CHORUS a-tpo 86074 (36 testů) Výrobce: DIESSE Diagnostica Senese Via delle Rose 10 53035 Monteriggioni (Siena) Itálie
OBSAH 1 Úvod... 3 2 Princip testu... 3 3 Složení soupravy... 4 4 Další potřebné vybavení k provedení testu... 5 5 Skladování a stabilita komponent... 6 6 Bezpečnost práce... 6 7 Technické připomínky... 7 8 Vzorky a jejich skladování... 8 9 Pracovní postup.... 8 10 Validita testu... 8 11 Hodnocení výsledků... 9 12 Interpretace výsledků... 9 13 Charakteristika soupravy... 10 14 Literatura... 11 15 Vysvětlení symbolů... 13 2/16 Rif IO-09/256-C; IFU 86074/MIT Ed. 22.11.2011
Kvantitativní stanovení IgG protilátek proti thyroid peroxidáze (TPO) v lidském séru na přístroji Chorus pomocí jednorázového testovacího zařízení 1 Úvod Thyroid peroxidáza (TPO) je membránově vázaný glykoprotein o molekulové hmotnosti 105 kda. Jedná se o hlavní enzym účastnící se syntézy hormonů štítné žlázy. TPO je jedním ze tří hlavních auto antigenů štítné žlázy spolu s Tyroglobulinem (Tg) a THS-receptorem. Pro detekci chronického autoimunitního onemocnění štítné žlázy, ale i pro stanovení hypofunkce štítné žlázy se využívá stanovení specifických protilátek proti TPO a Tg. Stanovení specifických protilátek proti Tg a TPO jsou důležité pro vyloučení autoimunitních onemocnění štítné žlázy, jelikož 98 % pacientů s podezřením na autoimunitní onemocnění má zvýšené titry těchto protilátek. U Gravesovy-Basedowovy choroby jsou zvýšené titry protilátek proti TPO přítomny zhruba u 71 až 97 % pacientů, u Hasmimotovy choroby u 91 až 95 %. Nepřítomnost protilátek proti Tg A TPO může prakticky vyloučit diagnózu thyreotidy. Zvýšené titry protilátek se vyskytují i u pacientů s adenokarcinomem štítné žlázy a hyperfunkcí štítné žlázy. Zhruba 10 % zdravých jedinců má zvýšené titry protilátek proti Tg. Závěry 20leté studie, která proběhla v Anglii, lze říci, že primární znak budoucí autoimunitního onemocnění štítné žlázy je průkaz zvýšených titrů protilátek proti auto antigenům štítné žlázy. Průkaz těchto protilátek může sloužit jako prediktivní market budoucího onemocnění. 2 Princip testu Test je založen na principu ELISA (Enzyme linked Immunosorbent Assay). CHORUS a-tpo umožňuje stanovení protilátek proti TPO na přístroji Chorus. Vysoce purifikovaný antigen TPO (ze štítné žlázy) se naváže na pevnou fázi. V průběhu inkubace vzniká vazba mezi specifickými protilátkami vyšetřovaného séra a imobilizovaným antigenem. Po promytí, která eliminují nenavázané proteiny, se provádí inkubace s konjugátem. Konjugát je roztok s obsahem monoklonálních protilátek proti lidským IgG imunoglobulinům značených křenovou peroxidázou. Po další sérii promytí, které odstraní nenavázaný konjugát, se přidá substrát reagující s peroxidázou. Intenzita modrého zbarvení, které vznikne, je přímo úměrné koncentraci specifických protilátek přítomných v testovaném lidském séru. Jednorázový test obsahuje všechny reagencie nutné k provedení testu na přístrojích Chorus. 3/16 Rif IO-09/256-C; IFU 86074/MIT Ed. 22.11.2011
Kalibrační sérum je kalibrováno na Mezinárodní referenční sérum WHO 66/387. Výsledky testu jsou vyjádřeny v IU/ml. 3 Složení soupravy Souprava umožňuje provést 36 stanovení. Testovací jednotka 6 6 ks 6 samostatných balení po 6 jednotlivých jednorázových testech Kalibrátor Roztok lidského séra o známé koncentraci protilátek, v pracovním ředění Pozitivní kontrola Roztok lidského séra o známé koncentraci protilátek, v pracovním ředění Pracovní návod 1 ks Soupravu nechte vytemperovat na laboratorní teplotu a ze samostatných balení odeberte stanovený počet jednorázových testů pro vlastní analýzu. Zbylé jednorázové testy vraťte zpět do obalu se sušidlem (silikagel gel obsahující oxid křemičitý), vytlačte vzduch a hermeticky uzavřete stisknutím uzávěru. Skladujte při +2 C až +8 C. 4/16 Rif IO-09/256-C; IFU 86074/MIT Ed. 22.11.2011
Obrázek 1 Schéma jednorázového testu Pozice 8 Pozice 7 Pozice 6 Místo pro štítek s čárovým kódem Prázdná pozice Mikrotitrační jamka s potaženým antigenem Vysoce pufirikovaný antigen TPO Pozice 5 Nepotažená mikrotitrační jamka Pozice 4 TMB Substrát 0,3 ml Tetrametylbenzidin 0,26 mg/ml a 0,01% H 2 O 2 stabilizovaný v 0,05 mol/l citrátového pufru (ph 3,8) Pozice 3 Ředicí roztok vzorků 0,35 ml Proteinový roztok se stabilizátory Pozice 2 Konjugát 0,3 ml Roztok protilátek proti lidským imunoglobulinům, značené peroxidázou Pozice 1 Prázdná jamka Do této jamky se přidá vyšetřované sérum 4 Další potřebné vybavení k provedení testu Tyto reagencie nejsou součástí balení. Promývací roztok pro testy na stanovení autoimunitních onemocnění 86004 Čistící roztok 2000 83605 Sanitační roztok 83604 Destilovaná nebo deionizovaná voda Běžné laboratorní sklo: odměrné válce, zkumavky atd. Mikropipety na přesný odběr 50 až 200 μl roztoku Jednorázové rukavice Roztok chlornanu sodného (5 %) Nádoby na potenciálně infekční materiál 5/16 Rif IO-09/256-C; IFU 86074/MIT Ed. 22.11.2011
5 Skladování a stabilita komponent Reagencie se musí skladovat při teplotě +2 C až +8 C. V případě skladování při nesprávné teplotě se musí zopakovat kalibrace a validovat test pomocí kontrolního séra (viz 10, Validita testu). Datum exspirace je uvedeno na každé komponentě a na štítku soupravy. Po otevření mají reagencie omezenou stabilitu. Jednorázový test 8 týdnů při teplotě +2 C až +8 C Pozitivní kontrola 8 týdnů při teplotě +2 C až +8 C Kalibrátor 8 týdnů při teplotě +2 C až +8 C 6 Bezpečnost práce Souprava je určena pouze pro diagnostické účely in vitro. Tato souprava obsahuje materiály lidského původu, které byly testovány a vykázaly negativní výsledky při použití metod schválených FDA pro stanovení přítomnosti HbsAg a anti-hiv-1, anti-hiv-2 a anti-hcv protilátek. Protože však žádný diagnostický test nemůže poskytnout úplnou záruku, že infekční agens nejsou přítomna, je třeba s veškerým materiálem lidského původu zacházet tak, jako by byl potenciálně infekční. Při zacházení s materiálem lidského původu je nutné dodržovat všechny místní předpisy týkající se bezpečnosti práce. Likvidace zbytků pro provedení testu S použitými vzorky sér, kalibrátory, jednorázovými testy je třeba zacházet jako s potenciálně infekčním materiálem a likvidovat je v souladu s platnou legislativou. Zdravotní a bezpečnostní informace 1. Nepipetujte ústy. Používejte rukavice na jedno použití a ochranu očí. Po umístění jednorázového testu do přístroje Chorus si důkladně umyjte ruce. 2. Některé reagencie obsahují nízké koncentrace škodlivých nebo dráždivých látek Pokud se některá s těchto reagencií dostane do kontaktu s kůží nebo očima, důkladně omyjte dané místo vodou. Konjugát obsahuje fenol TMB Substrát je roztok kyseliny 3. Neutralizované kyseliny nebo jiný tekutý odpad by se měl dekontaminovat přidáním dostatečného množství chlornanu sodného tak, aby konečná koncentrace dosahovala minimálně 1,0 %. Pro zajištění účinné dekontaminace ponechejte tento odpad 30 minut v 1% chlornanu sodném. 4. Rozlitý potenciálně infekční materiál je třeba okamžitě odstranit pomocí absorpčního papírového ručníku a kontaminovanou oblast umýt, například 1,0% 6/16 Rif IO-09/256-C; IFU 86074/MIT Ed. 22.11.2011
chlornanem sodným, a to předtím, než budete v práci pokračovat. Chlornan sodný nepoužívejte na rozlité tekutiny s obsahem kyseliny, ty musíte nejprve otřením vysušit. 5. Materiály použité k čištění potřísněných povrchů, včetně rukavic, se musí likvidovat jako potenciálně životu nebezpečný odpad. Materiály obsahující chlornan sodný nevkládejte do autoklávu. 7 Technické připomínky Pro získání spolehlivých výsledků je nutné přesné dodržování návodu. Soupravu nechte vytemperovat na laboratorní teplotu (+18 C až +30 C) a test proveďte do 60 minut. Zkontrolujte a dodržujte následující informace: Substrát obsažený v pozici 4 je bezbarvý. Nepoužívejte jednorázové testy, které toto nesplňují. Testovaný vzorek je dokonale na dně jamky rozprostřen. Zkontrolujte zda-li všechny reagencie v testu jsou přítomny a jestli není jednorázový test poškozen. Nepoužívejte testy, které nemají reagencie. Jednorázové testy jsou určeny pro použití na přístroji Chorus. Důkladně dodržujte pokyny pro použití a řiďte se návodem k obsluze přístroje. Chorus přístroj správně nastavený (viz návod k obsluze). Neměňte čárový kód umístěný na držadle jednorázového testu. Nepoužívejte testy s poškozenými štítky s čárovými kódy. Defektní čárové kódy lze vložit do přístroje manuálně. Během skladování a použití nevystavujte jednorázové testy silnému světlu ani výparům chlornanu. Použití silně hemolytických vzorků nebo vzorků s mikrobiální kontaminací může vést k nereprodukovatelným výsledkům. Než vložíte jednorázový test do přístroje, zkontrolujte, že reakční jamka neobsahuje cizí tělesa. Pipetujte sérum (50 µl) do pozice 1 jednorázového testu (viz obrázek 1). Nepoužívejte jednorázový test po uplynutí expiračního data. Zkontrolujte prosím, zda-li byl k přístroji Chorus připojen promývací roztok určený pro testy ke stanovení autoimunitních onemocnění (Washing Buffer Autoimmunity 86004. 7/16 Rif IO-09/256-C; IFU 86074/MIT Ed. 22.11.2011
8 Vzorky a jejich skladování Jako vzorek k vyšetření může být použito sérum, získané odběrem žilní krve. Zachází se s ním v souladu se všemi opatřeními předepsanými správnou laboratorní praxí. Čerstvé sérum lze skladovat 4 dny při +2 C až +8 C. Séra je možné uchovávat při -20 C a lze je rozmrazit maximálně 3krát. Neskladujte vzorky v mrazácích s funkcí vlastního rozmrazování. Rozmrazené vzorky je potřeba před použitím důkladně protřepat. Kvalita vzorku může být vážně narušena kontaminací, která vede k chybným výsledkům. Nepoužívejte silně lipemické, ikterické, hemolytické nebo kontaminované vzorky. Test nelze použít na lidskou plazmu. 9 Pracovní postup. 1. Otevřete balení, vyjměte požadovaný počet jednorázových testů a zbytek uzavřete zpět do sáčku poté, co vytlačíte vzduch. 2. Zkontrolujte stav jednorázového testu (viz 7 Technické připomínky). 3. Pipetujte 50 μl neředěného séra do pozice 1 každého testu. Při každé změně šarže soupravy použijte jednorázový test pro kalibraci. 4. Jednorázový test umístěte do přístroje. Proveďte kalibraci (je-li nutná) a vlastní stanovení podle pokynů uvedených v návodu k obsluze Chorus přístroje. 10 Validita testu Pomocí kontrolního séra ověřte správnost získaných výsledků. Použijte je v souladu s instrukcemi uvedenými v návodu na obsluhu. Pokud test ukáže, že se hodnota kontrolního séra pohybuje mimo přijatelné rozmezí, kalibraci je třeba opakovat. Předchozí výsledky budou automaticky opraveny. Pokud je výsledek kontrolního séra i nadále mimo přijatelné rozmezí, kontaktujte prosím technickou podporu: Tel: +39-0577-587154 Tel +39-0577-587121 8/16 Rif IO-09/256-C; IFU 86074/MIT Ed. 22.11.2011
11 Hodnocení výsledků Přístroj Chorus vyjadřuje výsledky v IU/ml (Mezinárodní referenční sérum WHO 66/387) vypočítané na základě grafu, který je uložený k příslušné šarži v přístroji. Hodnocení výsledků je popsáno v tabulce (Tabulka 1). Tabulka 1 Hodnocení výsledků IU/ml menší než 31,5 Hodnocení negativní 31,5 až 38,5 hraniční větší než 38,5 pozitivní Sérum v oblasti CUT-OFF se pohybuje na hodnotě 35 IU/ml. V případě hraničního výsledku zopakujte test. Pokud zůstává test nadále hraniční, je vhodné opakovat z nového odběru. 12 Interpretace výsledků Test nelze použít jako jedinou metodu pro stanovení klinické diagnózy. Negativní výsledek testu nevylučuje eventuální onemocnění. Serologický nález je třeba vždy interpretovat pouze v kontextu s výsledky ostatních laboratorních testů a s klinickým obrazem pacienta. 13 Kalibrační rozmezí Kalibrační rozmezí se pohybuje v oblasti 10 až 1000 IU/ml. Jestliže se objeví vzorky s výsledkem stanovení nad 1000 IU/ml je nutné tyto vzorky naředit Negativní kontrolou/ředicím roztokem vzorků ( 83607). 14 Referenční rozmezí V normální populaci (testováno na 120 sérech) se očekávané hodnoty titrů protilátek pohybují na rozmezí 11,9 až 31,2 IU/ml. 9/16 Rif IO-09/256-C; IFU 86074/MIT Ed. 22.11.2011
15 Charakteristika soupravy 15.1 Analytická specifita Analytická specifita byla testována na 5 vzorcích (2 negativní, 1 CUT-OFF, 2 pozitivní) obsahujících potenciálně interferující látky: Revmatoidní faktor (44 až 220 IU/ml) Bilirubin (4,5 až 45 mg/dl) Triglyceridy (10 až 250 mg/dl) Hemoglobin (5 až 30 mg/ml) Přítomnost interferujících látek v testovaných vzorcích nemá vliv na výsledek testu. 15.2 Zkřížená reaktivita Byly testovány vzorky (15) pozitivní: Gliadin IgG a IgA (3 vzorky) dsdna (1 vzorek) panca (1 vzorek) canca (1 vzorek) SS-A (1 vzorek) Sm (2 vzorky) U1-70 RNP (1 vzorek) a-tp (5 vzorků). Nebyla prokázána žádná významná zkřížená reaktivita. 15.3 Diagnostická citlivost a specifita Pro stanovení citlivosti a specifity bylo využito srovnání výsledků na jiné referenční soupravě. Bylo testováno 231 vzorků. Výsledky srovnání jsou uvedeny v tabulce (Tabulka 2). Tabulka 2 Výsledky srovnání zařazení testovaných vzorků Referenční souprava DIESSE Pozitivní Negativní Celkem Pozitivní 138 1 139 Negativní 7 85 92 Celkem 145 86 231 Souprava vykazuje 99,8% specifitu (CI 95% 93,7 až 99,8) a 95,2% citlivost (CI 95% 90,4 až 97,6). 10/16 Rif IO-09/256-C; IFU 86074/MIT Ed. 22.11.2011
15.4 Přesnost měření Intra-assay stanovení: testované vzorky (9) byly opakovaně změřeny (10krát během jednoho dne); průměr naměřených hodnot, směrodatná odchylka, variační koeficient (%) jsou uvedeny v tabulce (Tabulka 3). Tabulka 3 Intra-assay stanovení Vzorek Průměr (IU/ml) Směrodatná odchylka Variační koeficient (%) 1 15,5 0,72 4,6 2 15,1 0,95 6,3 3 29,5 2,85 9,7 4 30,5 2,07 6,8 5 40,1 3,89 9,7 6 39,7 2,07 5,2 7 121,7 16,18 13,7 8 151,2 18,01 11,9 9 433,9 58,98 13,6 Inter-assay stanovení: testované vzorky (9) byly opakovaně změřeny (v 8 opakováních); průměr naměřených hodnot, směrodatná odchylka, variační koeficient (%) jsou uvedeny v tabulce (Tabulka 4). Tabulka 4 Inter-assay stanovení Vzorek Průměr (IU/ml) Směrodatná odchylka Variační koeficient (%) 1 15,1 1,06 7 2 15,4 0,78 5,1 3 29 2,73 9,4 4 30,1 1,77 5,9 5 39,6 2,05 5,2 6 46,1 6,36 13,8 7 117,4 16,98 14,5 8 149 18,74 12,6 9 453 58,6 12,9 11/16 Rif IO-09/256-C; IFU 86074/MIT Ed. 22.11.2011
Přesnost mezi jednotlivými šaržemi: všechny testované vzorky byly analyzovány; průměr naměřených hodnot, variační koeficient (%) každého na vzorku jsou uvedeny v tabulce (Tabulka 5). Tabulka 5 Přesnost mezi šaržemi Vzorek Průměr (IU/ml) Směrodatná odchylka Variační koeficient (%) 1 13 1,57 12,1 2 13,3 1,7 12,8 3 28,4 1,14 4 4 30,1 1,06 3,5 5 38,7 0,57 1,5 6 50 5,37 10,7 7 118 7,2 6,1 8 132,7 4,93 3,7 9 434,3 39,15 9 15.5 Linearita Tři silně pozitivní séra byla testována v několika ředěních. Byl stanoven lineární titr. Výsledky jsou uvedeny v tabulkách (Tabulka 6, Tabulka 7 a Tabulka 8). Kvůli matrix efektu však nemusejí některá séra tento princip respektovat. Tabulka 6 Stanovení linearity vzorek A Ředění vzorku Očekávaná koncentrace (IU/ml) Naměřená koncentrace (IU/ml) Výtěžnost (%) 1:1 985,2 985,2 100 1:2 492,6 482,4 98 1:4 246,3 222,8 90 1:8 123,1 133,5 108 1:16 61,6 53,9 88 1:32 30,8 26,7 87 1:64 15,4 17,3 112 12/16 Rif IO-09/256-C; IFU 86074/MIT Ed. 22.11.2011
Tabulka 7 Stanovení linearity vzorek B Ředění vzorku Očekávaná koncentrace (IU/ml) Naměřená koncentrace (IU/ml) Výtěžnost (%) 1:1 993,6 993,6 100 1:2 496,8 550,7 111 1:4 284,4 265,5 107 1:8 124,2 106,6 86 1:16 62,1 70,2 113 1:32 31,1 27,5 89 1:64 15,5 17,3 112 Tabulka 8 Stanovení linearity vzorek C Ředění vzorku Očekávaná koncentrace (IU/ml) Naměřená koncentrace (IU/ml) Výtěžnost (%) 1:1 889,4 889,4 100 1:2 444,7 492,8 111 1:4 222,3 200,1 90 1:8 111,2 120,9 109 1:16 55,6 63,2 114 1:32 27,8 25,2 91 1:64 13,9 15,9 114 16 Literatura 1. Vanderpump MP, Turnbridge WM, et al. (1995) Clin. Endocrinol. 43: 55-68. 2. DeGroot LJ, Larsen PR et al. (1984) The thyroid and its diseases. 5. Ed. WIleu and Sons, New York. 3. Peter JB and Shoenfeld Y (1996) Autoantibodies. Elsevier Sciences BV, Amsterdam. 13/16 Rif IO-09/256-C; IFU 86074/MIT Ed. 22.11.2011
Poznámky 14/16 Rif IO-09/256-C; IFU 86074/MIT Ed. 22.11.2011
Poznámky 15/16 Rif IO-09/256-C; IFU 86074/MIT Ed. 22.11.2011
17 Vysvětlení symbolů Datum výroby Použít do data Nepoužívat opakovaně Čtěte přiložené dokumenty Výrobce Počet testů Skladovací teplota Čtěte návod k použití Biologická rizika Katalogové číslo Diagnostický zdravotnický prostředek in vitro Číslo šarže Počet testů Diesse Diagnostica Senese Via delle Rose 10 53035 Monteriggioni (Siena) Italy Tel. 0577-587111 16/16 Rif IO-09/256-C; IFU 86074/MIT Ed. 22.11.2011