Souhrn údajů o přípravku

Transkript

1 Příloha č. 3 k opravě rozhodnutí o prodloužení registrace sp.zn.:sukls111389/ NÁZEV PŘÍPRAVKU LEUCO-SCINT kit Kit pro přípravu radiofarmaka Souhrn údajů o přípravku LEUCO-SCINT kit je prášek na injekci, určený pro rekonstituci s technecistanem-( 99m Tc) sodným pro diagnostické použití. 2. KVALITATIVNÍ A KVANTITATIVNÍ SLOŽENÍ LEUCO-SCINT kit je kit pro přípravu radiofarmaka, jehož součástí není radioizotop. 1 lahvička obsahuje: Účinná látka: Exametazimum (d,l-hexamethylpropylene amine oxim, HM-PAO) 0,18 mg Úplný seznam pomocných látek viz bod LÉKOVÁ FORMA Kit pro přípravu radiofarmaka Bílý lyofilizát Kit obsahuje 3 lahvičky se sterilním, lyofilizovaným, apyrogenním neaktivním práškem na injekci, uzavřeným v dusíkové atmosféře. Každá lahvička je určena pro přípravu jedné značené dávky. Po označení se používá pro in vitro značení leukocytů techneciem-99m. Značené leukocyty jsou následně reinjikovány a je provedena scintigrafie zobrazení míst jejich lokalizace. Tento postup může být použit při detekci míst ložiskové infekce (např. abdominální absces), při pátrání po horečce neznámého původu a při hodnocení zánětlivých stavů, které nejsou spojeny s infekcí, jako je zánětlivé onemocnění střev. Kit dále obsahuje 3 lahvičky se sterilním, apyrogenním antikoagulačním roztokem (ACD-A roztok) a 3 lahvičky se sterilním, apyrogenním 6% hydroxyethylškrobem (Plasmasteril ) plasmaexpander. Kit kromě lahviček obsahuje, samolepicí štítky pro uvedení parametrů značeného přípravku a příbalovou informaci. Dále je ke kitu přiložen spotřební materiál pro izolaci leukocytů pro 3 pacienty. Pro každého pacienta je určeno: 5 ks 15 ml sterilních zkumavek s uzávěrem, 2 ks 50 ml sterilních zkumavek s uzávěrem a 2 ks sterilních pipet. 4. KLINICKÉ ÚDAJE 4.1 Diagnostické indikace Tento přípravek je určen pouze k diagnostickým účelům. Injekce Exametazimu značeného techneciem-99m (HM-PAO) je určena pro in vitro značení leukocytů techneciem-99m. Značené leukocyty jsou následně reinjikovány a je provedena scintigrafie kzobrazení míst jejich lokalizace. Tento postup může být použit pro detekci míst 1/11

2 ložiskové infekce (např. abdominální absces), při pátrání po horečce neznámého původu a při hodnocení zánětlivých stavů, které nejsou spojeny s infekcí, jako je zánětlivé onemocnění střev. 4.2 Dávkování a způsob podání Obsah lahvičky se rekonstituuje maximálně s 1,0-1,5 GBq sterilního roztoku technecistanu-( 99m Tc) sodného bez oxidačních látek a o objemu maximálně 1,5 ml. Způsob podávání: intravenózní injekce značených leukocytů po jejich in vitro značení. Dávka pro dospělé: pro in vivo lokalizaci techneciem-99m-označených leukocytů je doporučená dávka MBq i.v.. LEUCO-SCINT kit se nedoporučuje pro pacienty mladší 18 let, pokud přínos požadované informace nepřevýší riziko pocházející z radiační zátěže způsobené LEUCO-SCINTEM značeným techneciem-99m. 4.3 Kontraindikace Hypersenzitivita na léčivou látku nebo na kteroukoli pomocnou látku tohoto přípravku. 4.4 Zvláštní upozornění a opatření pro použití Radiofarmaka mohou používat pouze kvalifikované osoby spříslušným státním osvědčením pro používání a manipulaci s radionuklidy. Obsah lahvičky je určen pouze pro použití při přípravě LEUCO-SCINTU značeným techneciem- 99m a nesmí být podán přímo pacientovi bez předchozího značícího postupu. Používejte pouze eluát z generátoru technecia-99m, který byl eluován během posledních 24 hodin. Používejte pouze eluát získaný z generátoru méně než 2 hodiny před rekonstitucí. S radioaktivními přípravky se musí zacházet opatrně a příslušná bezpečnostní opatření by měla být dodržována k minimalizaci radiačního ozáření klinického personálu. Obsah kitu před přípravou není radioaktivní. Po přidání sterilní injekce technecistanu-( 99m Tc) sodného musí být použito adekvátní stínění pro finální přípravek. Složky kitu jsou sterilní a apyrogenní a je nutné striktně dodržovat předpisy pro aseptickou přípravu. 4.5 Interakce s jinými léčivými přípravky a jiné formy interakce Lékové interakce nejsou dosud známé. 4.6 Fertilita, těhotenství a kojení Ženy ve fertilním věku Je-li nutné podat radioaktivní přípravky ženám ve fertilním věku, je třeba vždy pátrat po informaci, zda není žena těhotná. Každá žena, které vynechala menstruace, by měla být považována za těhotnou, dokud se neprokáže opak. V případě nejistoty je důležité snížit radiační zátěž na minimum vzhledem k dosažení požadované klinické informace. Vždy by měly být zvážené alternativní techniky bez ionizujícího záření. Těhotenství 2/11

3 Radionuklidová vyšetření prováděná u těhotných žen, také zahrnují radiační dávku pro plod. Pouze naléhavá vyšetřování by proto měla být provedena během těhotenství, kdy pravděpodobný přínos mnohem převýší riziko, vzniklé pro matku a plod. Kojení Před podáním radioaktivního přípravku kojící matce, je třeba zvážit, zda vyšetření by mohlo být oddálené do doby, kým matka přestane kojit a zda byl udělán nejvhodnější výběr radiofarmaka, s přihlédnutím k sekreci radioaktivity do mateřského mléka. Pokud podání je považováno za nezbytné, kojení by mělo být přerušeno na 12 hodin a odsáté mléko zlikvidováno. Kojení může být obnovené v případě, že hladina v mléce nezpůsobí radiační dávku pro dítě větší než 1mSv. 4.7 Účinky na schopnost řídit a obsluhovat stroje LEUCO-SCINT kit nemá žádný nebo má zanedbatelný vliv na schopnost řídit nebo obsluhovat stroje. 4.8 Nežádoucí účinky Jen velmi málo případů mírné hypersenzitivity doložené rozvojem erytémové kopřivky (vyrážky) bylo hlášeno po přímé intravenózní injekce rekonstituovaného přípravku. Jen velmi málo zpráv bylo rovněž obdrženo o přecitlivělosti, eventuelně anafylaktického rázu, po podání techneciem-99m - značených leukocytů připravených za použití exametazimu značeného techneciem-99m (HM-PAO). Vystavení každého pacienta ionizujícímu záření musí být opodstatněné na základě jeho pravděpodobného přínosu. Podaná aktivita musí být taková, aby výsledná dávka záření byla co nejnižší, jak lze rozumně dosáhnout s ohledem na potřebu získat požadovaný diagnostický výsledek. Vystavení ionizujícímu záření je spojeno s indukcí rakoviny a možným rozvojem dědičných vad. Pro diagnostická nukleární medicínská vyšetřování, současné důkazy nasvědčují tomu, že tyto nežádoucí účinky se vyskytují s nízkou frekvencí vzhledem k nízkým radiačním dávkám. Efektivní dávkový ekvivalent z radiační dávky většiny diagnostických vyšetření je nižší než 20 msv. Vyšší dávky mohou být zdůvodněny v některých klinických případech. 4.9 Předávkování Žádný případ předávkování nebyl hlášen. V případě předávkování radiací by mělo být podporováno časté močení a vylučování stolice, aby se minimalizovala dávka absorbovaná pacientem. V pokusech s LEUCO-SCINT kit přípravkem na potkanech žádné známky svědčící o toxicitě nebyly pozorovány při dávce 700 x maximální dávky pro člověka. 5. FARMAKOLOGICKÉ VLASTNOSTI 5.1 Farmakodynamické vlastnosti Farmakoterapeutická skupina: Diagnostická radiofarmaka, detekce zánětu a infekce, technecium-( 99m Tc) exametazim, pro značení buněk ATC kód: V09HA02 V chemických koncentracích a aktivitách používaných pro diagnostické vyšetření technecium- ( 99m Tc) exametazim (HM-PAO) nevykazuje žádné farmakodynamické účinky. 5.2 Farmakokinetické vlastnosti 3/11

4 leukocyty značené techneciem-99m: Na základě in vivo distribuce, velmi nízkého plicního a jaterního vychytávání, možno usoudit, že značené leukocyty jsou stále funkční. Po reinjekci leukocytů značených techneciem-99m aktivita v cirkulujících granulocytech udaná jako procento aktivity značených granulocytů za 40 minut po injekci měla průměr 37% (rozmezí 10-47%). Během první hodiny po injekci leukocytů značených techneciem-99m, aktivita je vidět v plících, játrech, slezině, krevním řečišti, kostní dřeni a močovém měchýři. Ledviny (parenchym a/ nebo ledvinová pánvička) a žlučník mohou být také vidět. Během prvních 1-6 hodin, technecium-99m je vidět v střevě. 24 hodin po injekci je vidět značná aktivita v tlustém střevě. Obvyklé oblasti viditelné na dřívějších skenech jsou stále viditelné. 5.3 Předklinické údaje vztahující se k bezpečnosti Neklinické údaje získané na základě konvenčních farmakologických studií bezpečnosti, toxicity po opakovaném podávání, genotoxicity, hodnocení kancerogenního potenciálu a reprodukční toxicity neodhalily žádné zvláštní riziko pro člověka. Účinky v neklinických studiích byly pozorovány pouze po expozicích dostatečně převyšujících maximální expozici u člověka a svědčí o malém významu při klinickém použití. Nežádoucí účinky nebyly zaznamenány v klinických studiích, ale pozorované na zvířatech při expozičních úrovních podobných klinickým expozičním úrovním a smožným významem pro klinické použití, byly následující: Patologická vyšetření v průběhu preklinických studií neodhalila patologické léze v orgánech laboratorních zvířat. Mutagenita, teratogenita nebo karcinogenita přípravku nebyly hlášeny v příslušné literatuře. 6. FARMACEUTICKÉ ÚDAJE 6.1 Seznam pomocných látek Dihydrát chloridu cínatého (II) Dekahydrát difosforečnanu sodného Pomocné roztoky pro separaci leukocytů: ACD-A roztok (antikoagulační roztok) složení: dihydrát natrium citrátu pro injekci monohydrát kyseliny citronové glukóza pro injekci voda pro injekci 6% Hydroxyethylškrob složení: hydroxyethylškrob chlorid sodný voda pro injekci Seznam pomocného materiálu pro izolaci leukocytů - na jedno použití/jeden pacient 50 ml sterilní zkumavka s uzávěrem 2 ks 15 ml sterilní zkumavka s uzávěrem 5 ks Sterilní pipeta 2 ks 4/11

5 6.2 Inkompatibility Postup značení využívající sterilní injekci technecistanu-( 99m Tc) sodného (dle Ph. Eur.) závisí na množství cínatých iontů v redukované formě. Proto není dovoleno používat sterilní injekční technecistan-( 99m Tc) sodný obsahující oxidační látky. 6.3 Doba použitelnosti Doba použitelnosti kitu je 1 rok. Značený přípravek by měl být použitý do 30 minut po označení. V průběhu této doby celkové množství technecium-( 99m Tc) exametazimu (HM-PAO) nesmí být menší než 80%. Značené leukocyty musí být reinjikovány neprodleně, ale ne déle než 30 minut po přípravě. Značení by mělo být prováděno v uzavřeném systému. 6.4 Zvláštní opatření pro uchovávání Kit má být uchováván při teplotě vrozmezí 2-25 o C. Uchovávejte lahvičky v krabičce, aby byl přípravek chráněn před světlem. Po rekonstituci LEUCO-SCINT má být uchováván při teplotě v rozmezí 2 25 o C a chráněn před světlem. Značené leukocyty mají být uchovávány při teplotě mezi o C. Značený přípravek má být uchováván v souladu s národními předpisy pro radioaktivní látky. Tento přípravek se nesmí podávat přímo pacientovi. Obsah lahvičky je určen pouze pro použití při přípravě radioaktivní techneciem-99m označené injekce, pomocí postupu popsaného v bodě 12 souhrnu údajů o přípravku. Radiofarmakum by mělo být používáno pouze osobami, které jsou kvalifikovány svým vzděláním a praxí v bezpečném používání a manipulaci s radionuklidy, jejichž zkušenosti a odborná příprava byly schváleny příslušnou vládní agenturou oprávněnou vydávat licence na používání radionuklidů. 6.5 Druh obalu a velikost balení Bezbarvá skleněná, sterilní, 6 ml lahvička z borosilikátového skla, typ I, Ph.Eur., uzavřená sterilní gumovou zátkou a plastiko-hliníkovým uzávěrem stočeným pod okraj. Vnější obal pro skleněné lahvičky tvoří papírová krabička a tvarovaná papírová výplň. Spotřební materiál je uložen v papírové krabici a pro každého jednotlivého pacienta ještě v jedné krabičce. Kit obsahuje: 3 lahvičky s Exametazimem (HM-PAO), každá pro přípravu jedné dávky 3 lahvičky s 10 ml ACD A roztoku (antikoagulační roztok) 3 lahvičky s 14 ml 6% Hydroxyethylškrob (plasmaexpander) Pomocný materiál na jedno použití pro tři pacienty. 6.6 Zvláštní opatření pro likvidaci použitého léčivého přípravku nebo odpadu pocházejícího z tohoto přípravku a pro další zacházení s ním Všechen nepoužitý přípravek a odpad musí být zlikvidovány v souladu s místními požadavky pro radioaktivní materiály. 7. DRŽITEL ROZHODNUTÍ O REGISTRACI MEDI-RADIOPHARMA LTD. 5/11

6 2030, ÉRD, Szamos u Maďarsko 8. REGISTRAČNÍ ČÍSLO Česká republika: 88/1121/94-C 9. DATUM PRVNÍ REGISTRACE / PRODLOUŽENÍ REGISTRACE Datum první registrace: 03. Duben 1994 Datum posledního prodloužení: DATUM REVIZE TEXTU DOZIMETRIE Technecium-99m emituje záření gama o energii 140 kev a s poločasem rozpadu 6 hodin se přeměňuje na technecium-99, které lze považovat za kvazi-stabilní. Kategorie dospělí a děti Odhadovaná absorbovaná radiační dávka po podání injekce LEUCO-SCINTu značeného techneciem-99m Absorbovaná dávka záření Cílový orgán Dospělý 15 let 10 let 5 let 1 rok novorozenec Nadledviny 9,86E-03 1,22E-02 1,75E-02 2,36E-02 3,73E-02 7,46E-02 Mozek 2,09E-03 2,67E-03 3,94E-03 6,25E-03 1,11E-02 2,53E-02 Prsa 2,31E-03 2,83E-03 4,54E-03 6,99E-03 1,21E-02 2,75E-02 Žlučník 9,50E-03 1,14E-02 1,71E-02 2,70E-02 3,88E-02 7,90E-02 Dolní část 4,10E-03 5,28E-03 8,07E-03 1,10E-02 1,80E-02 3,40E-02 tlustého střeva Horní část 5,21E-03 6,56E-03 9,52E-03 1,57E-02 2,45E-02 4,89E-02 tlustého střeva Tenké 5,04E-03 6,24E-03 1,48E-02 1,40E-02 2,23E-02 4,54E-02 střevo Žaludek 8,55E-03 1,01E-02 1,03E-02 2,08E-02 3,24E-02 6,42E-02 Srdce 5,37E-03 6,54E-03 9,46E-03 1,34E-02 2,24E-02 4,45E-02 Ledviny 9,50E-03 1,16E-02 1,71E-02 2,39E-02 3,63E-02 7,00E-02 Játra 2,40E-02 3,08E-02 4,52E-02 6,31E-02 1,13E-01 2,41E-01 Plíce 4,98E-03 6,36E-03 8,89E-03 1,29E-02 2,16E-02 4,41E-02 Svaly 3,43E-03 4,30E-03 6,26E-03 9,24E-03 1,58E-02 3,44E-02 Vaječníky 3,98E-03 4,96E-03 7,08E-03 1,00E-02 1,51E-02 2,95E-02 Pankreas 1,42E-02 1,73E-02 2,46E-02 3,54E-02 5,44E-02 1,04E-01 Červená 1,85E-02 2,09E-02 3,30E-02 6,09E-02 1,21E-01 3,96E-01 kostní dřeň Povrchy 1,41E-02 1,58E-02 2,52E-02 4,08E-02 6,01E-02 1,18E-01 kostí Kůže 1,86E-03 2,25E-03 3,58E-03 5,71E-03 1,03E-02 2,40E-02 Slezina 1,57E-01 2,22E-01 3,34E-01 5,12E-01 9,11E-01 2,36E+00 6/11

7 Varlata 1,73E-03 2,25E-03 3,43E-03 5,43E-03 9,50E-03 2,18E-02 Brzlík 2,99E-03 3,64E-03 5,10E-03 7,58E-03 1,30E-02 2,77E-02 Štítná žláza 2,40E-03 3,00E-03 4,53E-03 7,16E-03 1,24E-02 2,74E-02 Stěna 2,80E-03 3,81E-03 5,71E-03 8,44E-03 1,40E-02 2,84E-02 močového měchýře Děloha 3,36E-03 4,18E-03 8,22E-03 1,20E-02 1,94E-02 2,90E-02 Tělo 5,03E-03 6,23E-03 9,43E-03 1,42E-02 2,41E-02 5,38E-02 celkem EDE msv/mbq) 1,75E-02 2,31E-02 5,36E-02 5,36E-02 9,41E-02 2,40E-01 Výpočty dávek byly provedeny za použití standardní MIRD metody (MIRD prospekt č.1, Společnost nukleární medicíny, 1976). Efektivní dávkové ekvivalenty (EDE) byly vypočteny v souladu s ICRP 53 (Ann. ICRP 18 (1-4), 1988). Kategorie těhotenství Odhadovaná absorbovaná radiační dávka po podání injekce LEUCO-SCINTu značeného techneciem-99m Absorbovaná dávka záření Cílový orgán Žena 3 měsíce 6 měsíců 9 měsíců Nadledviny 1,20E-02 1,20E-02 1,20E-02 1,20E-02 Mozek 2,55E-03 2,57E-03 2,42E-03 2,43E-03 Prsa 2,77E-03 2,78E-03 2,84E-03 2,84E-03 Žlučník 1,13E-02 1,11E-02 1,13E-02 1,11E-03 Dolní část 4,83E-03 4,55E-03 3,26E-03 3,00E-03 tlustého střeva Horní část 6,16E-03 5,70E-03 3,69E-03 2,69E-03 tlustého střeva Tenké střevo 5,71E-03 5,60E-03 3,33E-03 3,23E-03 Žaludek 9,84E-03 9,60E-03 6,09E-03 1,15E-02 Srdce 6,42E-03 6,42E-03 1,01E-02 1,00E-02 Ledviny 1,12E-02 1,12E-02 6,23E-03 6,23E-03 Játra 3,05E-02 3,04E-02 1,10E-02 1,09E-02 Plíce 6,29E-03 6,30E-03 3,05E-02 3,05E-02 Svaly 4,08E-03 4,05E-03 5,90E-03 5,92E-03 Vaječníky 4,41E-03 4,03E-03 3,94E-03 3,74E-03 Pankreas 1,71E-02 1,70E-03 4,88E-03 4,32E-03 Červená kostní 1,72E-03 1,72E-03 1,69E-02 1,72E-03 dřeň Povrch kostí 1,38E-02 1,37E-02 1,37E-02 1,37E-02 Kůže 2,19E-03 2,19E-03 2,14E-03 2,14E-03 Sletina 1,86E-01 1,86E-01 1,86E-01 1,86E-01 Varlata Brzlík 3,48E-03 3,50E-03 3,35E-03 3,35E-03 Štítná žláza 2,58E-03 2,60E-03 2,57E-03 2,56E-03 Stěna močového 3,35E-03 2,91E-03 2,12E-03 2,09E-03 měchýře Děloha 3,72E-03 2,87E-03 2,96E-03 3,01E-03 7/11

8 Plod 2,80E-03 2,83E-03 2,68E-03 Placenta 2,75E-03 2,26E-03 Tělo celkem 5,93E-03 5,90E-03 5,68E-03 5,62E-03 EDE (msv/mbq) 2,03E-02 2,02E-02 2,03E-02 2,02E-02 Výpočty dávek byly provedeny za použití standardního MIRD metody (MIRD prospekt č.1, Společnost nukleární medicíny, 1976). Efektivní dávkové ekvivalenty (EDE) byly vypočteny v souladu s ICRP 53 (Ann. ICRP 18 (1-4), 1988). 12. NÁVOD PRO PŘÍPRAVU RADIOFARMAKA Značící reakce technecia-99m, která se podílí na přípravě techneciem-99m značené injekci exametazimu, závisí na množství cínu přítomného ve dvojmocném redukovaném stavu. Jakýkoliv oxidant přítomný v použitém roztoku technecistanu-( 99m Tc) sodného, může nepříznivě ovlivnit kvalitu přípravku. Technecistan-( 99m Tc) sodný obsahující oxidanty nemá být použitý k přípravě značeného přípravku. Pro splnění posledního požadavku, generátor musí být eluován v průběhu posledních 24 hodin před získáním eluátu pro rekonstituci LEUCO-SCINT kit. Jako eluční činidlo musí být použita injekce chloridu sodného (ceur.pharm.). Nepoužívejte chlorid sodný s bakteriostatickou přísadou jako eluční činidlo pro získání injekce s technecistanem-( 99m Tc) sodným, protože zvýši oxidaci přípravku a negativně ovlivní biologickou distribuci LEUCO- SCINTu. Obsah lahvičky LEUCO-SCINT kit je sterilní a apyrogenní. Lahvička neobsahuje žádné konzervační bakteriostatické látky. Je nezbytné, aby uživatel pečlivě postupoval podle návodu a dodržoval přísně aseptický postup při přípravě radiofarmaka. Stanovení radiochemické čistoty musí být provedeno před podáním pacientovi. Tři potenciální radiochemické nečistoty mohou být přítomné v připravené injekci lipofilního techneciem-99m značeného exametazimového (HM-PAO) komplexu. Postup pro separaci a značení leukocytů: Poznámka: Sterilní techniky musí být používány v průběhu celého postupu. Uživatel by měl nosit nepropustné rukavice při veškeré manipulaci s přípravkem. 1. Odeberte 2 ml ACD-A roztoku a 3 ml 6% hydroxyethylškrobu do každé ze čtyř sterilních 20 ml stříkaček z umělé hmoty. 2. Do každé stříkačky natáhněte 15 ml krve pacienta a jemně promíchejte převracením. 3. Krev přeneste do sterilních 50 ml zkumavek a nechte stát při laboratorní teplotě minut, aby erytrocyty sedimentovali. 4. Poté, co erytrocyty sedimentují zhruba na poloviční objem původního množství krve, opatrně odeberte plazmu bohatou na leukocyty a trombocyty do sterilních zkumavek a centrifugujte 10 minut při 150g. 5. Pokud jste plazmu centrifugovali ve dvou a více zkumavkách, odeberte plazmu bohatou na trombocyty a ml uchovejte pro bod 8 a suspenze leukocytů spojte v jedné zkumavce a opět centrifugujte 10 minut při 150 g. 6. Zatím, co centrifugujete zkumavku se suspenzí leukocytů, přidejte do lahvičky označené HM-PAO 1,5 ml injekce technecistanu-( 99m Tc) sodného o aktivitě MBq. Obsah jemně promíchejte do rozpuštění lyofilizátu. (eluát nesmí být starší 2 hodin a předchozí eluce generátoru byla provedena během posledních 24 hodin). 7. Odsajte supernatant ze suspenze leukocytů tak, aby peleta leukocytů zůstala téměř suchá. Přidejte k ní 1 ml technecium-( 99m Tc) exametazimu (HM-PAO) o aktivitě MBq. 8/11

9 Opatrně promíchejte a poté inkubujte 10 minut při laboratorní teplotě za občasného promíchání. 8. Během inkubace leukocytů, centrifugujte plazmu z bodu 5 při 2000g 5 minut pro získání plazmy bez buněk. 9. K suspenzi značených leukocytů přidejte 3 5 ml plazmy bez buněk, promíchejte a centrifugujte 10 minut při 150 g. 10. Supernatant přeneste do jiné zkumavky. 11. K značené suspenzi leukocytů přidejte 3 5 ml plazmy bez buněk a promíchejte. 12. Změřte aktivitu lahvičky a zkumavky a vypočítejte účinnost značení. 13. Značené leukocyty je třeba reinjikovat neprodleně, ale ne déle než 30 minut po přípravě. Kontrola kvality 1. Viabilita separovaných leukocytů. 2. Stanovení radiochemické čistoty technecium-( 99m Tc) exametazimu (HM-PAO) metodou I nebo II. Viabilita Viabilitu leukocytů lze stanovit pomocí Trypanové modři následně: směs 0,2% roztoku trypanové modři a 4,25% roztoku chloridu sodného v poměru 4:1 se přidá k vzorku suspenze leukocytů. Po mírném promíchání se část přenese na Bürkerovou komůrku. Barevní roztok pasivně přechází přes porušenou buněčnou membránu leukocytů a zbarví je modře oproti nativním živým buňkám. Viabilita buněk je vyjádřena poměrem tmavě modré porušené buňky/nativní živé buňky. Pomocí této metody více než 90% buněk musí být v živém stavu. Stanovení radiochemické čistoty technecium-( 99m Tc) exametazimu (HM-PAO) Metoda I. Radiochemická čistota může být kontrolována za použití organických rozpouštědel extrakční metodou. Procento lipofilního LEUCO-SCINTu značeného techneciem-99m (HM-PAO) může být stanoveno následně: Materiál a zařízení 1. Roztok chloridu sodného (9,0g/l) 2. Chloroform 3. Mixer (Vortex) 4. Vhodný měřič aktivity Postup Do zkumavky, která obsahuje 3,0 ml chloroformu a 2,9 ml izotonického roztoku chloridu sodného přidejte 0,1 ml technecium-( 99m Tc) exametazimu (HM-PAO) a uzavřete. Obsah zkumavky intenzívně míchejte po dobu 1 minuty (např. na vortexu). Poté zkumavku ponechte 1 2 minuty v klidu pro separaci fází. Kvantitativně přeneste horní vrstvu do jiné zkumavky. Ve vhodném přístroji změřte aktivitu obou fází (chloroformovou a vodní, každou zvlášť). Lipofilní komplex technecium-( 99m Tc) exametazimu (HM-PAO) je rozpuštěn v chloroformové frakci a nečistoty v izotonickém roztoku chloridu sodného. Výpočet radiochemické čistoty technecium-( 99m Tc) exametazimu (HM-PAO) je daný vztahem: aktivita chloroformové frakce % lipofilního technecium-( 99m Tc) exametazimu (HM-PAO) = x 100 9/11

10 aktivita obou frakcí Radiochemická čistota by neměla být nižší než 80% během 30 minut po přípravě. Metoda II. Stanovení radiochemické čistoty podle cph.eur.. Tři potenciální radiochemické nečistoty mohou být přítomny v připravované exametazimové injekci. Jedná se o sekundární komplex exametazimu s techneciem-99m, volný technecistan a redukované-hydrolyzované technecium-99m. Kombinace dvou chromatografických systémů je nezbytná pro stanovení radiochemické čistoty injekce. Materiál a zařízení 1. roztok chloridu sodného (9,0g/l) 2. MEK (Butan-2-on) 3. Deska s vrstvou silikagelu pro TLC R, použije se deska ze skleněných vláken (2x20 cm) 4. vyvíjecí komory 5. vhodné měřící zařízení Interpretace chromatogramů Systém 1 (TLC:butan-2-on (MEK)) - Sekundární komplex technecium-( 99m Tc) exametazimu a redukovanéhydrolyzované technecium zůstávají na startu. - Lipofilní komplex technecium-( 99m Tc) exametazimu a technecistan migrují na Rf 0,8 1,0. Systém 2 (TLC:roztok chloridu sodného (9,0 g/l)) - Lipofilní komplex technecium-( 99m Tc) exametazimu, sekundární komplex technecium-( 99m Tc) exametazimu a redukované-hydrolyzované technecium zůstávají na startu. - Technecistan migruje na Rf 0,8 1,0. Postup stanovení 1. Připravte si 2 chromatografické komory. Do jedné nalijte MEK a do druhé roztok chloridu sodného do výšky asi 1,0 cm.. 2. Na start chromatogramů, který je 3,0 cm od spodního okraje naneste 5 µl vzorku LEUCO- SCINTu značeného techneciem-99m (HM-PAO) a chromatogramy ihned umístěte do chromatografických komor a nechte vzestupně vyvíjet 3. Chromatogramy nechte vyvíjet do vzdálenosti asi 15 cm, vyjměte je, označte čelo, proužky vysušte a rozložení radioaktivity změřte ve vhodném přístroji. Vypočítejte % aktivity sekundárního komplexu exametazimu značeného techneciem-99m a redukovaného-hydrolyzovaného technecia-99m ze systému 1 (A%). Procento (%) aktivity technecistanu vypočítejte ze systému 2 (B%). Radiochemická čistota vyjádřená jako procento lipofilního komplexu exametazimu značeného techneciem-99m je dána vztahem: 10/11

11 100-(A%+B%) kde: A% představuje množství sekundárního komplexu exametazimu značeného techneciem-99m a redukovaného-hydrolyzovaného technecia-99m B% představuje množství technecistanu Radiochemická čistota by měla být nejméně 80% pokud vzorky byli odebrány a analyzovány do 30 minut po rekonstituci kitu. Výpočet účinnosti značení leukocytů techneciem-99m je daný vztahem: Aktivita suspenze leukocytů % účinnosti značení leukocytů techneciem-99m = x 100 Aktivita suspenze a supernatantu Účinnost značení suspenze leukocytů techneciem-99m je 52 ± 4,1 %. 11/11