Retikulocytární hemoglobin. Soňa Vytisková

Transkript

1 Retikulocytární hemoglobin Soňa Vytisková 1

2 Úvod 2

3 Erytropoeza Kostní dřeň Krev Proerytroblast Basofilní erytroblast Polychromatický erytroblast Ortochromatický erytroblast 1-3 dny KD / 1-2dny PK Retikulocyt Erytrocyt Zmenšování velikosti buňky Nárůst syntézy HGB Retikulocyt obsahuje zbytky organel obsahující RNA (ribozomy, zbytky endoplazmatického retikula). 3

4 Erytrocyty a retikulocyty Vzhledem k tomu, že normální doba života RBC je 120 dní, zhruba 1/120 (~1%) nových RBC musí být denně doplněno do periferní krve, aby byl zachován jejich konstantní počet. Erytrocyty jsou dlouhověké a mohou nám vypovídat o erytropoetické aktivitě během několika posledních měsíců. Erytrocyty již neprodukují nový hemoglobin. Naproti tomu retikulocyty jsou krátkověké a mohou nám proto poskytnout informace o aktuální erytropoetické aktivitě. Retikulocyty stále produkují Hgb.

5 Erytrocyty nové parametry HPO -% hypochromních erytrocytů HPR -% hyperchromních erytrocytů MIC - % mikrocytů MAC - % makrocytů střední koncentrace korpuskulárního HGB obsah korpuskulárního HGB šíře distribuce dle koncentrace HGB šíře distribuce dle obsahu buněčného hemoglobinu stanovení počtu fragmentů (schistocytů) 5

6 Retikulocyty nové parametry Retikulohematokrit Koncentrace HGB v retikulocytech Rozdíl mezi koncentrací HGB v RBC a RETI Střední objem RETI Střední obsah HGB v RETI- Ret-He, CHr, MCHr (od žádanka) Šíře distribuce RETI Mladší a starší vývojové formy RETI (IRF, LFR, MFR, HFR) Střední koncentrace korpuskulárního HGB v RETI Obsah buněčného HGB v RETI Šíře distribuce dle koncentrace HGB v RETI Šíře distribuce dle buněčného obsahu HGB v RETI 6

7 Princip stanovení 7

8 Retikulocyty metody stanovení Mikroskop: barvení brilantkresylovou nebo metylenovou modří barví se tzv. substatnia granulofilametosa Fluorescenční metoda: Sysmex Abbott Cytochemická metoda: Beckman Coulter Advia Dle množství zbytkové RNA rozeznáváme zralé a nezralé retikulocyty (IRF). 8

9 Mieho teorie Při průchodu světla skrze kulovitý (sférický) objekt dochází k jeho odchýlení (difrakci) o vnitřní strukturu objektu Publikováno 1908 Kulaté částice rozptylují světlo tak, že rozptýlené světlo tyto částice popisuje co do velikosti a obsahu Mieho teorii lze aplikovat na jakýkoli kulovitý objekt - erytrocyty nevyjímaje, avšak za předpokladu, že jsou izovolumetricky sferizovány. Mohandas et al. Accurate and independent measurement of volume and hemoglobin concentration of individual red cells by laser scattering, Blood, 1986: 68:

10 Mieho teorie High refractive index Low refractive index 10

11 Princip stanovení Advia 11

12 Advia parametr CHr 12

13 Erytrogram, histogram CHr 13

14 Princip stanovení Abbott 14

15 Sapphire parametr MCHr Identifikace retikulocytů FL1 (intensita fluorescence, RNA) Koncentrace hemoglobinu v buňce IAS (lom světla v 7º; log + lin) PSS (lom světla 90º) 90º detector PMT3 PMT2 Laser 488 nm PMT1 FL1 detector Objem buňky ALL (lom světla 0º) PSS (lom světla 90º) Optical flow cell 7º detector 0º detector 15

16 Optické RBC parametery Diagram Objem vs. CHC (MCVr, MCHr, CHCr) MCVr 85.7 fl MCHr = MCVr x CHCr Červené tečky: RBC Zelené tečky: retikulocyty CHCr 289 g/l Put science on your side.

17 Hypochromic--- - Erytrogram Macrocytic Červené tečky: RBC Microcytic Zelené tečky: retikulocyty Normocytic, normochromic Microcytic, hypochromic Put science on your side.

18 Princip stanovení Sysmex 18

19 Forward scattered light intensity RBC- Area Sysmex parametr Ret-He RET Channel RET-H e vs. RBC-H e DELTA-H e RET-H e LFR-Area IRF - Area RET-H e - RBC-H e RBC-H e Fluorescence-Thrombocytes Fluorescent light intensity RET-H e Reticulocyte haemoglobin equivalent Calculated from RET-Y RBC-H e RBC haemoglobin equivalent Calculated from RET-RBC-Y 19

20 Ret-He r

21 Ret-He 21

22 Ret-He 22

23 Kontrola kvality 23

24 Klinické využití 24

25 Retikulocytární hemoglobin Nazývaný krátkodobým ekvivalentem MCH oproti MCH poskytuje potřebnou informaci v horizontu dní Retikulocyty v krevním oběhu pouze několik dní díky svému rychlejšímu obratu jsou jejich parametry rychlejším a citlivějším indikátorem činnosti kostní dřeně (zejména její schopnosti využívat železo k syntéze hemoglobinu) Zvýšené hodnoty retikulocytů pouze informují o počínající reakci kostní dřeně na stimulaci, nic však nevypovídají o skutečné kvalitě retikulocytů obsahu hemoglobinu v nich Prokazuje utilizaci železa ve tvorbě hemu, může být indikátorem nedostatku železa v kostní dřeni podobně jako barvení na železo v KD (Fishbane S., Mast A. E., Blood 2002)

26 Klinické využití Ret-He Sledování erytropoetické aktivity kostní dřeně obsah hemoglobinu v retikulocytech odráží aktuální stav a kvalitu erytropoézy Poskytuje informace o hemoglobinizaci v průběhu erytropoézy v reálném čase Diagnostika a monitorace léčby anemie z nedostatku železa, optimalizace léčby železem Účinný parametr při monitoringu kinetiky železa Časná diagnostika funkčního nedostatku železa, odlišení funkčního a nefunkčního nedostatku železa Účinný parametr pro optimalizaci a racionalizaci léčby erytropoetinem, zejména u pacientů podrobujících se chemoterapeutické léčbě a u dětí Obdoba glykemie a % HbA1c

27 Retikulocytární hemoglobin vs. klasické parametry metabolismu Fe Sérové železo Sérový feritin zásoby železa v organismu Saturace transferinu prezentuje mobilizaci železa Solubilní transferrinový receptor (stfr) a stfr-f index (stfr/log ferritin) Hepcidin Zn Protoporfyrin RET-He - není ovlivněn reakcí akutní fáze, obsah hemoglobinu v retikulocytech je snížen bez ohledu na přítomnost či nepřítomnost zánětu

28 Klinické využití - nefrologie dle dosud publikovaných údajů je největší klinické využití v oblasti léčby dialyzovaných pacientů EPO 1997 FDA approved : metoda validovaná pro pacienty podstupující hemodialýzu Nefrolofická guidelines (Evropské pokyny pro osvědčené postupy (EBPG) nebo iniciativa pro kvalitu výsledků vyšetření ledvinových onemocnění, National Kidney Foundation Kidney Disease Outcome Quality Initiative (NKF KDOQI).

29 Klinické využití - pediatrie 29

30 Klinické využití - gravidita

31 FN Brno Refereční rozmezí: pg (Sysmex) Hodnoty nižší než 28 pg se považují za projev funkčního nedostatku železa Vydávání výsledků pro klinická pracoviště od Počet vyšetření RET-He: cca 130 RET-He /měsíc

32 Závěr 32

33 Shrnutí Měření RET-He je rychlé, časově nenáročné Nízké náklady pro laboratoře i zdravotní pojišťovny stanovení počtu retikulocytů na automatickém analyzátrou 66 bodů Vykazovat s KO Časný ukazatel onemocnění/odpovědi na léčbu: dříve než klinické hematologické či biochemické ukazatele Vysoká výpovědní hodnota 100% citlivost pro diagnostiku deficitu železa 80% specifita pro diagnostiku deficitu železa

34 Poděkování

35 Děkuji za pozornost 35