Plně automatizované stanovení EBV infekce na analyzátorech ARCHITECT Firma Abbott Laboratories nabízí panel tří nových metod k detekci protilátek proti antigenům viru Epstein-Barrové (EBV) na imunoanalytických systémech ARCHITECT: ARCHITECT EBV VCA IgM, ARCHITECT EBV VCA IgG, ARCHITECT EBNA-1 IgG. Testy jsou určeny zejména ke stanovení diagnózy infekční mononukleózy (dále jen IM) a k určení stádia EBV infekce. Firma Abbott Laboratories nabízí panel tří nových metod k detekci protilátek proti antigenům viru Epstein-Barrové (EBV) na imunoanalytických systémech ARCHITECT: ARCHITECT EBV VCA IgM, ARCHITECT EBV VCA IgG, ARCHITECT EBNA-1 IgG. Testy jsou určeny zejména ke stanovení diagnózy infekční mononukleózy (dále jen IM) a k určení stádia EBV infekce. Virus EBV - charakteristika, patogeneze, klinické příznaky Virus Epstein-Barrové, EBV (viz obr. 1), je zástupcem skupiny lidských herpesvirů (kam patří dále CMV, VZV, HSV1, 2 a HHV6, 7, 8), pro něž je typické navození celoživotní perzistentní infekce u hostitele, provázené obdobími latence a reaktivace. EBV je obalený DNA virus, který byl objeven r. 1964 v buněčných kulturách tkáně Burkittova lymfomu; v r. 1968 byl identifikován jako původce IM. Obr. 1. Schéma viru EBV Zdroj: www.hemaquest.com/ images/ebv.jpg Zdroj: PloS Biology Vol. 3 (12);2005:2045 EBV se vyskytuje běžně na celém světě (jeden z nejčastějších lidských virů) - v rozvojových zemích jsou obyvatelé vystaveni nákaze většinou již v dětství, kdy infekce probíhá převážně asymptomaticky; ve vyspělých zemích dochází k primární infekci často až během dospívání, což může vést k IM (u 35 69 % případů).
Virus se přenáší zejména intimním kontaktem s infikovanou osobou, nejčastěji slinami, dále pohlavním stykem, krví nebo transplantací. EBV je lymfocytotropní virus, infikující zejména B-lymfocyty, kde vedle epiteliálních buněk nosohltanu a slinných žláz latentně perzistuje po primární infekci; reaktivovaný virus je vylučován slinami. Nejčastější klinický projev EBV infekce - infekční mononukleóza - se po počátečních nespecifických příznacích projevuje faryngitidou, tonzilitidou, zvětšením lymfatických uzlin a horečkou. Bývá zvětšená slezina a objevují se poruchy jaterních funkcí; onemocnění je spojeno s výrazným oslabením imunity organismu. U některých jedinců se po akutním onemocnění může rozvinout chronická forma IM spojená s opakovanou aktivací latentní EBV infekce. EBV infekce - sérologický profil a diagnostické schéma Během EBV infekce vytváří organismus protilátky proti několika virovým antigenním komplexům; detekce těchto specifických protilátek slouží k rozlišení jednotlivých fází infekce. Mezi hlavní antigeny patří: VCA (virový kapsidový antigen), EBNA (EB-virový nukleární antigen) a EA (časný - early antigen). Obr. 2. Sérologický profil EBV infekce s vyznačením markerů (Zdroj: materiály firmy Abbott) Základním testovacím postupem je vyšetření VCA IgM, VCA IgG a EBNA-1 IgG; stanovení těchto tří parametrů je u imunokompetentních jedinců dostatečné (Hess, 2004); dodatečná vyšetření dalších markerů slouží k diferenciální diagnostice nejasných výsledků (viz tab. 1).
Existuje řada často lokálně specifických testovacích algoritmů; mezi nejčastěji používané patří tyto dva: - EBNA-1 IgG jako marker první volby; v případě nereaktivního výsledku následuje reflexní testování VCA IgM a IgG; tento algoritmus určuje až 90 % případů EBV infekce v závislosti na vysoké prevalenci, - iniciální testování VCA IgM a IgG následované stanovením EBNA-1 IgG v případě reaktivních výsledků; často používané u mladistvých s příznaky IM. Přehled hlavních markerů EBV infekce (viz obr. 2) 1/ základní vyšetření VCA IgM: IgM protilátky proti virovému kapsidovému antigenu se objevují jako první na začátku infekce a zanikají během 4 6 týdnů. VCA IgG: IgG protilátky proti virovému kapsidovému antigenu se objevují v akutní fázi s vrcholem ve 2. 4. týdnu od začátku infekce a přetrvávají po celý život. EBNA-1 IgG: IgG protilátky proti nukleárnímu antigenu viru Epstein- Barrové typu 1 nejsou exprimovány v akutní fázi, ale pomalu se objevují 2 4 měsíce od začátku infekce a přetrvávají po celý život. 2/ některá doplňková vyšetření EBNA-2 IgG: IgG protilátky proti nukleárnímu antigenu viru Epstein- Barrové typu 2; jedná se hlavně o marker reaktivace, někdy je ale detekován během primární akutní infekce. EA IgG: IgG protilátky proti tzv. časnému antigenu se objevují v akutní fázi infekce a přestávají být detekovatelné po 3 6 měsících; u řady lidí jsou znakem aktivní infekce, nicméně odborné publikace uvádějí výskyt těchto protilátek pouze u 60 80 % případů akutní primární IM, u zbytku nejsou detekovatelné vůbec (Crowley et al., 2012). Naopak u 20 30 % zdravých lidí mohou být tyto protilátky přítomny po řadu let a často jsou nacházeny po reaktivaci. Proto nejsou ideální pro určení stádia nemoci. Avidita: zatímco stanovení avidity protilátek je velmi důležitým markerem u infekcí způsobených jinými herpesviry (např. CMV), u EBV infekce má její určení menší význam. Tab. 1. Interpretace výsledků markerů EBV infekce Základní diagnóza EBV je založena na stanovení tří protilátek k rozlišení mezi akutní, prodělanou nebo žádnou infekcí. V případě nejasných výsledků je třeba testování dodatečných markerů nebo opakovaný odběr vzorků.
(Upraveno z Huzly D, Hess RD Dtsch. Med. Wochenschr. 2007; 132: 151-154) VCA IgM VCA IgG EBNA-1 IgG Interpretace - - - + - - Séronegativita (bez infekce) Potenciálně velmi časná primární infekce, vyžadován opakovaný odběr vzorků ke klinickému zhodnocení Izolované VCA IgM* DD: akutní primární infekce NEBO nespecifické IgM - vyžadováno dodatečné testování nebo opakovaný odběr vzorků + + - Akutní primární infekce + + + Reaktivace* DD: právě proběhlá primární infekce (alespoň 4 týdny od začátku) NEBO nespecifické IgM - vyžadováno dodatečné testování - + + Prodělaná infekce - + - Izolované VCA IgG* DD: akutní primární infekce s negativními VCA IgM nebo prodělaná infekce s negativními EBNA-1 IgG, vyžadováno dodatečné testování - - + DD - diferenciální diagnostika * Vyžadováno další testování pro jasnou interpretaci Izolované EBNA-1 IgG* DD: velmi vzácná situace, prodělané infekce s nedetekovatelnými VCA IgG NEBO nespecifický výsledek Popis panelu metod ARCHITECT EBV Panel metod ARCHITECT EBV sestává ze tří testů k detekci protilátek proti antigenům EBV, které lze provádět na všech imunoanalytických systémech ARCHITECT isystems (patentovaná chemiluminiscenční technologie s flexibilními protokoly, tzv. Chemiflex). Test ARCHITECT EBV VCA IgM je dvoukroková imunoanalýza s předpřípravou ke kvalitativnímu stanovení protilátek třídy IgM proti virovému kapsidovému antigenu viru EBV v lidském séru a plazmě. Test ARCHITECT EBV VCA IgG je dvoukroková imunoanalýza ke kvalitativnímu stanovení protilátek třídy IgG proti virovému kapsidovému antigenu viru EBV v lidském séru a plazmě. Test ARCHITECT EBV EBNA-1 IgG je dvoukroková imunoanalýza ke kvalitativnímu stanovení protilátek třídy IgG proti nukleárnímu antigenu viru Epstein-Barrové typu 1 v lidském séru a plazmě. K základním charakteristikám panelu metod ARCHITECT EBV patří:
Plně automatizované stanovení všech tří testů na jednom analyzátoru z jednoho vzorku bez nutnosti alikvotace. Dosud publikované srovnávací studie ukazují, že v porovnání s nejčastěji používaným panelem testů redukuje panel metod ARCHITECT EBV množství nejasných výsledků z 12,6 % na 6,6 %. Hlavní rozdíl je v menším počtu VCA IgG a EBNA-1 IgG izolovaných reaktivních výsledků (viz tab. 2). Možnost současného stanovení dalších parametrů herpesvirů (CMV IgM, CMV IgG a CMV IgG Avidity) i ostatních sérologických markerů na jedné analytické platformě ARCHITECT. Tab. 2. Srovnání panelu ARCHITECT EBV s rutinně používaným panelem testů ke stanovení EBV infekce (Liaison EBV Panel) Ve srovnání s panelem testů Liaison EBV redukuje panel ARCHITECT EBV množství nejasných výsledků z 12,6 % na 6,6 %. Hlavní rozdíl je v menším počtu VCA IgG a EBNA-1 IgG izolovaných reaktivních výsledků. (Zdroj: COMPARISON OF THE ARCHITECT VCA-IGM, VCA-IGG, AND EBNA IGG PROTOTYPE ASSAYS TO THE DIASORIN LIAISON EBV PANEL, H. B. Braun, M. Berger, S. Bernhardt, S. Berghaus, J. Herzogenrath and E. Sickinger; Department Research and Development, Abbott GmbH & Co KG, Wiesbaden, Germany presented at IFCC 2011, Berlin)
Aktuální a detailní informace o analytických a funkčních vlastnostech všech testů a podrobný návod, jak postupovat při jejich provádění, naleznete v nejnovějších verzích příbalových letáků, které jsou dostupné na webových stránkách www.abbottdiagnostics.com/ifu. ARCHITECT a ChemiFlex jsou obchodní značky firmy Abbott Laboratories v rámci různých jurisdikcí. Všechny ostatní obchodní značky jsou majetkem příslušných vlastníků. Použitá literatura: Bednář, M et al., 1996, Lékařská mikrobiologie bakteriologie, virologie, parazitologie, nakladatelství Marvil. Braun H. B. et al., 2011.Comparison oft he ARCHITECT VCA-IgM, and EBNA IgG prototype assays tot he Diasorin Liaison EBV panel, presented at IFCC 2011, Berlin. Crowley A., et al., 2012, Is There Diagnostic Value in Detection of Immunoglobulin G Antibodies tot he Epstein-Barr Virus Early Antigen?BioResearch Open Access. Hess R.D., 2004. Routine Epstein-Barr Virus Diagnostics from the Laboratory Perspective: Still Challenging after 35 Years. Journal of Clinical Microbiology, Vol. 42, No. 8, p.3381-3387. Huzly D, Hess R.D., Dtsch. Med. Wochenschr. 2007; 132: 151-154. Roubalová K., 2010, Laboratorní diagnostika herpetických virů. Medicína pro praxi, 7(5), 241-244.