LYMFOCYTŮ V ODPOVĚDI DI NA ALERGENNÍ STIMUL

Transkript

1 PROLIFERACE T-LYMFOCYTT LYMFOCYTŮ V ODPOVĚDI DI NA ALERGENNÍ STIMUL D.Vokurková 1, K.Jankovičov ová 1, A.Šrotov rotová 1, P.Víš íšek 2, J.Novosad 1, E.Malá 1 1 Ústav klinické imunologie a alergologie, Fakultní nemocnice a Lékařská fakulta UK v Hradci Králové 2 Ambulance alergologie a imunologie, Litomyšl

2 LÉKOVÉ HYPERSENZITVNÍ REAKCE (LHR) Časné (immediate) Projevy během b 1-61 hodin po posledním podání léku Urtikarie, angioedém, konjunktivitida,, rýma, bronchospasmus IgE mediovaný mechanismus Pozdní (non-immediate) Projevy v intervalu delší ším m než 1 hodina od posledního podání léku Makulopapulozní exantémy my,, opožděná urtikarie Mechanismus závislý z na T-lymfocytechT

3 PATOFYZIOLOGIE Časné alergické LHR důsledek tvorby IgE antigen-specifickými B-B lymfocyty po senzitizaci Po následnn sledné expozici léku l antigen ( zřejmz ejmě komplex haptenu s proteinem) přemostp emostí IgE navázan zané na žírné buňky a bazofily,, stimuluje uvolnění preformovaných mediátor torů (histamin, tryptáza za, cytokiny TNFa) ) a tvorbu nových mediátor torů (leukotriienů, prostaglandinů, kininů)

4 PATOFYZIOLOGIE Pozdní alergické LHR většinou zprostředkovan edkované působením m T lymfocytů haptenová hypotéza ireverzibilní vazba léku l na proteiny antigeny koncept farmakologické interakce s imunitním receptorem (p-i) léky přímo p v interakci s imunitním m receptorem (TCR, HLA-molekula, aktivace Tlymfocytů alterací žlábku MHC)

5 Hypersenzitivita IV. typu pozdní, zprostředkovan edkovaná buňkami, přecitlivělost lost pozdního typu lokáln lní reakce - způsobena zánětlivou z reakcí závislou na Th1 buňkách a monocytech. Termín n dán d n této t to reakci proto, že e po intradermáln lní,, nebo kontaktní aplikaci antigenu nastává maximáln lní reakce po 24 aža 72 hodinách. Dáno charakterem reakce, ne povahou antigenu. Časová prodleva způsobena tím, t že e do místa m reakce musí nejprve migrovat Th1 buňky a makrofágy a vzájemn jemně se stimulovat.

6 Type of drugs eliciting drug hypersensitivity by allergic-immune (hapten) and p-i Int Arch Allergy Immunol 2016;171: , DOI: / Classification of Drug Hypersensitivity into Allergic, p-i, and Pseudo-Allergic Forms Werner J. Pichler a Oliver Hausmann ADR-AC GmbH Department of Rheumatology, Immunology, and Allergology, University of Bern,Inselspital, Bern, and c Löwenpraxis, Luzern, Switzerlandtions

7 Hypersenzitivita IV. typu IgE senzitizace může e přetrvp etrvávat vat roky U pozdních reakcí se zdá, že e paměť T- lymfocytů je ještě silnější Pacienti s LHR vykazují známky permanentní T-bb aktivace ještě roky po akutní události Masivní T-bb stimulace s cirkulujícími lymfoblasty sice mizí do týdnů až měsíců od vzniku příznakp znaků,, ale některn které známky aktivace, detekovatelných FC, trvají ještě dlouho (např.populace CD4+/CD25dim) U prokázan zané lékové alergie se doporučuje uje celoživotn ivotní eliminace léku l i lékůl zkřížen eně reagujících ch

8 DIAGNOSTIKA Důkladná anamnéza Standardizované kožní testy Spolehlivé in vitro testy Provokační testy s lékeml

9 LTT (lymfocytární transformační test) LTT měřm ěří proliferaci lymfocytů po inkubaci s lékem, u kterého je podezřen ení na alergickou reakci v důsledku přecitlivělosti losti k danému lékul In vitro test Reakce je umožněna na vznikem lékovl kově specifických buněč ěčných klonů,, které jsou schopny přímo p interagovat s T-buněčným receptorem. Při i aktivaci lymfocytů se buňky morfologicky měním a probíhá v nich řada procesů,, které vedou ke zvýšen ení syntézy proteinů,, DNA a RNA, a jsou zakončeny buněč ěčným dělend lením.

10 METODIKA LTT Vyseparované lymfocyty z heparinizované krve se spočítaj tají a nařed edí na kocentraci 1 x 10 6 /ml Nařed edí se koncentrace testovaných lékůl na 1mg/ml a 0,2mg/ml Negativní a pozitivní kontrola Do jamek kultivační destičky se nakape testovaný lék l k (potravina) a lymfocytárn rní suspenze pacienta Inkubace 6 dní v termostatu 37 o C a 5%CO 2 Zpracování permeabilizace,, značen ení RNAzou a PI Měření na cytometru

11 Cytometrická DNA analýza - kinetika buněč ěčného cyklu Normální buněčný cyklus G 2 M G 0 DNA analýza G 1 s C o u n t G 0 G 1 s G 2 M 2N obsah DNA 4N

12 Cytometrická DNA analýza - hodnocení spontánní stimulace PHA 0,9% 53,1%

13 VYHODNOCENÍ LTT Schopnost PROPIDIUM JODIDU vázat v se stechiometricky na nukleové kyseliny. Značen ené buňky emitují fluorescenci úměrně obsahu DNA. Analýza pomocí průtokov tokového cytometru pak poskytuje informace o podílu buněk k vyskytujících ch se v jednotlivých fázích f buněč ěčného cyklu (G1, S, G2).

14 VÝSLEDKY LTT Výsledek je vyjádřený jako stimulační index SI - podíl l hodnoty proliferační odpovědi di vzorku stimulovaného testovaným lékem l a hodnotou proliferační odpovědi di nestimulovaného vzorku. Výsledek do hodnoty SI 2 hodnotíme jako negativní SI = jako hraniční SI > 3 je pozitivní.

15 K.K žena ANAMNÉZA Bronchiáln lní astma Persistující alergická rinokonjuktivitida Prick test s vazbou na roztoče Negativita spec.ige běžných inhalačních i molek.alergen.alergenů (ISAC), není eozinofilie V dětstvd tství blíže e nespecifikovaná alergická reakce po Amoksiklavu a Ospamoxu

16 K.K žena 1,4% 39,1% SI = 1,7 negativní 2,4% SI = 2,3 hraniční SI = 3,3 pozitivní 3,2% 4,6%

17 K.K žena Pozitivita bazotestu na PNC G i V Pozitivita LTT na PNC V Hraniční LTT na PNC G Vzhledem k neznámé reakci po PNC a aminopnc v minulosti kontraindikace těchto léku l i v budoucnosti

18 P.E muž Opakované velké lokáln lní reakce (otok přes p 2 klouby) a mírné celkové reakce po vosím m bodnutí (pocit úzkosti, sevřenosti, enosti, výrazná horkost po celém m těle, t slabost bez kolapsu) SI = 6,6 SI = 6,8 3,0% 19,8% 20,4% pozitivní pozitivní Pozitivní výsledek na specif.ige na vosí i včelí jed Pozitivní kožní testy na na vosí i včelí jed SOS medikace při alergické reakci Alergenová terapie na vosí jed

19 U.M žena Od 16let křečovitk ovité bolesti v podbřišku, průjmy, meteorismus, kručen ení v břiše, zvýšen ená kazivost zubů (před maturitou a státnicemi tnicemi vždy v bolesti břicha b s hospitalizací,, křeče k uzavřeno jako emočně indukované potíže) Po expozici lepkem se do hodin osype, špaldový zákusek z bez vyrážky, ale bolesti břicha b za 2-3dny2 Vešker kerá vyšet etření negativní (kolonoskopie,, sérologie s k vyloučen ení celiakie) V r.2014 zahájena bezlepková dieta vešker keré problémy skončily Nyní v těhotenstvt hotenství opačné projevy bezlepkové pečivo vede ke zvracení, smrdí,, vadí Provedené odběry na IgG x pšen.. a žitné mouce, pekař.. kvasnice specif.ige IgE, IgA, IgG na gliadin Kožní prick testy (kravské mléko, pšenip eničná, žitná, špaldová mouka negativní x za 24h opožděná pozitivní reakce na pšenip eničnou nou mouku, mírnm rně i na žitnou a špaldovou) HLA na celiakii HLA Dimer DQ2 pozitivní v ojedinělých případech p padech asociován n s diagnózou celiakie (x nelze interptetovat jako potvrzení celiakie)

20 U.M žena 1,3% 31,8% SI = 3,5 pozitivní 4,5% Jde zřejmz ejmě o buňkami zprostředkovanou reaktivitu vůčv ůči i pšenip eničné mouce (laboratorně i podle opožděné reakce v kožních testech)

21 T.M dítě Od 3.týdne atopický exém,, nejprve v obličeji, poté podpaží,, za ušima, u pod krkem, poté plenková dermatitida Vysazení BKM a ořecho echů ve stravě matky bez viditelného efektu Po zařazen azení příkrmů (kaše Sunárek rek,, krupicová) opakované zvracení Kukuřičnorý norýžová kaše e nevadila Prick testy (BKM, araší šídy, pšen.mouka) negat. Epikutánn nní PM za 48h a 72h - poz Specif.IgE (bílek, BKM, PM, gluten) - negat

22 T.M dítě 1,9% Jde o FPIES (food protein induced enterocolitis syndrom) SI = 4,9 pozitivní PM 9,3% SI = 5,2 pozitivní ŽM 28,6% 9,9% Alergenem vyvolávajícím nonige mediovanou alergii je pšeničná a žitná mouka Vykazují i epikutánní testy (in vivo testují buňkami zprostředkovanou reaktivitu na potraviny)

23 Děkuji za pozornost