Cytologie likvoru v diagnostickém kontextu

Transkript

1 Cytologie likvoru v diagnostickém kontextu XI. Sympozium pro laboratorní a klinické aspekty likvorologie, neuroimunologie a analýzy extravaskulárních tekutin MUDr. Ondřej Sobek, CSc. Prof. MUDr. Jaroslava Dušková, CSc., FIAC Laboratoř pro likvorologii, neuroimunologii, patologii a speciální diagnostiku Topelex s.r.o. Praha

2 Indikace cytologického vyšetření likvoru ZÁNĚTY infekční Purulentní Serozní» virové» Bakteriální (borelie, treponemy, leptospiry) (Detekce agens- protilátky, PCR..) Autoimunitní RS, ADEM, NMO, AE- LE, Vaskulitidy (IEF, autoprotilátky, IL ) IC HEMORAGIE (SAK) NÁDOROVÉ POSTIŽENÍ - primární tu - metastatické infiltrace Preanalytické požadavky na cytologii EVT: Čerstvý vzorek,v dostatečném množství 4-5 ml, (min. 1 ml)

3 Cytologie likvoru - Metody Kvantitativní- cell count FR / automatizované (FCM) Kvalitativní Cytocentrifugace: 500ul CSF, 5 min. / 1100 rev./min ( Event. cytosedimentace / membránové filtry) Barvení (MGG, ORO, PAP, PAS, Fe3+, Gram, Ziehl-Neelsen ) Mikroskopické zhodnocení (200x 1000x) Immunocytochemie Mono Ab Ag nádorových buněk Automatizované- flow cytometry dg. leukemických, lymfomových infiltrací CNS

4 Mikroskopická identifikace mikrobiálních agens

5 Klinicky významná makrofagická reakce v likvoru: detekce Fe 3+, hematoidinu

6 Nádorové elementy v likvoru Problémy s identifikací nádorových buněk v CSF: - Málobuněčné vzorky - morfologické změny v hypoonkotickém médiu - rychlá autolýza - zánětlivě podmíněná hyperaktivace (akt. lymfoformy / lymfomové buňky) -> Imunocytochemická /FCM typizace

7 Imunocytochemická identifikace nádorových buněk Tumor Antigen Combination Differential dg. Neuroblastomas Synaptophysin Neurofilament protein /NFP NSE Chromogranin A Gliomas Glial Fibrillary Acidic Prot. /GFAP GFAP + CKAE Distinction gliomas carcinosis GFAP + LCA Distinction gliomas hemoblastosis Hemoblastomas LCA CD45 LCA + CKAE Distinction carcinosis- hemoblastosis B CD20cy L26 CD20 + CD45R0 subpopulation B and T CD45R0 T Carcinomas Cytokeratin/ CKAE LCA + CKAE Distinction carcinosis hemablastosis Epithelial Antigen Clone Ber-EP4 mamma Gross Cystic Disease Fluid Prot. GCDFP GCDFP + TTF/RCC Closer specification of carcinosis lungs, thyroidea Thyroid Transcription Factor/ TTF1 TTF + RCC Closer specification of carcinosis renal Renal Cell Carcinoma /RCC Melanoma Melan -A Melan A + CKAE Distinction carcinosis melanoma

8 Imunocytochemická identifikace nádorových buněk

9 Purulentní zánět v likvoru: komplexní rychlá diagnostika ID 767/2015: Elementy: 9130 /ul, Erytrocyty: 1109 /ul - výrazně zvýšená permeabilita hematolikvorové bariery (CB CSF 6,9 g/l), - granulocytární pleiocytosa v cytologickém obraze CSF - anaerobní metabolismus v likvorovém kompartmentu (KEB ) - PCR deklarovaná přítomnost Neisseria meningitidis v CSF.

10 TBE- KME Klasický obraz virového zánětu: Střední pleocytoza (10/100-ky el/ul). Iniciálně variabilní zastoupení PMN. relativně nízké zastoupení PB (převážně T- lymfo)

11 HSV encefalitida 1/ Lymfocytární pleocytoza (10/100-ky el/ul) 2/ příměs PMN!! 3/ Oligocytoza!! (lymfocytární/ granulocytární) 4/ Normální nález!! (hyperakutní průběh, imunosuprimovaní ) CYTOLOGICKÉ ZNÁMKY HEMORAGICKO- NEKROTICKÉHO ZÁNĚTU... LIPOFÁGY... ERYTROFÁGY

12 Sclerosis Multiplex Obraz chronického serózního zánětu - často oligocelularní nález s přítomností zralých plazmatických buněk

13 Neuroborelioza ID 2795/2015: Elementy CSF: 464 /ul, Erytrocyty CSF: 5 /ul V likvoru serozně zánětlivá celulizace ve smyslu lymfocytární pleocytózy s plazmocytární reakcí, elevace pro boreliovou infekci poměrně "specifického" chemokinu CXCL13 spolu s výraznou pozitivitou antiborel. protilátek třídy IgG i IgM (zkonfirmováno WB) s i.t. syntézou- nález tedy koresponduje s floridní neuroboreliozou.

14 SAK ID 2469/2014: Elementy CSF: 267 /ul, Erytrocyty CSF: /ul Velká krevní příměs s podílem PMN. Výrazná aktivace monocyto-makrofagického systému - přítomny erytrofágy, dekolorované erytrofágy, erytrosiderofágy, siderofágy, pěnité buňky. Lymfocyty pouze ojediněle. Ré: monocytární pleocytóza, známky nového i staršího krvácení do CNS,dále známky tkáňové léze.

15 ca mammy ID 2473/2014: Elementy CSF: 4 /ul, Erytrocyty CSF: 1 /ul Přítomen vysoký počet elementů splňujících kriteria malignity ( bazofílie cytoplazmy, velikost buněk, hustota chromatinu jader, atypická pseudopodia, viditelná jadérka.., vícejadernost buněk..). Dále viditelná aktivace v monocytární řadě, přítomny ojedinělé pěnité buňky. Ré: tumorozní hraniční oligocytóza, známky tkáňové léze. Barvení PAS - pozitivní. Nález kompatibilní s karcinomatozou mening při základní dg. ca mammy

16 Lymfomová infiltrace- DLBCL ID 3244/2015: Elementy: 128 /ul, Erytrocyty: 2 /ul Cytologický nález s velkými vágně kohezivními elementy s mitózami i atypickými odpovídá ze základního barvení nádorové infiltraci DLBCL,včetně regresivních změn části nádorových buněk a příměsi neutrofilních granulocytů. Biochemický nález dále s výrazně nízkým koeficientem KEB v záporných hodnotách.

17 Cytologie- adenoca jícnu ID 3074/2014: Elementy: 85 /ul, Erytrocyty: 23 /ul Klinická epi: pac. se základní dg. adenoca jícnu- nově bolesti C páteře a hlavy, NMR negat. CB CSF: 1.98 g/l, Glukoza CSF: 3.08 mmol/l, Laktát CSF: 3.29 mmol/l, KEB: Cytologický nález: V souladu s prvním stanovenou diagnózou hodnotím obraz jako nádorovou pleocytózu s rysy hlenotvorného adenokarcinomu. Na rezervních preparátech proveden s pozitivním výsledkem imunocytochemický průkaz CK 20 nález v souladu s dg. adenoca.

18 Cytologie- meduloblastom ID 1997/2014: Elementy CSF: 1 /ul, Erytrocyty CSF: 26 /ul Klinická epi: TU IV. komory - histol. meduloblastom anaplastický. Likvorová cytologie: nález vysoce atypických kohezivních buněk s rysy připouštějícími původ z anamnesticky udaného meduloblastomu. Pokud by byl k dispozici materiál s vyšším obsahem nádorových buněk, bylo by možno testovat imunocytochemicky synaptofyzin.

19 Imunocytochemický průkaz (Melan A) u melanomu CNS

20 Komplexní přístup k diagnostice likvoru Komunikace klinik <-> laboratoř Vhodně indikované spektrum laboratorních parametrů Erudovaná a komplexní interpretace laboratorního nálezu (biochemik, cytolog- patolog, imunolog, mikrobiolog ) Kvantitativní a kvalitativní cytologie nedílnou součástí komplexně pojatého vyšetření likvoru/ resp. EVT: - základní cell-count/ popř. diff. screening lze částečně automatizovat - definitivní patol. závěr umožní následná plnohodnotná cytologie (imunocytochemie) kvalifikovaným cytologem, (event. doplněná FCM v indikovaných případech)