CHORUS dsdna-g (36 testů)

CHORUS dsdna-g 86032 (36 testů) Výrobce: DIESSE Diagnostica Senese Via delle Rose 10 53035 Monteriggioni (Siena) Itálie

OBSAH 1 Úvod... 3 2 Princip testu... 3 3 Složení soupravy... 4 4 Další potřebné vybavení k provedení testu... 5 5 Skladování a stabilita komponent... 6 6 Bezpečnost práce... 6 7 Technické připomínky... 7 8 Vzorky a jejich skladování... 8 9 Pracovní postup.... 8 10 Validita testu... 8 11 Hodnocení výsledků... 9 12 Interpretace výsledků... 9 13 Kalibrační rozmezí... 9 14 Referenční rozmezí... 9 15 Charakteristika soupravy... 9 16 Literatura... 11 17 Vysvětlení symbolů... 12 2/12 IO-09/219-C; IFU 86032 Ed. 02.08.2012

Semikvantitativní stanovení IgG protilátek proti dsdna v lidském séru na přístrojích Chorus/Chorus TRIO pomocí jednorázového testovacího zařízení 1 Úvod Protilátky, které se váží na DNA, patří do skupiny protilátek vážicích se na antinukleární antigeny. Tyto specifické protilátky byly zjištěny u několika autoimunitních onemocnění. Protilátky reagující s nativní dvoušroubovicí (ds) DNA se považují za specifické pro onemocnění systémový lupus erythematosus (SLE) a byly zjištěny u zhruba 50 až 80 % pacientů. Protilátky proti dsdna se nacházejí v průběhu aktivní fáze SLE. Jejich koncentrace v séru koreluje se závažností onemocnění, a proto je detekce těchto specifických protilátek důležitá pro vlastní diagnózu a monitoring SLE. Detekce těchto protilátek reprezentuje jedno z 11 ACR kritérií pro diagnózu SLE. Většina pacientů postižených SLE vykazuje zvýšené titry protilátek třídy IgG proti dsdna. Tyto protilátky jsou asociovány s lupus nefritidou. U zhruba 30 % pacientů trpících SLE se navíc objevují také specifické protilátky třídy IgA. Existuje názor, že přítomnost těchto IgA může vymezovat určitou podskupinu SLE pacientů. Studie opravdu prokázaly spojení této podtřídy s jistými klinickými parametry tohoto onemocnění, jako jsou zvýšená rychlost sedimentace erytrocytů či rozpad komplementové komponenty C3, jakož i klinické projevy kožní vaskulitidy, akrální nekrózy a erytému. S nefritidou a artritidou však žádná asociace zjištěna nebyla. Specifické protilátky třídy IgM byly nalezeny v 52 % testovaných sér od pacientů trpících SLE. Na rozdíl od specifických protilátek třídy IgG a IgA, protilátky třídy IgM nekorelují s aktivitou onemocnění. Byla však dokázána velmi výrazná antagonistická korelace mezi protilátkami a lupus nefritidou, včetně laboratorních parametrů. Proto mohou specifické protilátky třídy IgM indikovat podskupinu pacientů s lupus, kterým nehrozí riziko vzniku nefritidy. 2 Princip testu Test je založen na principu ELISA (Enzyme linked Immunosorbent Assay). CHORUS dsdna-g umožňuje stanovení IgG protilátek proti dsdna na přístroji Chorus. Vysoce purifikovaný antigen se naváže na pevnou fázi. V průběhu inkubace vzniká vazba mezi specifickými protilátkami vyšetřovaného séra a imobilizovaným antigenem. Po promytí, která eliminují nenavázané proteiny, se provádí inkubace s konjugátem. Konjugát je roztok s obsahem monoklonálních protilátek proti lidským imunoglobulinům značených křenovou peroxidázou. Po další sérii promytí, které odstraní nenavázaný konjugát, se přidá substrát reagující s peroxidázou. Intenzita 3/12 IO-09/219-C; IFU 86032 Ed. 02.08.2012

modrého zbarvení, které vznikne, je přímo úměrné koncentraci specifických protilátek přítomných v testovaném lidském séru. Jednorázový test obsahuje všechny reagencie nutné k provedení testu na přístrojích Chorus. Tato souprava je kalibrována pomocí referenčních sér z CDC (Atlanta). Výsledky jsou vyjádřeny pomocí arbitrážních jednotek (IU/ml). 3 Složení soupravy Souprava umožňuje provést 36 stanovení. Testovací jednotka 6 6 ks 6 samostatných balení po 6 jednotlivých jednorázových testech Kalibrátor 1 175 µl Roztok lidského séra s obsahem IgG protilátek proti dsdna, obsahující konzervanty, v pracovním ředění Pozitivní kontrola 1 425 µl Roztok lidského séra s obsahem IgG protilátek proti dsdna, obsahující konzervanty, v pracovním ředění Pracovní návod 1 ks Soupravu nechte vytemperovat na laboratorní teplotu a ze samostatných balení odeberte stanovený počet jednorázových testů pro vlastní analýzu. Zbylé jednorázové testy vraťte zpět do obalu se sušidlem (silikagel gel obsahující oxid křemičitý), vytlačte vzduch a hermeticky uzavřete stisknutím uzávěru. Skladujte při +2 C až +8 C. 4/12 IO-09/219-C; IFU 86032 Ed. 02.08.2012

Obrázek 1 Schéma jednorázového testu Pozice 8 Pozice 7 Pozice 6 Místo pro štítek s čárovým kódem Prázdná pozice Mikrotitrační jamka s potaženými antigeny Vysoce purifikovaná dsdna Pozice 5 Nepotažená mikrotitrační jamka Pozice 4 TMB Substrát 0,35 ml Tetrametylbenzidin 0,26 mg/ml a 0,01% H 2 O 2 stabilizovaný v 0,05 mol/l citrátového pufru (ph 3,8) Pozice 3 Ředicí roztok vzorků 0,35 ml Proteinový roztok obsahující 0,2% Tween-20 a 0,1% Proclin Pozice 2 Konjugát 0,35 ml Roztok monoklonálních protilátek značených peroxidázou ve fosfátovém pufru obsahujícím 0,05% fenol a 0,02%Bronidox Pozice 1 Prázdná jamka Do této jamky se přidá neředěné vyšetřované sérum 4 Další potřebné vybavení k provedení testu Tyto reagencie nejsou součástí balení. Promývací roztok pro testy na stanovení autoimunitních onemocnění 86004 Čistící roztok 2000 83605 Sanitační roztok 83604 Chorus Negativní kontrola / Ředicí roztok vzorků 83607 Destilovaná nebo deionizovaná voda Běžné laboratorní sklo: odměrné válce, zkumavky atd. Mikropipety na přesný odběr 50 až 200 μl roztoku Jednorázové rukavice Roztok chlornanu sodného (5 %) Nádoby na potenciálně infekční materiál 5/12 IO-09/219-C; IFU 86032 Ed. 02.08.2012

5 Skladování a stabilita komponent Reagencie se musí skladovat při teplotě +2 C až +8 C. V případě skladování při nesprávné teplotě se musí zopakovat kalibrace a validovat test pomocí kontrolního séra (viz 10, Validita testu). Datum exspirace je uvedeno na každé komponentě a na štítku soupravy. Po otevření mají reagencie omezenou stabilitu. Jednorázový test 8 týdnů při teplotě +2 C až +8 C Pozitivní kontrola 8 týdnů při teplotě +2 C až +8 C Kalibrátor 8 týdnů při teplotě +2 C až +8 C 6 Bezpečnost práce Souprava je určena pouze pro diagnostické účely in vitro. Tato souprava obsahuje materiály lidského původu, které byly testovány a vykázaly negativní výsledky při použití metod schválených FDA pro stanovení přítomnosti HbsAg a anti-hiv-1, anti-hiv-2 a anti-hcv protilátek. Protože však žádný diagnostický test nemůže poskytnout úplnou záruku, že infekční agens nejsou přítomna, je třeba s veškerým materiálem lidského původu zacházet tak, jako by byl potenciálně infekční. Při zacházení s materiálem lidského původu je nutné dodržovat všechny místní předpisy týkající se bezpečnosti práce. Likvidace zbytků pro provedení testu S použitými vzorky sér, kalibrátory, jednorázovými testy je třeba zacházet jako s potenciálně infekčním materiálem a likvidovat je v souladu s platnou legislativou. Zdravotní a bezpečnostní informace 1. Nepipetujte ústy. Používejte rukavice na jedno použití a ochranu očí. Po umístění jednorázového testu do přístroje Chorus si důkladně umyjte ruce. 2. Některé reagencie obsahují nízké koncentrace škodlivých nebo dráždivých látek Pokud se některá s těchto reagencií dostane do kontaktu s kůží nebo očima, důkladně omyjte dané místo vodou. Konjugát obsahuje fenol TMB Substrát je roztok kyseliny 3. Neutralizované kyseliny nebo jiný tekutý odpad by se měl dekontaminovat přidáním dostatečného množství chlornanu sodného tak, aby konečná koncentrace dosahovala minimálně 1,0 %. Pro zajištění účinné dekontaminace ponechejte tento odpad 30 minut v 1% chlornanu sodném. 4. Rozlitý potenciálně infekční materiál je třeba okamžitě odstranit pomocí absorpčního papírového ručníku a kontaminovanou oblast umýt, například 1,0% chlornanem sodným, a to předtím, než budete v práci pokračovat. Chlornan 6/12 IO-09/219-C; IFU 86032 Ed. 02.08.2012

sodný nepoužívejte na rozlité tekutiny s obsahem kyseliny, ty musíte nejprve otřením vysušit. 5. Materiály použité k čištění potřísněných povrchů, včetně rukavic, se musí likvidovat jako potenciálně životu nebezpečný odpad. Materiály obsahující chlornan sodný nevkládejte do autoklávu. 7 Technické připomínky Pro získání spolehlivých výsledků je nutné přesné dodržování návodu. Soupravu nechte vytemperovat na laboratorní teplotu (+18 C až +30 C) a test proveďte do 60 minut. Zkontrolujte a dodržujte následující informace: Nepoužívejte jednorázové testy, jestliže je v pozici 4 modře zbarvený Substrát. Testovaný vzorek je dokonale na dně jamky rozprostřen. Zkontrolujte zda-li všechny reagencie v testu jsou přítomny a jestli není jednorázový test poškozen. Nepoužívejte testy, které nemají reagencie. Jednorázové testy jsou určeny pro použití na přístroji Chorus. Důkladně dodržujte pokyny pro použití a řiďte se návodem k obsluze přístroje. Chorus přístroj správně nastavený (viz návod k obsluze). Neměňte čárový kód umístěný na držadle jednorázového testu. Nepoužívejte testy s poškozenými štítky s čárovými kódy. Defektní čárové kódy lze vložit do přístroje manuálně. Během skladování a použití nevystavujte jednorázové testy silnému světlu ani výparům chlornanu. Použití silně hemolytických vzorků nebo vzorků s mikrobiální kontaminací může vést k nereprodukovatelným výsledkům. Než vložíte jednorázový test do přístroje, zkontrolujte, že reakční jamka neobsahuje cizí tělesa. Pipetujte sérum (50 µl) do pozice 1 jednorázového testu (viz obrázek 1). Nepoužívejte jednorázový test po uplynutí expiračního data. Zkontrolujte prosím, zda-li byl k přístroji Chorus připojen promývací roztok určený pro testy ke stanovení autoimunitních onemocnění (Washing Buffer Autoimmunity 86004. 7/12 IO-09/219-C; IFU 86032 Ed. 02.08.2012

8 Vzorky a jejich skladování Jako vzorek k vyšetření může být použito sérum, získané odběrem žilní krve. Zachází se s ním v souladu se všemi opatřeními předepsanými správnou laboratorní praxí. Čerstvé sérum lze skladovat 4 dny při +2 C až +8 C. Séra je možné uchovávat při -20 C a lze je rozmrazit maximálně 3krát. Neskladujte vzorky v mrazácích s funkcí vlastního rozmražování. Rozmrazené vzorky je potřeba před použitím důkladně protřepat. Kvalita vzorku může být vážně narušena kontaminací, která vede k chybným výsledkům. Nepoužívejte silně lipemické, ikterické, hemolytické nebo kontaminované vzorky. Test nelze použít na lidskou plazmu. 9 Pracovní postup. 1. Otevřete balení, vyjměte požadovaný počet jednorázových testů a zbytek uzavřete zpět do sáčku poté, co vytlačíte vzduch. 2. Zkontrolujte stav jednorázového testu (viz 7 Technické připomínky). 3. Pipetujte 50 μl neředěného séra do pozice 1 každého testu. Při každé změně šarže soupravy použijte jednorázový test pro kalibraci. 4. Jednorázový test umístěte do přístroje. Proveďte kalibraci (je-li nutná) a vlastní stanovení podle pokynů uvedených v návodu k obsluze Chorus přístroje. 10 Validita testu Pomocí kontrolního séra ověřte správnost získaných výsledků. Použijte je v souladu s instrukcemi uvedenými v návodu na obsluhu. Pokud test ukáže, že se hodnota kontrolního séra pohybuje mimo přijatelné rozmezí, kalibraci je třeba opakovat. Předchozí výsledky budou automaticky opraveny. Pokud je výsledek kontrolního séra i nadále mimo přijatelné rozmezí, kontaktujte prosím: Tel: +39-0577-587121 (technická podpora) Tel: +39-0577-587154 8/12 IO-09/219-C; IFU 86032 Ed. 02.08.2012

11 Hodnocení výsledků Přístroj Chorus vyjadřuje výsledky v jednotkách IU/ml (WHO/80) vypočítané na základě grafu, který je uložený k příslušné šarži v přístroji. Hodnocení výsledků je popsáno v tabulce (Tabulka 1). Tabulka 1 Hodnocení výsledků IU/ml menší než 20 Hodnocení negativní 20 až 30 hraniční větší než 30 pozitivní V případě hraničního výsledku zopakujte test. Pokud zůstává test nadále hraniční, je vhodné opakovat z nového odběru. 12 Interpretace výsledků Všechny pozitivní výsledky vyžadují pečlivou interpretaci. Test nelze použít pouze jako jedinou metodu pro stanovení klinické diagnózy. Serologický nález je třeba vždy interpretovat pouze v kontextu s výsledky ostatních laboratorních testů a s klinickým obrazem pacienta. 13 Kalibrační rozmezí Kalibrační rozmezí se pohybuje v oblasti 10 až 150 IU/ml. Jestliže se objeví vzorky s výsledkem stanovení nad 150 IU/ml je nutné tyto vzorky naředit Negativní kontrolou/ředicím roztokem vzorků ( 83607). 14 Referenční rozmezí V normální populaci (testováno na 120 sérech) se očekávané hodnoty titrů protilátek pohybují na rozmezí 10 až 19,8 IU/ml. 15 Charakteristika soupravy 15.1 Analytická specifita Analytická specifita byla testována na 5 vzorcích (2 negativní, 1 CUT-OFF, 2 pozitivní) obsahujících potenciálně interferující látky: Revmatoidní faktor (44 až 220 IU/ml) Bilirubin (4,5 až 45 mg/dl) Triglyceridy (10 až 250 mg/dl) Hemoglobin (5 až 30 mg/ml) 9/12 IO-09/219-C; IFU 86032 Ed. 02.08.2012

Přítomnost interferujících látek v testovaných vzorcích nemá vliv na výsledek testu. 15.2 Zkřížená reaktivita Byly testovány vzorky pozitivní na ASCA, Cenp-B, Jo-1, MPO, PR3, kardiolipin, AMA-M2 U1-70 RNP, Scl-70, Sm, SS-A, SS-B, ttg. Nebyla prokázána žádná významná zkřížená reaktivita. 15.3 Diagnostická citlivost a specifita Pro stanovení citlivosti a specifity bylo využito srovnání výsledků na jiné referenční soupravě. Bylo testováno 159 vzorků. Výsledky srovnání jsou uvedeny v tabulce (Tabulka 2). Tabulka 2 Výsledky srovnání zařazení testovaných vzorků Referenční souprava DIESSE Pozitivní Negativní Celkem Pozitivní 16 4 20 Negativní 1 138 139 Celkem 17 142 159 Souprava vykazuje 97,2% specifitu (CI 95% 93 až 98,9) a 94,1% citlivost (CI 95% 72,9 až 98,8). 15.4 Přesnost měření Intra-assay a Inter-assay: testované vzorky byly opakovaně změřeny; průměr naměřených hodnot, variační koeficient (%) jsou uvedeny v tabulce (Tabulka 3). Tabulka 3 Intra-assay a Inter-assay stanovení Vzorek Průměr (IU/ml) Intra-assay Variační koeficient (%) Průměr IU/ml) Inter-assay Variační koeficient (%) 1 14,3 5,5 16,2 8,6 2 15,6 4,5 17,5 5,5 3 16 8,7 17,9 8,4 4 19,3 5,1 18,9 9,7 5 22,3 7,3 27,6 4,9 6 27 5,9 31,2 9,4 7 30,3 4,7 35,7 6,8 8 39,7 9,4 45,5 8,1 10/12 IO-09/219-C; IFU 86032 Ed. 02.08.2012

Přesnost mezi jednotlivými šaržemi a přesnost mezi použitými přístroji: všechny testované vzorky byly analyzovány; průměr naměřených hodnot, variační koeficient (%) každého vzorku jsou uvedeny v tabulce (Tabulka 4). Tabulka 4 Přesnost mezi šaržemi a přesnost mezi přístroji Vzorek Průměr (IU/ml) Přesnost mezi šaržemi Variační koeficient (%) Přesnost mezi použitými přístroji Průměr IU/ml) Variační koeficient (%) 1 13,1 5,5 13,1 0,9 2 16,1 6 16 4,2 3 15,6 5,8 15,6 4,9 4 20,3 0,5 20,3 2,2 5 25,2 4 25,2 4,5 6 26,6 7,1 26,6 0,5 7 32 8,4 32 4,7 8 43,7 8,1 43,7 1,7 16 Literatura 1. Itoh Y. and Reighlin M. (1992) Autoimmunity 14: 57-65. 2. Kalden JR (1988) In: Klinische Rheumatologie. Springer Verlag, Berlin. 3. Harley JB (1998) J. Autoimmun. 2 : 383-394. 4. Slobbe RL et al : (1991) Clin. Exp. Immunol. 86 : 99-105. 11/12 IO-09/219-C; IFU 86032 Ed. 02.08.2012

17 Vysvětlení symbolů Datum výroby Použít do data Nepoužívat opakovaně Čtěte přiložené dokumenty Výrobce Počet testů Skladovací teplota Čtěte návod k použití Biologická rizika Katalogové číslo Diagnostický zdravotnický prostředek in vitro Číslo šarže Diesse Diagnostica Senese Via delle Rose 10 53035 Monteriggioni (Siena) Italy Tel. 0577-587111 12/12 IO-09/219-C; IFU 86032 Ed. 02.08.2012