Ondřej Sobek Jaroslava Dušková

Transkript

1 Cytologické vyšetření v rámci komplexní diagnostiky mozkomíšního moku XXIV. Cytologický den Společnosti klinické cytologie ČLS JEP Ondřej Sobek Jaroslava Dušková Laboratoř pro likvorologii, neuroimunologii, patologii a speciální diagnostiku Topelex s.r.o. Praha

2 LIKVOR specifická extravaskulární tekutina - V intimním kontaktu s CNS - Likvorový kompartment odd. systémem bariér od krevního kompartmentu - Specifické vlastnosti: - Malý objem 150ml - Hypoonkotický - Oligocelulární

3 Základní panel vyšetření likvoru - Biochemicko- energetické vyšetření - (Glu+ Lac = KEB) - Cytologie- kvantitativní - kvalitativní = základní rychlá informace o : - přítomnosti patologie - typu patologie - doplnění indikací specializovaných vyš.

4 Komplexní vyšetřování likvoru MULTIOBOROVÉ POJETÍ: - Plnohodnotná kvalitativní cytologie (cytolog/ patolog) + Biochemické vyšetření (klinický biochemik) - Proteinogram, Ig (IEF), specifické -strukturální proteiny S100, NSE, Tau + Imunologické parametry (imunolog) - PAF, cytokiny (IL6, CXCL13..), autoprotilátky + Průkaz mikrobiálních agens (mikrobiolog) - Specifické protilátky, PCR => KOMPLEXNÍ SYNTÉZA A INTERPRETACE NÁLEZŮ

5 Indikace cytologického vyšetření likvoru ZÁNĚTY infekční Purulentní Serozní» virové» Bakteriální (borelie, treponemy, leptospiry) (Detekce agens- protilátky, PCR..) Autoimunitní RS, ADEM, NMO, AE- LE, Vaskulitidy (IEF, autoprotilátky, IL ) IC HEMORAGIE (SAK) NÁDOROVÉ POSTIŽENÍ - primární tu - metastatické infiltrace Preanalytické požadavky na cytologii EVT: Čerstvý vzorek,v dostatečném množství 4-5 ml, (min. 1 ml)

6 Barvící postupy používané v likvoru Cell counting FR /event. automatizovaně (FCM) : 100µl likvoru + 10 µl Acidi acetici glacialis + acidi carbolici + solutionis fuchsini saturatae Základní barvení: May-Grünwald / Giemsa-Romanowski Další barvicí metodiky: Barvení pro průkaz lipidů Průkaz přítomnosti železa Hematoxylin- Eosin Barvení dle Papanicolaoua PAS reakce Barvení na nukleoly Barvení dle Grama Barvení na acidorezistenci dle Ziehl-Neelsena Imunocytochemická identifikace buněk

7 Mikroskopická identifikace mikrobiálních agens

8 Klinicky významná makrofagická reakce v likvoru: detekce Fe 3+, hematoidinu

9 Nádorové elementy v likvoru Problémy s identifikací nádorových buněk v CSF: - Málobuněčné vzorky - morfologické změny v hypoonkotickém médiu - rychlá autolýza - zánětlivě podmíněná hyperaktivace (akt. lymfoformy / lymfomové buňky) -> Imunocytochemická /FCM typizace

10 Purulentní zánět v likvoru: komplexní rychlá diagnostika ID 767/2015: Elementy: 9130 /ul, Erytrocyty: 1109 /ul - výrazně zvýšená permeabilita hematolikvorové bariery (CB CSF 6,9 g/l), - granulocytární pleiocytosa v cytologickém obraze CSF - anaerobní metabolismus v likvorovém kompartmentu (KEB ) - PCR deklarovaná přítomnost Neisseria meningitidis v CSF.

11 Cytologie- B-NHL- DLBCL ID 3244/2015: Elementy: 128 /ul, Erytrocyty: 2 /ul Cytologický nález s velkými vágně kohezivními elementy s mitózami i atypickými odpovídá ze základního barvení nádorové infiltraci DLBCL,včetně regresivních změn části nádorových buněk a příměsi neutrofilních granulocytů. Biochemický nález dále s výrazně nízkým koeficientem KEB v záporných hodnotách.

12 Cytologie- adenoca jícnu ID 3074/2014: Elementy: 85 /ul, Erytrocyty: 23 /ul Klinická epi: pac. se základní dg. adenoca jícnu- nově bolesti C páteře a hlavy, NMR negat. CB CSF: 1.98 g/l, Glukoza CSF: 3.08 mmol/l, Laktát CSF: 3.29 mmol/l, KEB: Cytologický nález: V souladu s prvním stanovenou diagnózou hodnotím obraz jako nádorovou pleocytózu s rysy hlenotvorného adenokarcinomu. Na rezervních preparátech proveden s pozitivním výsledkem imunocytochemický průkaz CK 20 nález v souladu s dg. adenoca.

13 Cytologie- meduloblastom ID 1997/2014: Elementy CSF: 1 /ul, Erytrocyty CSF: 26 /ul Klinická epi: TU IV. komory - histol. meduloblastom anaplastický. Likvorová cytologie: nález vysoce atypických kohezivních buněk s rysy připouštějícími původ z anamnesticky udaného meduloblastomu. Pokud by byl k dispozici materiál s vyšším obsahem nádorových buněk, bylo by možno testovat imunocytochemicky synaptofyzin.

14 Imunocytochemický průkaz (Melan A) u melanomu CNS

15 Kazuistika- Diff. dg. serozně zánětlivé celulizace v likvoru Pacient 34 let, spastická paraparéza susp. RS Cytologie: 17 /ul (50/3 el), lymfocytární pleocytozas plazmocytární reakcíobraz chronického serozníhozánětu

16 Kazuistika- Diff. dg. serozně zánětlivé celulizace v likvoru Biochemie likvoru CB: 0,41 g/l QAlb: 6,2 (x 10-3) KEB: 29 I.t. syntéza dle Reibera: IgG(loc)= 20,42 mg/l, t.j. 38 % IEF: likvor : 12 pásů v alkalické oblasti. sérum : žádné pásy. Vzorec II - Positivní oligoklonální synthesa IgG v CNS. Humorální zánětlivé markery CSF: PAF: Transferin: 23,3mg/l, AAG: 8,9 mg/l Prozánětlivé cytokiny: CXCL 13: 240 pg/ml IL 6: 162 pg/ml

17 Kazuistika- Diff. dg. serozně zánětlivé celulizace v likvoru Anti-boreliovéprotilátky ELISA: negativní < Šedá zóna> pozitivní IgG Sérum 120,30 <16-22 U/ml> Pozitivní! IgM Sérum 1,70 <...20 U/ml> Negativní IgG CSF 181,80 <...8 U/ml> Pozitivní! IgM CSF 0,00 <...8 U/ml> Negativní Antibody Index IgG v likvoru: 1,68 <1,3-1,5> Pozitivní! Antibody Index IgM v likvoru: 0,00 <1,3-1,5> Negativní Konfirmace WB POZITIVNÍ Resume: Laboratorní nález splňuje kritéria neuroboreliozy. Po ATB (ceftriaxon 14 dní) výrazné klinické zlepšení.

18 Komplexní přístup k diagnostice likvoru Komunikace klinik <-> laboratoř Vhodně indikované spektrum laboratorních parametrů Erudovaná a komplexní interpretace laboratorního nálezu (biochemik, cytolog- patolog, imunolog, mikrobiolog ) Kvantitativní a kvalitativní cytologie nedílnou součástí komplexně pojatého vyšetření EVT: - základní cell-count/ screening lze částečně automatizovat - definitivní patol. závěr umožní pouze plnohodnotná cytologie, prováděná kvalifikovaným cytologem (+ FCM v indikovaných případech )