Enterotoxiny Staphylococcus aureus Jana Kotschwarová Andrea Koťová
Obsah Charakteristika Staphylococcus aureus Vlastnosti Faktory virulence Enterotoxiny Patogeneze Výskyt Metody stanovení Prevence výskytu
Charakteristika Staphylococcus aureus Zlatý stafylokok nejvýznamnější druh rodu Staphylococcus (čeleď Staphylococcaceae) velikost 0,7 0,9 µm, tvoří hroznovité shluky G+ kok, fakultativně anaerobní, nepohyblivý zkvašuje manitol
Vlastnosti tvoří exopolysacharidy slizy tvoří biofilm pomocí adhezinu na krevním agaru může způsobovat úplnou hemolýzu MRSA (methicillin-rezistentní S. aureus)- kmeny rezistentní vůči atb. oxacilinu Podmínky Růst bakterií Produkce enterotoxinu (optimum/rozmezí) Teplota [ C] 7-48 35-40 10-48 ph 4,3-9 7-8 4,5-9,6 aw 0,83-0,99 0,98 0,87-0,99
Faktory virulence produkce velkého množství biologicky aktivních látek a. Adhezivní faktory b. Propagační a transportní faktory- α hemolyzin c. Ochranné faktory a toxiny
Enterotoxiny toxické exoproteiny chránící koky bohaté na Lys, Asp, Glu a Tyr metabolické produkty při množení S. aureus vyvolávají alimentární onemocnění 20 typů enterotoxinů SEA SEU (značení genů) SEA-SEE způsobuje alimentární intoxikaci odolávají varu 20 min
Patogeneze přirozeně se vyskytuje na kůži a oblasti nosohltanu lidí a zvířat při oslabení organismu- kožní záněty, alimentární onemocnění, pneumonie, osteomyelitidy, STS, syndrom opařené kůže, abscesy, bakteriální endokarditidy a sepse
Stafylokoková enterotoxikóza infekční dávka S. aureus min. 10 5 KTJ.g -1 a koncentrace toxinu v potravině 1 ng.g -1 příznaky se objeví za 1-6 h po konzumaci příznaky: nevolnost, zvracení, bolest břicha, průjem (bez horečky) a bolest hlavy odeznění za 24 h mnoho případů stafylokokové enterotoxikózy nezaznamenáno pro rychlý průběh
Výskyt přirozeně osidluje pokožku a sliznice, běžná mikroflóra vemene kontaminace ze zvířat, prostředí, nebo lidí během výrobního procesu mléčné výrobky, lahůdky (šunka.), pudinky a salátové dresinky u výrobků s velkým podílem ruční práce
Metody stanovení enterotoxinů Přímé metody imunologické metody fyzikálně-chemické metody Nepřímé metody molekulárně biologické metody
Imunologické metody ELISA vazba antigenu a protilátky značené enzymem, který štěpením substrátu vyvolá barevnou změnu nejčastěji se využívá tzv. sandwich ELISA, kdy jsou na detekovaný antigen navázány 2 protilátky- imobilizovaná a enzymaticky značená ELFA princip je podobný jako u metody ELISA, rozdíl je v použitém substrátu, který je enzymem štěpen na fluorescenční produkt vzniklé chemické změny jsou detekovány pomocí fotodiodového fluorimetru
RPLA = reverzní pasivní latexová aglutinace aglutinační reakce založena na vysoce specifické vazebné reakci mezi antigenem a protilátkou, nosičem je barevná latexová částice provádí se v mikrotitračních destičkách hodnocení je semikvantitativní- podle mřížkové struktury vzniklé na dně jamek
Fyzikálně chemické metody SDS- PAGE separace proteinů dle jejich pohyblivosti (v závislosti na délce řetězce) v elektrickém poli polyakrylamidový gel s SDS LC-MS přesné stanovení proteinu na základě jeho molekulové hmotnosti a na základě pořadí AK po enzymatickém štěpení nedostupnost std. pro celé spektrum SEs
HPLC časově náročná příprava vzorků- složité extrakční postupy a následné čištění extraktů pomocí kolony se stacionární fází separujeme jednotlivé toxiny ověření identity toxinu imunologickou metodou nejsou dostupné standardy pro všechny SEs, zatím stanoveno jen SEA a SEB
Molekulárně biologické metody PCR denaturace DNA- rozvolnění vlákna hybridizace- nasednutí primerů syntéza- vznik nových vláken působením enzymu DNA- polymerázy
Prevence výskytu důsledná hygiena pracovníků a používání ochranných rukavic v potravinářském provozu zabránění množení bakterie a následné produkci toxinupasterace nenechávat potraviny dlouhodobě při pokojové teplotě
Zdroje http://cit.vfu.cz/alimentarnionemocneni/sa/index.html http://www.chemickelisty.cz/docs/full/2012_08_745-749.pdf http://www.wikiskripta.eu/index.php/enterot oxiny http://www.wikiskripta.eu/index.php/rod_sta phylococcus#staphylococcus_aureus