Srdeční troponiny při hodnocení kardiotoxicity v experimentu

Rozměr: px

Začít zobrazení ze stránky:

Download "Srdeční troponiny při hodnocení kardiotoxicity v experimentu"

Břetislav Kovář
před 5 lety
Počet zobrazení:

1 Srdeční troponiny při hodnocení kardiotoxicity v experimentu Michaela Adamcová Ústav fyziologie Lékařská fakulta v Hradci Králové Karlova Univerzita v Praze

2 Hodnocení myokardiálního poškození v experimentálních studií dříve. CK-MB je druhově specifická CK-MB není kardiospecifická a poškození kosterního svalu často doprovází manipulaci se zvířaty (např. i.m. aplikace léčiv, anestezie) Detekce myokardiálního poškození založena na hodnocení histopatologických změn postmortem

3 1999 Adamcová et al. J.Cancer Res. Clin. Oncol. 125: , 1999

4 2009 Berridge et al. Am Heart J. 158(1):21-9, 2009

Hlavní výhody srdečních troponinů vysoká specifita - struktura troponin T a I se liší u srdeční a kosterní svaloviny vysoká senzitivita detekce tzv.

5 Hlavní výhody srdečních troponinů vysoká specifita - struktura troponin T a I se liší u srdeční a kosterní svaloviny vysoká senzitivita detekce tzv. minor lézí myokardu široké diagnostické okno dní robustnost metody rychlá, jednoduchá, robustní mezidruhová homologie struktura troponinů je fylogeneticky konzervována

6 Nové poznatky - revize??? Intracelulární kompartmentalizace ctn: pool cytosolový a pool vázaný na myofibrily (Katus et al. 1991) cytosolový early appearing pool (Thygesen et al. 2010) ctnt je špatně rozpustný, zvýší-li se iontová síla pufru, extrakce může dosáhnout až 80 % (Starnberg et al. 2014) Mechanismy uvolnění troponinů (White 2011): - nekróza - apoptóza - fyziologický turnover - uvolnění fragmentů troponinu, které vznikly proteolytickou degradací - zvýšení permeability buněčné membrány nadměrným napětím - bleby

7 Srdeční troponin T Roche (C: ; D: ) Human ENRKKEEEEL VSLKDRIERR RAERAEQQRI RNEREKERQN RLAEERARRE EEENRRKAED Mouse ENRKKEEEEL ISLKDRIEKR RAERAEQQRI RNEREKERQN RLAEERARRE EEENRRKAED Rat ENRKKEEEEL ISLKDRIEKR RAERAEQQRI RNEREKERQN RLAEERARRE EEENRRKAED Rabbit ENRKKEEEEL VSLKDRIEKR RAD*AEQLRI RAEREKERQN RLAEERARRE EEESRRKAED Cat ENRKKEEEEL ISLKDRIEKR RAERAEQQRI RNEREKERQT RLAEERARRE EEENRRKAED Dog ENRKKEEEEL ISLKDRIEKR RAERAEQQRI RNEREKERQT RLAEERARRE EEENRRKAED Porcine ENRKKEEEEL VSLKDRIEKR RAERAEQQRI RTEREKERQT RLAEERARRE EEENRRKAED Bovine ENRKKEEEEL VSLKDRIEKR RAERAEQQRI RAEREKERQT RLAEERARRE EEESRRKAED Goat TKNITEIADL NQKVFDLRGK FKRPALRRVR ISADAMMQAL LGARAKETLD LRAHLKQVKK Sheep uncharacterized

8 Srdeční troponin I Abbott ARCHITECT (C: 24 40; D: 41 49) Human MADGSSDAAR EPRPAPAPIR RR*SS*NYRAYA TEPHAKKKSK ISASRKLQLK TLLLQIAKQE Mouse MADESSDAAG EPQPAPAPVR RR*SSANYRAYA TEPHAKKKSK ISASRKLQLK TLMLQIAKQE Rat MADESSDAAG EPQPAPAPVR RR*SSANYRAYA TEPHAKKKSK ISASRKLQLK TLMLQIAKQE Rabbit ADESRDAAG EARPAPAPVR RR*SSANYRAYA TEPHAKSKKK ISASRKLQLK TLMLQIAKQE Cat MADNDDAAG CPPPAPAPVR RR*SSANYRAYA TEPHAKKKSK ISASRKLQLK TLMLQIAKQE Dog MADESGDAAG CPPPAPAPIR RQ*SSANYRAYA TEPHAKKKSK ISASRKLQLK TLMLQIAKQE Porcine MADRSGDAAG DSRPAPAPVR RR*SSANYRAYA TEPHAKKKSK IPASRKLQLK TLMLQIAKQE Bovine MADRSGGSTA GDTVPAPPPV RRRSSANYRAYA TEPHAKKKSK ISASRKLQLK TLMLQIAKQE Goat MADRSGSSTA GDTVPAPPPV RRRSSANYRAYA TEPHAKKKSK ISASRKLQLK TLMLQIAKQE Sheep uncharacterised

9 Antracyklinová kardiomyopatie a troponiny 30 % pacientů léčených antracykliny má vyšší hladiny ctn Troponiny pravděpodobně detekují přítomnost antracyklinové kardiotoxicity velmi časně v době, kdy poškození funkce srdce nemůže být odhaleno některými z dalších metodických přístupů využívaných v současné době v klinické praxi (review Dolci et al 2008). Navíc se zdá, že by bylo možné na základě měření troponinů vytypovat pacienty s vysokým rizikem kardiotoxicity, kteří vyžadují důslednější monitorování srdeční funkce.

10 ??? klinické praxe Diagnostické okno troponinů Časový profil koncentrací ctn v různých cyklech terapie Prediktivní hodnota troponinů Možnost využití hs setů ctn versus Heterogenita pacientů Heterogenita chemoterapeutických protokolů

11 Cíle experimentální studie určit diagnostické okno srdečních troponinů na validovaném modelu chronické daunorubicinové kardiomyopatie přispět k optimálnímu časování odběrů pro stanovení troponinů za účelem získání maximální prediktivní hodnoty v klinické praxi

12 Model chronické antracyklinové kardiomyopatie u králíka králíci New Zealand opakované i.v. podání (1x týdně, 8 aplikací) kontrolní skupina, n = 6, (fyziologický roztok 1 ml/kg i.v.) daunorubicin, n = 9, (Daunoblastina Phizer,3 mg/kg i.v.)

13 Metodika I Plazmatická koncentrace srdečních troponinů odběry krve byly provedeny před zahájením experimentu, v 1., 2., 5., 6., 8., 9. a 10. týdnu po 1., 5. a 8. podání daunorubicinu v čase 0, 2, 4, 16, 12, 24, 48 a 72 hod. Plazmatické koncentrace srdečních troponinů byly měřeny pomocí vysoce sensitivních setů hs ctnt (Roche) s detekčním limitem 0,003µg/l a hs ctni (Abbott) s detekčním limitem 0,0007 µg/l.

14 Metodika II Měření systolické funkce LK Echokardiografické hodnocení LVFS (Vivid 4 - sonda10 MHz (GE Healthcare, UK) Invazivní vyšetření dp/dt max a dp/dt min (ADI PowerLab/8SP (Adinstruments, Australia) Histologické a imunohistochemické vyšetření myokardu H&E a Masson's blue trichrome primární MAb anti-human ctni (HyTest, 1:5000) a anti-mouse TnT (Sigma, 1:100) and sekundární donkey-anti-mouse IgG antibody (Jackson ImmunoResearch Lab., USA; 1:500)

15 Metodika III Stanovení troponinů v LK - Western blot Izolace v RIPA Separace na TGX AnykD Precast Gels (BioRad, CA, USA) Primární MAb anti - mouse ctni (Chemicon; 1:10 000) a anti-mouse TnT (Sigma, 1:5 000) Sekundární Ab - horseradish peroxidase-conjugated goat anti-mouse IgG (DakoCytomation, Denmark, 1:10 000)

16 LV FS (%) Výsledky Frakční zkrácení LK control *** dauno

17 Invazivní vyšetření LK

18 Plazmatické koncentrace ctnt

19 Plazmatické koncentrace ctni

20 Korelace ctnt a ctni v plazmě

21 ctni (AUC) ctnt (AUC) Srdeční troponiny (AUC) week * * control dauno * week * control dauno

22 ctnt (AUC) Analýza prediktivního významu srdečních troponinů pro vývoj dysfunkce LK ctni (AUC) week * * ctnt vs dp/dt max AUC 1 AUC 5 AUC 8 r P ctnt vs LVFS AUC 1 AUC 5 AUC 8 r P control dauno ctni vs dp/dt max AUC 1 AUC 5 AUC 8 r P * * ctni vs LVFS AUC 1 AUC 5 AUC 8 r P week control dauno

23 s dp/dt max ctni R p ctnt R p 1-0h h h h h h h h h h h h h h h h *** 5-0h ** 5-0h ** 5-2h h * 5-4h * 5-4h ** 5-6h h h h * 5-24h h ** 5-48h h ** 5-72h h *** ** 8-0h * 8-0h ** 8-2h * 8-2h * 8-4h * 8-4h * 8-6h ** 8-6h * 8-12h * 8-12h * 8-24h h *** 8-48h ** 8-48h h ** 8-72h * *** *** PZH PZH *** Korelace srdečních troponinů s LVFS ctni R p ctnt R p 1-0h h h h h h h h h h h h h h h h *** 5-0h ** 5-0h ** 5-2h ** 5-2h * 5-4h h h h h h h h h h *** 5-72h h ** * 8-0h * 8-0h ** 8-2h h h h h h h h ** 8-24h h * 8-48h ** 8-48h h * 8-72h * * PZH PZH *

24 Histologické vyšetření myokardu control dauno

25 Imunohistochemické vyšetření myokardu ctni kontrola daunorubicin a c ctnt

26 Srdeční troponiny v myokardu - WB Fragment Mw 23 kda

27 Závěr Antracykliny indukovaná kardiotoxicita je spojena s dlouhodobým a kontinuálním uvolňováním troponinů, které závisí na kumulativní dávce antracyklinů a přetrvává ještě po vysazení chemoterapie. Po 5. a 8. aplikaci DAU bylo maximálních hodnot troponinů dosaženo mezi 4. až 6. hod a v dalších sledovaných časových intervalech byl zaznamenán již zřetelný pokles Odlišné diagnostické okno (ve srovnání s AMI) může být vysvětleno rozdílným wash-outem troponinů, souvisejícím s intaktní koronární cirkulací. Hladiny troponinů korelovaly se systolickou dysfunkcí LK (dp/dt max, resp. LVFS).

28 Poděkování M. Štěrba 1, O. Popelová-Lenčová 1, E. Jirkovský 1, V. Geršl 1, Y. Mazurová 2, J. Vávrová 3, J. Maláková 3, V. Palička 3 1 Ústav farmakologie, 2 Ústav histologie a embryologie, Lékařská fakulta v Praze, Univerzita Karlova v Hradci Králové, 3 Ústav klinické biochemie a diagnostiky, Fakultní nemocnice v Hradci Králové Tato práce byla podporována grantem PRVOUK P37/5 a IGA NT

Podobné dokumenty

th Colours of Sepsis

7.2.2017 19th Colours of Sepsis Komplex 3 regulačních proteinů, která je součástí kontraktilního aparátu(v kosterním a srdečním svalu), je připojena k tropomyosinu(proteinu) a nachází se v drážce mezi