PCR DIAGNOSTIKA INFEKČNÍCH AGENS V EXTRAVASKULÁRNÍCH TEKUTINÁCH MUDr. Zuzana Bílková
ZÁKLADNÍ DG ALGORITMUS Základní dg algoritmus vychází: klinický obraz, epikrízaě odbĝr biologického materiálu cytologický obraz (kvantitativní + kvalitativní) základní biochemická vyšetření (CB,glu+lak=energetika/KEB) imunologické parametry (cytokiny, TNF) Dg. floridního zánětlivého procesu přímý průkaz patogenu (kultivační vyšetření, PCR) nepřímý průkaz stanovení specifických protilátek
KULTIVACE Výhody Široké spektrum zachycených mikrorg. na dg pķdách (selektivní dg pķdy) Možnost další práce s vykultivovaným kmenem (identifikace, aglutinace, sérotypizace, citlivost k atb) Nevýhody problémy s rķstem bc na kult. pķdách (po ATB) časová náročnost nemožnost kultivace nĝkterých agens (rutinnĝ se neprovádí u virķě leptospiryě borelie (spirochety), toxoplasma, chlamydie, mykoplazmy)
PCR Výhody rychláě citliváě prķkaz nekultivovatelných a obtížnĝ kultivovatelných patogenķ u kritických pacientķě riziko prodleníě empirická th, eskalační - deeskalační th MOŽNOST PRĶKAZU I VIRĶ (resp. libovolného mikrobiálního agens) Nevýhody nelze dále pracovat s kmenem dg spektrum (možnost multiplexķ) vyšší cena Vhodné obĝ možnosti diagnostiky kombinovat.
KAZUISTIKA Č. 1 83-letá pacientka přijatá na neurol. JIP 8.1.2015 (čt); likvor zaslán TOPELEX + OKM ÚVN epikríza: meningeální syě porucha vĝdomíě TT 38 st.c, susp. neuroinfekce cytologie: Elementy: 680; Barvení: M-G: granulocytární pleocytóza s aktivací lymfocytķ; ůram: drobné gě tyčkyě kokovité formy KEB: -101,68 v záporných hodnotách oxidační vzplanutí profesionálních fagocytķ (granulocytķ) - susp. bakteriální infekce PCR: LIMO pozitivní prķkaz 9.1.2015 (pátek dopoledne) empirická léčba AMP kultivačnĝ prķkaz LIMO 10.1.2015 a nasazeny testy citlivosti (so+ne) Th: AMP lék volby, dop. doplnit Gen
KAZUISTIKA Č. 2 54-letý pacient,hospitalizován na neurologickém odd. epikríza: ICMP s pravostrannou symptomatologií, horní meningeální sy, febrilní, kortikoterapie v reumatolog. záležitosti cytologie: ELE: 109; granulocytární pleocytóza s lymfocytární a ojed. monocytární lipofagickou reakcí, ré: počínající fáze serózního zánĝtu KEB: 24,3 v mezích serózního zánĝtu PCR: I.bĜh se standardním objemem likvoru (200 mikrol): LIMO negativníě II. bĝh objem 500mikrol: PCR LIMO: POZITIVNÍ! (nízká bakteriální náložě chyba inokula) kultivace: z likvoru neprovedena, v HK- LIMO Th: Amp+Gen
KAZUISTIKA Č. 3 39-letá pacientka, hosp. na neurochirurgii, likvor zaslán 2.6.2015 epikríza: 4 mĝsíce po resekci kraniofaryngeomu, opakovaná likvorea,hydrocefalus, zavedený shuntě mok kultivačnĝ negativníě susp. neuroinfekce cytologie: 2.6. Elementy: 200 ; Barvení: M-ů: převaha neutrof. granulocytķě přítomny známky aktivace v lymfocytární řadĝě v monocytární řadĝ bez substrátu fagocytózy; ůram: bez prķkazu bakteriálních a mykotických partikulí. KEB : -125,13 oxidační vzplanutí profesion. fagocytķ PCR: Candida albicans kultivačnĝ bez nálezu (sonifikace)
KAZUISTIKA Č. 3 POKRAČ. 8.6.: ELE: 206; trvající převaha granulocytķ, plazmocyty;v monocyt. řadĝ ojed. pĝnité buňky; KEB: 4ě86; PCR: CAAL pozitivní; kultivace: bbn 14.6.: ELE: 115; granulocytátní pleocytóza, lymfocytární reakce; KEB: -14,35; PCR: CAAL pozitivní; kultivace: bbn 17.6.: ELE 275; granulocytární pleocytózaě zhoršení nálezu KEB: 3ě38ě PCR: CAAL pozitivní; kultivace: bbn 23.6.: ELE: 180; trvající granulocytární pleiocytóza s plazmocytární reakcí, trvající obraz hnisavého zánĝtu KEB: 2ě12; PCR: CAAL pozitivní; kultivace: bbn 30.6.: ELE: 11; KEB: 22,37; PCR: CAAL- NEGATIVNÍ Th: Diflucan
KAZUISTIKA Č. 4 6-ti mĝsíční holčičkaě indikovaný předčasný porod s.c., v dobĝ porodu matka nemocnáě užívala atbě otec přenašeč m. Wilson epikríza: přetrvává výrazná elevace zánĝtlivých parametrķě v HK E.coli cytologie: ELE: 7253; M-ů: převaha neutrof.granulocytķě četná vakuolizace v monocyt. řadĝěreaktivní lymfoplasmocytyě masivní nálož bakterií; ůram: gpolymorfní tyče KEB: -1516 PCR: Enterobacteriaceae POZITIVNÍ Th: cef.3. gen +Gen, Meronem
KAZUISTIKA Č. 4 (TABULKA) 172 ELE 2259 215 487 152 57 (KP, plazmocyt 0) 10 KEB -1948-158 -31,87-6,1 15,74 15,95 15,63 PCR pozit. pozit. pozit. pozit. NEG. NEG. NEG. Tab.: Vývoj infekce v laboratorních parametrech
ZÁVěR Vhodné je metody přímého prķkazu kombinovat PřípadnĜ se rozhodnout pro tuě která je pro konkrétní případ: vhodnĝjší (např. PCR pro obtížnĝ kultivovatelné agens) má vĝtší přínos (mám podezření na určitý patogeně potřebuji co nejrychleji informaciě potvrdím nebo vyloučím PCR)