Nabídka Sigma-Aldrich pro rychlou a multidimenzionální HPLC RNDr. Dana Procházková
Sigma-Aldrich
Laboratorní chemikálie Organická rozpouštědla, pufry, kyseliny, báze, soli, etc..
Katalogy
The Reporter for Europe, Analytix Bezplatně SPE, SPME GC, HPLC Standardy Činidla Mikrobiologie Akce platí v ČR i SR 5
enewsletters pro Analytiku & Chromatografii 6 sigma-aldrich.com/newsletters
7
8
9
10 Monthly savings
HPLC Solvents Save 60% Please mention Promotion Code HFI when ordering, valid until February 29, 2012 34850-4X2.5L Acetone CHROMASOLV, for HPLC, 99.8 34881-4x2.5L Acetonitrile R CHROMASOLV, for liquid chromatography, 99.8% (GC) 34851-4x2.5L Acetonitrile CHROMASOLV gradient grade, for HPLC, 99.9% 34888-4x2.5L Acetonitrile E CHROMASOLV, for HPLC, for UV, 99.9% 34856-4X2.5L Dichloromethane, CHROMASOLV, for HPLC, 99.8 34859-4X2.5L Hexane, CHROMASOLV, for HPLC, 97.0% (GC) 34860-4X2.5L-R Methanol, CHROMASOLV, for HPLC, 99.9% 34885-4X2.5L-R Methanol, CHROMASOLV, gradient grade, for HPLC, 99.9% 34865-4X2.5L Tetrahydrofuran, CHROMASOLV Plus, for HPLC, 99.9%, inhibitor-free 34877-4x2.5L Water, CHROMASOLV Plus, for HPLC 11
12 Videa a web semináře
13 http://www.sigmaaldrich.com/analyticalchromatography/video/brighttalk.html
14
15 Analytické standardy
16 Analytické standardy
RTC Environmental Analysis Catalogue Proficiency Testing Dark Blue Water Pollution Analysis (WP) Drinking Water (Water Supply) Analysis (WS) Contaminated land Analysis (Solid Waste, LPTP) Underground Storage Tank (UST) Microbiology (RCQ) Certified Reference Materials - Gold Natural Matrix CRM (Soil & Water) Clean Soils Calibration CRMs - Brown XRF Samples Inorganic CRMs UST/Hydrocarbon CRMs 17
Mezilaboratorní porovnávání Akreditováno podle ISO 17043 Velký počet účastníků z celého světa (2 000 2 500) Jednoduché odesílání výsledků přes web nebo e-mailem 4 6 okružních testů během roku 2 ampule na testovaní (standard s certifikátem pro nastavení přístroje a neznámý vzorek) 6 týdnů na odeslání výsledků Je provedena statistická analýza a hodnotící zpráva je zaslána každé laboratoři Výsledek formou hodnotící zprávy formou Z-score Acceptable, Warning nebo Fail V případě výsledku Warning nebo Fail po provedení nápravných opatření je možnost opravného vzorku. Výsledek je statisticky zpracován s původním souborem. 18
19 Web stránky: RTC webové stránky
HPLC 20
Chronologie vývoje HPLC nosičů Silikagel jako nejpoužívaněj vanější nosič Velikost částic Ascentis Express Rychlost analýz, účinnost Porous silica 5 µm 3 µm <2 µm monoliths, CEC Permeability wall 21
22 Výhody silikagelových částic s pevným jádrem
Ascentis Express Fused-Core tm specifikace Sorbent: vysoce čistý silikagel 1.7 µ neporézní jádro a 0.5 µ porézní vrstva jsou type B Velikost částic: 2.7 µ Stacionární fáze: C18, C8, HILIC, RP-Amide, F5, Pheny-hexyl, CN, Peptide ES C18 Distribuce velikosti částic: 2.7 +/- 0.16 µ (6% standardní odchylka*) Velikost pórů: 90 Å, 160 Å Velikost povrchu: 150 m²/g (220-300 m²/g efektivní) ph rozsah: 2 9 (minimálně) Limitní tlak: 600 barů (testováno na UHPLC) LC-MS: vysoce kompatibilní 23 * Typický rozsah pro malé totálně porézní částice je 15-20% standardní odchylka.
Distribuce částic 24
25 Výhody silikagelových častic s pevným jádrem
26 Výhody silikagelových častic s pevným jádrem
Vysoké průtokové rychlosti, rychlé separace 16,000 35.00 30.00 25.00 20.00 15.00 10.00 5.00 H = A + B/u + Cu 2.7 µm Ascentis Express 16,000 14,000 12,000 10,000 8,000 6,000 4,000 2,000 P = 1000FηL P = πr 2 d 2 p 1.7 µm 2.7 µm FC 3 µm 1 2 3 4 5 Průtoková rychlost MF (mm/sec) 2 4 6 8 10 12 Průtoková rychlost MF (mm/sec) 27
Ascentis Express UHPLC na klasických HPLC chromatografech Zpětný tlak versus průtoková rychlost Maximální limit 450 400 Pressure drop (bar) 350 300 250 200 150 Limit tradičních HPLC systemů N = >30,000 35 60 80 100 50 0 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6 1.8 2 2.2 2.4 2.6 2.8 3 3.2 3.4 3.6 3.8 4 Flow rate (ml/min) 28 Experimentální zavislost celkového zpětného tlaku jako funkce průtokové rychlosti pro C18, 15 cm x 4.6 mm, 2.7 m Ascentis Express kolony při různých teplotách. MF: 30:70 voda:acetonitril Autor Prof. Luigi Mondello University of Messina
Rozlišení Velikost částic a maximální N Kolony s částicemi menší než 2-µm zvyšují 1.55 x rozlišení a 8 x tlak vzhledem k 5 µm sorbentům U kolon Ascentis Express 2,7-µm je zvýšení rozlišení také 1.55 x ale zvýšení tlaku 4 x vzhledem k 5 µm sorbentům Délka kolony dp N Rs faktor Tlak (psi) Tlak (bar) 10cm 5µm 10 000 1 750 50 10cm 3µm 14 000 1,18 2250 150 10cm 2.7µm FC 24 000 1,55 2800 190 10cm 1.7µm 24 000 1,55 6000 400 29
Rychlá LC versus tradiční HPLC (3 mm vnitřní průměr) 5 µ porézní Column: 5µ C18; 3 x 150 mm Flow: 0.4 ml/min Mobile Phase: 20:80, water : acetonitrile Inj: 1.5 µl Temp: 35 C Pressure: 885 psi (61 bar) N (naphthalene) : ~11000 k (naphthalene) : 1.78 1.5 ml celkový objem 1.0 2.0 3.0 4.0 Time (min) elution order: Fused-Core (zelená chromatografie) uracil, phenol, acetophenone, benzene, toluene, naphthalene Column: Ascentis Express C18; 3 x 50 mm Flow: 0.6 ml/min Mobile Phase: 31:69, water : acetonitrile Inj: 0.5 µl Temp: 35 C Pressure: 1750 psi (121 bar) N (naphthalene) : ~11000 k (naphthalene) : 1.75 Rs (acetophenone) : 3.2 0.5 ml celkový objem 30 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 Time (min) 4x rychlejší analýza, 3x menší spotřeba rozpouštědel
Problém s nečistotami v mobilní fázi 31 Nečistoty, které na HPLC nejsou detegovatelné mohou být problém na UHPLC
LC-MS Ultra CHROMASOLV Rozpouštěla a aditiva do MF Brand Product Name Description Pack size Fluka 14261 Acetonitrile LC-MS Ultra CHROMASOLV, 99.9%, tested for UHPLC-MS 1L, 2L Fluka 14262 Methanol LC-MS Ultra CHROMASOLV, 99.9%, tested for UHPLC-MS 1L, 2L Fluka 14263 Water LC-MS Ultra CHROMASOLV, tested for UHPLC-MS 1L, 2L Fluka 14264 Trifluoroacetic acid LC-MS Ultra eluent additive, 99.0% suitable for UHPLC-MS 1ML, 2ML Fluka 14265 Formic acid LC-MS Ultra eluent additive, 98% suitable for UHPLC-MS 1ML, 2ML Fluka 14266 Ammonium formate LC-MS Ultra eluent additive, suitable for UHPLC-MS 25G Fluka 14267 Ammonium acetate LC-MS Ultra eluent additive, suitable for UHPLC-MS 25G 32
LC-MS Ultra CHROMASOLV Rozpouštědla se testují na UHPLC Gradient UHPLC-UV, shodné vlastnosti mezi výrobními šaržemi Nízké pozadí a minimum nečistot jako jsou ftaláty a PEG. Testováno na UHPLC-MS TOF Testování v obou polaritách Obaly Bílé borosilikátové sklo Minimální výluh alkalických iontů 33
Identifikace nečistot v ESI + Intens. x104 1.2 LCMS Ultra UVMSpos_RD1_07_3218.d: BPC 49.0000-1701.0000 +All MS, -Constant Bkgrnd 1.0 0.8 0.6 New LC-MS ultra grade 0.4 0.2 0.0 Intens. x104 Gradient Grade BASF pos_rd1_03_3255.d: BPC 49.0000-1701.0000 +All MS, -Constant Bkgrnd 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 High quality gradient grade 0.2 0.0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 Time [min] 34 Nežádoucí nečistoty v rozpouštědlech (plastifikátory, PEGy).
LC-MS Ultra CHROMASOLV ESI + ESI - 35 MS test v ESI + a ESI - ; 5ppb reserpinu a 20 ppb digoxinu; velmi nízký šum.
Borosilikátové skleněné láhve Intens. 800 LCMS Ultra UVMSneg_RD1_01_3235.d: -MS, 3.0-9.1min #(270-809), -Constant Bkgrnd 600 400 LC MS Ultra (v borosilikátové láhvi) 200 197.9713 325.1941 451.3073 648.9335 698.9277 532.9422 792.9043 847.8578 909.8569 1014.8415 0 800 Chrom Gradient Grade UVMSneg_RD1_04_3232.d: -MS, 3.0-9.0min #(270-807), -Constant Bkgrnd 600 400 219.9947 248.9723 Klastry mravenčanu sodného Gradient grade quality (v hnědé skleněné láhvi) 200 325.2004 355.9741 384.9540 520.9360 648.9327 698.9393 858.8914 906.8939 983.8583 1035.8551 0 200 400 600 800 1000 1200 m/z 36
Brožury HPLC 37
Děkuji za pozornost 38