Centrum imunologie a mikrobiologie, Zdravotní ústav Ústí nad Labem, ČR. XIV. ČASOMIL, , Martinice u Březnice

Transkript

1 Význam stanovení protilátek proti aquaporinu-4 Vlastimil Král a kol. Centrum imunologie a mikrobiologie, Zdravotní ústav Ústí nad Labem, ČR XIV. ČASOMIL, , Martinice u Březnice

2 Autoprotilátky definice, charakteristika Autoprotilátky: velmi heterogenní skupina protilátek, pokud jde o jejich specifitu, vznik, účinek a klinický význam namířeny proti endogenním Ag (autoag proteiny, glykoproteiny, nukleové kyseliny, fosfolipidy, glykosfingolipidy indukovány různými mechanizmy (patologické autoprotilátky x přirozené autoprotilátky) Mnoho autoprotilátek vzniká specificky či především u určitých onemocnění, mají velký klinický význam (bez ohledu na jejich případnou patogenitu!).

3 Přirozené (auto)protilátky - NAA S.V. Boyden, koncept NAA, v té době neaktuální v kontextu klonálně selekční teorie M. F. Burneta (řešení pro fenomén tolerance a autoimunity) P. Grabar: autoprotilátky /NAA jako transportní systém pro metabolický odpad, stárnoucí buňky 90. léta, NAA jako autoreaktivní sérové protilátky, které pro svůj vznik nevyžadují antigenní stimul (A. Coutinho, Y.Shoenfeld, G. Dighiero) Většina přirozených protilátek má charakter NAA

4 Specifita NAA Jaderné struktury buněk (Ro/La, centroméra, histony, DNA) Mitochondrie Antiimunoglobuliny ( RF, idiotypová síť) Cytoskelet (actin, tubulin, myosin, ) Štítná žláza (TPO) Cardiolipin (PL?) ANCA AECA (IgG NAA) Mitotický aparát buňky (MSA-2, ) další struktury

5 Klinický význam AutoAb Stanovení autoprotilátek může pomoci či být nezbytné pro diagnostiku, diferenciální diagnostiku, prognózování a/nebo monitorování autoimunitních onemocnění

6 Kazuistika 1/1 CIS/susp. RS? Muž, *1971, nevýznamná OA první neurologické obtíže 12/01 - zánět zrakového nervu pravého oka, přeléčen inf. Solumedrolem, dále Prednison (l0 mg/d), během několika měsíců kompletní úprava klinicky izolovaný syndrom (CIS) MRI mozku a LP pro suspekci na demyelinizační onemocnění v.s. typu RS. 5/02 provedena MRI - bpn, 3/02 LP- IEF bez OCB (oligo IgG neg.) nízká P dalšího relapsu, nesplněna kritéria dg. RS (neg. rezonance a neg. likvor) 09/02 z plného zdraví recidiva zánětu zrakového nervu na levém oku - pulz SM, kompletní úprava. 07/04 zánět zrakového nervu levého oka, hospitalizace, léčen SM, stav se upravil. Dále bez neurologických obtíží.

7 Kazuistika 1/2 Neuromyelitis optica / Devicův sy 02/08 lehká viróza asi od pozoroval zvýšenou citlivost PDK a jinou citlivost na teplo na PDK, kolísavě udává i zvýšenou citlivost na hrudníku a zádech (asi v pásu Th 3-6). Akutně MRI Th/L míchy (3/08) - zde protáhlé ložisko v rozsahu Th1-Th3. Th3. Pulz SM (4 gr), pak Prednison od 40 mg, od pol. 3/08 nasazen Cellcept (mykofenolát mofetil)- postupně dávka 2x1000 mg. pacient (i bez vyšetření NMO-IgG) naplnil Wingerchukova revidovaná kritéria: obě absolutní (zánět ON a míchy) a 2/3 vedlejších: normální MRI mozku na počátku choroby a míšní léze 3 a více obratlových segmentů na MRI míchy. Provedeno vyšetření NMO-IgG/AQP4-IgG a verifikována dg. NMO v r stejný pacient s izolovaným zánětem zrakového nervu, normální rezonancí a/nebo bez OCB v likvoru po první atace ON, odběr na NMO-IgG/AQP4-IgG ihned. Odlišení RS a NMO má zásadní význam pro nasazení terapie, která je odlišná.

8 Neuromyelitis optica (NMO) Devicův sy zánětlivé (autoimunitní) onemocnění CNS méně než 1% demyelinizačních onemocnění u kavkazské populace převaha ženy 3:1, výskyt i v dětském věku optická neuritida uni- nebo bilaterální myelitida (lehké senzitivní příznaky až obraz těžké kvadruparézy s respiračním selháním) relaps remitentní průběh (15-23% monofazický) terapie: plazmaferéza, cyklofosfamid, Rituximab

9 Imunopatologický zánět u demyelinizačních onemocnění CNS RS Tc Imunosuprese/imunomodulace (IFNb, Copaxone) Devicův sy IgG, aktivace C Imunosuprese, plazmaferéza, Rituximab

10 AQP4 tvoří hlavní transportní kanál H 2 O v CNS. Kontroluje pohyb H 2 O mezi mozkem, likvorem a krví. Matthew J. Tait, Trends Neurosci. 2008

11 Detekce anti-nmo protilátek - NIF Cerebellar cortex Cerebellum Cerebellum

12 NMO-IgG jako specifický marker NMO

13 Antigenní terč Aquaporin-4 (AQP4) Lennon et al.: IgG marker of optic-spinal multiple sclerosis binds to the aquaporin-4 water channel. JEM, 2005

14 Předpokládaný patogenetický význam protilátek proti AQP4 u NMO NMO-IgG1 aquaporin 4 aktivace komplementu buňky zánětu, oxidativní stres produkce cytokinů porušení HEB, edém, nekróza

15 Neuromyelitis optica - NMO/Devicův sy - revidovaná Wingerchukova kritéria ria (2006) Absolutní: optická neuritida akutní myelitida Podpůrná kritéria: nález na MRI mozku na počátku onemocnění nenaplňuje kritéria pro RS na MRI míchy v T2 vážených obrazech s průkazem longitudinálně extenzivní transverzální myelitidy (léze o délce 3 a více obratlových segmentů) pozitivní NMO-Ig/AQP4-IgG IgG v séru

16 Text

17 Stanovení NMO-IgG/AQP4-IgG u 105 pacientů s recidivujícími ON a/nebo myelitidami testována přítomnost NMO-IgG /AQP4-IgG v séru. NIF - Neurology Mosaic 17 (Euroimmun, Lübeck, D) 5 BIOCHIPs (cerebellum, cerebrum, optický nerv, AQP4 transfekovaná a netransfekovaná linie HEK (Cell Based Assay)

18 AQP4 IgG (Cell Based Assay, NIF) (pozitivní a negativní reakce na AQP4 transfekované linii HEK buněk) NMO-IgG průkaz na tkáni (optický nerv, mozeček) afinita k Virchow-Robinově prostorům senzitivita 73% specifita 91% AQP4-IgG AQP4 transfekované HEK buňky senzitivita 91% specifita 100%

19 NMO IgG (NIF) + anti-aqp4 (CBA)

20 Výsledky 13/105 testovaných sér pacientů bylo pozitivních na AQP4-IgG (12 na NMO-IgG) 92 negativních pacientů je sledováno pro CIS 92 negativních pacientů je sledováno pro CIS (n=15), RS (n=67) nebo autoimunitní onemocnění CNS nesplňující kritéria RS ani NMO (n=10)

21 Charakteristika AQP4-IgG pozitivních pacientů průměrný věk v počátku onemocnění 42 let, trvání choroby 9,9 let (SD±7,0 let), relaps rate 2,7 (SD±3,2); EDSS 4,1 (SD±2,7) NMO n=9 high risk n=4 gender F/M OCB positive/ negative brain MRI normal/ non specific lesions other autoimmune disease 7/2 3/6 5/3 thyreoiditis, rheum.artritis myasthenia gravis 4/0 2/2 2/2 SLE, SjS, thyreoiditis n=13 11/2 5/8 7/5 8

22 NMO SOP NMO/LETM - autoprotilátky 66.7% NMO-IgG/AQP4-IgG 43.8% ANA 15,7% SS-A/Ro Systémové autoprotilátky přítomny u séropozitivních NMO

23 Ab proti AQP4 u pacientů s neuro SLE a prim. SjS (Wandinger K.-P. et al., Arthritis and Rheumatism, 2010, in press) Význam stanovení AQP4-IgG u pacientů se SLE a SjS s neurologickými příznaky (LETM, ON,..)

24 Souhrn NMO není raritou v ČR (..a v SR?) Kombinace CBA a NIF představují spolehlivou metodu pro detekci NMO-IgG/AQP4-IgG v séru NMO je velmi pravděpodobně demyelinizační onemocnění odlišné od RS (není tedy jejím podtypem) NMO-IgG/AQP4-IgG mají prognostický význam u recidivujících optických neuritid a longitudinálně extenzivní myelitidy Diagnostika anti-aqp4-igg u pacientů se SLE a prim. SjS s neurologickými příznaky (LETM, ON)

25 Spolupracovníci, poděkování CIM ZÚ Ústí n.l. Jitka Pohořská Ivana Stiborová Inst. Exp. Immunol., Lűbeck, Klaus-Peter Wandinger Neurol. klinika 1.LF UK, Praha Petra Nytrová Eva Havrdová

26 XIV. ČASOMIL alias IL-60 RADOMIL , , hotelový resort Equitana, Martinice u Březnice

27 Hladiny AQP4-IgG korelovaly s počtem B buněk při terapii Rituximabem