Verifikace sérologických testů v imunologických laboratořích ISO 15189 5.5 Postupy vyšetření Andrea Vinciková Centrum imunologie a mikrobiologie Zdravotní ústav se sídlem v Ústí nad Labem
Validace Ověřování, že specifikované požadavky jsou přiměřené pro zamýšlené použití. (VIM3) Prověření analytické metody, které zaručuje, že údaje o jednotlivých znacích byly ověřeny a že jsou pravdivé a vhodné pro zamýšlený účel. (VIM3) Chování metody se vyjadřuje v pojmech analytických charakteristik - výkonnostních parametrů, často znaků analytické metody: preciznost (nepreciznost), pravdivost), mez detekce, mez stanovitelnosti, selektivita, rozsah, linearita, robustnost (VIM3) U výrobků s CE značkou poskytuje výrobce.
home made Laboratoř provádí validaci: bez CE, neurčená pro IVD použití výrazná změna v postupu (setu s CE) jiná matrice Kvantitativní (a tzv. semikvantitativní ) metody Doporučení k provádění validace a verifikace analytických metod v klinických laboratořích druhé vydání: 11/2010 (Klin. Biochem. Metab., 19 (40), 2010, No. 1, p. 36-44.) Kvalitativní metody SLI ČSAKI nedoporučuje akreditovat kvalitativní metody typu home made, protože je velmi obtížné je odpovídajícím způsobem validovat.
Verifikace Poskytnutí objektivního důkazu, že daná položka splňuje specifikované požadavky. (VIM3) Položkou může být např. proces, postup měření, materiál, sloučenina nebo měřicí systém (základní analytické znaky metody). (VIM3) Specifikovanými požadavky může být například to, že jsou splněny specifikace výrobce. (VIM3) Ověření v konkrétní laboratoři, že analytické znaky metody jsou ve shodě s validačními údaji. Verifikaci podléhají všechny metody a je třeba ji v pravidelných intervalech opakovat.
Verifikace při zavádění nové metody při změně principu měření změně měřícího zařízení při změně výrobce diagnostické soupravy změně místa provádění ukazuje-li kontrola kvality přetrvávající problém průběžná verifikace (opakovaná v určitém intervalu)
Přesnost (preciznost) odhad náhodné chyby (reprodukovatelnost, opakovatelnost) Vychýlení měření (bias) odhad systematické chyby pomocí analýzy referenčního materiálu s uvedenou návazností Nejistota měření Údaj, který charakterizuje rozsah v němž se výsledek měření odůvodněně nachází (s danou pravděpodobností).
Kvantitativní (a tzv. semikvantitativní ) metody Kvantitativní metody Metody s kalibrační křivkou (standardy s uvedenými jednotkami U/ml, IU/ml ) Příklady: Anti HBs v IU/l (Architect, AxSYM, Immulite) Anti HAV total v IU/l (AxSYM) FSME IgG v VIEU/ml (ELISA) Semikvantitativní metody Poměrové metody s výsledkem S/CO, titry Příklady: HBsAg (Architect, AxSYM, Immulite) BB IgM (ELISA) TPPA v titru (aglutinace) VDRL v + /++ /+++
Kvantitativní (a tzv. semikvantitativní ) metody Reprodukovatelnost (mezilehlá preciznost, Interassay) 10 20 opakování (replikací) na 2 hladinách (u 2 vz.) komerční kontrolní nebo pacientský vzorek. doporučuje se využít výsledků IKK Opakovatelnost (Intraassay, kontrola přesnosti) 6-10 opakování (replikací) na 1 hladině (u 1 vz.) komerční kontrolní nebo pacientský vzorek V případě komerčního referenčního vzorku s uvedenou návazností na primární standard možno určit Bias (biochemie).
www.sekk.cz / infoservis Pomůcka pro výpočet odhadu kombinované nejistoty ("kalkulačka nejistot") Reprodukovatelnost Opakovatelnost
Průměr Xp= Xi/n SD výběru SDv = ( (xi - xp) 2/(n-1)) Variační koeficient: CV= SDv*100/Xp
Kvalitativní metody Metody v provedení je /není přítomno s hodnocením pozitivní/ negativní / hraniční. Příklady: BB IgG WB VDRL bez hodnocení + / ++ / +++ TPPA bez titrace PL x infekčním agens NIF bez titrace PCR Pokud provedu kvantitativní či semikvantitativní stanovení a pouze výsledek je uveden jako kvalitativní (pozitivní, negativní, hraniční), verifikace by měla být provedena jako u kvantitativní /semikvantitativní met.
Kvalitativní metody U kvalitativních metod je nutno dodržovat přesně postup výrobce a zařazovat požadované interní kontroly, popř. pravidelně zařazovat hraniční vzorek. Reprodukovatelnost (mezilehlá preciznost, Interassay) 6-10 opakování (replikací) na 1 hladině (u 1 vz.) komerčně dodávané kontrolní materiály certifikátem nebo alespoň s cílovými hodnotami deklarovanými výrobcem vyhodnotit shodu s požadovaným výsledkem (pozitivní/hraniční/negativní)
Validační / verifikační protokol přesná identifikace testované soupravy (reagencie) identifikace použitých kontrolních vzorků identifikace použitého měřícího zařízení časové údaje týkající se reprodukovatelnosti (časový interval) časové údaje týkající se opakovatelnosti (datum měření) jména pracovníků provádějících měření datum vyhodnocení validačního /verifikačního protokolu jméno a podpis osoby zodpovědné za vypracování validačního/ verifikačního protokolu
Validace a verifikace v oboru lékařské mikrobiologie dokument VV20100504v.1, schválený 4.5.2010 Validace a verifikace metod průkazu protilátek a průkazu antigenu Metody typu ELISA s CE - validace Validuje výrobce. Výrobce dodává i relevantní literaturu a má dostupné protokoly. Laboratoř může bez dalšího převzít validaci výrobce. V případě, že laboratoř provede jakoukoliv změnu v metodice předepsané výrobcem, musí provést validaci, jakoby se nejednalo o CE metodu.
Metody typu ELISA s CE verifikace Interassay (reprodukovatelnost) Jako verifikace interassay doporučujeme použít kontroly, které jsou součástí soupravy a které zaručují stabilitu vzorku. Laboratoř musí kontroly předepsané výrobcem použít pro každé provedení. Musí zkontrolovat, zda jsou splněna kritéria pro platnost testu a zapsat to do protokolu o měření. Musí mít zpracovaný postup, jak postupovat v případě neshody. Tyto kontroly lze považovat za hodnocení interassay reprodukovatelnosti. Pokud použiji výsledky IKK 10 20 opakování na 2 hladinách, spočítám CV% nebo % shody a dám do verifikačního protokolu stejné jako doporučení odb. 813
Metody typu ELISA s CE verifikace Intraassay (opakovatelnost) Kontrola přesnosti (intraassay) se provádí opakovaným vyšetřením pozitivního a negativního vzorku (každý 3x) 1-2x ročně v závislosti na počtu vyšetření nebo na sezónním výskytu infekce. Pokud změřím u kvantitativní či semikvantitativní metody 1 vzorek (např. hraniční nebo pozitivní) 1x ročně v 6-10 opakování (místo 2x ročně 3x měření pozitivního a negativního vzorku), spočítám CV% a dám do verifikačního protokolu stejné jako doporučení odb. 813
Děkuji za pozornost