Chlamydia Antigen Test je určen pro in vitro diagnostiku jako rychlý kvalitativní test na průkaz přítomnosti antigenu chlamydií u žen přímo z cervikálního výtěru a u mužů ze vzorků moči nebo močové trubice. ÚVOD Rod Chlamydia představují tři druhy: Chlamydia trachomatis, Chlamydia pneumoniae (1) jako lidské patogeny a Chlamydia psittaci jako patogen zvířecí. Chlamydia trachomatis má 15 známých serotypů. Často se sdružují s jinými urogenitálními infekcemi a lymfogranulom venereum (LGV). Chlamydia trachomatis způsobují nejběžnější bakteriální sexuálně přenosná onemocnění. V USA se ročně vyskytují asi 4 miliony nových případů, reprezentované hlavně záněty děložního hrdla a negonokokovými uretritidami (8). Způsobuje také zánět spojivek a zápal plic u dětí (2, 4 7). Infekce způsobené Chlamydia trachomatis mají vysokou prevalenci. Onemocnění se často neprojevuje a probíhá bezpříznakově s následnými vážnými komplikacemi u žen a novorozenců. Komplikacemi chlamydiových infekcí u žen jsou zánět děložního hrdla, uretritida, endometritida, zánětlivá onemocnění pánve (PID) a zvýšený výskyt mimoděložního těhotenství a neplodnosti. Vertikální přenos onemocnění z matky na dítě během porodu může mít za následek zánět spojivek a zápal plic (8). Uvádí se, že chlamydiové infekce jsou sdruženy s minimálně 40% všech případů negonokokových uretritid a zánětů nadvarlat (6). Přibližně 70% žen s endocervikálními infekcemi a až 50% mužů s infekcí močové trubice jsou sdruženy s chlamydiovou infekcí (8). Chlamydia psittaci se vyskytují jako přidružené agens u infekcí dýchacích cest u jedinců vystavených kontaktu s infikovanými ptáky a není přenosná z člověka na člověka. Chlamydia pneumoniae byla poprvé izolovaná v roce 1983, je často přidružená s dýchacími infekcemi a zápalem plic (2). Chlamydiové infekce jsou diagnostikovány metodou tkáňových kultur nebo PCR. Společně s PCR je kultivace nejpřesnější metoda odhalení chlamydií. Obě tato metody jsou velmi pracné a drahé. Výsledek je znám nejdříve za několik dní a ne všechna pracoviště jsou na toto vyšetření zařízena (2, 3, 7). Při použití imunofluorescenčních testů je nutné speciální vybavení a kvalifikovaný personál, který odečítá výsledky fluorescenčním mikroskopem pod UV světlem. PRINCIP Chlamydia Antigen Test je rychlý imunochromatografický test. Vzorek je umístěn do extrakční zkumavky s extrakčním činidlem A. Po dvou minutách je přidáno činidlo B a tři kapky (přibližně 120 µl) této směsi jsou z extrakční trubičky aplikovány do jamky testovací kazety. V testovací kazetě je membrána, na které je nanesena v testovací linii monoklonální protilátka a na kontrolní linii je nanesena kozí anti-myší protilátka. Antigeny, které reagují s polyklonální protilátkou značenou zlatem vzlínají po membráně k testovací linii, kde se zachytí pouze přítomné antigeny chlamydií a vytvoří barevný proužek. Pokud ve vzorku nejsou antigeny chlamydií přítomny, objeví se barevný proužek pouze v kontrolní linii. Barevný proužek v kontrolní linii musí být přítomen při každém testu a signalizuje správnost provedení testu a funkčnost kazety. SKLADOVÁNÍ A STABILITA Testovací souprava může být uložena při pokojové teplotě (+2 až +30 C) po dobu exspirace. Nesmí se mrazit. Obal testovací kazety otevřete až těsně před použitím. BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ Pouze pro in-vitro diagnostiku. Nepoužívejte testovací kit po exspirační době. Nekombinujte reagencie a kazety z různých šarží. Nezaměňujte uzávěry lahviček s reagenciemi a kontrolními séry. Nepoužívejte kazetu a tampony pokud mají porušený obal. Nekombinujte reagencie a kazety z různých šarží. 1
Nerozebírejte testovací kazetu. Každá testovací kazeta je jen na jedno použití. Materiál používané v kazetě (např. protilátky) jsou infekční. Správnou manipulací s nimi ale nehrozí žádné nebezpečí. Dodržujte veškerá opatření při sběru, manipulaci a uskladnění celého kitu. Všechny vzorky a pomocný materiál použitý k testování je infekční. Likvidujte kontaminovaný materiál dle platných bezpečnostních přepisů. Reagenční roztok A obsahuje hydroxid sodný (alkalický roztok), reagenční roztok B obsahuje kyselinu chlorovodíkovou. Pokud by se reagencie dostaly do očí nebo do kontaktu s pokožkou, vypláchněte je velkým množstvím vody. K získání cervikálního vzorku používejte pouze sterilní dakronové tampony nebo cytologické kartáčky. Cytologické kartáčky nepoužívejte u gravidních žen. Vyhněte se kontaminaci vzorků používáním sterilně balených tampónů a jednorázových extrakčních zkumavek. Při testování nejezte, nepijte a nekuřte. Noste ochranný oděv (např. plášť), rukavice na jedno použití a ochranné brýle. Jako u všech diagnostických testů, nelze diagnózu zakládat jen na rychlém testu. Ke konečné diagnóze by lékař měl vzít v úvahu další laboratorní vyšetření a celkový klinický obraz. REAGENCIE A POSKYTOVANÝ MATERIÁL 20 testovacích kazet Reagencie A v plastové kapací lahvičce; obsahuje 0.2 M hydroxid sodný (7 ml). Xi, dráždidlo, R 36/38, dráždidlo očí a pokožky Reagencie B v plastové kapací lahvičce; obsahuje 0.2 M kyselina solná (7 ml). 20 extrakčních zkumavek a kapátek Plastový držák Návod k použití Materiál možný k objednání v souladu s 93/42/EEC: Sterilní dakronové tampony (CE0482): 20 kusů Možno doobjednat: Cytologické kartáčky pro optimální odběr vzorku Speciální tampony pro odběry vzorků z močové trubice Požadovaný materiál, který není součástí balení: Stopky Pro vzorek moči: nádoba, pipeta, centrifuga Pro vzorek z močové trubice: speciální tampony SBĚR A SKLADOVÁNÍ VZORKU Kvalitní odběr vzorku je základem správného vyšetření a má u Chlamydia Antigen Testu největší význam (8). Průkaz chlamydií vyžaduje správný a důkladný odběr vzorku, který obsahuje buněčný materiál a ne tělesné tekutiny. Odběr vzorků z cervixu: Používejte tampony dodané v soupravě. Před odběrem vzorku, odstraňte z čípku a jeho okolí hlen jiným vatovým tamponem, který následně vyhoďte. Tampon by měl být vložen až do cervikálního kanálu podél děložního čípku, tak hluboko, až vatová špička tampónu není viditelná. Tento postup umožní odběr kubických nebo cylindrických buněk, které jsou cílové pro chlamydie. Pomalu otáčejte tamponem 15-20 sekund, poté jej opatrně vyjměte tak, abyste se nedotkli vaginální stěny. 2
Alternativně lze odebírat endocervikální vzorky cytologickým kartáčkem. (Upozornění: cytologické kartáčky se nesmí používat u těhotných žen). Postupujte podobně. Po odstranění hlenu vložte kartáček do cervikálního kanálu a třikrát s ním otočte. Kartáček vytahujte opatrně, aby nedošlo ke kontaminaci buňkami vaginální sliznice. V případě, že budeme provádět vyhodnocení testu okamžitě, vložte ihned po odběru vzorku tampon/cytologický kartáček do extrakční zkumavky Odběr vzorků z močové trubice: Používejte standardní ohebné tampony pro odběry vzorků z močové trubice. Poučte pacienty, aby nemočili jednu hodinu před odběrem vzorku. Vložte tampon do močové trubice asi 2-4 cm hluboko. Otáčejte s ním 3-5 vteřin a poté jej opatrně vyjměte. V případě, že budeme provádět vyhodnocení testu okamžitě, vložte ihned po odběru vzorku tampon do extrakční zkumavky Uchování vzorku z cervixu a močové trubice: Pokud nebudete provádět test ihned, uložte tampon do suché přepravní nádobky bez jakýchkoliv transportních médií. Tampony mohou být uloženy po dobu 4 hodin při pokojové teplotě (15-30 C) nebo 24 hodin v chladu (2-8 C). Nezmrazte. Všechny vzorky by měly mít před testováním pokojovou teplotu (15-30 C). Odběr vzorků moče u mužů: Poučte pacienta o odběru 20-40 ml vzorku první ranní moči do čisté, suché, sterilní nádoby bez jakýchkoliv konzervačních látek (není součástí sady). První ranní moč obsahuje největší koncentraci chlamydií a je tudíž považována jako nejvhodnější vzorek. Pokud nebudete testovat vzorky ihned, může být vzorek uskladněn po dobu 24 hodin v chladničce (2-8 C). PROVEDENÍ TESTU I. Extrakce vzorku: 1. Příprava cervikálního vzorku nebo vzorku z močové trubice: Umístěte čistou extrakční zkumavku do plastového držáku a přidejte 5 kapek reagencie A do extrakční zkumavky. Ponořte tampon/kartáček se vzorkem do extrakční zkumavky a extrahujte po dobu 2 minut při pokojové teplotě. Přitiskněte několikrát tampón/kartáček ke stěně zkumavky a vytlačte z něj všechnu kapalinu. Po uplynutí časového limitu přidejte 5 kapek reagencie B a opět vymačkejte tekutinu z tampónu/kartáčku o stěnu zkumavky. Likvidujte tampon nebo kartáček dle platných hygienických směrnic. Extrahované vzorky mohou být uloženy v laboratorní teplotě po dobu 60 minut, aniž by došlo k ovlivnění výsledku testu. 2. Příprava vzorku moče: Vzorky moče by měly být zcentrifugovány (10.000 AT. /min; 10 minut) Pečlivě odstraňte supernatant a sediment resuspendujte v 5 kapkách reagencie A. K opatrnému promíchání vzorku můžete použít pipetu na jedno použití a ponechte při pokojové teplotě po dobu 2 minut. Přeneste vzorek do extrakční zkumavky a pipetou na jedno použití a přidejte 5 kapek reagencie B a promíchejte. Poté může být vzorek použit na testovací kazetu bez prodlení. 3
II. Postup testu Postupujte podle návodu. Před otevřením umístěte testovací kazetu do laboratorní teploty. Odstraňte ochranný obal Chlamydia Antigen Testu a umístěte ho na čistý, suchý a rovný povrch. Označte kazetu pacientovými údaji. Nasaďte kapátko na extrakční zkumavku. Nakapejte 3 kapky (přibližně 120 µl) vzorku z extrakční zkumavky do jamky v testovací kazetě, která je označena písmenem S. Počkejte, dokud se neobjeví růžová linie v kontrolní, případně i v testovací zóně. Výsledek testu by měl být odečitatelný během 15 minut od nakapání vzorku do jamky. V závislosti na koncentraci chlamydiového antigenu mohou být výsledky čitelné již po jedné minutě. Výsledky by neměly být odečítány po více jak 15 minutách. Po 20 minutách by již výsledky neměly být interpretovány. INTERPRETACE VÝSLEDKŮ Negativní výsledek: Jen jedna růžovočervená linie v kontrolní zóně. Žádná zjevná ani slabá růžovočervená linie v testovací zóně. Tento výsledek ukazuje, že ve vzorku není obsažen žádný chlamydia.antigen nebo množství chlamydia antigen se nachází pod detekčním limitem. Pozitivní výsledek: objeví se dvě růžovočervené linie, jedna v testovací a druhá v kontrolní zóně. Tento výsledek ukazuje přítomnost chlamydia antigenu. Chybný test: Pokud se neobjeví žádná linie, test je chybný. Tento výsledek signalizuje možné špatné provedení testu. Test může být opakován s novou testovací kazetou. Buď připravíme nový vzorek, nebo použijeme zbývající vzorek Omezení Chlamydia Antigen Test nerozlišuje přesně sérotyp Chlamydie C. trachomatis, C. pneumoniae nebo C. psittaci. Minimální identifikační hladina tohoto testu se může lišit v závislosti na přítomném sérotypu. Výsledek je také závislý na množství chlamydií ve vzorku. To může být ovlivněno metodami odběru vzorku a dalšími faktory jako je věk, předchozí onemocnění atp. 4
KONTROLA JAKOSTI Chlamydia Antigen Test má zabudovanou vnitřní kontrolu. Růžová linie v této kontrolní testovací oblasti je známkou správného provedení testu a funkčnosti kazety. Správná laboratorní praxe vyžaduje však systém externích kontrol, které zaručují správné provádění. Jedná se o dvě kontroly, jedna je negativní a druhá slabě pozitivní kontrola. Použití slabě pozitivní kontroly zajišťuje určitou úroveň citlivosti testu. Doporučujeme používat systém těchto kontrol jako ověření správnosti provádění testů. CITLIVOST Identifikační práh Chlamydia Antigen Testu byl stanoven na 1x10 5 mikroorganizmů na test. Citlivost byla zjišťována na různých vzorcích s různými sérotypy chlamydií. SPECIFITA Směs protilátek, která je používána v Chlamydia Antigen Testu je schopna rozeznat všech 15 sérotypů chlamydií. Zkřížená reaktivita s ostatními mikroorganismy byla studována pomocí bakteriálních suspenzí v koncentraci 10 7 CFU/ml. Následující mikroorganismy nevykazovaly žádnou zkříženou reaktivitu v Chlamydia Antigen Testu: Acinetobacter calcoceticus Proteus vulgaris Salmonella typhi Acinetobacter spp. Staphylococcus aureus Candida albicans Neisseria catarrhalis Neisseria gonorrhoea Neisseria meningitidis Neisseria lactamica Escherichia coli Gardnerella vaginalis Streptococcus faecalis Streptococcus faecium Pseudomonas aeruginosa Trichomonas vaginalis POUŽITÁ A DOPORUČENÁ LITERATURA 1. Grayston, J. T. et al., N. Engl. J. Med. 315:161, 1986. 2. Barnes, R., Clin. Microbiol. Rev. 2:119, 1989. 3. Kellogg, J. A., Arch.Pathol. Lab. Med. 113:453, 1989. 4. Schachter, J., N., Engl. J. Med. 13:105, 1978. 5. Schachter, J., Chlamydiae, p.1045ff, Manual of Clinical Microbiology, 5th ed, ASM, Washington, 1991. 6. Schachter, J. & Dawson, C. R., Sex. Transm. Dis. 8:167, 1981. 7. Stamm, W. E., Ann. Intern. Med. 108:710, 1988. 8. CDC. Morbid.Mortal. Weekly Rep. 34(suppl 3s): 535, 1985. 5
Symboly Číslo šarže +2 C +30 C Skladujte při pokojové teplotě Datum exspirace Pouze na jedno použití Pro použití in-vitro 0123 Máte nějaké otázky týkající se použití testu nebo jeho vyhodnocení? Kontaktujte svého dodavatele nebo výrobce. 6