pro zajištění zdraví. René Kizek
Moderní nástroje pro zobrazování biologicky významných molekul pro zajištění zdraví René Kizek 12.04.2013 Fluorescence je fyzikálně chemický děj, který je typem luminiscence. Luminiscence se dále dělí
Enzymy charakteristika a katalytický účinek
Enzymy charakteristika a katalytický účinek Tematická oblast Datum vytvoření Ročník Stručný obsah Způsob využití Autor Kód Chemie přírodních látek enzymy 28.7.2012 3. ročník čtyřletého G Charakteristika
1- Úvod do fotosyntézy
1- Úvod do fotosyntézy Prof. RNDr. Petr Ilík, Ph.D. KBF a CRH, PřF UP FS energetická bilance na povrch Země dopadá 2/10 10 energie ze Slunce z toho 30% odraz do kosmu 47% teplo 23% odpar vody 0.02% pro
2. Fotosensitizované reakce a jejich mechanismus. 5. Samoorganizované porfyrinové nanostruktury a jednoduché aplikace
1. Úvod (proč jsou důled ležité) 2. Fotosensitizované reakce a jejich mechanismus 3. Fotodynamická terapie 4. Spontánní aggregace 5. Samoorganizované porfyrinové nanostruktury a jednoduché aplikace Porfyriny
Radiační odstraňování vybraných kontaminantů z podzemních a odpadních vod
Radiační odstraňování vybraných kontaminantů z podzemních a odpadních vod Václav Čuba, Viliam Múčka, Milan Pospíšil, Rostislav Silber ČVUT v Praze Centrum pro radiochemii a radiační chemii Fakulta jaderná
Antioxidanty. a nové biochemické poznatky
Antioxidanty a nové biochemické poznatky ANTIOXIDANTY Obecné informace biochemicky velmi významné látky chrání buňky před vlivy volných radikálů návaznost na tzv. oxidační stres význam v živých organismech,
Molekulová spektroskopie 1. Chemická vazba, UV/VIS
Molekulová spektroskopie 1 Chemická vazba, UV/VIS 1 Chemická vazba Silová interakce mezi dvěma atomy. Chemické vazby jsou soudržné síly působící mezi jednotlivými atomy nebo ionty v molekulách. Chemická
Ukázky z pracovních listů z biochemie pro SŠ A ÚVOD
Ukázky z pracovních listů z biochemie pro SŠ A ÚVD 1) Doplň chybějící údaje. Jak se značí makroergní vazba? Kolik je v ATP makroergních vazeb? Co je to ADP Kolik je v ADP makroergních vazeb 1) Pojmenuj