Rapid-VIDITEST Swine Flu

Transkript

1 Rapid-VIDITEST Swine Flu Jednokrokový kazetový test pro detekci antigenu viru chřipky typu A. Návod k použití soupravy Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II 365, Vestec, Jesenice u Prahy, Tel: , Fax: , objednavky@ vidia.cz, Web: POUŽITÍ: Rapid-VIDITEST Swine Flu je jednokrokový barevný imunochromatografický test pro kvalitativní stanovení antigenu viru chřipky typu A. Je určen pro humánní diagnostiku ke stanovení antigenu prasečí chřipky z nosních výtěrů, výplachů a aspirátů, a také pro veterinární diagnostiku ke stanovení antigenu ze vzorků od prasat (z výtěrů nosohltanu, z plicní tkáně a stolice). ÚVOD: Virus chřipky typu A (Influenza A virus) z čeledi Orthomyxoviridae obsahuje RNA genom. Genom viru kóduje jeden nebo dva nestrukturální proteiny a devět strukturálních proteinů, které společně s lipidovým obalem převzatým od hostitelské buňky vytvářejí virovou částici. Virus chřipky je jednou nejrozšířenějších příčin morbidity a mortality lidské populace na celém světě. Prasečí chřipka je vyvolávána subtypy H1N1, H1N2, H3N1, H3N2 a H2N3. Nákazy u vepřů způsobují celosvětově hlavně tři subtypy chřipkového viru typu A (H1N1, H3N2, and H1N2). Prasečí chřipka se klinicky projevuje u člověka symptomy jako je kašel, horečka, bolení v krku, únava, nechuť k jídlu a méně často zvracení a průjmy. PRINCIP TESTU: Rapid-VIDITEST Swine Flu je jednokrokový barevný imunochromatografický test pro kvalitativní stanovení antigenu viru chřipky typu A v nazopharyngeálních výtěrech od lidí a od prasat a ve vzorcích odebraných z plicní tkáně prasat nebo jejich výkalů. V testovacích zónách kazety je navázána myší monoklonální protilátka proti virovému antigenu. V průběhu testování vzorek reaguje s barevným konjugátem, který byl předem ponechán vyschnout v místě aplikace vzorku. Směs pak kapilárním efektem vzlíná vzhůru po membráně. V případě pozitivního výsledku je barevný konjugát zachycen specifickými protilátkami, což se ve výsledkové zóně projeví jako barevná linka. Vzlínání pokračuje až k imobilizovaným kontrolním protilátkám v kontrolní zóně, kde se vždy na konci testu objeví zelená linka. Přítomnost zelené linky ověřuje: 1) že se použil dostatečný objem vzorku, 2) že došlo ke správné vzlínavosti vzorku, 3) interní kontrolu reagencií. 1

2 OBSAH SOUPRAVY: - Testovací kazety (obsahují jednorázové plastové pipety) - Sterilní odběrové tampóny - Roztok B (ředicí roztok pro vzorky) - Testovací zkumavky - Návod k použití - Certifikát kontroly balení - Odběrová zkumavka s pufrem pro vzorky tkáně/stolice POTŘEBNÝ MATERIÁL NEDODÁVANÝ SE SOUPRAVOU: - Sterilní nádoba pro odběr vzorků - jednorázové rukavice - stopky SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ: S běr humánních vzorků: 1. Stěr z nosohltanu: Vnořte vatový tampón skrze nosní dírku do oblasti zadního nosohltanu. 2. Nosní výplach/aspirát: Nakapejte do nosních dírek sterilní fyziologický roztok a vzorek zachytávejte do odběrové nádoby. S běr vzorků od prasat: 1. Stěr z nosohltanu: Vnořte vatový tampón skrze nozdru do oblasti zadního nosohltanu. 2. Výplach nosohltanu: Nakapejte do nozder fyziologický roztok a vzorky nechte vytékat do sterilní odběrové nádoby. 3. Plicní tkáň usmrceného zvířete: Odeberte menší část postižené plicní tkáně a rozetřete/homogenizujte v roztoku PBS, stočte a odeberte supernatant. 4. Výkaly/stolice: Vzorky stolice/výkalů odebírejte do čistých a suchých odběrových nádob (bez konzervantů a transportních medií). Odešlete ihned po odběru do laboratoře (citlivost s časem klesá). Vzorky z nosohltanu během skladování a transportu udržujte chlazené na 2º-4ºC. 2

3 PRACOVNÍ POSTUP: Před testováním nechte testovací kazetu, vzorky nosního výtěru nebo výplachu a kontroly vytemperovat na laboratorní teplotu (15 až 30 C). Neotvírejte obal, dokud nejste připraveni provést test. Postup pro vzorky nosních výplachů/aspirátů: Pro každý vzorek použijte novou testovací zkumavku a dávkovací pipetu. 1. Do testovací zkumavky přidejte vzorek výplachu/aspirátu z nosohltanu (6 kapek nebo 300 µl) (1). 2. Přidejte roztok B (3 kapky nebo 150 µl) a zamíchejte (2). Vyjměte testovací kazetu z obalu a ihned po otevření ji použijte. Pro každý vzorek použijte novou testovací kazetu. 3. Aplikujte 100 µl do oválného okénka, které je označeno písmenem S (3). Začněte měřit čas. Po 10 minutách odečtěte výsledek (objeví se barevné linky). Postup pro vzorky nosních výtěrů: Pro každý vzorek (stěr) použijte novou testovací zkumavku a dávkovací pipetu. 1. Do testovací zkumavky aplikujte 15 kapek roztoku B (1). 2. Vložte do ní odběrový tampon. Krouživým pohybem tamponu důkladně roztok promíchejte. Třete tampon o stěnu zkumavky, vytlačte z něj co nejvíce tekutiny (2). Vyjměte testovací kazetu z obalu a ihned po otevření ji použijte. Pro každý vzorek použijte novou testovací kazetu. 3. Aplikujte 100 µl do oválného okénka, které je označeno písmenem S (3). Začněte měřit čas. Po 10 minutách odečtěte výsledek. 3

4 Postup pro vzorky tkání (supernatant)/stolice: Pro každý vzorek používejte novou odběrovou zkumavku s pufrem. Odšroubujte víčko zkumavky: 1. Vzorek stolice: Vnořte tyčinku několikrát do vzorku stolice, abyste odebrali malou část vzorku (100mg) (1). Zašroubujte víčko zkumavky nyní obsahující pufr a vzorek stolice. Protřepejte obsah (2). Z tekutých vzorků stolice a tkáňového supernatantu odeberte vzorek plastovou pipetou a přidejte 100 μl vzorku do odběrové zkumavky s pufrem. 2. Vyjměte testovací kazetu z obalu a ihned po otevření ji použijte. Zatřepejte zkumavkou se vzorkem, abyste rozmíchali vzorek v pufru. 3. Odlomte špičku víčka (3). Pro každý vzorek použijte novou testovací kazetu. 4. Aplikujte přesně 4 kapky do oválného okénka, které je označeno písmenem S (3). Začněte měřit čas. Po 10 minutách odečtěte výsledek. INTERPRETACE VÝSLEDKŮ: ZELENÁ ČERVENÁ ČERVENÁ Negativní Pozitivní Neplatný Neplatný 4

5 POZITIVNÍ: Kromě zelené linky v kontrolní zóně C se objeví také červená linka ve výsledkové zóně T. NEGATIVNÍ: V kontrolní zóně C se objeví jedna zelená linka. Výsledková zóna T zůstane prázdná. NEPLATNÝ: Test je neplatný, pokud se v kontrolní zóně C neobjeví zelená linka bez ohledu na přítomnost červené linky ve výsledkové zóně T. Nejčastějšími příčinami selhání testu jsou: nedostatečná koncentrace vzorku, nesprávný pracovní postup nebo poškození reagencií. Zkontrolujte pracovní postup a opakujte test s novou testovací sadou. Pokud potíže přetrvávají, kontaktujte svého dodavatele. POZNÁMKA K INTERPRETACI VÝSLEDKU: Intenzita červené linky v místě označeném T se může měnit v závislosti na koncentraci antigenů ve vzorku. Nicméně tímto kvalitativním testem nelze posuzovat množství antigenu ani odhadovat nárůst nebo pokles. PLATNOST TESTU: Test je platný pouze v případě, když se v kontrolní zóně objeví zelená linka. V testu je použit interní standard. Zelená linka, která se objevuje v kontrolní zóně, je vnitřní kontrolou testu. Potvrzuje dostatečný objem vzorku a správný průběh testu. OČEKÁVANÝ PŘÍNOS: Ve Spojených státech je nákaza chřipkou zodpovědná za přibližně úmrtní a více než hospitalizací. Celkové náklady spojené s každoroční chřipkovou epidemií se odhadují na 10 miliard dolarů. OMEZENÍ TESTU: 1. Rapid-VIDITEST Swine Flu prokazuje pouze přítomnost viru chřipky typu A v testovaném vzorku (kvalitativní detekce). Tímto kvalitativním testem nelze posuzovat množství antigenu ani odhadovat jeho nárůst nebo pokles. 2. V případě, že je test negativní, ale klinické symptomy přetrvávají, doporučujeme znovu otestovat jinými klinickými metodami. Negativní výsledek v žádném případě nevylučuje možnost chřipkové infekce. 3. Tento test slouží pouze k pravděpodobné diagnóze chřipkové infekce. Veškeré výsledky musí být interpretovány v souladu s ostatními klinickými známkami a laboratorními nálezy, které má lékař/veterinář k dispozici. VLASTNOSTI TESTU: Citlivost a specifita Různá ředění virového extraktu byla testována přímo v ředicím roztoku nebo v negativním vzorku nosního výtěru. Detekce byla provedena podle návodu a výsledky byly porovnány s jiným komerčně dostupným testem. Test vykazoval >99% citlivost a >99% specifitu ve srovnání s jiným komerčně dostupným rychlotestem. 5

6 Křížové reakce S testem Rapid-VIDITEST Swine Flu byla provedena studie křížové reaktivity. Nebyla nalezena žádná křížová reaktivita s běžnými respiračními patogeny a dalšími organizmy a látkami, které se příležitostně mohou nacházet ve vzorcích z nosohltanu, např. RSV (Respiračně syncytiální virus), Adenovirus. SKLADOVÁNÍ A STABILITA: Skladujte v originálním obalu při teplotě 2 až 30 C. Test je stabilní do data exspirace uvedeného na obalu. Nezmrazujte. BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ: - Pouze pro in vitro diagnostiku - Nepoužívejte po uplynutí expirační doby - Testy až do použití uchovávejte zatavené v neporušených obalech. - Pokud je hliníkový obal porušený test nepoužívejte. - Používejte ochranný oděv a ochranné rukavice. Při práci nejezte, nepijte a nekuřte. - Se vzorky manipulujte jako s potenciálně infekčním materiálem. - Testovací kazetu likvidujte jako biologický infekční odpad v souladu s příslušnými předpisy. - Test provádějte nejpozději do 2 hodin od otevření hliníkového obalu. REFERENCE: 1. BARENFANGER et al., Clinical and Financial Benefits of Rapid Detection of Respiratory Viruses: an Outcomes Study. Journal of Clinical Microbiology. August 2000, Vol 38 No 8, p LOWEN, A. et al., The guinea pig as a transmission model for human influenza viruses. PNAS, June 2006, Vol 103, No 26, POUŽITÉ SYMBOLY: Určeno pro diagnostiku in vitro Datum exspirace Číslo šarže Výrobce Datum poslední revize: 04/2013 6