Validace sérologických testů výrobcem. Vidia spol. s r.o. Ing. František Konečný IV/2012

Transkript

1 Validace sérologických testů výrobcem Vidia spol. s r.o. Ing. František Konečný IV/2012

2 Legislativa Zákon č. 123/2000 Sb. o zdravotnických prostředcích ve znění pozdějších předpisů Nařízení vlády č. 453/2004 Sb., kterým se stanoví technické požadavky na diagnostické zdravotnické prostředky in vitro ve znění pozdějších předpisů pokud jsou splněny podmínky legislativy, výrobek je označen symboly IVD, CE

3 Systém řízení jakosti ISO norma se zabývá principy řízení dokumentace, lidských zdrojů, infrastruktury, zavádí procesy komunikace se zákazníky, hodnocení dodavatelů, měření výkonnosti procesů a také interní audity za účelem získání zpětné vazby. ISO 13485: norma specifikuje požadavky na řízení systému kvality při výrobě a distribuci zdravotnických prostředků a zavádí specifické požadavky typické pro tento obor

4 Technické požadavky na IVD analýza rizik studie funkční způsobilosti podmínky skladování, přepravy a stabilita podniková dokumentace (směrnice, SOP) informace poskytované výrobcem (bezpečnostní listy, návody k použití, štítky) výrobní dokumentace jednotlivé šarže (protokoly o výrobě a kontrole složek)

5 Studie funkční způsobilosti 1. soubor obsahující negativní vzorky a 2. soubor s charakterizovanými pozitivními vzorky vzorky jsou ověřovány na validovaném testu a na jiné komerčně dostupné IVD soupravě diskrepantní výsledky jsou přetestovány třetím nezávislým testem vzorky jsou na základě 2 shodných výsledků v testech rozděleny do skupin: - správně pozitivní - falešně pozitivní - správně negativní - falešně negativní

6 Studie funkční způsobilosti Stanovení diagnostické citlivosti (senzitivity) pravděpodobnost, že pozitivní test vyjadřuje skutečně pozitivní výsledek Stanovení specificity - pravděpodobnost, že negativní test vyjadřuje skutečně negativní výsledek

7 Studie funkční způsobilosti kvantitativní soupravy (kontinuální stupnice hodnot výsledků měření) mez stanovitelnosti nejnižší množství protilátek ve vzorku, které může být stanoveno jako exaktní hodnota s požadovanou hodnotou nejistoty kvalitativní soupravy (dvě a více kategorií výsledků měření) mez detekce charakterizuje nejnižší hodnotu, která je vůbec ještě metodou (kvalitativně) měřitelná a odlišitelná od nuly

8 Interference sleduje se vliv látek, které mohou být přítomny ve vzorku a mohou negativně ovlivnit průběh reakce triglyceridy (0 80 mg/ml) hemoglobin (0 50 mg/ml) bilirubin (0 5 mg/ml) test se provádí přidáním různých koncentrací do vzorku, povolená odchylka hodnot +/- 15%

9 hodnota OD Interference 1,60 Vliv triglyceridů na průběh testu 1,40 1,20 1,00 0,80 0,60 0,40 0,20 0, koncentrace přidané směsi triglyceridů v séru (mg/ml)

10 Interference křížová reaktivita protilátek revmatoidní faktory testování sér od pacientů s jiným typem infekce, s polyklonální aktivací imunitního systému, s autoprotilátkami

11 Výroba šarže soupravy výrobní proces je vícestupňový postup se řídí směrnicí výroby validační kroky pro každou šarži: - stanovení cut-off - kvantifikace - parametry správnosti stanovení - návaznost šarží - stability

12 Výroba soupravy Směrnice výroby Z Plánování výroby Revize materiálů a polotovarů, kontrola exspirací Studium výstupní kontroly předchozí šarže Schází materiál NE ANO Nákup (SM-9) Příkaz k výrobě šarže nebo složky Vstupní kontrola materiálu ANO NE Řízení neshodného výrobku (SM-12)

13 Stanovení cut-off určení hranice negativity vzorků tak, aby byla optimální citlivost i specificita použit panel negativních vzorků v testu zařazeny také pozitivní vzorky používaný výpočet cut-off = průměr negativních vzorků + 2 směrodatné odchylky (σ) horní hranice šedé zóny je vypočítána jako průměr negativních vzorků + 3 směrodatné odchylky v soupravě je uveden korekční faktor kalibrátoru - kor. faktor * hodnota KAL = cut-off - index pozitivity (IP) vzorků je určen jako hodnota absorbance vzorku / cut-off

14 Stanovení cut-off šedá zóna

15 šikmost Stanovení cut-off špičatost

16 Kalibrace referenční sérum je ředěno logaritmickou řadou 1:12,5 1:1600 výběr standardů (kalibrátorů) pro soupravu je proveden tak, aby výsledná křivka standardů co nejvíce odpovídala původní kalibrační křivce přiřazení arteficiálních nebo mezinárodních jednotek standardům dle kalibrační křivky referenčního séra nebo mezinárodního standardu

17 Hodnota OD 3,000 Kalibrace Srovnání 2 referenčních sér 2,500 2,000 1,500 PRS SRS 1,000 0,500 0, Ředění (log)

18 Parametry správnosti intraassay variabilita (opakovatelnost) přesnost měření stejného vzorku provedených stejnou metodou, stejným pracovníkem, na stejném místě, za stejných podmínek (minimálně 20 jamek stejného vzorku v jednom testu) variační koeficient (CV) do 5% interassay variabilita (reprodukovatelnost) přesnost nezávislých výsledků provedených stejnou metodou na stejném vzorku v různých testech dané šarže s povolenou variabilitou (CV) do 15%

19 Parametry správnosti ověření linearity schopnost metody poskytnout výsledky přímo úměrné ke koncentraci protilátek - vzorky různých koncentrací jsou dále ředěny, hodnocení naměřených koncentrací se porovnává s předpokládanými koncentracemi recovery test příprava směsných vzorků, porovnání získaných hodnot k teoreticky spočteným hodnotám (tolerance +/- 20%)

20 naměřená koncentrace (AU/ml) Parametry správnosti Test ověření linearity y = 1,0978x - 3,4707 R² = 0, AU/ml (+/- 15%) naměřené = teor. (100%) Lineární (AU/ml (+/- 15%)) teoretické hodnoty (AU/ml)

21 Návaznost návaznost na referenční materiál vyššího řádu, pokud je k dispozici návaznost na vlastní referenční materiál (referenční sérum je rozplněno a zamraženo, pro každý test se používá nová alikvota) návaznost kontrolních sér mezi šaržemi ve výrobě (absorbance, jednotky)

22 hodnota OD Návaznost 3,000 Hodnoty OD standardů v následných šaržích soupravy 2,500 2,000 1,500 1,000 OD A OD B OD C OD D OD E OD F 0,500 0, dvoj dvoj šarže dvoj

23 Stability zrychlené stability se provádí již na začátku vývoje (souběžně při +2 až 8 C, při laboratorní teplotě a při +37 C) ověřování stability se provádí průběžně od ukončení výroby každé šarže soupravy dlouhodobé stability 1x ročně (i po ukončení expirace) transportní stability v termoboxech zátěžové testy (zmrznutí složek soupravy)

24