400/800 Phencyclidine Fencyklidin () Informace pro objednání COBAS INTEGRA 200 testů Kat. č. 20738042 122 Vyznačuje analyzátory, na kterých lze sadu cobas c použít Abuscreen OnLine Phencyclidine Systémové-ID 07 3804 2 Preciset DAT Plus I 6 5 ml Kat. č. 03304671 190 CAL 1-6 C.f.a.s. DAT Qualitative Plus 6 5 ml Kat. č. 03304698 190 C.f.a.s. DAT Qualitative Plus Clinical 3 5 ml Kat. č. 04590856 190 Control Set DAT I Kat. č. 03312950 190 PreciPos DAT Set I PreciNeg DAT Set I Control Set DAT Clinical Kat. č. 04500873 190 PreciPos DAT Clinical PreciNeg DAT Clinical Systémové informace COBAS INTEGRA Abuscreen OnLine Phencyclidine () Test S, test-id 0-510 pro semikvantitativní stanovení Test QL, test-id 0-610 pro kvalitativní stanovení Test QC, test-id 0-110 pro kvalitativní stanovení použitím C.f.a.s. DAT Qualitative Plus Clinical Použití Phencyclidine () je diagnostický in vitro test pro semikvantitativní a kvalitativní detekci fencyklidinu a jeho metabolitů v lidské moči při koncentraci cut-off 25 ng/ml na systémech COBAS INTEGRA. Mohou být získány semikvantitativní výsledky testu, které umožňují laboratořím určit využití stanovení jako součást programu kontroly kvality. Semikvantitativní stanovení je určeno pro měření vhodného naředění vzorku pro potvrzení konfirmační metody, jako je plynová chromatografie / hmotnostní spektrometrie (GC/MS). Phencyclidine může být použit jen jako předběžný analytický výsledek. Pro získání potvrzeného analytického výsledku musí být použita specifičtější alternativní chemická metoda. Preferovanou konfirmační metodou je GC/MS. 1 Výsledky testů uživání drog, zvláště jsou-li předběžně pozitivní, je třeba hodnotit s klinickým zřetelem a odborným úsudkem. Souhrn Fencyklidin () je arylcyklohexylamin se silnými analgetickými a anestetickými vlastnostmi. 1,2,3,4,5,6 Byl vyvinutý původně jako nitrožilní anestetikum, výskyt duševních vedlejších účinků vyloučil jeho možné klinické využití. nebyl nikdy schválen pro použití na lidech kvůli post-anestetickému zmatení a deliriu, které se objevily během klinických studií. je při ilegálním prodeji na ulici známý pod různými jmény jako např. "andělský prach", zatímco pojmenování jako "supergrass" znamená kombinaci s marihuanou. má halucinogenní, CNS (centrální nervový systém)-stimulující a CNS-uklidňující vlastnosti, jejichž projev je závislý na dávce a druhu. 4 a jeho strukturální obdoba, ketamin, jsou antagonisté receptoru NMDA (N-metyl-D-aspartát). 2,5 Známý jako disociační anestetikum, vytváří změny osobnosti, pocity disociace od prostředí a sebe. Dextrometorfan, prostředek proti kašli, může vyvolat podobné účinky, je-li užíván ve vysokých dávkách. 6 Prášek z, rozpustný ve vodě, může být užit orálně, šňupán, podáván nitrožilně nebo kouřen. Typická dávka k dostání na ulici (1-10 mg) může způsobit tachykardii, hypertenzi, halucinace, apatii, letargii, sensorickou izolaci a ztrátu koordinace. Vzrušení a neklid je rovněž průvodním znakem a může vést k bezdůvodné zuřivosti, kombinuje-li se s ostatními halucinogeny. Opakované užívání může způsobit závislost a vyšší dávky mohou vyvolat symptomy podobné schizofrenii a mohou vyústit v křeče a dlouhotrvající nebo smrtelné kóma. 2,6 je metabolizován kruhovou hydroxylací a oxidací enzymy cytochromu P450. 3,7 Metabolit aminokyseliny se vyskytuje ve významných množstvích v lidské moči. 8 U lidí byly pozorovány významné rozdíly v trvání odbourání, nicméně fáze II metabolismu sulface a glukuronidace mohly také přispět k rozdílům při době trvání rozpadu. 7 Princip testu Kinetická interakce mikročástic v roztoku (KIMS) 9 měřená změnou intenzity procházejícího světla. V případě absence drogy ve vzorku se volné protilátky váží na látku vázanou na mikročástici, a vytváří agregáty. Jak probíhá agregace ve vzorku, který neobsahuje drogu, absorbance roste. Jestliže vzorek moči obsahuje dotyčnou drogu, probíhá kompetice s částicemi s navázaným derivátem látky o volné protilátky. Protilátka vázaná na drogu ve vzorku není již dostupná pro podporu agregace částic a následný vznik struktury částic je inhibován. Přítomnost drogy ve vzorku úměrně snižuje nárůst absorbance vůči koncentraci drogy ve vzorku. Obsah drogy ve vzorku je určen poměrem ke známé hodnotě cut-off koncentrace drogy. Reagencie - pracovní roztoky Diluent vzorku (SD) Pufr obsahující stabilizátor a 0.09% azid sodný. Reagencie s protilátkou (AB) Reagencie s mikročásticemi (MP) Protilátka proti (monoklonální myší) v pufru, stabilizátor a 0.09 % azid sodný. Mikročástice s konjugovaným derivátem v pufru a 0.09 % azid sodný. SD je v pozici A, AB je v pozici B a MP je v pozici C. 2012-03, V 7 CS 1 / 5
Stanovení drog Pipetovací sekvence Analyzátory COBAS INTEGRA 400/400 plus R1 = AB R2 = SD R3 (SR) = MP R1 = SD R2 = AB R3 (SR) = MP Bezpečnostní opatření a varování Věnujte pozornost všem varováním a bezpečnostním opatřením uvedeným v části 1 / Úvod této Příručky metod. Zacházení s reagenciemi Analyzátory COBAS INTEGRA 400/400 plus Všechny nové (nepropíchnuté) cobas c packy musí být míchány 1 minutu použitím mixéru kazet před umístěním na palubu přístroje. Všechny cobas c packy, které jsou již v užívání, musí být na počátku každého týdne (jednou týdně) promíchány stejným způsobem. Reagencie je automaticky promíchána 1 minutu po propíchnutí cobas c packu a půl minuty při sekvenci Begin of Day. Uskladnění a stabilita Doba skladování při 2-8 C Viz datum exspirace na štítku obalu cobas c. Analyzátory COBAS INTEGRA 400/400 plus V přístroji při použití při 10-15 C V analyzátoru při použití při 8 C 69 dní 89 dní Doba stability reagencie v analyzátoru při použití začíná od momentu napíchnutí cobas c packu. Reagencie nemrazit. Reagencie, které byly zamraženy, je nutné odstranit. Odběr vzorků a příprava Pouze níže uvedené vzorky byly testovány a jsou přijatelné: Moč: Vzorky moče odebírejte do čistých skleněných či plastových nádobek. Vzorky čerstvé moče nepotřebují zvláštní předúpravu nebo zacházení, ale měly by být ochráněny před kontaminací při pipetování. ph vzorků by mělo být ve fyziologickém rozmezí 5 až 8. Aditiva a konzervans nejsou potřebné. Doporučujeme uchovávat vzorky při teplotě 2-8 C a zpracovat je do 5 dnů od odběru. 10 Při delším skladování doporučujeme vzorky zamrazit. Velmi zakalené vzorky před analýzou zcentrifugujte. Příměs či naředění vzorků může způsobit chybný výsledek. Při podezření, že byl vzorek znehodnocen, proveďte nový odběr. Testování validity vzorku je vyžadováno jen u vzorků odebíraných podle Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs. 11 Varování: Ředění vzorku by mělo být použito jen při jejich přípravě pro GC/MS, ale jinak není vhodné. Postup ředění, je-li použit, by měl být validován. Dodávaný materiál Reagencie jsou uvedeny v části "Reagencie - pracovní roztoky". Stanovení Optimálního využití stanovení dosáhnete, budete-li dodržovat pokyny, uvedené v dokumentaci pro analyzátory. Instrukce, specifické pro jednotlivé analyzátory, vyhledejte v uživatelské příručce. Aplikace pro moč COBAS INTEGRA 400/400 plus definice testu Semikvantitativní Kvalitativní Způsob měření Absorbance Absorbance Způsob výpočtu abs. Koncový bod Koncový bod Způsob reakce R1-R2-S-SR R1-R2-S-SR Směr reakce Nárůst Nárůst Start reakce SR SR Vlnová délka A 520 nm 520 nm Rozsah testu 0-50 ng/ml 0-3000 s následným ředěním 0-500 ng/ml Faktor postdiluce 10 doporučeno a Ne Výpočet první/posl. 49/67 49/67 Jednotka ng/ml a) Používat, pokud se jedná o předběžný výsledek pro analýzu GC/MS. Pipetovací parametry Diluent (H 2 O) R1 53 µl 6 µl R2 42 µl 15 µl Vzorek 10 µl 6 µl SR 15 µl 12 µl Celkový objem 159 µl COBAS INTEGRA 800 definice testu Semikvantitativní Kvalitativní Způsob měření Absorbance Absorbance Způsob výpočtu abs. Koncový bod Koncový bod Způsob reakce R1-R2-S-SR R1-R2-S-SR Směr reakce Nárůst Nárůst Start reakce SR SR Vlnová délka A 520 nm 520 nm Rozsah testu 0-50 ng/ml 0-3000 s následným ředěním 0-500 ng/ml Faktor postdiluce 10 doporučeno b Ne Výpočet první/posl. 44/78 44/78 Jednotka ng/ml b) Používat, pokud se jedná o předběžný výsledek pro analýzu GC/MS. Pipetovací parametry Diluent (H 2 O) R1 42 µl 6 µl R2 53 µl 6 µl Vzorek 10 µl 6 µl SR 12 µl 6 µl Celkový objem 141 µl 2 / 5 2012-03, V 7 CS
Stanovení drog Kalibrace Kalibrátory Semikvantitativní aplikace S, 0-510 Preciset DAT Plus I calibrators, CAL 1-4 0, 12,5, 25, 50 ng/ml fencyklidin (DATS9, systémové-id 07 6798 0) Kvalitativní aplikace QL, 0-610 Preciset DAT Plus I calibrators, CAL 1 0 ng/ml nebo deionizovaná voda a Preciset DAT Plus I calibrators, CAL 3 c nebo C.f.a.s. DAT Qualitative Plus 25 ng/ml (DATQ1, systémové-id 07 6744 1) QC, 0-110 Kalibrátory Preciset DAT Plus I či II d, CAL 1 0 ng/ml nebo deionizovaná voda a C.f.a.s. DAT Qualitative Plus Clinical 25 ng/ml (DATQ5, systémové-id 07 6880 4) Pro kvalitativní aplikace je určená hodnota cut-off 1000. c) Nepoužívejte Preciset DAT Plus I, CAL 3, kalibrujete-li Opiates 300/2000 kvalitativním stanovením 2000 ng/ml (test OP2QL, test-id 0-410). d) Preciset DAT Plus II, CAL 1, nejsou obecně vyžadovány pro kalibraci fencyklidinu, mohou být ovšem použity jako alternativní hladina 0 ng/ml pro DATQ5, systémové-id 07 6880 4. Typ kalibrace Semikvantitativní aplikace Lineární interpolace Kvalitativní aplikace Lineární regrese Opakování kalibrace Doporučen duplikát Kalibrační interval COBAS INTEGRA 400/400 plus: Každá šarže, každých 70 dní a jestliže to vyžaduje proces kontroly kvality COBAS INTEGRA 800: Každá šarže, každých 30 dní a jestliže to vyžaduje proces kontroly kvality Kalibrační křivka je vytvářena použitím kalibrátorů. Kalibrátory musí být umístěny podle hodnot koncentrace od nejvyšší po nejnižší do CAL/QC stojánku. Vytvořená křivka je uložena v paměti systému COBAS INTEGRA a podle potřeby znovu vyvolána. Návaznost: Tato metoda byla standardizována dle primární referenční metody (GC/MS). Kontrola kvality Kontrola kvality Pořadí kontrol Kontrola po kalibraci Control Set DAT I PreciPos DAT Set I (DAT1P, systémové-id 07 6753 0) PreciNeg DAT Set I (DAT1N, systémové ID 07 6754 9) nebo Control Set DAT Clinical PreciPos DAT Clinical (DATCP, systémové-id 07 6879 0) PreciNeg DAT Clinical (DATCN, systémové-id 07 6878 2) Určeno uživatelem Doporučena Koncentrace drog v Control Set DAT I a Clinical byly verifikovány GC/MS. Kontrolní intervaly a meze by měly být uzpůsobeny pro každou laboratoř dle individuálních požadavků. Naměřené hodnoty by se měly pohybovat v definovaných mezích. Každá laboratoř by měla mít vypracovaný postup pro případ, že hodnoty kontrol překročí definované meze. Sledujte příslušná vládní nařízení a lokální směrnice kontroly kvality. Výsledky Systémy COBAS INTEGRA vydávají výsledky s následujícím označením: Semikvantitativní hodnocení výsledků Označení COBAS INTEGRA Rozmezí hodnot Bez označení Negativní < 25 ng/ml <TEST RNG Negativní < 0 ng/ml >TEST RNG Pozitivní > 50 ng/ml POS 25 Pozitivní 25 ng/ml Výše uvedená rozmezí hodnot jsou založena na hladině cut-off 25 ng/ml. Kvalitativní hodnocení výsledků Označení COBAS INTEGRA Rozmezí hodnot Bez označení Negativní < 1000 <TEST RNG Negativní < 0 >TEST RNG Pozitivní > 3000 POS 1000 Pozitivní 1000 Uvedená rozmezí jsou založena na přiřazení hodnoty 1000 ke cut-off 25 ng/ml. Semikvantitativní hodnocení výsledků Semikvantitativní předběžně pozitivní výsledky by měly být použity v laboratořích pro měření vhodného naředění vzorku potvrzením konfirmační metody jako je GC/MS. Rovněž umožňuje laboratoři zřídit kontrolní postupy a stanovit využití kontroly. Upozornění: Při použití funkce následného ředění (ředění 1:10) musí mít ředěný výsledek hodnotu alespoň poloviny hodnoty cut-off analytu x10, aby se zaručilo, že vzorek nebyl příliš naředěn. Pokud klesne ředěný výsledek pod polovinu hodnoty cut-off analytu x10, opakujte vzorek s menším naředěním. Ředění, která mají výsledky v blízkosti cut-off, poskytují nejpřesnější stanovení. Chcete-li určit koncentraci předběžně pozitivního vzorku, vynásobte výsledek odpovídajícím faktorem ředění. Ředění by mělo být použito jen při přípravě hodnot pro GC/MS. Omezení - interference Informace o látkách testovaných tímto stanovením jsou uvedeny v kapitole "Specifické údaje o využití" tohoto dokumentu. Možné však je, že mohou interferovat i jiné komponenty nebo faktory, které mohou negativně ovlivnit výsledek (např. technická chyba, nebo chyba postupu). Předběžný pozitivní výsledek dosažený touto metodou indikuje přítomnost v moči. Nestanoví však míru intoxikace. POTŘEBNÝ KROK Programování speciálního mytí: Použití speciálních mycích cyklů je nutné při zpracovávání určitých kombinací testů na analyzátorech COBAS INTEGRA. Pro další pokyny čtěte Návody metod, Úvod, Extra mycí cykly. Tam, kde je to vyžadováno, musí být před vydáním výsledků provedeno programování speciálního mytí/zamezení přenosu mezi vzorky (carry-over). Ke kontrole kvality použijte kontrolní materiály uvedené v části "Informace pro objednání". Navíc lze použít i jiný vhodný kontrolní materiál. 2012-03, V 7 CS 3 / 5
Stanovení drog Specifické údaje o využití Reprezentativní údaje o využití pro analyzátory COBAS INTEGRA jsou uvedeny níže. Výsledky, získané v různých laboratořích, se mohou lišit. Preciznost Preciznost byla stanovena podle interního postupu zpracováním sérií kontrol ve 40 replikátech, jednou denně, po dobu 5 dnů. Následující výsledky byly získány analyzátorem COBAS INTEGRA 700: Semikvantitativní preciznost Opakovatelnost e Průměr SD VK ng/ml ng/ml % Level 1 12 1.1 9.6 Level 2 20 0.8 4.3 Level 3 24 1.1 4.6 Level 4 31 1.6 5.2 Analytická specifičnost Specifičnost stanovení COBAS INTEGRA Phencyclidine byla zjištěna vytvořením inhibiční křivky pro jednu každou uvedenou sloučeninu a určením přibližného množství každé sloučeniny, která by byla ekvivalentní reaktivitě při hodnotách cut-off 25 ng/ml. Sloučenina Přibližné ng/ml odpovídající 25 ng/ml Přibl. % křížové reaktivity Thienylcyklohexylpiperidin 30 83 (TCP) Chlorprothixen 92857 0.03 Dextromethorfan 137787 0.02 Mezilehlá Průměr SD VK preciznost f ng/ml ng/ml % Level 1 12 1.2 10.0 Level 2 20 1.1 5.5 Level 3 24 1.4 5.7 Level 4 31 2.2 7.1 e) opakovatelnost = preciznost v sérii f) mezilehlá preciznost= celková preciznost/preciznost mezi sériemi/preciznost mezi dny Kvalitativní preciznost cut-off (x) Počet testovaných Správný výsledek Hladina spolehlivosti 0.8x 200 200 >95% negativní odečet 1.2x 200 200 >95% pozitivní odečet Spodní detekční limit testu 5.0 ng/ml Spodní detekční limit představuje nejnižší měřitelnou hladinu analytu, kterou lze odlišit od nuly. Je vypočítána jako hodnota ležící 2 standardní odchylky nad nulovým kalibrátorem (nulový kalibrátor + 2 SD, opakovatelnost, n = 40). Správnost 100 vzorků moče získaných v klinických laboratořích, kde byly stanoveny jako negativní v panelu látek jinou technologií, bylo hodnoceno na na systému COBAS INTEGRA. Všech 100 klinických vzorků bylo negativních vůči cut-off 25 ng/ml. 50 vzorků moče s předběžně pozitivním výsledkem, stanoveným komerčně dostupnou enzymoimunoanalýzou a potvrzených metodou GC/MS na, bylo rovněž vyhodnoceno na analyzátoru COBAS INTEGRA 700. Všech 50 vzorků bylo pozitivních stanovením COBAS INTEGRA Phencyclidine vůči cut-off 25 ng/ml. GC/MS + - Analyzátor COBAS INTEGRA 700 + 50 0-0 0 4 / 5 2012-03, V 7 CS
Stanovení drog Interference léčiv Následující sloučeniny byly přidány k alikvotům poolované normální lidské moči v koncentraci 100000 ng/ml. Žádná z těchto sloučenin při testování soupravou nevykázala křížovou reaktivitu větší nebo rovnou 0.5 %. Acetaminofen Kys. acetylsalicylová Aminopyrin Amitriptylin Amobarbital d-amfetamin l-amfetamin Ampicilin Kys. askorbová Aspartam Atropin Benzokain Benzoylecgonin (metabolit kokainu) Benzfetamin Butabarbital Kofein Chlornan vápenatý Karbamazepin Chlordiazepoxid Chlorochin Chlorfeniramin Chlorpromazin Kokain Kodein Cyklobenzaprin Dextropropoxyfen Diazepam Difenhydramin Dopamin Doxepin Doxylamin Ecgonin Ecgonin metylester d-efedrin d,l-efedrin l-efedrin Epinefrin Erythromycin Estriol Fenoprofen Furosemid Kys. gentisová Glutethimid Guajakol glyceroléter Hydrochlorotiazid p-hydroxyamfetamin Hydroxyzin Ibuprofen Imipramin Izoproterenol Ketamin Lidokain LSD MDA MDMA Melanin Meperidin Metadon d-metamfetamin Metaqualon Metylfenidat Metyprylon Morfin Naloxon Naltrexon Naproxen Niacinamid Nordoxepin Noretindron l-norpseudoefedrin Ofloxacin Oxazepam Penicilin G Pentobarbital β-fenethylamin Fenobarbital Fenothiazin Fentermin Fenylbutazon d-fenylpropanolamin d,l-fenylpropanolamin Prokain Promethazin d-pseudoefedrin l-pseudoefedrin Quinidin Chinin Sekobarbital Sulindac Tetracyklin Δ 9 THC-9-karboxylová kys. Tetrahydrozolin Trifluoperazin Tyramin Verapamil Odkazy 1. Karch SB, ed. Drug Abuse Handbook. Boca Raton, FL: CRC Press LLC 1998. 2. Hardman JG, Limbird LE, Gilman A, eds. Goodman and Gilman s The Pharmacological Basis of Therapeutics. 10th ed. New York, NY: McGraw Hill Pub Co 2001. 3. Baselt RC. Disposition of Toxic Drugs and Chemicals in Man. 7th ed. Foster City, CA: Biomedical Publications 2004. 4. Clouet DH, ed. Phencyclidine: An Update. NIDA Research Monograph 64. National Institute on Drug Abuse 1986. 5. De Souza EB, Clouet D, London ED, eds. Sigma,, and NMDA receptors. Research Monograph 133. National Institute on Drug Abuse 1993. 6. Leshner AI. Hallucinogens and dissociative, including LSD,, Ketamine, dextromethorphan. NIH Publication Number 01-4209, NIDA Research Report Series 2001. 7. Laurenzana EM, Owens SM. Metabolism of phencyclidine by human liver microsomes. Drug Metab Dispos 1997;25:557-663. 8. ElSohly MA, Little TL Jr, Mitchell JM, et al. GC/MS analysis of phencyclidine acid metabolite in human urine. J Anal Toxicol 1988;12:180-182. 9. Armbruster DA, Schwarzhoff RH, Pierce BL, et al. Method comparison of EMIT II and ONLINE with RIA for drug screening. J Forensic Sci 1993;38:1326-1341. 10. Toxicology and Drug Testing in the Clinical Laboratory; Approved Guideline. 2nd ed. (C52-A2). Clinical and Laboratory Standards Institute 2007;27:33. 11. Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs (Revised Specimen Validity Testing). Fed Regist 2004;69:19643-19673. Tečka se v tomto metodickém listu vždy používá jako desetinný oddělovač k označení hranice mezi celými a desetinnými místy desetinného čísla. Oddělení tisíců se nepoužívá. Významné doplňky nebo změny jsou označeny pruhem podél textu. 2012 Roche Diagnostics Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, D-68305 Mannheim www.roche.com Jakákoliv modifikace přístroje, jak je zde uvedeno, vyžaduje validaci laboratoří. 2012-03, V 7 CS 5 / 5