ProGastrin-Releasing Peptide (ProGRP) u nemocných s malobuněčným karcinomem plic

Transkript

1 ProGastrin-Releasing Peptide (ProGRP) u nemocných s malobuněčným karcinomem plic FONS Symposium klinické biochemie Pardubice, M. Tomíšková, J. Skřičková, I. Klabenešová, M. Dastych 2 Klinika nemocní plicních a tuberkulózy Oddělení klinické biochemie a hematologie 2 Fakultní nemocnice v Brně - Bohunicích a Lékařská fakulta Masarykovy univerzity Brno

2 Gastrin-Releasing Peptid (GRP) peptid s 27 aminokyselinami fyziologicky stimuluje uvolňování gastrinu v lidském gastrointestinálním traktu a způsobuje vasodilataci v dýchacím ústrojí u malobuněčného karcinomu plic (SCLC) byla zjištěna zvýšená exprese a uvolňování GRP

3 Progastrin-releasing Peptid extrakce GRP je náročný proces nevhodný k rutinnímu použití pro velmi krátký poločas v krvi jeho prekurzor - Progastrinreleasing Peptide (ProGRP) je stabilní může být stanoven v séru s použitím Elisa testu na rekombinantním ProGRP

4 Vlastnosti progrp fyziologicky nachází v malé koncentraci v krvi každého člověka není tumor specifický protein - nenádorové plicní choroby - jiné zhoubné nádory

5 Hodnota ProGRP v lidském séru u zdravých jedinců 2-50 pg/ml medián 20 pg/ml, 95.percentil = 35pg/ml medián u nemocných se SCLC 250 pg/ml, 95.percentil je 500 pg/ml 20% nemocných s SCLC je hodnota více jak 0x větší než u benigních plicních chorob

6 Vyšetřování progrp u nemocných na KNPT ve FN Brno Soubor nemocných s plicním onemocněním vyšetřených v roce 200 na KNPT ve FNB, Bohunice Cíl Srovnání hodnot ProGRP u skupiny nemocných s : benigním plicním onemocněním nemalobuněčným bronchogenním karcinomem (NSCLC) malobuněčným bronchogenním karcinomem - limitovaným stádiem - extensivním stádiem

7 Metoda vyšetření ProGRP Architect progrp je chemiluminiscenční dvoukroková metoda na mikročásticích CMIA (Chemiluminiscent Microparticle ImunoAssay) Vzorek nemocného + paramagnetické mikročástice potažené protilátkami anti-progrp Vazba Pro GRP + protilátky na mikročásticích konjugát protilátek anti ProGRP + akridinium vznik reakční směs + roztoky pre Trigger a Triger chemoluminiscenční reakce Měření množství detekovatelného ProGRP (přímá úměra signálu v relativních světelných jednotkách detekovatelného optikou systému analyzátoru Architekt i Systém)

8 Procentuální zastoupení nemocných n=49 (00%) 20,8 38,3 40,9 Benigní NSCLC SCLC

9 Tabulka. Srovnání hodnot progrp dle typu onemocnění a) Bez transformace dekadickým logaritmem N Průměr Medián SCLC % - 90% Min - Max Výsledky K-W testu NSCLC <0,00 b Jiná nenádorová plicní onemocnění b b) Po transformaci dekadickým logaritmem a N Průměr Medián 0% - 90% Min - Max SCLC 57 2,9 3,0,7-4,,3-5,0 Výsledky K-W testu a NSCLC 6,6,6,4 -,8,3-2,9 b <0,00 Jiná nenádorová plicní 3,6,6,4 -,9,3-2,0 b onemocnění statistická významnost hodnocena Kruskal-Wallis testem a, b homogenní skupiny bez významných rozdílů (hodnoceno post hoc pomocí mnohonásobného porovnání metodou průměrného pořadí)

10 Obrázek. Srovnání hodnot progrp dle typu onemocnění a) Bez transformace dekadickým logaritmem b) Po transformaci dekadickým logaritmem N=57 N=6 N=3 N=57 N=6 N=3 progrp (pg/ml) a Median 25%-75% 0%-90% p < 0.00 Dekadický logaritmus progrp (pg/ml) a Median 25%-75% 0%-90% b p < 0.00 b b b 0 0 SCLC NSCLC Jiné SCLC NSCLC Jiné Onemocnění pacienta Onemocnění pacienta statistická významnost hodnocena Kruskal-Wallis testem a, b homogenní skupiny bez významných rozdílů (hodnoceno post hoc pomocí mnohonásobného porovnání metodou průměrného pořadí)

11 Tabulka 2. Srovnání hodnot NSE dle typu onemocnění a) Bez transformace dekadickým logaritmem N Průměr Medián SCLC 53 40,9 63,2 NSCLC 35 25,4 20,4 0% - 90% 3,2-305,0 0,3-54,4 Min - Max 9,6-979,0 8,2-60,4 Výsledky M-W testu < 0,00 b) Po transformaci dekadickým logaritmem N Průměr Medián 0% - 90% Min - Max Výsledky M-W testu SCLC 53,8,8, - 2,5,0-3,0 NSCLC 35,3,3,0 -,7 0,9 -,8 < 0,00 statistická významnost hodnocena Mann-Whitney testem

12 Obrázek 2. Srovnání hodnot NSE dle typu onemocnění a) Bez transformace dekadickým logaritmem b) Po transformaci dekadickým logaritmem 400 N=53 N=35 3,0 N=53 N=35 NSE (mg/ml) Median 25%-75% 0%-90% p < 0.00 Dekadický logaritmus NSE (mg/ml) 2,5 2,0,5,0 0,5 Median 25%-75% 0%-90% p < SCLC NSCLC 0,0 SCLC NSCLC Onemocnění pacienta Onemocnění pacienta statistická významnost hodnocena Mann-Whitney testem

13 Obrázek 3. Srovnání hodnot progrp u pacientů s SCLC dle pokročilosti onemocnění a) Bez transformace dekadickým logaritmem Extenzivní stadium (ED) Limitované stadium (LD) N Průměr Medián 0% - 90% Min - Max Výsledky M-W testu ,345 b) Po transformaci dekadickým logaritmem Extenzivní stadium (ED) Limitované stadium (LD) N Průměr Medián 0% - 90% 3 3, 3,0,7-4,3,3-5,0 26 2,8 3,0,7-3,8,4-4, Min - Max Výsledky M-W testu 0,345 statistická významnost hodnocena Mann-Whitney testem

14 Obrázek 3. Srovnání hodnot progrp u pacientů s SCLC dle pokročilosti onemocnění a) Bez transformace dekadickým logaritmem b) Po transformaci dekadickým logaritmem N=3 N=26 6 N=3 N=26 progrp (pg/ml) Median 25%-75% 0%-90% p = Dekadický logaritmus progrp (pg/ml) Median 25%-75% 0%-90% p = Extenzivní stadium (ED) Limitované stadium (LD) Extenzivní stadium (ED) Limitované stadium (LD) statistická významnost hodnocena Mann-Whitney testem

15 Obrázek 4. Srovnání hodnot NSE u pacientů s SCLC dle pokročilosti onemocnění a) Bez transformace dekadickým logaritmem Extenzivní stadium (ED) Limitované stadium (LD) N Průměr Medián 0% - 90% ,3 77,5 2,7-737, ,3 42,8 2,0-43,0 Min - Max 9,6-979,0 9,6-305,0 Výsledky M-W testu 0,007 b) Po transformaci dekadickým logaritmem Extenzivní stadium (ED) Limitované stadium (LD) N Průměr Medián 0% - 90% Min - Max 29 2,0,9,3-2,9,0-3,0 24,6,6, - 2,2,0-2,5 Výsledky M-W testu 0,007 statistická významnost hodnocena Mann-Whitney testem

16 Obrázek 4. Srovnání hodnot NSE u pacientů s SCLC dle pokročilosti onemocnění a) Bez transformace dekadickým logaritmem b) Po transformaci dekadickým logaritmem 800 N=29 N=24 3,0 N=29 N=24 NSE (mg/ml) Median 25%-75% 0%-90% p = Dekadický logaritmus NSE (mg/ml) 2,5 2,0,5,0 0,5 Median 25%-75% 0%-90% p = ,0 Extenzivní stadium (ED) Limitované stadium (LD) Extenzivní stadium (ED) Limitované stadium (LD) statistická významnost hodnocena Mann-Whitney testem

17 Obrázek 5b. Srovnání hodnot NSE a progrp dle typu onemocnění Pacienti s SCLC (N=53) Pacienti s NSCLC (N=35) 4 progrp = 65 pg/ml Spearman r = 0.4 p= progrp = 65 pg/ml Spearman r = 0.04 p= Dekadický logaritmus NSE (mg/ml) 3 2 NSE = 7 mg/ml Dekadický logaritmus NSE (mg/ml) 3 2 NSE = 7 mg/ml Dekadický logaritmus progrp (pg/ml) Dekadický logaritmus progrp (pg/ml)

18 Obrázek 8. ROC křivka pro diskriminaci mezi SCLC a NSCLC na základě progrp resp. na základě NSE ROC křivka dle progrp 0,8 Plocha pod křivkou: AUC = 0.92 (95% IS 0.86; 0.97) p<0.00 Senzitivita 0,6 0,4 0,2 progrp NSE ROC křivka dle NSE Plocha pod křivkou: AUC = 0.80 (95% IS 0.7; 0.89) p< ,2 0,4 0,6 0,8 - Specificita

19 Podíl žijících pacientů Podíl žijících pacientů Podíl žijících pacientů Obrázek 0. Doba přežití od data diagnózy dle progrp,0 Cut off: progrp = 000 pg/ml,0 Cut off: progrp = pg/ml 0,8 000 (N=28) > 000 (N=29) 0, (N=39) >2 000 (N=8) 0,6 p = 0,86 0,6 p = 0,76 0,4 0,4 0,2 0,2 0, Doba od diagnózy (měsíce),0 0,8 0,6 Cut off: progrp = pg/ml (N=45) >3 000 (N=2) p = 0,003 0,4 0,2 0, Doba od diagnózy (měsíce) 0, ) P-hodnota Log-rank testu Doba od diagnózy (měsíce) Pod cut off Cut off pro progrp N Medián (95% IS) 3,0 000 pg/ml 28 měsíce (7,0; 9,0) pg/ml pg/ml 45 3,4 měsíce (9,9; 6,8) 3,9 měsíce (0,3; N Nad cut off Medián (95% IS),3 měsíce (4,; 8,5),2 měsíce (4,3; 8,) 5,3 měsíce (0,4; 0,)

20 Podíl žijících pacientů Podíl žijících pacientů Podíl žijících pacientů,0 Obrázek 2. Doba přežití od data diagnózy dle NSE,0 Cut off: NSE = 20 ng/ml Cut off: NSE = 35 ng/ml 0,8 20 (N=9) > 20 (N=44) 0,8 35 (N=5) > 35 (N=38) 0,6 p = 0,6 0,6 p = 0,077 0,4 0,4 0,2 0,2 0, Doba od diagnózy (měsíce) 0, Doba od diagnózy (měsíce),0 0,8 0,6 0,4 0,2 0,0 Cut off: NSE = 50 ng/ml 50 (N=9) > 50 (N=34) p = 0, Doba od diagnózy (měsíce) Pod cut off Cut off pro NSE N Medián (95% IS) 6,8 20 ng/ml 9 měsíce (9,8; 23,8) 35 ng/ml 5 ) P-hodnota Log-rank testu 50 ng/ml 9 3,9 měsíce (8,; 9,6) 3,4 měsíce (9,5; 7,4) N Nad cut off Medián (95% IS),6 měsíce (6,8; 6,4),6 měsíce (7,3; 5,9) 2,5 měsíce (8,0; 7,0)

21 NSE u malobuněčného karcinomu výhody a nevýhody korelace mezi hodnotou NSE a rozsahem onemocnění v době diagnózy korelace mezi hodnotou NSE a prognózou SCLC (DFS, OS) uváděna v některých pracích nebyla v našem souboru potvrzena častá falešná pozitivita NSE v běžné praxi Vzhledem k obsahu NSE i v červených krvinkách a krevních destičkách je třeba provést oddělení krevních elementů nejpozději do jedné hod. od odběru, jinak jsou naměřené hodnoty NSE falešně pozitivní,měřitelnou interferenci způsobuje již obsah hemoglobinu vyšší než 50 mg/l!

22 ProGRP u malobuněčného karcinomu výhody a nevýhody vyšší senzitivita u nemocných s SCLC bez ohledu na pokročilost onemocnění zvýšená hodnota progrp u 79,9% pacientů oproti zvýšené hodnotě NSE u 57,8% s LD SCLC vyšší senzitivita v časném vzestupu při recidivě nebo progresi SCLC (sledování po ukončené léčbě) Větší stabilita progrp při pokojové teplotě, zvl. při vyšetřování ProGRP z plasmy (3-7 hod.) Omezení metody: zvýšené progrp u pacientů s renální insuficiencí musí se tedy korelovat s hladinou kreatininu

23 Význam ProGRP - závěr diagnostika SCLC (odlišení NSCLC, sekundární metastatické postižení plic) sledování efektu léčby záchyt časné recidivy nebo progrese onemocnění Při hodnotách progrp nad 3000pg/ml je i prognostickým faktorem kombinované bronchogenní karcinomy (odhalení přítomnosti neuroendokrinní složky) odlišení falešně pozitivní hodnoty NSE Kombinace pro GRP a NSE má aditivní hodnotu zvyšuje senzitivitu a specificitu v diagnostice SCLC