AUXACOLOR testů KOLORIMETRICKÝ TEST ASIMILACE CUKRŮ K IDENTIFIKACI HLAVNÍCH LÉKAŘSKY VÝZNAMNÝCH KVASINEK.

Transkript

1 AUXACOLOR testů KOLORIMETRICKÝ TEST ASIMILACE CUKRŮ K IDENTIFIKACI HLANÍCH LÉKAŘSKY ÝZNAMNÝCH KASINEK. 1

2 1 KLINICKÝ ÝZNAM průběhu posledních dvaceti let se výrazně zvýšila incidence mykotických infekcí, zejména infekcí způsobených kvasinkami, a podstatně se změnil i profil jejich výskytu v souvislosti s rostoucím výskytem oportunních infekcí. Detekce kvasinek v patologických vzorcích odebraných z povrchových i hlubokých tkání organismu má zásadní význam, vzhledem k variabilitě míst postižených infekcí a různorodosti druhů. Navíc vzhledem k opakovanému výskytu těchto infekcí a širšímu použití antimykotických léků se objevují rezistentní patogenní kmeny, proto je v současnosti nezbytné přesně identifikovat druh kvasinek, zodpovědný za infekci. AUXACOLOR 2 splňuje tento účel, jelikož umožňuje identifikovat druhy, které se nejčastěji vyskytují v klinické praxi. Test je snadno použitelný a interpretovatelný a může být snadno zaveden do všech laboratoří. 2 PRINCIP Test AUXACOLOR 2 je identifikační systém založený na principu asimilace cukrů. Růst kvasinek je vizualizován barevnou změnou ph indikátoru. Souprava dále obsahuje 3 enzymatické testy, včetně testu k detekci fenoloxidázové aktivity Cryptococcus neoformans. 3 DRUHY TESTŮ K POUŽITÍ Souprava obsahuje: negativní kontrolu usnadňující interpretaci výsledků asimilace cukrů (modrá jamka). 13 výsledků asimilace cukrů, které odpovídají následujícím cukrům: glukóza (GLU.) : pozitivní kontrola maltóza (MAL.) celobióza (CEL.) sacharóza (SAC.) trehalóza (TRE.) galaktóza (GAL.) adonitol (ADO.) laktóza (LAC.) melezitóza (MEL.) rafinóza (RAF.) xylóza (XYL.) inositol (INO.) arabinóza (ARA.) 2

3 Každý cukr je dehydrován v přítomnosti základního roztoku a ph indikátoru bromkresolové červeně. Růst kvasinek je indikován změnou barvy indikátoru z modré na žlutou a zákalem v jamce. Enzymatický test k detekci Nacetylgalaktosaminidázové aktivity (hexosaminidáza: HEX.). Pozitivní reakce se projevuje žlutým zbarvením jamky, zatímco u negativního testu zůstává obsah jamky bezbarvý. Fenoloxidázový test (POX) k detekci aktivity fenoloxidázy Cryptococcus neoformans spojený s testem k detekci prolinarylamidázové aktivity (PRO): hnědé zbarvení jamky indikuje positivní výsledek fenoloxidázové (POX) aktivity žluté zbarvení indikuje pozitivní výsledek prolinarylamidázové (PRO) aktivity absence zbarvení nebo šedé zbarvení indikuje negativní reakci pro oba testy. Koexistence POX a PRO testů v té samé jamce může být odůvodněna tím, že tyto dva testy nejsou nikdy zároveň oba pozitivní. Jediné možné profily jsou POX negativní/pro negativní, POX pozitivní/pro negativní, POX negativní/pro pozitivní, přičemž kolorimetrická interpretace je popsána výše. SCHÉMA USPOŘÁDÁNÍ MIKROTITRAČNÍ DESTIČKY AUXACOLOR 2 3

4 4 SLOŽENÍ SOUPRAY Krabice s 20 testy, kód 56513, obsahující: 20 x R1 jednotlivě balené 16jamkové mikrotitrační destičky 20 přilnavých fólií 20 x R2 suspenzní médium hotové k použití 1 složku s výsledkovými archy 1 příbalový leták 5 UPOZORNĚNÍ A BEZPEČNOSTNÍ PŘEDPISY Nepoužívejte soupravu po datu exspirace. Zacházejte se všemi vzorky jako s potenciálně infekčním materiálem a při kultivaci dodržujte aseptické laboratorní techniky. Kontaminovaný materiál odkládejte do nádoby přizpůsobené pro likvidaci laboratorního odpadu. 6 UCHOÁÁNÍ REAGENCIÍ Reagencie musí být uchovávány při teplotě 2 až 8 C ve vlastních obalech. Za těchto podmínek jsou reagencie stabilní až do data exspirace uvedeného na obalu. Po otevření obalu mikrotitrační destičky je možné destičku uchovávat při laboratorní teplotě po dobu 10 hodin, aniž by došlo ke změně účinnosti testu. 7 PRACONÍ POSTUP Dodávaný materiál iz složení soupravy. Nezbytný materiál, který není součástí dodávky Opacity control kit, kód Bakteriologická klička. Pipety pro měření a dávkování 100 µl. Nádoba na dezinfekční roztok nebo autoklávovatelná nádoba pro likvidaci kontaminovaného materiálu. Případně denzitometr. 4

5 Kroky pracovního postupu Před použitím nechte reagencie ustálit na laboratorní teplotu. 1. Inokulace mikrotitrační destičky Připravte si inokulum z kultury pěstované 24 až 48 h na Sabouraudově médiu (/ antibiotika) nebo v chromogenním médiu (CandiSelect 4, kód 63746). Za sterilních podmínek vyočkujte do suspensního média (R2) dostatečné množství (1 až 5 identických kolonií) čistých kolonií daného kmene (bez baktérií a jiných kvasinek) tak, abyste získali zákal ekvivalentní zákalové kontrole dodávané pod kódovým označením soupravy (zákal odpovídající zákalovému standardu 1,5 McFarlanda). Důsledné dodržení zákalu inokula je nezbytné pro získání kvalitních výsledků. Homogenizujte suspenzi na třepačce. Pomocí pipety odeberte a rozplňte 100 µl inokula do každé jamky mikrotitrační destičky (R1). Přelepte mikrotitrační destičku (R1) přilnavou fólií, přitom dbejte na co nejvíc stejnoměrném přilnutí fólie k destičce. Inkubujte 48 hodin (v případě nutnosti 72 hod.) při 30 C (± 2 C). 2. yhodnocení výsledků Definitivní vyhodnocení by se mělo provést po 48 hodinách. Ačkoliv předběžné vyhodnocení po 24 hodinách může přinést správné skóre a identifikaci jistých kvasinek, doporučujeme, aby se definitivní vyhodnocení provedlo až po 48 hodinách. 5

6 Pokud existuje podezření na kryptokokovou infekci, mělo by se definitivní vyhodnocení provést až po 72 hodinách vzhledem k pomalému růstu těchto mikroorganismů. yhodnocení lze usnadnit kontrolou spodní strany mikrotitrační destičky či sejmutím adhezívní fólie, přitom je však nutné dodržovat obvyklá pravidla sterility pro případ, že bude nutné v inkubaci pokračovat. takovém případě opatrně vyměňte adhezívní fólii, vyhodnoťte výsledky podle tabulky na straně 9 a zaznamenejte je do příslušného výsledkového archu. 3. Interpretace výsledků a) Jak interpretovat barevné reakce Jamka Test Barva/Interepretace Negativní kontrola Neg. k. Negativní kontrola Modrá Negativní Pozitivní Testy asimilace cukrů Enzymové testy GLU MAL SAC GAL LAC RAF INO CEL TRE ADO MEL XYL ARA HEX POX/PRO Glukóza (pozitivní kontrola) Maltóza Sacharóza Galaktóza Laktóza Rafinóza Inositol Celobióza Trehalóza Adonitol Melezitóza Xylóza Arabinóza Detekce aktivity Nacetylgalaktósaminidázy (hexosaminidáza) Detekce aktivity fenoloxidázy Cryptococcus neoformans (POX) Detekce activity prolinarylamidázy (PRO) Modrá (a) nebo zelená Bezbarvá Bezbarvá nebo šedá (c) Žlutá (b) nebo bezbarvá Žlutá Hnědá Žlutá (b) 6

7 (a) Modrošedá a modrozelená jsou považovány za negativní (b) Světle žlutá a žlutozelená jsou považovány za pozitivní (c) Některé kmeny Geotrichum capitatum, Geotrichum candidum, Trichosporon spp a Cryptococcus laurentii mohou způsobit šedohnědé zbarvení jamky. tomto případě je reakce negativní a této jamce se musí při vyhodnocení přiřadit hodnota nula. b) Metoda vyhodnocení K identifikaci se používá 16 biochemických charakteristik rozdělených do 15 jamek (testy POX. a PRO. jsou kombinovány ve stejné jamce). Pětimístný numerický profil se získá kombinací hodnot získaných z 15 testů do následujících trojmístných skupin: 1. číslice Glukóza Maltóza Sacharóza 2. číslice Galaktóza Laktóza Rafinóza 3. číslice Inositol Celobióza Trehalóza 4. číslice Adonitol Melezitóza Xylóza 5. číslice Arabinóza Hexosaminidáza Fenoloxidáza Každé negativní reakci se přiřazuje skóre nula a každé pozitivní reakci se přiřazuje skóre podle pozice v dané trojici takto: 1 bod pro pozici 1 2 body pro pozici 2 4 body pro pozici 3 v dané trojici Seskupením tří bodových hodnocení se získá číslo, které odpovídá pětičíselném numerickém profilu: Např. : Glukóza Maltóza Sacharóza = první číslice je 7 Prolinarylamidázová aktivita (jamka PRO: POX./PRO.) se hodnotí jako nebo jako podle pozorovaného zbarvení. žlutá jamka (světle žluté a žlutozelené zbarvení je považované za pozitivní): pozitivní test PRO. bezbarvá nebo šedá jamka (šedohnědé zbarvení je považované za negativní): negativní test PRO. 7

8 Aby hodnocení bylo kompletní, je nutno vypočíst další dvě dodatečné číslice pomocí výše zmíněné metody. Ty představují následné charakteristiky: Pigmentace (PI.) Artrospóry (AR.) Pouzdro (CA.) Mycelium/pseudomycelium (MY. PSMY.) Chlamydospóry (CHL.) Růst při 37 C Konečná identifikace je založena na kombinaci biochemických testů a doplňujících kritérií (morfologických a metabolických) za obvyklých podmínek. Příklady: KMEN GLU. MAL. SAC. GAL. LAC. RAF. INO. CEL. TRE. ADO. MEL. XYL. ARA. HEX. POX./ PRO. PI. AR. CA. MY./PSMY. CHL. 37 C KMEN Č. 1 KMEN Č. 2 KMEN Č. 3 ýpočet odpovídajících numerických profilů a identifikace: Numerický profil Kmen Biochemické Další Identifikace Test PRO testy charakteristika Kmen č C. albicans Kmen č C. glabrata Kmen č C. neoformans Poté, co byl stanoven numerický profil, je vyhledán v seznamu na straně 15 (originální příbalový leták). Pokud není získaný numerický profil uveden v seznamu (vzácný profil), použijte interpretační tabulku (strana 9). 8

9 9 37 C () () CHL. () () MY. PSMY. () () () CA. AR. PI. () () () () () () POX. /PRO. () () HEX. () () () () () () ARA. () () XYL. () () () () () () () MEL. () () () () () ADO. () () () () () () TRE. () () () () () () () CEL. () () () INO. () RAF. () () () LAC. () () () GAL. () () () () () () () SAC. () () MAL. () GLU. INTERPRETAČNÍ TABULKA DRUHY C. ALBICANS 1 C. ALBICANS 2 (1) C. CIFERRII C. DUBLINIENSIS C. FAMATA C. GLABRATA C. GUILLIERMONDII C. INCONSPICUA C. KEFYR C. KRUSEI C. LIPOLYTICA C. LUSITANIAE C. NOREGENSIS C. PARAPSILOSIS C. RUGOSA C. SAKE C. TROPICALIS C. ZEYLANOIDES C. ALBIDUS C. LAURENTII C. NEOFORMANS C. UNIGUTTULATUS G. CANDIDUM G. CAPITATUM K. APICULATA R. GLUTINIS R. MUCILAGINOSA (RUBRA) S. CEREISIAE T. ASAHII T. INKIN T. MUCOIDES T. SPP P. WICKERHAMII (2)

10 POPISEK (1) C. albicans 2: odpovídá kmenům dříve klasifikovaným pod druhem C. stellatoidea, nachází se vzácně. (2) P. wickerhamii: jedná se o patogenní jednobuněčnou řasu, která roste snadno na médiích pro izolaci kvasinek a má stejný makroskopický vzhled jako kvasinky. Mikroskopické vyšetření odhalí kulaté buňky rozdělené vnitřními přepážkami. : Test pozitivní minimálně pro 99 % kmenů : Test negativní minimálně pro 99 % kmenů : ariabilní test () : Test pozitivní minimálně pro 95 % kmenů nebo test s opožděnou expresí (48 hod. nebo 72 hod.) () : Test negativní minimálně pro 95 % kmenů PI. : Pigmentace AR. : Artrospory CA. : Pouzdro MY. : Mycelium (P.C.B. médium) PSMY. : Pseudomycelium (P.C.B. médium) CHL. : Chlamydospory 37 C : Růst při 37 C 10

11 c) Poznámky 1 Identifikace kvasinek je založena jak na jejich biochemických charakteristikách určených na mikrotitrační destičce AUXACOLOR 2, tak na jejich morfologických charakteristikách, které se přednostně stanovují na médiu PCB, nebo případně na médiu RAT. Je nutné získat všechny tyto údaje. Pro identifikaci je nutno zároveň vzít v úvahu původ vzorků, klinické souvislosti, a případně i výsledky doplňujících testů. 2 Při interpretaci výsledků je nutno brát v potaz původ vzorků a klinický kontext. 3 Druhy Rhodotorula glutinis a Rhodotorula mucilaginosa jsou sice uvedeny v interpretační tabulce, avšak jejich numerické profily nejsou specifikovány, protože mnohé jejich znaky jsou variabilní. Tyto 2 druhy jsou charakterizovány lososově růžovou pigmentací kolonií, která se často objevuje po 48 hodinách kultivace. 4 Kvasinky rodu Cryptococcus tvoří pouzdro, které může být výrazně nespojité. 5 Morfologie kvasinek Kloeckera apiculata je charakteristická, která umožňuje jejich rozlišení od druhů se stejnými numerickými profily: velmi malé kvasinky protáhlého tvaru s bipolárními pupeny ( podobné citrónu). 6 Pro potvrzení identifikace některých druhů kvasinek nebo pro rozlišení druhů se stejnými numerickými profily může být vhodné provedení doplňujících testů: test asimilace dusičnanu draselného je možné použít k odlišení kvasinek jako jsou Cryptococcus albidus (pozitivní test) a Cryptococcus laurentii (negativní test) nebo Rhodotorula mucilaginosa (negativní test) a Rhodotorula glutinis (pozitivní test). stanovení ureázy na ureaindolovém médium slouží k potvrzení identifikace rodu Cryptococcus. Tento test je pozitivní do 4 hodin u Cryptococcus neoformans a do 24 hodin u ostatních druhů. redukce tetrazolia odlišuje Candida tropicalis (pozitivní reakce) od Candida lusitaniae (negativní reakce). 11

12 8 ÚČINNOST TESTU Souprava AUXACOLOR 2 umožňuje identifikovat 31 druhů kvasinek a jeden druh jednobuněčných řas Prototheca wickerhamii. porovnání se soupravou AUXACOLOR umožňuje tato souprava identifikovat 7 nových druhů kvasinek: Candida ciferrii, Candida dubliniensis, Candida sake, Kloeckera apiculata, Trichosporon asahii, Trichosporon inkin a Trichosporon mucoides. Prospektivní klinická studie a v retrospektivní studie 120 kmenů, které tvořily reprezentativní vzorek druhů identifikovaných soupravou AUXACOLOR 2, ukázaly že: 92,5 % testovaných kmenů bylo identifikováno do 48 hod. (59,2 % do 24 h), a to vzhledem k použití nových testů v soupravě (hexosaminidázový test a prolinarylamidázový test), rovněž však díky komplementaci seznamu numerických profilů pro druhy uvedené v návodu k použití. Souprava AUXACOLOR 2 je schopna rozlišit všechny kmeny Candida dubliniensis (5 testovaných kmenů) a Candida albicans (15 kmenů). Kombinace prolinarylamidázového testu a fenoloxidázového testu je dalším testem na mikrotitrační destičce, který je vhodný k identifikaci kmenů Candida glabrata (9 kmenů, které jsou odlišeny od Candida zeylanoides) nebo k odlišení Candida krusei (6 kmenů) a Candida lipolytica (4 kmeny). POX test umožnil detekci fenoloxidázové aktivity Cryptococcus neoformans u 4 testovaných kmenů. 9 OMEZENÍ TESTU 1 Souprava AUXACOLOR 2 umožňuje identifikovat pouze druhy kvasinek uvedené v interpretační tabulce. 2 U uvedených druhů uvádí databáze pouze nejčastější numerické profily. Numerický profil, který není uveden v seznamu, může odpovídat vzácnému profilu uvedeného druhu nebo profilu druhu, který není uveden. Doplňující údaje k informacím v databázi jsou uvedeny v interpretační tabulce. 12

13 3 Některé vzácné druhy, které nejsou uvedeny v návodu k použití, mohou mít ve výjimečných případech stejný numerický profil jako druh uvedený v tabulce. 4 Mikrotitrační destička AUXACOLOR 2 musí být použita pouze s čistými kmeny. Kombinace kvasinek jsou detekovány u 16 % vzorků. izualizace kombinací kvasinek je umožněna paralelně kultivací na CandiSelect 4 nebo médiu PCB a testem AUXACOLOR 2. 5 některých případech může použité izolační médium ovlivnit barevnou změnu určitých testů za 24 hod. (xylóza, hexosaminidáza), avšak neinterferuje s identifikací kvasinek po 48 hodinách. 6 Fenoloxidázový / prolinarylamidázový test: některé výjimečné kmeny Cryptococcus neoformans nemusí projevovat fenoloxidázový znak. některé kmeny Geotrichum capitatum, Geotrichum candidum, Trichosporon spp a Cryptococcus laurentii mohou indukovat kaštanově šedé zbarvení jamky. tomto případě je reakce negativní a při vyhodnocení musí být této jamce přiřazena hodnota nula. některé kmeny Prototheca wickerhamii mohou vyjadřovat charakteristiku prolin arylamidázy 7 Neměl by být brán zřetel na případy změny pozitivního výsledku na výsledek negativní, tj. změnu barvy původně interpretovanou jako pozitivní na negativní. Např. jamka, která je žlutá po 24 nebo 48 hodinách a pak zezelená nebo zmodrá po 48 nebo 72 hodinách, je považována za pozitivní. 8 Na druhou stranu jakákoliv změna z negativního výsledku na výsledek pozitivní během prvních 72 hodin musí být brána v potaz: jamka by měla byt považována za pozitivní. Např. jamka, která je modrošedá a modrozelená po 24 nebo 48 hodinách a pak zežloutne po 48 nebo 72 hodinách, je považována za pozitivní 10 KONTROLA KALITY Mikrotitrační destičky AUXACOLOR 2 (R1) jsou podrobeny kontrole kvality pomocí panelu čistých kmenů s dobře definovanými biochemickými charakteristikami. 13

14 Aktivitu soupravy je možné rovněž zkontrolovat v laboratoři pomocí následujících referenčních kmenů: KMENY C. NEOFORMANS ATCC T. MUCOIDES BCCM/IHEM C. LIPOLYTICA IP NEG. GLU. MAL. SAC. GAL. LAC. RAF. INO. CEL. TRE. ADO. MEL. XYL. ARA. HEX. POX/PRO Znaky pozorované po 48 hod. inkubace u kmenů kultivovaných na Sabouraudově agaru. ATCC: American Type Culture Collection, Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852, USA. BCCM / IHEM: Belgian Coordinated Collections of Microorganisms / IHEM Culture Collection, Scientific Institute of Public Health Louis Pasteur, Mycology Section, Rue J. Wytsmanstraat 14, B1050 Brussels IP: Collection Nationale de Cultures de Microorganismes, Institut Pasteur, 25 rue du Docteur Roux, Paris cedex 15, France 11 KONTROLA KALITY ÝROBCE šechny vyrobené reagencie jsou připraveny v souladu s naším systémem kvality, od převzetí surovin až po výslednou komercializaci výrobku. Každá skupina výrobků je podrobena hodnocení kontroly kvality a je uvedena na trh, pouze pokud splňuje předem specifikovaná akceptační kritéria. Záznamy týkající se produkce a kontroly každé skupiny výrobků jsou uchovány v BioRadu. 12 LITERATURA iz francouzská verze. 14

15 BioRad 3, boulevard Raymond Poincaré MarneslaCoquette France Tel. : 33 (0) Fax : 33 (0) /2005 code:

16 Code () 05 Candida krusei Geotrichum capitatum () 01 Candida zeylanoides () 05 Candida lipolytica Candida norvegensis v 04 Candida inconspicua () 01 Candida zeylanoides () 05 Candida lipolytica () 21 Geotrichum candidum Kloeckera apiculata Candida norvegensis () 05 Candida lipolytica Candida norvegensis Candida glabrata () 01 Candida zeylanoides () 01 Candida zeylanoides () 01 Candida zeylanoides () 01 Candida zeylanoides () 01 Candida zeylanoides Geotrichum capitatum () 05 Candida lipolytica v 05 Candida rugosa v 05 Candida rugosa () 05 Candida lipolytica v 05 Candida rugosa v 05 Candida rugosa () 21 Geotrichum candidum v 05 Candida rugosa v 05 Candida rugosa () 21 Geotrichum candidum Prototheca wickerhamii () 01 Candida zeylanoides () 01 Candida zeylanoides () 01 Candida zeylanoides () 01 Candida zeylanoides Candida glabrata Prototheca wickerhamii Candida albicans Candida albicans 2 Code Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Trichosporon asahii Trichosporon asahii Trichosporon asahii Trichosporon asahii Trichosporon asahii Trichosporon asahii Trichosporon asahii Trichosporon asahii Trichosporon asahii Trichosporon asahii Trichosporon asahii Trichosporon asahii Trichosporon asahii Trichosporon asahii Trichosporon asahii Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr 15

17 Code Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr Candida kefyr v 40 Cryptococcus uniguttulatus v 40 Cryptococcus uniguttulatus v 40 Cryptococcus uniguttulatus v 40 Cryptococcus uniguttulatus Saccharomyces cerevisiae v 01 Candida sake v 40 Cryptococcus uniguttulatus v 40 Cryptococcus uniguttulatus v 40 Cryptococcus uniguttulatus v 40 Cryptococcus uniguttulatus v 05 Candida lusitaniae v 40 Cryptococcus albidus v 40 Cryptococcus albidus v 01 Candida sake v 05 Candida lusitaniae v 40 Cryptococcus albidus v 40 Cryptococcus albidus Candida dubliniensis Candida dubliniensis Candida dubliniensis v 05 Candida parapsilosis v 05 Candida parapsilosis Candida albicans Candida albicans v 05 Candida parapsilosis v 05 Candida parapsilosis Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Code Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Saccharomyces cerevisiae Candida dubliniensis Candida dubliniensis v 05 Candida parapsilosis Candida dubliniensis Saccharomyces cerevisiae v 05 Candida parapsilosis v 01 Candida sake Candida dubliniensis v 05 Candida parapsilosis v 01 Candida sake Candida dubliniensis Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans v 05 Candida parapsilosis Candida albicans Candida albicans () 05 Candida tropicalis v 05 Candida parapsilosis v 01 Candida sake Candida albicans () 05 Candida tropicalis v 05 Candida parapsilosis v 01 Candida sake Candida albicans Candida albicans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Candida ciferrii v 40 Cryptococcus uniguttulatus v 40 Cryptococcus uniguttulatus Cryptococcus neoformans 16

18 Code Cryptococcus neoformans v 40 Cryptococcus uniguttulatus v 40 Cryptococcus uniguttulatus Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans v 05 Candida lusitaniae v 40 Cryptococcus albidus v 05 Candida lusitaniae () 05 Candida tropicalis v 05 Candida lusitaniae v 05 Candida lusitaniae v 01 Candida sake () 05 Candida tropicalis v 05 Candida lusitaniae v 40 Cryptococcus albidus Candida guilliermondii v 05 Candida lusitaniae v 01 Candida sake Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Trichosporon inkin Trichosporon inkin Trichosporon asahii Trichosporon asahii Trichosporon asahii Trichosporon asahii Trichosporon asahii Trichosporon asahii Trichosporon asahii Trichosporon asahii () 21 Trichosporon spp () 25 Trichosporon spp Trichosporon asahii () 21 Trichosporon spp Code () 21 Trichosporon spp () 21 Trichosporon spp () 25 Trichosporon spp Trichosporon asahii v 05 Candida lusitaniae () 21 Trichosporon spp () 21 Trichosporon spp () 21 Trichosporon spp Trichosporon asahii Trichosporon asahii () 21 Trichosporon spp () 21 Trichosporon spp () 21 Trichosporon spp () 25 Trichosporon spp () 25 Trichosporon spp () 21 Trichosporon spp () 21 Trichosporon spp Saccharomyces cerevisiae Saccharomyces cerevisiae v 40 Cryptococcus albidus v 40 Cryptococcus albidus Saccharomyces cerevisiae Saccharomyces cerevisiae v 40 Cryptococcus uniguttulatus v 40 Cryptococcus uniguttulatus v 40 Cryptococcus uniguttulatus v 40 Cryptococcus uniguttulatus v 40 Cryptococcus albidus v 40 Cryptococcus albidus v 40 Cryptococcus albidus v 40 Cryptococcus albidus v 40 Cryptococcus albidus Saccharomyces cerevisiae Saccharomyces cerevisiae Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans 17

19 Code Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans v 40 Cryptococcus albidus v 40 Cryptococcus albidus Saccharomyces cerevisiae Saccharomyces cerevisiae Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Candida ciferrii Candida ciferrii v 40 Cryptococcus uniguttulatus v 40 Cryptococcus uniguttulatus Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans v 40 Cryptococcus uniguttulatus v 40 Cryptococcus uniguttulatus Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans v 00 Candida famata Candida guilliermondii v 00 Candida famata v 00 Candida famata v 00 Candida famata Candida guilliermondii v 00 Candida famata Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans Candida ciferrii Candida ciferrii v 40 Cryptococcus albidus Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans v 40 Cryptococcus albidus Code Cryptococcus neoformans Cryptococcus neoformans v 40 Cryptococcus albidus v 40 Cryptococcus albidus v 40 Cryptococcus albidus v 40 Cryptococcus albidus v 40 Cryptococcus albidus v 40 Cryptococcus albidus v 00 Candida famata v 00 Candida famata v 00 Candida famata v 00 Candida famata () 21 Trichosporon spp () 21 Trichosporon spp () 21 Trichosporon spp v 00 Candida famata () 21 Trichosporon spp () 21 Trichosporon spp () 21 Trichosporon spp v 00 Candida famata () 21 Trichosporon spp v 00 Candida famata () 21 Trichosporon spp () 21 Trichosporon spp () 21 Trichosporon spp () 21 Trichosporon spp () 21 Trichosporon spp () 21 Trichosporon spp () 21 Trichosporon spp v 40 Cryptococcus albidus Trichosporon mucoides Trichosporon mucoides Cryptococcus laurentii v 40 Cryptococcus albidus () 21 Trichosporon spp Trichosporon mucoides 18

20 12 BIBLIOGRAPHY 1. C.P. KURTZMAN, J.W. FELL The Yeasts. A taxonomic study, Fourth Revised and Enlarged Edition. Editions Elsevier BH COOPER, M. SILAHUNTER Yeasts of medical importance. Manual of clinical microbiology. Fourth edition. 1985, p H. KOENIG Guide de mycologie médicale. Editions Ellipses 1995, p H. FRICKERHIDALGO, B. LEBEAU, P. KERROEDAN, O. FAURE, P. AMBROISETHOMAS, R. GRILLOT AUXACOLOR TM, a new commercial system for yeast identification: evaluation of 182 strains comparatively with ID 32C. Ann. Biol. Clin. (Paris). 1995; 53(4): H. FRICKER, D. MONGET, B. LEBEAU, M. BABOLAT, P. AMBROISE THOMAS, R. GRILLOT Rapid identification of Candida albicans: evaluation of Rapidec albicans". Study of 444 yeast strains. Ann. Biol. Clin. (Paris). 1992; 50(2): D. SULLIAN, D. COLEMAN Candida dubliniensis : characteristics and identification. J. Clin. Microbiol ; 36(2) : H.S.WANG, R.T. ZEIMIS, G.D. ROBERTS Evaluation of a caffeic acidferric citrate test for rapid identification of Cryptococcus neoformans. J. Clin. Microbiol. 1977; 6(5): 4459.

21

22 BioRad 3, boulevard Raymond Poincaré MarneslaCoquette France Tel. : 33 (0) /2005 Fax.: 33 (0) code: