BACTEC Standard Anaerobic/F Culture Vials Živná pùda s výtažkem sójového kaseinu ÚČEL POUŽITÍ Èesky Kultivační lahvičky BACTEC Standard Anaerobic/F (předem redukovaná obohacená živná půda s výtažkem sójového kaseinu a CO 2 ) se používají pro anaerobní krevní kultury. Hlavní použití je s fluorescenčními přístroji řady BACTEC pro kvalitativní kultivaci a průkaz anaerobních mikroorganismů v krvi. SHRNUTÍ A VYSVĚTLENÍ Testovaný vzorek se inokuluje do jedné nebo nìkolika lahvièek, které se vloží do fluorescenèního pøístroje øady BACTEC za úèelem inkubace a pravidelného odeètu. Každá lahvièka obsahuje chemické èidlo, které detekuje zvýšení množství CO 2 vyprodukovaného rùstem mikroorganismù. Pøístroj každých deset minut monitoruje zvýšení fluorescence èidla, která je pøímo úmìrná množství pøítomného CO 2. Pozitivní odeèet znamená, že se v lahvièce pravdìpodobnì nachází životaschopné mikroorganismy. Detekce se týká pouze mikroorganismù, které se budou vyvíjet v urèitém typu média. ZÁSADY POSTUPU Pokud se v testovaném vzorku inokulovaném do lahvièky BACTEC mikroorganismy nachází, budou organismy vytváøet CO 2 pøi metabolizaci substrátù nacházejících se v lahvièce. Fluorescenèní pøístroj øady BACTEC bude monitorovat zvyšování fluorescence èidla v lahvièce zpùsobené zvýšením množství CO 2. Analýza rychlosti zvýšení CO 2 a zvýšení množství CO 2 umožòuje fluorescenènímu pøístroji øady BACTEC urèit, zda je lahvièka pozitivní, tj. zda testovaný vzorek obsahuje životaschopné organismy. REAGENTY Kultivaèní lahvièky BACTEC Standard Anaerobic/F obsahují pøed zpracováním tyto reaktivní složky: PP085JAA 2008/01 Seznam složek Destilovaná voda 40 ml Živná pùda s výtažkem sójového kaseinu 3,0% w/v Kvasnièný výtažek 0,4% w/v Natrávenina zvíøecí tkánì 0,01% w/v Glukóza 0,25% w/v Hemin 0,0005% w/v Menadion 0,00005% w/v Thioly 0,10% w/v Bikarbonát sodný 0,04% w/v Polyanetholsulfonát sodný (SPS) 0,025% w/v Všechna média BACTEC jsou sycena CO 2. Anaerobní média jsou pøedem redukována a sycena CO 2 a N 2. Složení mohlo být upraveno tak, aby vyhovovalo urèitým provozním požadavkùm. Varování a bezpečnostní opatření Pro diagnostiku in vitro. Produkt obsahuje suchý pøírodní kauèuk. V klinických vzorcích se mohou vyskytovat patogenní mikroorganismy včetně virů hepatitidy a viru lidské imunodeficience (AIDS). Proto dodržujte při práci s veškerým materiálem kontaminovaným krví a jinými tělními tekutinami Standardní bezpečnostní opatření 1-4 a předpisy své instituce. Pøed použitím každou lahvièku prohlédnìte a zkontrolujte, zda se na ní nevyskytují známky kontaminace, napø. zakalení, vypoukliny èi stlaèená zátka, nebo prosakování. Je-li lahvièka kontaminovaná, NEPOUŽÍVEJTE ji. V kontaminované lahvièce by mohl být pøetlak. Pokud pro pøímý odbìr použijete kontaminovanou lahvièku, mohlo by dojít ke zpìtnému prùtoku plynu nebo kontaminovaného kultivaèního média do pacientovy žíly. Kontaminace lahvièky nemusí být zøejmá na první pohled. Rozhodnete-li se použít pøímý odbìr, pozornì jeho postup sledujte, abyste zabránili zpìtnému prùtoku látek do tìla pacienta. Lahvièky, které vykazují známky zakalení, kontaminace nebo špatného zabarvení (ztmavnutí), nepoužívejte. Ve výjimeèných pøípadech mùže pøi snímání zaklápìcího víèka nebo pøi manipulaci dojít k prasknutí sklenìné lahvièky nebo ke zlomení krèku. Ve výjimeèných pøípadech mùže také dojít k nedostateènému uzavøení lahvièky. V obou pøípadech mùže obsah lahvièek vytéct, zejména pokud lahvièku pøevrátíte. Po inokulaci zacházejte s lahvièkami opatrnì, protože se zde v pøípadì prosakování mohou nacházet patogenní organismy nebo látky. Pøed likvidací všechny inokulované lahvièky sterilizujte v autoklávu. Lahvièky s pozitivní kulturou urèené k subkultivaci, histologickému barvení atd.: Pøed odebráním vzorkù je nezbytné odstranit plynné metabolity mikroorganismù. Odbìr vzorkù provádìjte pokud možno v místnosti zabezpeèené proti biologické nákaze. Pøed odbìrem si obleète odpovídající ochranný odìv, rukavice a masku. Další informace o subkultivaci naleznete v èásti Postup. Možný únik bìhem inokulace vzorkù do kultivaèních lahvièek lze minimalizovat pomocí injekèních støíkaèek s trvale nasazenými jehlami nebo hroty Luer-Lok. Pokyny ke skladování Lahvièky BACTEC jsou po dodání pøipraveny k použití; nevyžadují žádné znovuobnovení ani zøedìní obsahu. Uskladnìte na chladném (2 25 C) a suchém místì, mimo dosah pøímého sluneèního záøení. ODBÌR VZORKÙ Odbìr vzorkù provádìjte sterilními postupy, abyste snížili riziko kontaminace. Obvyklý objem vzorkù je 5 7 ml. Doporuèujeme inokulovat vzorky do lahvièek BACTEC v blízkosti postele pacienta. Vìtšinou se vzorky aplikují 10 ml nebo 20 ml injekèní støíkaèkou
s hrotem Luer-Lok. Podle potøeby lze použít držák na jehly Vacutainer, soupravu pro odbìr krve Vacutainer, soupravu pro odbìr krve Vacutainer Safety-Lok nebo jinou soupravu hadièek s kanylou typu butterfly. Rozhodnete-li se pro pøímý odbìr použít jehlu se soupravou hadièek, pozornì pøi zahájení odbìru vzorku sledujte smìr prùtoku krve. Vakuum v lahvièce obvykle pøesáhne hodnotu 7 ml, takže je dùležité, aby uživatel sledoval odebraný objem prostøednictvím znaèek v rozestupu 5 ml na štítku lahvièky. Po natažení požadovaných 5 7 ml zastavte prùtok ohnutím hadièky a odstranìním soupravy hadièek z lahvièky BACTEC. Vzorky o objemu 3 ml lze také použít, ale jejich prokázání nebude tak výrazné jako u vzorkù s vìtším objemem. Inokulovanou lahvièku BACTEC co nejrychleji pøepravte do laboratoøe. POSTUP Odstraòte z lahvièky BACTEC zaklápìcí víèko a zkontrolujte, zda není lahvièka popraskaná, kontaminovaná, pøíliš zakalená, vypouklá nebo zda nemá stlaèenou zátku. Pokud nìjaké vady zjistíte, lahvièku NEPOUŽÍVEJTE. Pøed inokulací oèistìte víèko alkoholem (použití jódu NEDOPORUÈUJEME). Aseptickou technikou aplikujte do každé lahvièky vzorek o objemu 5 7 ml. Pokud se rozhodnete použít vzorky o objemu 3 4 ml, nebude jejich prokazování tak výrazné jako u vzorkù s vìtším objemem (viz Omezení postupu). Inokulované anaerobní lahvièky umístìte co nejrychleji do fluorescenèního pøístroje øady BACTEC za úèelem inkubace a monitorování. Pokud inokulovanou lahvièku neumístíte do pøístroje ihned a shledáte v ní viditelný rùst, netestujte ji ve fluorescenèním pøístroji øady BACTEC, ale radìji proveïte subkultivaci a Gramovo barvení a zacházejte s ní jako s pozitivní lahvièkou. Lahvièky vložené do pøístroje budou automaticky testovány každých deset minut po dobu uvedenou v testovacím protokolu. Fluorescenèní pøístroj øady BACTEC urèí pozitivní lahvièky (viz Uživatelskou příručku příslušného přístroje fluorescenční řady BACTEC). Èidlo uvnitø pozitivních lahvièek se nebude na první pohled lišit od èidla v negativních lahvièkách, fluorescenèní pøístroj øady BACTEC však zjistí rozdíl ve fluorescenci. Pokud bude na konci testu negativní lahvièka na první pohled pozitivní (znaky: krev èokoládového zbarvení, vypouklé víèko, hemolyzovaná a/nebo velmi tmavá krev), proveïte subkultivaci a Gramovo barvení a zacházejte s ní jako s pozitivní lahvièkou. Pozitivní lahvièky subkultivujte a na podložním sklíèku proveïte Gramovo barvení. Ve velké vìtšinì pøípadù budou organismy viditelné a laboratoø tak mùže lékaøi oznámit pøedbìžné výsledky. Subkultivace na selektivních médiích a pøedbìžný pøímý antimikrobiální test na citlivost lze pøipravit z tekutiny obsažené v lahvièkách BACTEC. Subkultivace: Pøed zahájením subkultivace umístìte lahvièku do svislé polohy a na víèko umístìte alkoholem napuštìné krytí. Abyste z lahvièky uvolnili tlak, zaveïte pøes alkoholem napuštìné krytí a pøes víèko sterilní jehlu s odpovídající filtrem nebo tampónem. Po uvolnìní tlaku a pøed odbìrem vzorku lahvièky za úèelem provedení subkultivace jehlu vyjmìte. Pøi zavádìní a vyjímání udržujte jehlu v pøímé poloze, nezavádìjte ji ani ji nevyjímejte otáèivými pohyby. Abyste získali maximální množství izolátù, mùžete negativní kultury nejprve zkontrolovat barvením a/nebo subkultivací a teprve poté je zlikvidovat jako negativní. KONTROLA KVALITY Požadavky na kontrolu kvality musí být splněny v souladu s platnými místními, státními a federálními předpisy a požadavky na akreditaci, a se standardními postupy kontroly kvality vaší laboratoře. Doporučujeme, aby si uživatel prostudoval informace o správném provádění kontroly jakosti v příslušných směrnicích CLSI (dříve NCCLS) a předpisech CLIA. Po uplynutí data expirace kultivaèní lahvièky NEPOUŽÍVEJTE. Lahvièky, které vykazují známky popraskání nebo jiného poškození, NEPOUŽÍVEJTE a odpovídajícím zpùsobem je zlikvidujte. Souèástí každého balení médií jsou certifikáty kontroly jakosti. Certifikáty kontroly jakosti uvádìjí seznam testovacích organismù, vèetnì kultur ATCC urèených normou CLSI, Quality Control for Commercially Prepared Microbiological Culture Media. 5 Pro každý z následujících organismù je èasové rozmezí pøed detekcí v hodinách 72 h: Clostridium histolyticum Streptococcus pneumoniae ATCC 19401 ATCC 6305 Clostridium perfringens Escherichia coli ATCC 13124 ATCC 25922 Bacteroides fragilis* Staphylococcus aureus ATCC 25285 ATCC 25923 Bacteroides vulgatus ATCC 8482 *Barvení CLSI Informace o kontrole kvality pro fluorescenční přístroj řady BACTEC naleznete v příslušné uživatelské příručce fluorescenčního přístroje řady BACTEC. VÝSLEDKY Fluorescenèní pøístroj øady BACTEC urèí pozitivní vzorek a odhalí pravdìpodobnou pøítomnost životaschopných mikroorganismù v lahvièce. OMEZENÍ POSTUPU Kontaminace Bìhem odbìru a inokulace do lahvièky BACTEC nesmí dojít ke kontaminaci vzorku. Výsledkem kontaminovaného vzorku bude pozitivní odeèet, který však nebude relevantním klinickým vzorkem. Rozhodnutí musí uèinit uživatel v závislosti na takových faktorech jako je typ prokázaných organismù, pøítomnost stejných organismù ve více kulturách, záznamy pacienta atd. Prokázání organismù citlivých na SPS ze vzorkù krve Jelikož krev mùže vùèi organismùm citlivým na SPS (napø. nìkteré druhy Neisseria) neutralizovat toxicitu SPS, je pøítomnost optimálního objemu krve (5 7 ml) pøi prokazování tìchto organismù výhodou.
Nìkteré nároèné organismy, napø. nìkteré druhy Haemophilus, vyžadují faktory rùstu, napø. NAD nebo faktor V, které lze získat ze vzorkù krve. Je-li objem vzorku krve 3,0 ml nebo ménì, bude zøejmì nutné pro prokázání tìchto organismù pøidat odpovídající množství. Přídavek pro náročné organismy BACTEC FOS může být použit jako vyživovací přídavek. Organismy, které nejsou životaschopné Nátìr s Gramovým barvením z kultivaèního média mùže obsahovat malé množství organismù, které nejsou životaschopné. Zdrojem tìchto organismù jsou složky médií, chemikálie pro barvení, imerzní olej, podložní sklíèka a vzorky používané pro inokulaci. Také pacientovy vzorky mohou obsahovat organismy, které se v kultivaèním médiu nebo médiu urèeném k subkultivaci nerozrostou. Takové vzorky podle potøeby subkultivujte na speciálních médiích. 6 Prokázání Streptococcus pneumoniae U aerobních médií bude S. pneumoniae obvykle na první pohled i po otestování pøístrojem pozitivní, ale v nìkterých pøípadech se mùže stát, že se po Gramovì barvení nebo po bìžné subkultivaci žádný organismus neprokáže. Pokud byla inokulována i anaerobní lahvièka, lze organismus obvykle prokázat provedením aerobní subkultivace anaerobní lahvièky. Bylo totiž prokázáno, že tento organismus se v anaerobních podmínkách dobøe vyvíjí. 7 Všeobecné informace Optimálního prokázání izolátù bude dosaženo pøidáním 5 7 ml krve. Použití menšího èi vìtšího množství mùže nepøíznivì ovlivnit prokazování a/nebo èasová rozmezí detekce. Krev mùže obsahovat antimikrobiální látky nebo jiné inhibitory, které mohou zpomalit rùst mikroorganismù nebo tomuto rùstu úplnì zabránit. Pokud jsou pøítomny organismy, které neprodukují dostateèné množství CO 2 na to, aby je pøístroj detekoval, nebo pokud došlo pøed umístìním lahvièky do pøístroje k výraznému rùstu, mùže dojít k nesprávnému negativnímu odeètu. K nesprávnému urèení pozitivity mùže dojít v pøípadì, že je poèet bílých krvinek vysoký. Vzhledem k povaze biologického materiálu v médiu a neodmyslitelné variabilitì organismù by se mìl uživatel seznámit s možnými variabilními výsledky pøi zjištìní urèitých organismù. OÈEKÁVANÉ HODNOTY A SPECIFICKÉ VLASTNOSTI ÚÈINNOSTI Viz Uživatelskou příručku příslušného přístroje fluorescenční řady BACTEC. OBJEDNACÍ ÚDAJE Katalog. číslo Popis 442191 BACTEC Standard Anaerobic/F Culture Vials (kultivační lahvičky), krabice s 50 lahvičkami ODKAZY 1. Clinical and Laboratory Standards Institute. 2005. Approved Guideline M29-A3. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 3rd ed. CLSI, Wayne, Pa. 2. Garner, J.S. 1996. Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17: 53-80. 3. U.S. Department of Health and Human Services. 1999. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC), 4th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 4. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p. 0021-0045. 5. Clinical and Laboratory Standards Institute. 2004. Approved Standard M22-A3. Quality control of commercially prepared microbiological culture media, 3rd ed. CLSI, Wayne, Pa. 6. Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.L. Landry and M.A. Pfaller (ed.). 2007. Manual of clinical microbiology, 9th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 7. Howden, R.J., J. Clin. Path. 1976, 29:50-53.
B Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, Maryland 21152 U.S.A. 800-638-8663 BENEX Limited Bay K 1a/d, Shannon Industrial Estate Shannon County Clare, Ireland Tel: 353-61-47-29-20 Fax: 353-61-47-25-46 ATCC is a registered trademark of the American Type Culture Collection. BD, BD Logo, BACTEC, Vacutainer, Safety-Lok and Luer-Lok are trademarks of Becton, Dickinson and Company. 2008 BD.