Lortorní přístroje postupy VLASTNOSTI -GLUKANOVÝCH FILMŮ Z INTAKTNÍCH A DESINTEGROVANÝCH BUNĚK Scchromyces cerevisie MIROSLAV NOVÁK, ANDRIY SYNYTSYA, GORDON K. GOMBA, ANNA HEJLOVÁ, JIŘÍ BLAHOVEC c, ONDŘEJ GEDEON d, PETR SLEPIČKA e, JAROSLAV MAIXNER f JANA ČOPÍKOVÁ Ústv chemie technologie schridů, Vysoká škol chemicko-technologická v Prze, Technická 3/5, 166 28 Prh 6 - Dejvice, Ktedr mtemtiky, c Ktedry fyziky, Česká zemědělská univerzit v Prze, Kmýcká 129, 165 21 Prh 6 Suchdol, d Ústv skl kermiky, e Ústv inženýrství pevných látek,, f Centrální lortoře, Vysoká škol chemicko-technologická v Prze, Technická 3/5, 166 28 Prh 6 - Dejvice Došlo 26.7.11, přijto 5.10.11. Klíčová slov: β-glukn, kvsinky Scchromyces cerevisie, filmy, struktur, mechnické vlstností Úvod V moderních krytech rn se používjí rozmnité komince iologicky ktivních látek, které plní čsto i funkci kožní náhrdy 1. Zákldní součástí těchto moderních krytů rn jsou ovykle polyschridy lginát 2, chitin neo chitosn 3,4, modifikovná celulos 5, dextrn 6,7, kyselin hylouronová 8,9 dlší. Jednou z význmných složek těchto moderních krytů rn je (1 3,(1 6- -D-glukn (dále: - glukn, používný uď smotný neo v kominci s želtinou 10 či kolgenem 11, neo želtinou kyselinou hylouronovou 12. -Glukn podporuje hojení rn tím, že stimuluje především mkrofágy 13,14, které zjišťují fgocytózu sekreci cytokinů 15 produkují fktory, které npomáhjí hojení rn, npř. epidermální růstový fktor (EGF ngiogenézní fktor. -Glukn rovněž stimuluje tvoru kolgenu, který je hlvní funkční složkou pojivových tkání má zásdní úlohu při tvorě nové kožní tkáně 16,17. Biologický efekt -gluknu při uvžovné plikci jko ktivní kryt rány předstvuje ovšem pouze jednu, yť důležitější, stránku věci. Tou druhou jsou fyzikálněchemické mechnické vlstnosti krytu, které výrzně ovlivňují nejen jeho iologické, le i plikční vlstnosti, mnipulovtelnost stilitu in situ. V této práci jsme změřili pozornost n tyto vlstnosti filmů z -gluknu, izolovného z kvsinek Scchromyces cerevisie. -Glukn z kvsinek je možné izolovt dvěm zásdními postupy, při nichž se vychází uď z intktních uněk neo z uněčného homogenátu. O produkty se určitým způsoem odlišují tké se liší i fyzikálně-chemické mechnické vlstnosti z nich připrvených filmů. Experimentální část Izolční postupy -Glukn yl v přípdě příprvy z intktních uněk izolován způsoem podle Mnnerse spol. 18 z komerčního pekřského droždí (Scchromyces cerevisie, Lessfre Česko,.s., které se v 5% suspensi v 6% NOH digerovlo z chldu poté z vru pelet získný odstředěním se postupně čistil promýváním. V přípdě příprvy -gluknu z desintegrovných uněk yl postup doplněn desintegrcí v lotinovém nerezovém lortorním homogenizátoru s teflonovým rotčním diskem, v 1% NOH při koncentrci kvsinek 2,5 hm.%. K desintegrci se používly kermické lotiny (ZY Premium, Sigmund Lindner GmH; složení 94,7 % ZrO 2 + HfO 2, 5,1 % Y 2 O 3, průměr 0,6 0,8 mm, které nepodléhjí otěru v lklickém prostředí, jk ylo potvrzeno XRF nlýzou. Postup desintegrce yl sledován spektrofotometricky při λ = 260 nm (uvolňování nukleových kyselin. Jko konec desintegrce yl rán okmžik, kdy se sornce odstředěného vzorku homogenizovné suspense již dále nezvyšovl; tto do yl 150 s. -Glukn získný v oou přípdech není zcel čistý, oshuje určitý podíl -gluknů mlé množství proteinů či chitinu (viz or. 1, le svou kvlitou odpovídá komerčně dodávným -gluknům. Izolce čistšího -gluknu je smozřejmě možná, le vzhledem k tomu, že cílem této práce je porovnání filmů ze stejného výchozího mteriálu lišících se pouze způsoem izolce, jeví se nám použitý způso jko dekvátní. Příprv β-gluknových filmů Suspense -gluknu, připrveného jedním neo druhým postupem uvedeným výše, odpovídjící poždovné plošné koncentrci filmu (2,5 10 mg cm 2, oshující glycerol jkožto plstifikátor (25 % hmotnosti použitého -gluknu, yl vylit n hliníkové misky s dokonle rovným dnem se seprční vrstvou silikonového tuku. Filmy yly vysoušeny 3 5 hodin (podle plošné koncentrce filmu při 65 C. Anlytické metody Osh monoschridů v hydrolyzátu vzorku (1 h v 3 mol l 1 kyselině trifluoroctové, 100 C; po hydrolýze TFA odpřen pod N 2 při 40 C yl stnoven niontovou chromtogrfií (HPAEC-PAD n stvenici Dionex BIO LC (Dionex, USA s pulsním mperometrickým detektorem, s nlytickou kolonou 2 250 mm CroPc PA1. 955
Lortorní přístroje postupy 0,5 Asornce 0,4 0,3 0,2 0,1 (OH (CH 2 (CH (CH 2 lipidy (C=O mid I (H 2 O ílkoviny mid II (CH 2, (COO - mid III (CCO (CCH (COH 0,0 4000 3500 3000 2500 1800 1600 1400 1200 1000 800 600 400 nukleové kyseliny (P=O (COC (CO(CC -glukny polyschridy mnnny -glukny (C1H -glukny -glukny Vlnočet, cm -1 Or. 1. FTIR spektr homogenátu kvsničných uněk ( výchozích β-gluknů připrvených digescí nedesintegrovných ( desintegrovných ( ----- uněk Průtok moilní fáze (16 mmol l 1 NOH při teplotě 25 C yl 0,25 ml min 1. Osh vody ve filmech yl stnoven metodou Krl Fischer n přístroji ThermoOrion AF8 v prostředí směsi methnol:formmid (2:1 oj., relizovnou podle návodu k použitému přístroji. Celkové glukny, -glukn -glukn yly stnoveny n komerční souprvě Megzyme K-YBGL 04/08. FTIR spektroskopie FTIR spektr práškových vzorků filmů yl měřen v KBr tletách n přístroji Nicolet 6700 (ThermoScientific, USA v olsti 4000 650 cm 1 s rozlišením 2,0 cm 1 počtem skenů 64. Zákldní linie yl vyhlzen korigován progrmem Omnic 8.8 (ThermoScientific, USA. Mikroskopická nlýz Rstrovcím elektronovým mikroskopem (SEM s utoemisní tryskou (FEG-SEM, Hitchi S-4700 yl snímkován povrch vzorků lomové hrny získné v kplném dusíku. Vzorky yly pokoveny 10 nm vrstvou slitiny Au/Pd ve vkuové npršovčce Bl-Tec SCD-500. SEM orzy yly zchyceny pomocí sekundárních elektronů se superpozicí topogrfického fázového kontrstu. Hodnoty urychlovcího npětí, prcovní vzdálenosti původního zvětšení jsou uvedeny n jednotlivých snímcích. Profil povrchu morfologie filmů yly měřeny mikroskopií tomárních sil (AFM v kontktním modu sondou n mikroskopu Digitl Instruments CP II se sondou Veeco Silicon P-doped CONT20A-CP (konstnt pružnosti 0,9 N/m. Rentgenová spektrometrie Při rentgenové difrktometrii (XRD yly filmy měřeny při lortorní teplotě n difrktometru X Pert PRO θ-θ (PANnlyticl, s geometrií Brgg-Brentno CuK lmpou (λ = 1,5418 Å, U = 40 kv, I = 30 ma, s detektorem X'Celertor neo scintilčním detektorem s rozshem úhlů 5 60 (2θ, úhlovým rozlišením 0,02 (2θ intervlem pulsů 0,3 s. Dt yl zprcován progrmem HighScore Plus (PANnlyticl. Reltivní krystlinit v rozshu úhlů 8 ž 60 (2θ yl spočten jko poměr intenzity příslušné krystlickému stvu celkové intenzity 19. Anlýz kovových prvků rentgenovou fluorescenční nlýzou (XRF ve filmech proíhl n sekvenčním spektrometru ARL 9400 XP. Dt yl vyhodnocen softwrem Winxrf. Termická nlýz Tepelná stilit filmů yl měřen diferenční skenovcí klorimetrií (DSC v přístroji Setrm DSC 131. Při sledování fázových přechodů se teplot v tmosféře N 2 zvyšovl od 40 C do 200 C rychlostí 5 C min 1 tepelná stilit filmů yl sledován ěhem ohřevu od 20 C do 600 C, opět rychlostí 5 C min 1 v tmosféře N 2. Záznmy yly zprcovány v progrmu Origin 8. Mechnické testy Pro mechnické testy yly folie kondiciovány 5 dní při pokojové teplotě reltivní vlhkosti 43 %; stejné poměry yly udržovány v měřící komoře. Thové testy do přetržení yly provedeny n univerzálním testovcím přístroji Instron TM (typ 33R 4464 s komorou 3119-506, se softwrem Bluehill (Instron Bluehill TM Mteril Testing 956
Lortorní přístroje postupy Softwre, 2004. Nmáhná olst vzorku yl 35 8 mm, rychlost příčníku 1 mm min 1. Průměrné hodnoty tloušťky šířky vzorku (měřeny mikrometrem stereomikroskopem sloužily k výpočtu průřezu npětí. Z deformční křivky, tj. závislosti npětí n poměrné deformci, yl vypočten Youngův modul pružnosti, určen mez kluzu jko npětí způsoující nepružnou deformci 0,2 %, pevnost jko npětí při přetržení tžnost jko poměrná deformce při přetržení 20,21. Výsledky diskuse Hydrolýzou -gluknu jk z nedesintegrovných tk desintegrovných uněk kyselinou trifluoroctovou vzniká pouze glukos, což potvrzuje homogenitu jeho monoschridového složení 22. Skutečný osh - -gluknů zjištěný enzymovou metodou yl u nedesintegrovných uněk 4,6 35,7 %, u desintegrovných uněk 3,0 69,0 % (průměr ze tří stnovení. Je ptrné, že po desintegrci c d Or. 2. Elektronoptické snímky povrchu lomů filmů; β-glukn z nedesintegrovných uněk: povrch filmu, lom; β-glukn z desintegrovných uněk: c povrch filmu, d lom Or. 3. AFM snímky povrchu filmu (shding φ 250, θ 50 ; β-glukn z nedesintegrovných uněk, β-glukn z desintegrovných uněk 957
Lortorní přístroje postupy 6000 Intenzit, pulzy 5000 4000 3000 2000 1000 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 (2 Or. 4. Rentgenová difrktometrie filmů β-gluknu připrvených digescí nedesintegrovných ( desintegrovných ( uněk Or. 6. Příkldy deformčních křivek pro filmy vyroené z desintegrovných ( 0,046 mm, 0,025 mm intktních (----- glucn: glycerol 5, glucn: glycerol 3 uněk; dt pro filmy vyroené z intktních uněk převzt z cit. 20 3 Tepelný tok, mw 2 1 0-1 -2-3 -4-5 -6 2 0-2 -4-6 -8-10 -25 0 25 50 75 100 125 150 175 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500 550 600 Teplot, C Or. 5. DSC filmů β-gluknu připrvených digescí intktních ( desintegrovných (- - - uněk; ohřev 40 C ž 200 C, ohřev 20 C ž 600 C klesá osh -gluknu, což je vysvětlitelné rozvolněním struktury uněčných stěn před následnou lklickou digescí. Vlhkost připrvených filmů se pohyovl kolem 6,4 % při teplotě 25 C reltivní vlhkosti vzduchu 33 %. FTIR spektr výchozích -gluknů připrvených digescí intktních desintegrovných uněk jsou ukázán ve srovnání se spektrem kvsničných uněk po desintegrci n or. 1. Ve spektru desintegrovných uněk 23 25 jsou ptrné píky ílkovin (1652, 1539 1342 cm 1, nukleových kyselin (1240 cm 1 mnnnů (971, 915 811 cm 1. Pásy kolem 2961, 2873, 1454 1370 cm 1 (virce methylových skupin ílkovin mizí neo se výrzně snižují po lklické digesci, nopk virční pásy polyschridů v olsti 1200 1000 cm 1 (pásy -gluknů kolem 1109, 1077, 1043, 995, 963 891 cm 1, cit. 24,25 vykzují výrzný nárůst. Výchozí β-glukn z nedesintegrovných uněk oshovl výrzné pásy -gluknů kolem 1022, 932, 850, 760 708 cm 1 (cit. 26,27. Dulet vircí mid I při 1660 1630 cm 1 pás vircí mid II kolem 1560 cm 1 jsou typické pro -chitin 28, který je součástí polyschridového komplexu uněčných stěn kvsinek. Ze SEM snímků (or. 2 horní plochy filmů lomové hrny je zřejmé, že povrch filmu z intktních uněk je více heterogenní, s vláknitou strukturou, povrch filmu z desintegrovných uněk je více homogenní, s jemnou grnulární strukturou. N snímcích lomových hrn je homogenit filmu z desintegrovných uněk ještě ptrnější. Profil povrchu -gluknových filmů n AFM snímcích vrchní strny filmů (or. 3 je znčně nerovný, s ptrnými zytky uněčných stěn. Film z -gluknu z desintegrovných uněk (or. 3 oshuje větší počet rozměrově menších frgmentů větší podíl morfní mtrix, vznikjící dlší frgmentcí uněčné stěny při lklické digesci. Ostřejší vrcholy jsou ptrně důsledkem vyššího stupně rozvolnění uněčných stěn: menší frgmenty jsou více ovlivněny kontrkcí při vysoušení filmů. N zákldě velkého počtu proměřených míst je rozmezí výšky frgmentů n filmech z nedesintegrovných uněk 160 220 nm šířky 3200 3600 nm, u frgmentů z desintegrovných uněk je rozmezí výšky 300 320 nm šířky 3250 ž 3400 nm. Výsledky měření XRD odpovídjí látkám s nevýrznou krystlickou spíše výrznou morfní strukturou. Reltivní krystlinit -gluknu ve filmu z intktních uněk yl 27,4 % -gluknu ve filmu z desintegrovných uněk yl 39,4 % (or. 4. Filmy z oou typů β-gluknu mjí hlvní pík kolem 19,5 (2θ, který odpovídá mezirovinné vzdálenosti d = 4,49 nm; u filmů z oou typů - gluknu jsou nevýrzné dlší píky. N DSC křivkách příslušných filmům z oou typů - gluknu jsou dv skelné přechody kolem 29 C 35 C (or. 5 29 31 široký endotermní pík mezi 40 C 140 C dný štěpením intr- intermolekulárních vodíkových 958
Lortorní přístroje postupy Tulk I Mechnické vlstnosti filmů Glukn z uněk -Glukn β-glukn / glycerol n Tloušťk [mm] Modul pružnosti [MP] Mez kluzu [MP] Pevnost [MP] Tžnost [%] [mg/cm 2 ] [g/g] MV SD c MV SD c MV SD c MV SD c Desint. d 5 4 11 0,046 2163 65 32 2,9 40 2,1 3,2 0,18 2,5 4 8 0,025 2317 77 ns ns 31 2,4 1,6 0,21 Nedesint. e 10 5 15 0,09 1508 37 23 1,9 28 2,8 3,9 1,31 10 3 21 0,09 712 31 9 1,7 17 5,7 14,2 4,3 n počet vzorků, MV průměrná hodnot, c SD směrodtná odchylk, d ns nestnoveno, e dt převzt z cit. 20 vze postupným odpřováním vody. Při teplotě 277 C je n DSC křivce filmu z intktních uněk (or. 5 endotermní pík při teplotě 297 C exotermní pík, n křivce filmu z desintegrovných uněk endotermní píky při 250 C 355 C exotermní píky při 282 C 381 C (or. 5, které odpovídjí teplotám rozkldu polyschridu 22 ; polyschrid z desintegrovných uněk má mírně sníženou teplotu rozkldu. Mechnické vlstnosti filmů z desintegrovných uněk yly testovány vždy n dvou jink stejných filmech s různými plošnými hustotmi, tedy i tloušťkmi (t. I, or. 6. Význmnost rozdílů mezi mechnickými prmetry yl posuzován t-testem n hldině = 0,05. Pro silnější filmy yl ptrná význmně vyšší pevnost (P = 0,0104 vyšší tžnost (P = 0,00013 nežli u tenčích filmů. Nproti tomu Youngův modul pružnosti neyl ovlivněn různou tloušťkou (P = 0,18. N tenčích filmech většinou neyl měřitelná mez kluzu, příp. splývl s přetržením. Pevnost tžnost tenčích filmů se prkticky nelišil od meze kluzu odpovídjící poměrné deformce silnějších filmů (P = 0,85, resp. 0,78, různá tloušťk filmů tedy neovlivnil význmně první část deformčních křivek. K přetržení tenčích filmů přitom docházelo výrzně dříve nežli silnějších filmů. Výsledky pro filmy vyroené z nedesintegrovných uněk 20, které yly skldovány testovány z nlogických teplotních vlhkostních podmínek jsou rovněž v t. I n or. 6. Modul pružnosti, mez kluzu pevnost zjištěné pro filmy z desintegrovných uněk yly výrzně vyšší, filmy jsou tedy i při nižší plošné hustotě výrzně pevnější méně tžné nežli filmy připrvené z nedesintegrovných uněk. Závěr -Glukny z desintegrovných uněk měly nižší osh -gluknů filmy z nich připrvené yly ve srovnání s filmy připrvenými z intktních uněk více homogenní, s jemnou grnulární strukturou. Amorfní stv filmů s mírnou reltivní krystlinitou je spíše vyšší u filmů připrvených z intktních uněk; to je v souldu s mikroskopií tomárních sil. Teplot skelných přechodů se u jednotlivých typů filmů neliší, všk filmy připrvené z -gluknu z desintegrovných uněk mjí nižší teplotu rozkldu, rozkld ovšem nstává vždy ž při teplotách nd 250 C. Z hledisk užitných vlstností filmů je podsttné, že filmy z desintegrovných uněk jsou pevnější méně tžné nežli filmy připrvené z nedesintegrovných uněk. Autoři děkují Dr. Jně Ederové z měření DSC křivek, Ing. Jroslvu Němečkovi z příprvu filmů doc. Ing. Miroslvu Müllerovi z měření rozměrů vzorků k mechnickým testům. Tto práce vznikl z podpory projektů GA ČR 525/09/1133 MŠMT 6046137305. LITERATURA 1. Novák M.: Proceedings of 6 th Interntionl Conference on Polyscchrides - Glycoscience (Čopíková J., Šárk E., Řápková R., ed., str. 17, VŠCHT Prh, Prh 2010. 2. Yimin Qin: Polym. Int. 57,171 (2008. 3. Ching-Hu Su, Chi-Shu Sun, Shm-Wei Jun, Chung- Hong Hu, Wen-Ting Ket, Ming- Thu Sheu: Biomter. 16, 1169 (1997. 4. Ching-Hu Su, Chi-Shu Sun, Sheng-Wei Jun, Hsiu- O Ho, Chung-Hong Hu, Ming-Thu Sheu: Biomterils 20, 61 (1999. 5. Bjerová M., Krejčová K., Rišková M., Gjdziok J., Msteiková R.: Adv. Polym. Technol. 28, 199 (2009. 6. Weng L., Romnov A., Rooney J., Chen W.: Biomterils 29, 3905 (2008. 7. Chkrvrthy D., Smith D. J.: J. Bioct. Compt. Polym. 10, 313 (1995. 8. Sng Bong Lee, Hyun Wook Jeon, Young Woo Lee, Seong Kwn Cho, Young Moo Lee, Kng Won Song, Moon Hyng Prk, Sung Hw Hong: Mcromol. Res. 11, 368 (2003. 9. Cervelli V., De Angelis B., Lucrini L., Spllone D., Blzni A., Pll L., Gentile P., Cerulli P.: Adv. Skin Wound Cre 23, 262 (2010. 10. Sng Bong Lee, Hyun Wook Jeon, Young Woo Lee, 959
Lortorní přístroje postupy Young Moo Lee, Kng Won Song, Moon Hyng Prk, Young Soo Nm, Hee Chng Ahn: Biomterils 24, 2503 (2003. 11. Deltte S. J., Evns J., Her A., Admson W., Othersen H. B., Tgge E. P.: J. Pedit. Surg. 36, 113 (2001. 12. Sng Bong Lee, Hyun Wook Jeon, Young Woo Lee, Seong Kwn Cho, Young Moo Lee, Kng Won Song, Moon Hyng Prk, Sung Hw Hong: Mcromol. Res. 11, 368 (2003. 13. DiLuzio N. R., Trends Phrmcol. Sci. 4, 344 (1983. 14. Ovington L. G.: Wound Cre 1998, 116. 15. Porter C. A., Love E. J., Memore L., Zhng L., Müller A., Browder W., Willims D. L.: Am. Surg. 63, 125 (1997. 16. Peterková P., Lpčík L.: Chem. Listy 94, 371 (2000. 17. Wei D., Zhng L., Willims D. L., Browder I. W.: Wound Rep. Regen. 10, 161 (2002. 18. Mnners D. J., Msson A. J., Pterson J. C.: Biochem. J. 35, 19 (1973. 19. Nr S., Komiy T.: Strch/Sterke 35, 407 (1983. 20. Blhovec J., Hejlová A., Čopíková J., Novák M.: Polym. Eng. Sci., přijto. 21. Hejlová A., Blhovec J.: Proceedings of 6 th Interntionl Conference on Polyscchrides - Glycoscience (Čopíková J., Šárk E., Řápková R., ed., str. 48, VŠCHT Prh, Prh 2010. 22. Slvíčková P., Synytys A., Gom G. K., Novák M., Čopíková J.: Proceedings of 6 th Interntionl Conference on Polyscchrides - Glycoscience (Čopíková J., Šárk E., Řápková R., ed., str. 191, VŠCHT Prh, Prh 2010. 23. Shi Guorong, Ro Liqun, Xie Qingji, Li Jun, Li Benxing, Xiong Xingyo: Virt. Spectrosc. 53, 289 (2010. 24. Glichet A., Socklingum G. D., Belri A., Mnfit M.: FEMS Microiol. Lett. 197, 179 (2001. 25. Šndul J., Kogn G., Kčuráková M., Mchová E.: Crohydr. Polym. 38, 247 (1999. 26. Zhnkov R. G., Andrinov V. M., Mrchewk M. K.: J. Mol. Struct. 436/437, 637 (1997. 27. Kčuráková M., Belton P. S., Wilson R. H., Hirsch J., Eringerová A.: J. Sci. Food Agric. 77, 38 (1998. 28. Biniś D., Wyszomirski M., Biniś W., Boryniec S.: Polish Chitin Soc., Monogrph XII, 95 (2007. 29. Wng Xio-Gng, Crrington T., McKellr A. R. W.: J. Phys. Chem. 113, 9915 (2009. 30. Zhng H., Nishinri K., Willims M. A. K., Foster T. J., Norton I. T.: Int. J. Biol. Mcromol. 30, 7 (2002. 31. Zhng H., Hung L., Nishinri K., Wtse M., Konno A.: Food Hydrocolloids 14, 121 (2000. M. Novák, A. Synytsy, G. K. Gom, A. Hejlová, J. Blhovec c, O. Gedeon d, P. Slepičk e, J. Mixner f, J. Čopíková ( Deprtment of Crohydrte Chemistry nd Technology, d Deprtment of Glss nd Cermics, e Deprtment of Solid Stte Engineering, f Centrl Lortories, Institute of Chemicl Technology, Prgue, Deprtment of Mthemtics, c Deprtment of Physics, Czech University of Life Sciences, Prgue: Properties of β-glucn Films from Intct nd Disintegrted Scchromyces cerevisie Cells Insolule polyscchride frctions contining β- glucns s the min component were isolted from intct nd disintegrted cells of yest Scchromyces cerevisie. Films prepred from oth these crude glucns s well s rw mterils themselves were nlysed y FTIR spectroscopy nd structure, therml nd mechnicl properties of the films were investigted using SEM, AFM, XRD, XRF, DSC nd tensile tests. β-glucn preprtions from disintegrted cells hd less mount of α-glucns thn those otined from intct cells. Films originted from disintegrted cells were more homogeneous, while crystllinity ws more pronounced t films from intct cells. Glss trnsition of the oth types of films underwent t the sme temperture. Films from disintegrted cells were less thermo stle, stronger nd less elstic thn those prepred from intct cells. 960