AMH preanalytické podmínky

HTML
DOWNLOAD

Rozměr: px

Začít zobrazení ze stránky:

Download "AMH preanalytické podmínky"

Stanislav Soukup
před 5 lety
Počet zobrazení:

1 AMH preanalytické podmínky Testování stability podle ISBER protokolu R. Kučera, O. Topolčan, M. Karlíková Oddělení imunochemické diagnostiky, Fakultní nemocnice Plzeň

2 O čem to dnes bude? AMH základní informace Stabilita AMH co je známo ISBER protokol Naše výsledky Závěry 2

3 Úvod Trocha statistiky na úvod nikdy neškodí 3

4 ZDROJ: Český statistický úřad Vývoj míry plodnosti podle věku, srovnání rok 1990 a 2003

Průměrný věk matky při porodu v ČR 2001-2015 30,5 Průměrný věk matky při porodu v ČR 30,0 29,5 29,0 28,5 28,0 27,5

5 Průměrný věk matky při porodu v ČR ,5 Průměrný věk matky při porodu v ČR 30,0 29,5 29,0 28,5 28,0 27,5 27,0 26,5 26, ZDROJ: Český statistický úřad

6 průměrné koncentrace AMH (ng/ml) AMH ve fertilním věku u žen >45 Věk (roky)

7 AMH základní charakteristika AMH patří do skupiny růstových faktorů TGF-β. Název Řetězec Poločas (h) AA Molek. hmotnost (kda) Fyziologická funkce prenatální Fyziologická funkce postnatální AMH AMH-N AMH-C Diferenciace pohlaví plodu Muži: pohlavní zrání Ženy: zrání folikulocytů AMH glykoproteinový dimer AMH-N AMH-C I I I AMH prostorová struktura

8 AMH Fyziologická funkce - prenatálně Sexuální diferenciace lidského plodu Caspar F. Wolff ( ) německý anatom Johannes Müller ( ) německý anatom AMH ne AMH ano AMH izoloval Alfred Jost (1947) U vyvíjejícího se embrya jsou přítomny bipotenciální žlázy a oba typy vývodů: Müllerův ženský typ, Wolfův mužský typ

9 AMH Fyziologická funkce - prenatálně Sexuální diferenciace lidského plodu AMH ne AMH ano Chromozom Y Gen SRY nacházející se na chromozomu Y spouští produkci proteinu testicular determination factor (TDF) - transkripční faktor. Váže se do specifických oblastí DNA a pomáhá kontrolovat aktivitu jednotlivých genů spouští kaskádu dějů vývoj plodu mužského pohlaví.

Prenatální funkce AMH diferenciace pohlaví plodu Exprese receptorů pro AMH při regresi Müllerova duktu AMH způsobuje vývoj plodu mužského pohlaví 6. 8.

10 Prenatální funkce AMH diferenciace pohlaví plodu Exprese receptorů pro AMH při regresi Müllerova duktu AMH způsobuje vývoj plodu mužského pohlaví gestační týden - exprese receptoru MIS1 a MIS2, po navázání AMH regrese Můllerova vývodu díky indukci apoptózy dále se vyvíjí Wolfův duktus a plod mužského pohlaví Teixeira J et al. Endocrine Reviews 2001;22:

varlat v prenatálním i postnatálním období u mužů, a v

11 AMH produkce v dospělosti Řez varletem Řez ovariálním folikulem Produkce AMH probíhá v Sertoliho buňkách varlat v prenatálním i postnatálním období u mužů, a v granulózových buňkách vaječníků v postnatálním období u žen.

12 AMH - klinické využití Diagnostika a sledování PCOS Sledování léčby nádorů granulózových buněk vaječníků Sledování změn ovariální rezervy po užívání cytostatik a po radioterapii Diagnostika a diferenciální diagnostika předčasné a opožděné puberty u chlapců Diagnostika kryptorchizmu a anorchie u chlapců Diferenciální diagnostika narušeného pohlavního vývoje u dětí 12

13 Cíl Zjistit optimální preanalytické podmínky a krátkodobou stabilitu AMH 13

14 2 otázky 1) Za jak dlouhou dobu po odběru je potřeba krev stočit a separovat sérum (plazmu)? 2) Co je možné provádět se separovaným materiálem po odběru včetně krátkodobého skladování do zpracování? 14

15 Stáčení plné krve Důležité je včasné oddělení červené krevní složky Stočení krve do 3h po náběru (některé zdroje 8h)

17 AMH Gen II den 2 Vliv stání plné krve 24h při RT na hodnotu AMH AMH Gen II ELISA 24h plná krev RT AMH Gen II den 1 Rozdíl AMH Gen II: den 1 vs den 2 Průměr + 11%

18 Metodika 5 dobrovolníků AMH mezi 3,92-6,39 ng/ml protokol ISBER po vystavení vzorků různě nadefinované zátěži byly vzorky umístěny do -80 C až do závěrečné analýzy 18

19 Metodika

20 Opakované rozmrazování

21 Různé skladovací teploty

22 Metodika skupiny vzorků: sérum sérum separované po přemražení plné krve v gelových náběrových zkumavkách sérum oddělené po centrifugaci z gelových zkumavek za použití druhé odběrové sady 22

23 ??? 23

24 AMH (ng/ml) Výsledky AMH sérum 7 Freeze - Thaw stability Volunteer 1 Volunteer 2 Volunteer 3 Volunteer 4 Volunteer Number of freeze thaw cycles 24

25 AMH (ng/ml) Výsledky AMH sérum 7 Stability after separation (22 C) Volunteer 1 Volunteer 2 Volunteer 3 Volunteer 4 Volunteer Time 25

26 AMH (ng/ml) Výsledky AMH sérum 7 Stability after separation (4-8 C) Volunteer 1 Volunteer 2 Volunteer 3 Volunteer 4 Volunteer Time 26

27 AMH (ng/ml) 4,8 Výsledky všechny materiály přemrazování vzorku Freeze - Thaw stability 4,6 4,4 4,2 4 3,8 3,6 serum standard serum freeze thaw blood serum second separation 3,4 3, Number of freeze - thaw cycles 27

28 AMH (ng/ml) Výsledky všechny materiály stabilita po separaci při 22 C Stability after separation (22 C) 4,8 4,6 4,4 4,2 4 3,8 3,6 Průměr z Serum Průměr z Serum 2 Průměr z Freeze thaw gel tubes 3,4 3,

29 AMH (ng/ml) Výsledky všechny materiály stabilita po separaci při 4-8 C Stability after separation (4-8 C) 5 4,8 4,6 4,4 4,2 4 3,8 Průměr z Serum Průměr z Serum 2 Průměr z Freeze thaw gel tubes 3,6 3,4 3,

30 AMH (ng/ml) Výsledky všechny materiály -20 C po dobu 30 dní Stability after separation 5 4,5 4 4,514 4,642 4,59 3,5 3 2,5 2 Průměr z Serum Průměr z Serum 2 Průměr z Freeze thaw gel tubes 1,5 1 0,5 0 FREEZER (-20 C) FOR 30 DAYS 30

31 Skladovatelnost zamražených vzorků -20 C 1rok -80 C více než 1rok maximální doba uložení???? (v 2015 zprac. vz. z roku 1994)

32 Závěry Přemražený vzorek plné krve CV(%) 5.50 Ostatní vzorky CV(%) max

33 Závěry AMH stočit do 8h (?) 24h (+11%), 20h (+15%) při RT Lednice 4 C lepší varianta Po stočení max 2x přemrazit 33

34 Závěry Po stočení skladování po 24h v RT úbytek AMH 2.1% po 1 týdnu v RT úbytek AMH do 10% po 1 týdnu ve 4 C úbytek AMH 0% Po zamražení -20 C, -80 C 34

35 doc. PharmDr. Radek Kučera, Ph.D. Oddělení imunochemické diagnostiky Fakultní nemocnice Plzeň Telefon: Mobil: Děkuji za pozornost

Podobné dokumenty

doc. PharmDr. Radek Kučera, Ph.D. Oddělení imunochemické diagnostiky, FN Plzeň

doc. PharmDr. Radek Kučera, Ph.D. Oddělení imunochemické diagnostiky, FN Plzeň AMH základní charakteristika nebo Klinické použití????? Závěr Začněme ale statistikou... Vývoj míry plodnosti podle věku,