JEDNOSTUPŇOVÝ RYCHLÝ TEST PRO SOUČASNOU KVALITATIVNÍ DETEKCI METAMFETAMINU, MORFINU(OPIÁTŮ), BENZODIAZEPINU, MARIHUANY BUPRENORFINU V LIDSKÉ MOČI včetně specielních testů ověření validity vzorku moče: OXIDOVADLA/PCC, SPECIFICKÁ HMOTNOST, PH, NITRITY, GLUTARALDEHYD A KREATININ. In Vitro Diagnostikum pro profesionální použití DOPORUČENÉ POUŽITÍ MultiDrugControl 008AD415 je specificky sestavená kombinace jednostupňových imunoassayí pro kvalitativní detekci metamfetaminu, marihuany, buprenorfinu, opiátů, benzodiazepinů a jejich metabolitů v lidské moči, včetně testu validity ve složení: Oxidovadla,specifická hmotnost, ph, nitrity a kreatinin, které se vyhodnocují podle přiložené barevné tabulky. SOUHRN A VYSVĚTLENÍ MultiDrugControl 008AD415 je rychlý screeningový test na principu chomatografické imunoassaye, který se vyhodnocuje vizuálně, bez použití přístroje. Test využívá monoklonální protilátky k selektivní detekci zneužívaných drog v lidské moči. Detekované drogy a jejich metabolity jsou uvedeny níže v tabulce s jejich cut-off hladinami. Chemické testy pro ověření validity se vyhodnocují porovnáním barvy reakčního pole s přiloženou tabulkou. Výsledek je semikvantitaivní, pokud jsou všechny sledované parametry v rozmezí normálu, je potvrzeno, že vzorek nebyl zfalšován. Tabulka drog, příbuzných sloučenin a metabolitů, které jsou detekovány v moči při uvedených cut-off koncentracích Substance Cutoff (ng/ml) Substance Cutoff ( ng/ml) METHAMPHETAMINX (MET500) BENZODIAZEPINY (BZD 300) d-methamphetamine 500 Oxazepam 300 d,l-amphetamine 75,000 Alprazolam 200 d-amphetamine 50,000 Bromazepam 1560 Chloroquine 12,500 Chlordiazepoxide 1560 (1R,2S)-(-)-Ephedrine 50,000 Clobazam 100 p-hydroxymethamphetamine 15,000 Clonazepam 780 Mephentermine 25,000 Clorazepate 200 l-methamphetamine 4,000 Delorazepam 1560 3,4-Methylenedioxymethamphetamine (MDMA) 1,000 Desalkylflurazepam 390 l-phenylephrine 100,000 Diazepam 200 β-phenylethylamine 75,000 Estazolam 2500 MORFIN / OPIÁTY (MOR300) Flunitrazepam 390 Morphine 300 alpa-hydroxy-alprazolam 1260 Codeine 300 d,l-lorazepam 1560 Ethylmorphine 6,250 RS-Lorazepam glucuronide 1560 Hydrocodone 50,000 Midazolam 12500 Hydromorphone 3,125 Nitrazepam 100 Levorphanol 1,500 Norchlordiazepoxide 200 6-Monoacetylmorphine (6-MAM) 400 Nordiazepam 390 Morphine 3-β-D-glucuronide 1,000 Temazepam 100 Norcodeine 6,250 Triazolam 2500 Normorphine 100,000 BUPRENORFIN (BUP10) Oxycodone 30,000 Buprenorphine 10 Oxymorphone 100,000 Norbuprenorphine 20 Procaine 15,000 Buprenorphine 3-D-glucuronide 15 Thebaine 6,250 Norbuprenorphine 3-D-glucuronide 200 MARIHUANA (THC50) 11-nor- 9 -THC-9 COOH 50 Cannabinol 20,000 11-nor- 8 -THC-9 COOH 30 8 -THC 15,000 9 -THC 15,000. Tyto testy poskyzují pouze orientační analytický výsledek.pro ověření ( pro forenzní účely) je nutno použít jinou laboratorní metodu. Jako referenční metoda je doporučena GC/MS( plynová chromatografie/hmotová spektrometrie).nebo LC/MS( kapalinová chromatografire/hmotová spektrometrie)výsledky testů je třeba posuzovat s profesionílní klinickou zkušeností, zvláště je-li nález pozitivní PRINCIP TESTU MultiDrugControl 008AD415 je založen na principu kompetitivní imunochemické reakce.test pro každou jednotlivou drogu tvoří nitrocelulozový membránový proužek s navázaným konjugátem droga-protein, v místě označeném T (test) a specifickou protilátkou proti hledané droze (jejímu metabolitu), značenou koloidním zlatem, Po namočení do vzorku moče migruje kapalina membránou vzhůru, přičemž rozpustí značenou protilátku a prosakoje dále přes výsledkové okno. Pokud je v moči přítomna droga v koncentraci vyšší, než udaná cut-off hodnota ( citlivost testu), zaplní vazebná místa na protilátce a tím zabrání její vazbě na konjugát navázaný v testovacím okně. Nepřítomnost barevné linie u označení T znamená pozitivní nález drogy. Pokud ve vzorku moči není přítomna droga, zbarvená protilátka se naváže na konjugát droga-protein ve výsledkovém okně a vytvoří barevnou linii v oblasti označené T. Vznik této červené linie tedy znamená negativní výsledek. Pro kontrolu správné funkce testů je použit systém nehumánního antigenu a protilátky, které musí vždy vytvořit linii v kontrolní oblasti C ve výsledkovém okně. Potvrzuje, že byl použit správný postup a dostatečné množství vzorku. 1 / 6
Strana A Strana B Reprodukované zbarvení se může lišit od originálu! TESTY VALIDITY / FALŠOVÁNÍ VZORKU Kontrola možné úpravy vzorku za účelem ovlivnění výsledku. Falešně negativní výsledek drogového testu lze získat buď rozložením enzymu použitého v reakci, nebo přímo rozkladem molekul hledané drogy, nebo jednoduše zředěním vzorku tak, aby koncentrace drogy klesla pod cut-off. Testy validity vzorku fungují na principu změny barvy chemických indikátorů v přítomnosti znehodnocujících přísad. Oxidovadla,specifická hmotnost(s.g),ph, Nitrity, Glataraldehyd a Kreatinin ověřují integritu původního vzorku moče. Oxidanty/PCC (Pyridinium chlorochromat) tests ověřuje přítomnost oxidovadel, jako jsou bělící prostředky na bázi peroxidu vodíku. Pyridinium Chlorchromat je nejběžněji používán. Normální lidská moč neobsahuje ani oxidovadla ani PCC. Specifická hmotnost ověřuje možné naředění moče. Normální rozmezí spec.hmotnosti lidské moči je cca 1,005 až 1,030, proto hodnoty mimo tato rozmezí poukazují na možné naředění (nižší hodnoty), nebo na jiné falšování ( vyšší hodnoty). Je nutno brát v úvahu možné onemocnění vyšetřované osoby ( např. diabetici mají moč o nižší hustotě) ph ukazuje na úpravu moči okyselením, nebo naopak zalkalizováním. Normální rozmezí ph moče je 4 až 9. ph mimo toto uvedené rozmezí je známkou okyselení, nebo naopak zalkalizování vzorku.. Nitrity V normální lidské moči se nitrity nevyskytují. Vyjímkou může být bakterielní infekce močového traktu. Vzorky moče obsahující nitrity v hodnotě větší než 15 mg/dl jsou považovány za falšované. Test zachytí komerčně vyráběné prostředky, které se podílí na oxidaci hlavního metabolitu marihuany THC-COOH. Glutaraldehyd test ověřuje přítomnost aldehydů. Čistící protředky, obsahující glutaraldehyd mohou způsobit falešnou negativitu rychlých testů rozložením enzymu, použitého v imunochemické reakci. Glutaraldehyd se běžně v lidské moči nevyskytuje, jeho přítomnost znamená zfalšování. Kreatinin je odpadním produktemn kreatinu, obsaženého ve svalech. Jeho koncentrace v moči se pohybuje v konstantním rozmezí. Vypitím nadměrného množství vody,bylinných čajů a užíváním diuretik se system zavodní a moč naředí. Společně se spcifickou hmotností je kreatinin spolehlivým ukazatelem naředění vzorku moče. Nepřítomnost kreatininu ve vzorku< 5 mg/dl indikuje, že vzorek není lidská moč.. REAGENCIE MultiDrugControl test obsahuje myší monoklonální protilátky, navázané na partikulích a odpovídajíví konjugát droga-protein imobilizovaný na membráně. V kontrolním systému je použita kozí protilátky BEZPEČNOSTNÍ POKYNY Test je určen pouze proin vitro diagnostiku. K zabránění kontaminace použijte pro každý vzorek moči novou Nepoužívejte test po uplynutí data expirace čistou nádobku Kazetu ponechte v uzavřené originální obálce až do doby použití. Vzorky moči jsou potencionálně infekční materiál, zaházejze s Nepotřísnětě membránu v okně vzorkem moči nimi předpisů správné laboratorní praxe Proužky ponechte ponořené v moči na 10-15 vteřin. Použitou kazetu I ostatní materál likvidujte dle platných předpisů USKLADNĚNÍ A STABILITA MultiDrugControl může být uložen za pokojové teploty, nebo v chladničce (2 30 C) v originální neporušené obálce. Test nesmí přejít mrazem Nepoužívajte po datu expirace, uvedeném na obálce. ODBĚR A PŘÍPRAVA VZORKU Moč musí být odebrána do čisté suché nádobky.moč pro toxikologické vyšetření může být odebrána kdykoliv během dne Vzorky moče se zákalem se doporučuje zcentrifugovat nebo nechat ustát a pro test použít čirou moč. Nejlepší je použít pro test čerstvou moč Za pokojové teploty nesmí moč stát déle než 2 hodiny,v chladničce může být uložena 48 hodin (2-8 C) před testem. DODANÝ MATERIAL Testovací kazeta v uzavřené obálce MATERIAL doporučený, ale nedodaný Nádobka pro odběr moči Návod k použití Časoměřič (minutky) Barevná tabulke pro vyhodnocení testů validity 2 / 6
Ponožte proužky do vzorku moči na 10-15 vteřin PROVEDENÍ TESTU PŘÍPRAVA : Vzorky moče,( případně kontrolní materiály) a testovací kazetu (v uzavřené obálce! ) je třeba před provedením testu vytemperovat na pokojovou teplotu ( 15-30 C) = přibližně 20 min. VLASTNÍ POSTUP TESTU: 1. Vyjměte testovací kazetu z obálky a použijte co nejdříve. Odstraňte víčko, kryjící proužky membrány. Ponořte proužky kolmo do vzorku moče až po označení linkou (ne nad šipky!) na 10-15 sekund. 2. Nasaďte víčko zpět a kazetu položte na rovnou nesavou suchou podložku. Spusťte minutky a vyčkejte, až se vytvoří barevná linie ve výsledkovém okně. 3. Mezi 3.-5. minutou vyhodnoťte nejprve testy validity/ falšování vzorku pomocí barevné tabulky. Pokud detekujete možné zfalšování, nemá význam odečítat drogové testy. Odeberte nový vzoreka otestujte novou kazetou. 4. Výsledek drogových testů odečtěte mezi 5-10. minutou. Pro ověření výsledku odečtěte test ještě v 10 minutě, ne však po delší době. INTERPRETACE VÝSLEDKŮ TESTŮ NA DROGY všechny pozitivní všechny negativní i světlejší linky=negativní neplatné, kde chybí linie C Negativní nález: barevné linie jsou zřetelné jak v oblasti kontroly C, tak v oblasti testu T. Negativní výsledek znamená, že koncentrace dané drogy v moči je nižší, než hodnota cut-off pro tuto specifickou drogu. Pozitivní výsledek: Ve výsledkovém okně je zřetelná pouze kontrolní linie C, v oblasti testu T zbarvení chybí Pozitivní znamená, že koncentrace drogy v moči je vyšší, nebo rovna hodnotě cut-off. Pozn: intenzita zbarvení linií se může lišit Neplatný nález: V oblasti testu C se neobjevila barevná linie. Výsledek testu je nehodnotitelný, bez ohledu na linie u označení T! 3 / 6
Test by měl být zopakován s novou kazetou a dostatečným množstvím vzorku. Pokud problém přetrvává, kontaktujte výrobce nebo distributora. INTERPRETACE FALŠOVÁNÍ VZORKU Pro porovnání barev používejte originální přiloženou tabulku! Semikvantitativní vyhodnocení proveďte vizuálně porovnáním barvy reakčních políček na straněa kazety s tabulkou. Zjistěte, zda zbarvení odpovídá normálnímu nálezu v moči, nebo je abnormální (vzorek zfalšován) Reprodukované barvy se mohou lišit od originálu. Pro porovnání použijde přiloženou tabulku! KONTROLA KVALITY Vnitřní kontrola kvality postupu je obsažena v testu: ve výsledkovém okně se musí objevit kontrolní linie C. Dokazuje, že byl dodržen správný postup, bylo aplikováno dostatečné množství vzorku, a že nasákavost membrány je adekvátní.. Doporučuje se provést externí kontrolu testu pomocí komerčních kontrolních materiálů podle správné laboratorní praxe. OMEZENÍ TESTU NA DROGY 1. Multi Dip-5 test dává pouze orientační výsledek. Pro potvrzení nálezu se doporučuje jiná laboratorní metoda. Konfirmační metodou je GC/MS nebo LC/MS-(plynová či kapalinová chromatografie s hmotovou spektroskopií).test je určena pouze pro lidskou moč. 2. Existuje možnost technických, nebo procedurálních chyb, či přítomnost substancí, které nebyly na seznamu interferujících látek a mohou způsobit falešný výsledek. 3. Bělicí prostředky, nebo kamenec mohou také způsobit falešně negativní výsledek nezávisle na analytické metodě. Pokud je prokázáno falšování ( úprava vzorku moče), doporučuje se provést test s nově odebraným vzorkem. 4. Pozitivní výsledek indikuje pouze přítomnost drogy/metabolitu a není ukazatelem míry intoxikace. 5. Negativní výsledek nemusí znamenat absolutní nepřítomnost drogy v moči. Negativní výsledek se získá, pokud přítomnost drogy leží pod uznávanou cut-off hodnotou testu. 6. Test neodliší drogu zneužitou od drogy podané k léčebným účelům 7. Pozitivní test může být též způsoben některými potravinami nebo potravinovými doplňky OMEZENÍ TESTŮ VALIDITY / FALŠOVÁNI VZORKU. Cílem je zachytit látky, které se nevyskytují v normální lidské moči a mohou ovlivnit výsledek testů na drogy. Ačkoliv jje jich řada, nemohou obsáhnout úplně všechny možnosti zfalšování vzorku moče a nemohou je tedy zcela vyloučit... Oxidanty/ PCC) Normální lidská moč je neobsahuje. Naopak vysoká koncentrace antioxidantů, nebo redukujících látek (jako kyselina askorbová) v moči může způsobit jejich falešně negativní výsledek. Specifická hmotnost ověřuje naředění vzorku, je-li nižší než cca 1,003. (Je nutno brát v úvahu možné onemocnění-např diabetici mají nižší hustotu moči. Vyšší než normální hodnoty bývají způsobeny zvýšeno hladinou bílkovin..ph ukazuje na úpravu moči okyselením, nebo naopak zalkalizováním. Normální rozmezí ph moče je 4 až 9. Nitrity: V normální zdravé lidské moči se nitrity nevyskytují. Vyjímkou může být bakterielní infekce močového traktu, nebo kontaminace vzorku. Glutaraldehyd není normální součástí moči. Pouze při některých metabolických poruchách se může objevit interference (ketoacidoza, hladovění, neléčený diabetes nebo vysoce proteinová dieta)...kreatinin je přítomen v lidské moči v přibližně konstantní koncentraci 20-350 mg/dl. Závisí na množství svalové hmoty. Jeho koncentrace v moči se může snížit pod normální hodnotu při abnormálním množství vypité vody, nebo diuretických čajů, onemocnění ledvin. Výrazné snížení znamená naředění moče, ( současně s nízkou hodnotou specifické hmotnosti). 4 / 6
ANALYTICKÁ CHARAKTERISTIKA TESTŮ Správnost Bylo provedeno paralelní porovnání MultiDrugControl Testu s nejběžněji používaným komerčním testem na drogy v moči. Bylo vyšetřeno 300vzorků převážně získaných od subjektů, používajících drogové screeningové testy. Podezřelé pozitivní nálezy byly ověřeny referenční metodou GC/MS.Výsledky jsou uvedeny v tabulkách: % shoda s komerčním testem MET500 MOR300 BZD300 THC50 BUP10** Pozitivní vzorky -shoda Negativní vzorkyshoda >99 % >99 % 90 % 98 % 88 % 80 % >99 % 97 % >99 % >99 % Výsledky celkem 87 % >99 % 94 % 99 % 97 % *NOTE: komerční kit nemá test BUP. Ten byl proto porovnáván s vlastním single testem. % shod a s referenční metodou GC/MS MET500 MOR300 BZD300 THC50 BUP10* Positivní vzorky >99 % >99 % 97 % 97 % 98 % Negativní vzorky 96 % 94 % 95 % 88 % 99 % Celkové výsledky 98 % 97 % 96 % 91 % 99 % *NOTE: BUP byl stanovonán LC/MS, ostatní GC/MS. Analytická senzitivita Moč bez obsahu jiné drogy byla použita pro rozpuštění uvedených drog na roztoky o koncentracích t ± 50% nad a pod cut-off and ± 25%nad a pod cut-off. Výsledky jsou uvedeny níže: Koncentrace drogy vzhledem ke Cut-off MET 500 MOR300 BZD300 THC50 BUP10 - + - + - + - + - + 0 % Cut-off 30 0 30 0 30 0 30 0 90 0-50 % Cut-off 30 0 30 0 30 0 30 0 90 0-25 % Cut-off 23 7 25 5 27 3 12 18 75 15 Cut-off 13 17 17 13 11 19 1 29 60 30 25 % Cut-off 8 22 1 29 5 25 1 29 31 59 50 % Cut-off 0 30 0 30 0 30 0 30 0 90 5 / 6
ZKŘÍŽENÁ REAKTIVITA Pro ověření zkřížených reakcí byla provedena studie s přidáním náledujících sloučenin do moči bez obsahu drog a se zvyšujícícn se obsahem sledovaných sloučenin a byly vyhodnocovány testy na Methamphetamine, Morphine, Benzodiazepine, Marihuanu and Buprenorphin. Níže uvedené sloučeniny neovlivnily výsledek MultiDrugControl testu žádným způsobem ani při koncentraci 100 µg/ml ( mg/litr).. LITERATURA 1. Tietz NW. Textbook of Clinical Chemistry. W.B. Saunders Company. 1986; 1735 2. Cody B, J.T., Specimen Adulteration in drug urinalysis. Forensic Sci. Rev., 1990, 2:63. 3. Tsai C, S.C. et.al., J. Anal. Toxicol. 1998; 22 (6): 474 4. Baselt RC. Disposition of Toxic Multi-Drugs and Chemicals in Man. 2nd Ed. Biomedical Publ., Davis, CA. 1982; 488 5. Hawks RL, CN Chiang. Urine Testing for Drugs of Abuse. National Institute for Drug Abuse (NIDA), Research Monograph 73, 1986 Aug.2010 BDP Revize čes.překladu 02-/2014Rj 6 / 6