Dvousložková souprava, kapalná činidla ke stanovení kreatininu v lidském séru, plazmě nebo moči.

Transkript

1 Kreatinin modifikovaná metoda Jaffe Dvousložková souprava, kapalná činidla ke stanovení kreatininu v lidském séru, plazmě nebo moči. D95595 Cont 4x100 ml R1 1x100 ml R2 Parametry měření Metoda: 2-bodové kinetické měření, nárůst absorbance Vlnová délka: Hg 492 nm ( nm) Měření: proti reagenčnímu blanku Teplota: C, 37 C Vzorek: Sérum, heparinová plazma, moč Linearita: do µmol/l Mez stanovitelnosti: 17,7 µmol/l Princip Stanovení je založeno na reakci kreatininu s pikrátem sodným v alkalickém prostředí za vzniku červeného komplexu. Intenzita zbarvení je přímo úměrná koncentraci kreatininu ve vzorku. Složení a výsledná koncentrace R1 hydroxid sodný 0,2 mol/l R2 kyselina pikrová 20 mmol/l Příprava činidel Pro start činidlem R2 jsou činidla připravena k přímému použití. Pro start vzorkem se pracovní činidlo se připraví smícháním 4 dílů činidla R1 (NaOH) a 1 dílu činidla R2 (kyselina pikrová). Stabilita a skladování činidel Činidla skladujeme při teplotě 2-25 C. Jsou stabilní po celou dobu exspirace, vyznačené na obalu, zabrání-li se kontaminaci po otevření originálního balení. Pracovní činidlo je stabilní 5 hodin při laboratorní teplotě. Činidla uchováváme ve tmě! Nedodržení uvedených doporučení zbavuje firmu DIALAB jakékoliv zodpovědnosti. Vzorek Sérum nebo heparinová plazma, lze použít heparinát lithný. Nelze použít hemolytická séra. Kreatinin je ve vzorku séra, plazmy stabilní 1 týden při teplotě 4-25 C, minimálně 3 měsíce při -20 C. Moč sbírejte do plastových sběrných lahví určených jen pro tento účel, bez konzervačních přísad. V moči je kreatinin stabilní při teplotě C 2 dny, 6 dní při 4-8 C a 6 měsíců při 20 C. Je důležité přesně změřit objem sbírané moči. Vyšetřujeme moč ředěnou 1:49 deionizovanou vodou. Nepoužívejte kontaminované vzorky. Nezmrazujte opakovaně! Odběr doporučujeme provést do zkumavky: Rev Strana 1 (celkem 5)

2 "VACUETTE" pro sérum (červené) nebo, "VACUETTE" s heparinem (zelené). Standard (není součástí soupravy) Koncentrace: 177 µmol/l Skladování: 2-25 C Stabilita: po celou dobu exspirace UZAVŘETE OKAMŽITĚ PO POUŽITÍ! Interference Kyselina askorbová do koncentrace 3 mg/l, hemoglobin do koncentrace 0,5 g/l a triglyceridy do koncentrace 22,6 mmol/l při stanovení neinterferují. Bilirubin v koncentraci vyšší než 68,5 μmol/l při stanovení interferuje. Provedení testu Start činidlem R2 Činidla a vzorky inkubujeme na laboratorní teplotu. Pipetujeme: vzorek standard blank činidlo R1 1,00 ml 1,00 ml 1,00 ml vzorek 0,05 ml - - standard - 0,05 ml - Promícháme, inkubujeme 0-5 minut a přidáme: činidlo R2 0,25 ml 0,25 ml 0,25 ml Promícháme, inkubujeme asi 1 minutu a odečteme absorbanci A1 proti reagenčnímu blanku. Inkubujeme přesně 2 minuty a po té odečteme absorbanci A2 proti reagenčnímu blanku. Vypočteme ΔA = A2 - A1 pro vzorek a standard. Start vzorkem Pracovní činidlo a vzorky inkubujeme na laboratorní teplotu. Pipetujeme: vzorek standard blank pracovní činidlo 1,00 ml 1,00 ml 1,00 ml vzorek 0,05 ml - - standard - 0,05 ml - Promícháme, inkubujeme 1 minutu a odečteme absorbanci A1 proti reagenčnímu blanku. Inkubujeme přesně 2 minuty a po té odečteme absorbanci A2 proti reagenčnímu blanku. Vypočteme ΔA = A2 - A1 pro vzorek a standard. Kalkulace Sérum/plazma ΔA vz x konc. standardu v µmol/l = kreatinin v µmol/l ΔA st Moč ΔA vz x konc. standardu v µmol/l x50 = kreatinin v µmol/l ΔA st Kretininová clearance µmol/l kreatininu v moči x ml moče/24 h = ml/min/1,73 m 2 µmol/l kreatininu v séru x 1440 Výpočet kreatininové clearance je vztažen k průměrnému povrchu dospělého lidského těla (1,73 m 2 ). Odhadovaná rychlost glomerulární filtrace ( ml/min/1,73 m 2 ) v souladu S MDRD (modification of diet in renal disease) pomocí hodnot kreatininu získaných standardizovanou metodou. 6 Rev Strana 2 (celkem 5)

3 Pro sérový kreatinin (scr) (µmol/l): GFR= x scr -1,154 x věk -0,203 x 1,212 (pro Afroameričany) x 0,742 (pro ženy) Referenční rozmezí* Sérum/plazma bez kompenzace Dospělí [1] µmol/l Ženy Muži Děti [2, 8] Novorozenci Kojenci Děti Sérum/plazma kompenzovaná metoda Dospělí [3] µmol/l Ženy Muži Děti [9] Novorozenci Kojenci Děti Moč [1] Ženy Muži µmol/l/24h µmol/l/24h Clearance kreatininu [2] Ženy ml/min/1,73 m 2 Muži ml/min/1,73 m 2 * doporučujeme v každé laboratoři stanovit vlastní referenční rozmezí. Kompenzační metoda (3,4) Kyselina pikrová, která vytváří barevný komplex, reaguje dále nespecificky s různými interferujícími složkami tzv. pseudo-kreatininy. To způsobuje falešně vysoké výsledky při stanovení nízkých koncentrací v séru nebo plazmě. Ke kompenzaci těchto interferencí se použije uvedená hodnota kalibrátoru v příbalovém letáku pro kompenzovanou metodu a následně se odečte 27 µmol/l od výsledné hodnoty kreatininu. Doporučujeme používat kompenzovanou hodnotu kalibrátoru. Tato metoda lze použít pouze pro vzorky plazmy a séra. Kompenzovaná metoda je v návaznosti na GC-IDMS a lze ji požít pro odhad glomerulární filtrace pomocí MDRD vzorce viz výše 6. Analytické parametry stanovení Linearita Metoda stanovení je lineární do koncentrace kreatininu 1330 μmol/l. Při vyšší koncentraci ředíme vzorky fyziologickým roztokem NaCl (154 mmol/l) a výsledek vynásobíme faktorem ředění. Přesnost (při 37 C) Intra-assay n = 20 Průměr SD CV [%] Vzorek 1 49,50 0,88 1,30 Vzorek 2 109,62 0,88 0,83 Vzorek 3 594,93 5,30 0,93 Inter-assay n = 20 Průměr SD CV [%] Vzorek 1 71,60 2,65 3,63 Vzorek 2 141,4 0,884 0,87 Vzorek 3 506,5 4,42 0,85 Porovnání metod Při porovnání Dialab Kreatininu (y) s komerčně dostupným testem metodou Jaffé (x) (68 vzorků v rozsahu Rev Strana 3 (celkem 5)

4 53,0-884 µmol/l) byly získány následující výsledky: y = x 2,65 µmol/l; r= 1,000. Při porovnání Dialab kompenzovaného Kreatininu (y) s enzymatickou metodou (x) (66 vzorků v rozsahu 44,2-380 µmol/l) byly získány následující výsledky: y = 0,986 x + 3,80 µmol/l; r= 0,998. Kontrola kvality Všechna komerční kontrolní séra, kde je uvedena hodnota pro tuto metodu stanovení. Doporučujeme používat: DIACON N D x5ml Normální kontrolní sérum DIACON P D x5ml Abnormální kontrolní sérum DIACON Urine Level 1 D x5ml Normální kontrolní moč DIACON Urine Level 2 D x5ml Abnormální kontrolní moč Kalibrace Tato metoda vyžaduje použití standardu nebo kalibrátoru. Doporučujeme použít: DIACAL AUTO D x3ml Kreatinin standard D x3ml Hodnoty kalibrátoru jsou návazné na NIST (National Institute for Standardization) Standardní Referenční Materiál SRM 965 za použití hladiny 1 a 2 na GC-IDMS. Automatizace Na požádání jsou k disposici aplikační listy pro běžné typy automatických analyzátorů. Bezpečnostní upozornění Činidlo R1 obsahuje hydroxid sodný. Xi dráždivý R-věty: 36/38 Dráždí oči a kůži. S-věty: S2 Uchovávejte mimo dosah dětí S26 Při zasažení očí okamžitě důkladně vypláchněte vodou a vyhledejte lékařskou pomoc. S37/39 Používejte vhodné ochranné rukavice a ochranné brýle nebo obličejový štít. V případě nehody, nebo necítíte-li se dobře, okamžitě vyhledejte lékařskou pomoc (je-li možno, ukažte toto označení). Činidlo R1 a standard S 24/25 Zamezte styku s kůží a očima Další informace viz bezpečnostní list. Odpadové hospodářství Prázdný obal zneškodněte v rámci tříděného odpadu v souladu se zákonem o odpadech. Rev Strana 4 (celkem 5)

5 Literatura 1. Newman DJ, Price CP. Renal function and nitrogen metabolites.in: Burtis CA, Ashwood ER, editors. Tietz Textbook of ClinicalChemistry. 3rd ed. Philadelphia: W.B Saunders Company; 1999.p Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics. 1st ed. Frankfurt: THBooksVerlagsgesellschaft; p Mazzachi BC, Peake MJ, Ehrhardt V. Reference Range and MethodComparison Studies for Enzymatic and Jaffé Creatinine Assays in Plasma and Serum and Early Morning Urine. Clin. Lab. 2000; 46: Swanson AF, Swartzentruber M, Nolen PA et al. Multicenter Evaluation of the Boehringer Mannheim Compensated, Rate-Blanked Creatinine/Jaffe Application on BM/Hitachi Systems. Advances in Clinical Diagnostics Boehringer Mannheim Corporation 5. Guder WG, Zawta B. Recommendations of the Working group on Preanalytical Quality of the German Society for Clinical Chemistry and the German Society for Laboratory Medicine: The quality of Diagnostic Samples. 1st ed Darmstadt: GIT Verlag 2001; p. 24-5, Levey AS, Coresh J, Greene T, Marsh J et al: Expressing the Modification of Diet in Renal Disease Study Equation for Estimating Glomerular Filtration Rate with Standardized Serum Creatinine Values. Clin Chem 2007; 53 (4): Junge W, Wilke B, Halabi A, Klein G. Determination of reference intervals for serum creatinine, creatinine excretion and creatinine clearance with an enzymatic and a modified Jaffé method. Clin Chim Acta 2004; 344: Soldin SJ, Brugnara C, Wong EC, eds. Pediatric Reference Intervals. 6th ed. AACC Press, 2007: p Schlebusch H, Liappis N, Klein G. Ultrasensitive CRP and Creatinine: Refernece intervals from infancy to childhood. Clin Chem Lab Med. 2001; 39 Special supplement pp S1-S448; May POT042 DIALAB spol. s r.o. Nám. Osvoboditelů 1, Praha 5 Tel./Fax: office@dialab.cz IČO: Rev Strana 5 (celkem 5)