NAT testování dárců krve v ÚVN Praha

Transkript

1 Oddělení hematologie a krevní transfuze NAT testování dárců krve v ÚVN Praha Ludmila Landová

2 Organizace laboratorního vyšetření dárců krve - OHKT ÚVN Praha Konsolidované řešení ZVÝŠENÍ bezpečnosti pro pacienty, kteří obdrží krev a její složky odebrané a vyrobené v ÚVN Praha ČOS č z Minimální požadavky na krev, dárce krve, vybavení pro krevní transfuzi a určování krevních skupin Kompatibilita v rámci NATO Perspektiva pro ČR 10/2013 zavedení vyšetřování NAT HBV, HCV, HIV 2/2014 zavedení vyšetřování NAT PVB19, HAV Veškerá diagnostika infekčních markerů sjednocena pod jednoho dodavatele: využití komplexního programu: Roche blood safety solution

3 efektivita Laboratoř dárců krve OHKT ÚVN konsolidovaná laboratoř integrace technologií úspora automatizace vzájemná zastupitelnost Gallileo Cobas e601 Cobas s201

4 HBV HCV HIV HAV PVB19 Stejný princip stanovení, ale různými testy! MPX v 2.0 POUZE KVALITATIVNÍ VÝSLEDEK! REAKTIVNÍ/NEREAKTIVNÍ DPX HAV POUZE KVALITATIVNÍ VÝSLEDEK! REAKTIVNÍ/NEREAKTIVNÍ B19 KVANTITATIVNÍ TEST

5 HBV HCV HIV HAV PVB19 1. Automatické poolování vzorků (Hamilton) 2. Příprava vzorků pomocí zařízení COBAS AmpliPrep 3. Automatická amplifikace nukleové kyseliny a automatická detekce PCR produktů v reálném čase pomocí analyzátoru COBAS TaqMan 4. Automatické řízení dat pomocí softwaru pro tvorbu směsí a řízení dat (PDM) cobas s201

6 HBV HCV HIV HAV PVB19 Automatické poolování vzorků (Hamilton)

7 Příprava vzorků cobas AmpliPrep 5 sekvenčních kroků: deaktivace nukleáz: usnadnění uvolnění RNA a DNA viru Uvolněné NK se váží na povrch magnetických skleněných částic Promývací činidlo odstranění nečistoty a nenavázané látky Vyčištěné NK se uvolní eluční pufrem

8 Transkripce, amplifikace a detekce kyseliny Amplifikace DNA polymerázou prodloužení primerů podél cílových templátů= vytvoření dvouřetězcové DNA Detekce amplifikované NK je prováděna vytvořením fluorescentních signálů sond z MMX

9 HBV HCV HIV Interpretace výsledků HAV PVB19

10 Externí kontrola kvality Qualitative detection of HAV Qualitative detection of HBV Qualitative detection of HCV Qualitative detection of HIV Quantitative detection of B19 Qualitative detection of HIV Qualitative detection of HBV Qualitative detection of HCV Qualitative detection of HBV Qualitative detection of HCV ACCURUN 305 Series 100 HCV RNA Control ACCURUN 305 Series 300 HCV RNA Control ACCURUN 305 Series 400 HCV RNA Control ACCURUN 315 Series 150 HIV RNA Control ACCURUN 315 Series 400 HIV RNA Control ACCURUN 315 Series 500 HIV RNA Control ACCURUN 325 Series 200 HBV DNA Control ACCURUN 325 Series 700 HBV DNA Control ACCURUN 345 HIV-1 RNA, HCV RNA, HBV DNA: Multiplex Positive Control

11 Interní kontrola kvality Roche interní kontroly MPX v2.0 Roche interní kontroly DPX IC a QC ke každému jednotlivému poolu

12 Test kit sensitivities for NAT Mini pool or Individual Donation-Testing Mini pool or Single Donation NAT testing HCV RNA HIV RNA HBV DNA HAV RNA B19V DNA Brand name of the test kit cobas TaqScreen MPX Test, version 2.0 cobas TaqScreen MPX Test, version 2.0 cobas TaqScreen MPX Test, version 2.0 cobas TaqScreen DPX Test cobas TaqScreen DPX Test Assay sensitivity (95%) (IU/mL) Sensitivity per single donation (95%) (IU/mL) 6,8 6,8* HIV-1 group M 50,3 HIV-1 group O 18,3 copies/ml HIV-1 group M 50,3 HIV-1 group O 18,3 copies/ml HIV-2 7,9 HIV-2 7,9 2,3 2,3 1,06 1,06 11,48 11,48 Primary pool Resolution pool Primary pool 480 Primary pool 96 Cut off B19V test - all 3 genotypes 1,00E+4 1,00E+5 2,08E+3 1,00E+3 Hodnota B19 v primárním poolu 1 cutoff: 10 4 IU/ml Guideline for Nucleic Acid Testing (NAT) to Reduce the Possible Risk of Human Parvovirus B19 Transmission by Plasma-Derived Products, 2009

13 HBV HCV HIV HAV PVB19 Zavedení metody a její validace 1. Testování negativních vzorků 2. Testování pozitivních vzorků 3. Testování ředících řad 4. Logistická, provozní a uživatelská přijatelnost (havárie systému atd.) v poolech + i jednotlivé vzorky První souhrnný návod na validaci metod NAT:

14 HBV HCV HIV 1. Testování negativních vzorků MPX v 2.0 DPX 698 vzorků 715 vzorků plasma 2. Testování pozitivních vzorků ze SZÚ D0/D1 20 vzorků pro obě metody 3. Testování ředících řad v poměru-robustnost: 1:10 / 1:50 / 1: 100 Kvantifikace sestupnou řadou pouze pro parvob19! HAV Zavedení metody a její validace PVB19

15 Organizace laboratorního vyšetření dárců krve - OHKT ÚVN Praha Současné řešení (od 9/2014) v nové laboratoři 3 v 1

16 Gallileo cobas c8000 = 6x e602 2x cobas s201 2x cobas p312 colibri vzorků / den = vzorků / rok!!!

17

18 HBV HCV HIV HAV PVB19 Rutinní vyšetřování: náročnost na laboranty min práce/1 testovací run 1/ přenést vzorky z preanalytiky do poolovače 2/ přenést vzorky z poolovače do modulu AmpliPrep 3/ akceptace výsledků, jejich kontrola a přenesení do LIS A/ ONLINE PŘENOS žádanek pomocí FTP z PLF center do ÚVN B/ automatické propojení LIS (TIS Brno) a preanalytického systému f. Roche: vyřadí zkumavky bez IDbarcodu, poškozené barcody, nezadané požadavky atd. C/ ONLINE PROPOJENÍ všech modulů pro NAT testování D/ ONLINE PŘENOS žádanek pomocí FTP zpět do center s elektronickým podpisem zodpovědného pracovníka

19 HBV HCV HIV HAV PVB19 Rutinní vyšetřování NAT: náročnost na laboranty vzhledem k počtu vzorků týdně V současné době svozy z PLF center 2x týdně Denní směna NAT: PO-PÁ Noční směna NAT: PO+ČT Zaveden pool 480 pro metodu DPX (HAV, B19) - 3,1 poolu/denní směnu + 96 pool pro metodu MPX (HIV, HCV, HBV) ze 480 zkumavek 5x 96ti poolů FINÁLNÍ KONTROLA VÝSLEDKŮ BIOANALYTIKEM propuštění výsledků včetně elektronického podpisu zadavateli

20 3000 vzorků / den = vzorků / rok cobas c8000 = 3-4x e801 2x preanalytical module cobas p x cobas p680 2x Gallileo NEO Postanalytical temporary archive module cobas p501/p701 2x cobas 6800

21 NÁHLED NA NOVOU LABORATOŘ DÁRCŮ KRVE ROK 2018

22 SEROLOGICKÁ ČÁST: a-hcv, HBsAg, HIV a syphilis

23 ČÁST NAT: HCV, HBV, HIV, HAV a PVB19

24 ALTERNATIVNÍ MINULOST :o)

25 DĚKUJI VÁM ZA POZORNOST