ZAUJÍMAVÉ KAZUISTIKY Z ONKOHEMATOLÓGIE Jacková M., Ölvecká S. Poznámka. CLK Pracovisko Laboratórnej hematológie

Transkript

1 ZAUJÍMAVÉ KAZUISTIKY Z ONKOHEMATOLÓGIE Jacková M., Ölvecká S CLK Pracovisko Laboratórnej hematológie 1

2 Akútne myeloidné leukémie (AML) 80% AL dospelých 15% u detí polovica pacientov 60rokov, medián 10 rokov heterogénna skupinu malígnych chorôb krvotvorby akumulácia nezrelých elementov ( blastov) myeloidnej línie primárne v KD Príčina: neobjasnená získané onemocnenie, epigenetické faktory chemické látky strava ionizujúce žiarenie genetická výbava jedinca Vznik: transformácia nezrelých myeloidných prekurzorov vkostnej dreni ( myelo, mono, erytro, megakaryocytové línie) Morfológiaia KD 20% blastov v kostnej dreni 2

3 myeloidná línia lymfoidná línia CFU GEMM 3

4 Akútna erytroblastová leukémia zriedkavé ochorenie dospelých (2 5% AML), zlá prognóza klonálna porucha prekurzorov multipotentnej kmeňovej bunky (CFU GEMM) zvýšený počet erytroidných a myeloidných prekurzorov dominantná nezrelá erytroidná populácia 50% Klinika: opakované infekcie purpura pokožky nepravidelné teploty zriedkavé zväčšenie uzlín 46% B symptómy hepato, splenomegália 25% bolesť kostí 4

5 PK: ťažká cytopénia výrazná anémia najnižší hemoglobín a počet Le a Tr prítomné jadrové erytroidné bunky KD: atypické erytroidné prekurzory erytrodysplázia (granul., megakar.) Stanovenie dg.: % erytroblasty : % myeloblasty cytochémia PAS pozit reakcia Liečba: chemoterapia namierená proti obom líniám, ale malá účinnosť allogénna transplantácia Prognóza: veľa relapsov, krátke prežívanie pacienta Survival analýza lepšia prognóza pre mladších, ženy, transplatovaných 5

6 ERYTROPOÉZA Pluripotentná hematopoetická bunka Myeloidná línia Lymfoidná línia kultivačne detegovateľné CFU-GEMM BFU-E CFU-E morfologicky detegovateľné jadrové prekurzory Proerytroblast Erytroblast: bazofilný polychromatofilný ortochromatofilný Retikulocyt bezjadrový Erytrocyt PK 6

7 Flow cytometrická analýza jadrových erytrocytových prekurzorov Erytropoéza strata CD45, CD117, HLA DR, CD38, CD105 CD34 proporcionálne k myel. ( 27% AML M6) Erytrocytová bunková línia CD235a ( glykoforína ) špecifický, slabšia intenzita na prekurzoroch, zrelé erytrocyty najvyššia intenzita CD71 ( receptor pre transferín, aktivačný znak iných leukémií) CD36 (monocyty aj megakaryocyty) 7

8 Expresia antigénov na povrchu jednotlivých vývojových štádií jadrových erytroidných prekurzorov Fajtová M a kol. Onkológia2013,8:48 49 Pro Bazofilné Polychromné Ortochromné CD CD CD CD CD CD CD235a / FSC SSC

9 Kazuistika erytroblastovej leukémie 14,5 ročný chlapec KO a diff.,morfológia a cytochémia KD, FC vyšetrenie nízky výskyt u detí (neznáma incidencia) Vzorka PK zo dňa : KO + diferenciál Le 1,5 x 10 9 /l R dif: Ne 17%, Eo 1%, Ly: 28%, Tyč. 16%, Mo 1%, Blast neurč. 1, ERYTROBLAST 36% výrazná cytopénia Cytochémia KD z PAS...nehod. Likvor počet elemenov pod 5/ µl 9

10 Morfológia KD dňa Hypercelulárna dreň s nižším počtom megakaraocytov, hyperplázia kvalitatívne zmenenej erytropoézy tvorí 51,7% buniek, výskyt myeloblastov v prepočte na bunky nie erytroidného pôvodu (NEC) 31%. Blasty sú malé aj stredne veľké, aj so slabo bazofilnou cytoplazmou s jemnou azurofilnou granuláciou v cytoplazme. Vyzrievajúca myelopoéza má maturačnú poruchu s redukovaným počtom tyčiek a segmentov, tiež má dysplastické rysy v nesúlade zrenia, granulácií aj veľké Mmy. Výskyt patologických mikromegakaryocytov. Záver: Morfologický obraz v kostnej dreni spľňa percentuálne kritéria (aj s prítomnosťou multilineárnej dysplázie ) pre diagnózu AML M6 erytroleukémia. 10

11 FC analýza kostnej drene Príprava : Vzorka KD neseparovaná Farbenie: 50µl vzorky + potrebné množstvo MoAb Použité MoAb (Immunotech Beckman Coulter) Erytro. línia: CD235a-PE, CD71 FITC, CD36 FITC Myelo mono línia: CD13 PE, CD33 PC5, CD64 A750, CD14 PC7, 117 PE Nešpecifické antigény: CD34 A750, CD45 FITC, CD43 FITC, HLA DR PC5.5 B línia: CD10 PE, CD19 PC5, CD20 PE/ T línia: CD7 PC7, CD3 PC5, A750, CD8 PC7 11

12 Lýza: s NH 4 Cl: erytroblasty nepodliehajú lýze dôjde k lýze len zrelých erytrocytov Premytie: 2 krát s fyziologickým roztokom Meranie: 4 5 farebná analýza FC Navios (Beckman Coulter) 12

13 13

14 14

15 15

16 Výsledky FC analýzy KD z Erytroidná populácia 20 25% CD34 CD117 HLA DR CD45 CD235+ CD71+ CD36+ CD43+ CD13 CD33 CD14 Myeloblasty 21% CD34 CD117+ HLA DR+ CD45+ (dim) CD235 CD71+ CD36 CD43+ CD13+ CD33+ CD14 CD7 /+ 16

17 WHO klasifikácia AML, NOS ( 19. mája 2016, časopis BLOOD) revízia 4. vydania 2008 stretnutie 2014 nové poznatky klinické, prognostické, morfologické, imunofenotypové, molekulárno genetické. AML with recurrent genetic abnormalities AML s rekurentnými cytologickými abnormalitami AML with myelodysplasia related changes AML s myelodysplastickými zmenami Therapy related myeloid neoplasms AML a MDS súvisiaci s terapiou AML, NOS inak nezaradené (zaradenie podľa morfológie) AML, NOS inak nezaradené Myeloid sarcoma Myeloidný sarkom Myeloid proliferations related to Down syndrome 17

18 Zmeny v klasifikácii AML, NOS Jediná zmena Akútna erytroblastová leukémia (AML M6) a) akútna erytroidná/myeloidná leukémia (AML M6a) definovaná 50% erytroidných prekurzorov a 20% myeloblastov z neerytroidných buniek Nová klasifikácia: vynechaná z kategórie AML! myeloblasty sa počítajú vždy ako percento zo všetkých buniek KD! Hodnotenie: % erytroidných buniek : % myeloblastov b) čistá erytroidná leukémia (AML M6b) jediný typ akútnej erytroblastovej leukémie > 80% erytroblastov ( 30% proerytroblastov) 18

19 Diferenciálna diagnostika erytrolekémie: ( AML, NOS Pure erythroid leukemia 80% erytroblastov a 30% proerytroblastov ) 50% až 80% erytroblastov a zároveň 1. Žiadne myeloblasty reaktívna erytroidná hyperplázia ako následok imunosupresívnej liečby, rádioterapie, chemoterapie Therapy related myeloid neoplasms 2. 20% myeloblastov ANC BM MDS 3. 20% myeloblastov ANC BM a) AML with recurrent genetic abnormalities b) a 50% buniek s dyspláziou v dvoch a viac líniách AML with myelodysplasia related changes c) AML, NOS iný subtyp 19

20 AML, NOS ( not otherwise specified) subkategória AML with minimal differentiation AML without maturation AML with maturation Acute myelomonocytic leukemia Acute monoblastic/monocytic leukemia Pure erythroid leukemia ( Acute erythroid leukemia erythroid/myeloid type) Acute megakaryoblastic leukemia Acute basophilic leukemia Acute panmyelosis with myelofibrosis 20 f

21 ZHODNOTENIE FC ANALÝZY Erytroidná línia na základe uvedených antigénov ťažko odlíšiť erytroblasty od erytrocytov (aj napriek lýze môžu byť erytrocyty prítomné?) Detekcia menej zrelých myeloblastov presný subtyp neuvedený (nevyšetrená cympo) Korelácia morfologickej klasifikácie s imunofenotypizáciou neplatí vždy Presnejšia analýza erytrocytových neoplází (imunofenotypové abnormality) 21

22 22