Rev. 04/09 Upozornění: Tento návod k použití je v souladu se směrnicí IVD 98/79/ES a je určen pro zákazníky z členských států Evropské unie. ÚČEL POUŽITÍ ST AIA-PACK Intact PTH ST AIA-PACK Intact PTH je určen pouze pro diagnostické použití in vitro ke kvantitativnímu měření intaktního parathyroidního hormonu v lidském séru nebo v plazmě s EDTA na analyzátorech systému Tosoh AIA. SOUHRN A VYSVĚTLENÍ Parathyroidní hormon (parathormon, parathyrin, PTH) je polypeptid tvořený 84 aminokyselinami (m. h. 9 800 Daltonů). PTH zvyšuje obsah ionizovaného vápníku v krvi stimulací resorpce z kostí a uvolňováním vápníku a fosfátu z kostí do extracelulární tekutiny přímým působením na kost. A PTH také podporuje reabsorpci ionizovaného kalcia a inhibuje renální reabsorpci fosfátů cestou působení na renální tubuly. PTH je důležitým hormonem pro optimalizaci koncentrace vápenatých iontů v krvi. PTH je rychle metabolizován v játrech a v ledvinách na primární biologicky aktivní N-terminální fragmenty a biologicky neaktivní C-terminální fragmenty s mnohem delšími poločasy. C-terminální fragmenty, vylučované ledvinami, jsou typicky výrazně zvýšené u subjektů se selháním ledvin. Stanovení intaktního PTH podávají přesnější obraz kinetiky sekrece PTH, protože intaktní PTH je méně ovlivněn snižující se funkcí ledvin. Proto je intaktní PTH velmi vhodným markrem při vyhledávání nemocí příštítných tělísek a ledvin, např. hyperparatyreoidismu a sekundárního hyperparatyreoidismu, pro posouzení úspěšnosti či neúspěšnosti operativního odstranění maligních příštítných tělísek a pro pozorování pooperační rekonvalescence. PRINCIP STANOVENÍ ST AIA-PACK Intact PTH je dvoumístná imunoenzymometrická analýza, která je celá prováděná v testovacích kelímcích ST AIA-PACK Intact PTH. Intaktní PTH přítomný v testovaném vzorku se váže na polyklonální protilátky imobilizované na magnetických zrnech a na enzymem značených polyklonální protilátkou v ST AIA-PACK Intact PTH. Magnetická zrna jsou promytím zbavena nenavázaných, enzymem značených polyklonálních protilátek a jsou pak inkubována s fluorogenním substrátem, 4-methylumbeliferylfosfátem (4MUP). Množství enzymem značených polyklonálních protilátek, které se vážou na zrna, je přímo úměrné koncentraci PTH v testovaném vzorku. Je vynesena standardní křivka a neznámé koncentrace vzorků jsou vypočítány pomocí této křivky. DODÁVANÝ MATERIÁL Katalogové č. 0025213 Plastové testovací kelímky obsahující dvanáct lyofilizovaných magnetických zrn potažených kozími polyklonálními protilátkami proti PTH a kozích polyklonálních protilátek proti PTH konjugovaných s hovězí alkalickou fosfatázou obsahujících azid sodný jako konzervační látku. 1-11 POTŘEBNÉ MATERIÁLY, KTERÉ NEJSOU SOUČÁSTÍ DODÁVKY Následující materiály jsou požadovány pro provedení analýzy intact PTH pomocí ST AIA-PACK Intact PTH (kat. č. 0025213) na analyzátorech systému Tosoh AIA. Následující materiály společnost Tosoh dodává samostatně. Materiály Kat. č. AIA Nex IA/AIA-21 0018539 AIA Nex IA/AIA-21 LA 0018540 AIA-1800 ST 0019836 AIA-1800 LA 0019837 AIA-2000 ST 0022100 AIA-2000 LA 0022101 AIA-600 II 0019014 AIA-600 II BCR 0019328 AIA-360 0019945 AIA-PACK SUBSTRATE SET II 0020968 AIA-PACK SUBSTRATE REAGENT II / AIA-PACK SUBSTRATE RECONSTITUENT II ST AIA-PACK Intact PTH CALIBRATOR SET 0025313 CALIBRATOR (1) 0 pg/ml CALIBRATOR (2) 15 pg/ml (přibližně) CALIBRATOR (3) 50 pg/ml (přibližně) CALIBRATOR (4) 200 pg/ml (přibližně) CALIBRATOR (5) 800 pg/ml (přibližně) CALIBRATOR (6) 2 400 pg/ml (přibližně) ST AIA-PACK Intact PTH SAMPLE DILUTING SOLUTION 0025513 AIA-PACK Intact PTH CONTROL SET 0025413 AIA-PACK WASH CONCENTRATE 0020955 AIA-PACK DILUENT CONCENTRATE 0020956 KELÍMKY NA VZORKY 0018581 AIA-PACK DETECTOR STANDARDIZATION TEST CUP 0020970 AIA-PACK SAMPLE TREATMENT CUP 0020971 Další požadavky pouze pro AIA Nex IA/AIA-21: PIPETOVACÍ ŠPIČKY 0018552 PŘEDEM VLOŽENÉ PIPETOVACÍ ŠPIČKY 0018583 Další požadavky pouze pro AIA-600 II, AIA-1800 a AIA-2000: PIPETOVACÍ ŠPIČKY 0019215 STOJAN PRO PIPETOVACÍ ŠPIČKY 0019216 PŘEDEM VLOŽENÉ PIPETOVACÍ ŠPIČKY 0022103 Používejte pouze materiály dodané společností Tosoh. Nepoužívejte náhradní materiály získané z jiných zdrojů, protože výkonnost testu je charakterizována přísně na základě materiálů společnosti Tosoh. VAROVÁNÍ A BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ 1. ST AIA-PACK Intact PTH je určen pouze pro diagnostické použití in vitro. 2. V rámci jednoho zásobníku nemíchejte testovací kelímky různých šarží nebo různých testů. 3. ST AIA-PACK Intact PTH obsahuje azid sodný, který může reagovat s olověným nebo měděným potrubím za vzniku potenciálně výbušných azidů kovů. Při likvidaci těchto činidel do kanalizace je vždy spláchněte velkým množstvím vody, aby nedocházelo k hromadění azidu. 2-11
4. Při přípravě tohoto výrobku není používáno lidské sérum. Protože však pro přípravu vzorků budou používány lidské vzorky a další výrobky pro kontrolu kvality v laboratoři mohou být deriváty lidského séra, dodržujte prosím při manipulaci se všemi vzorky a kontrolními vzorky standardní laboratorní bezpečnostní opatření. 5. Nepoužívejte po uplynutí data expirace. 6. ST AIA-PACK Intact PTH bylo navrženo tak, aby u převážné většiny vzorků nedocházelo k problémům způsobeným zakřivením kalibrační křivky při vysokých koncentracích, tzv. hook effect. Vzorky s koncentracemi intaktního PTH přibližně od 2 000 do 100 000 pg/ml budou odečteny jako vyšší než 2 000 pg/ml. K jevu zahnutí kalibrační křivky ( hook effect ) může dojít při koncentracích intaktního PTH vyšších než 100 000 pg/ml. 7. Řady TOSOH AIA-1200 nebo analyzátory pro imunoanalýzu AIA-600 NEMOHOU být užívány k provádění testu ST AIA-PACK Intact PTH. SKLADOVÁNÍ A STABILITA Veškeré materiály jsou stabilní do data expirace uvedeného na štítku, jsou-li uchovávány při specifikované teplotě. Materiály Kat. č. 2-8 C: ST AIA-PACK Intact PTH 0025213 ST AIA-PACK Intact PTH CALIBRATOR SET 0025313 ST AIA-PACK Intact PTH SAMPLE DILUTING SOLUTION 0025513 AIA-PACK Intact PTH CONTROL SET 0025413 AIA-PACK SUBSTRATE SET II 0020968 AIA-PACK WASH CONCENTRATE 0020955 AIA-PACK DILUENT CONCENTRATE 0020956 1 30 C: AIA-PACK DETECTOR STANDARDIZATION TEST CUP 0020970 AIA-PACK SAMPLE TREATMENT CUP 0020971 - Testovací kelímky ST AIA-PACK Intact PTH mohou být skladovány až 1 den při teplotě 18 25 C. - Když právě sadu kalibračních roztoků nepoužíváte, skladujte ji vždy ve svislé poloze při teplotě 2-8 C. Je-li ST AIA-PACK Intact PTH CALIBRATOR SET uchovávaný neotevřený a zchlazený na teplotu 2-8 C, je stabilní do data exspirace uvedeného na štítku. Materiály kalibračních roztoků by měly být spotřebovány do 1 dne od otevření, za předpokladu, že jsou lahvičky těsně uzavřeny a uloženy v chladu při teplotě 2-8 C. - Po otevření je doporučeno kontrolní roztoky nejlépe spotřebovat do 7 dnů. Pokud je uchováván neotevřený a zchlazený na teplotu 2-8 C bude ST AIA-PACK intact PTH SAMPLE DILUTING SOLUTION stabilní do data exspirace uvedeného na štítku. Po otevření bude SAMPLE DILUTING SOLUTION stabilní po dobu až 7 dnů, pokud je skladován zchlazený na teplotu 2-8 C. Po dosažení teploty 18-25 C by měl být spotřebován za přibližně 30 minut. Roztok pro ředění vzorků může být používán až 90 dnů, za předpokladu, že: 1) je používán POUZE k ručním ředěním a 2) lahvičky jsou vždy bezprostředně po použití těsně uzavřeny a uloženy v chladničce. - Rekonstituovaný roztok substrátu je stabilní 3 dny při 18 25 C nebo 7 dnů při teplotě 2 8 C. - Pracovní ředicí roztok a promývací roztoky jsou stabilní po dobu 30 dnů při 18 25 C. Jestliže se činidla zakalí nebo změní barvu, nepoužívejte je. ODBĚR VZORKŮ A MANIPULACE S NIMI Pro analýzu je nutno použít sérum nebo plazmu s EDTA. NEPOUŽÍVEJTE plazmu s citrátem ani heparinizovanou plazmu. Vzorky séra se musí změřit co nejdříve. Nelze-li analýzu provést okamžitě, vzorky séra se mohou před analýzou uložit při teplotě 2 8 C po dobu až 24 hodin. Koncentrace intaktního PTH ve vzorcích séra lze snížit cykly zmrazení a rozmrazení. Vzorky séra nezmrazujte. Používá-li se sérum, vzorek žilní krve se odebírá asepticky bez konzervačních látek. Uchovávejte při teplotě 18 25 C než se vytvoří sraženina (obvykle 15 45 minut), pak odstředěním získejte vzorek séra pro test. Používá-li se plazma s EDTA, vzorek žilní krve se odebírá asepticky s určeným aditivem. Co nejdříve odstřeďte a oddělte plazmu od sedimentovaných buněk. Před provedením analýzy mohou být vzorky plazmy s EDTA uloženy při teplotě 2-8 C po dobu maximálně 24 hodin. Pokud nelze analýzu provést během 24 hodin, vzorky plazmy s EDTA se musí skladovat zmrazené při teplotě -20 C nebo nižší až po dobu 200 dnů. Nevystavujte vzorky plazmy EDTA opakovaným zmrazovacím a rozmrazovacím cyklům. Zakalené vzorky plazmy s EDTA nebo vzorky, které obsahují částice hmoty, musí být před analýzou odstředěny. Před analýzou pomalu ponechte vzorky dosáhnout teploty 18 25 C a jemně je promíchejte. Během sériového sledování jednotlivého pacienta nestřídejte druhy vzorků. U určitých pacientů se mohou koncentrace naměřené v různých druzích vzorků poněkud lišit. Objem vzorku potřebný pro analýzu je 75 µl. POSTUP Podrobné pokyny pro AIA Nex IA/AIA-21, AIA-600 II, AIA-1800, AIA-2000 a AIA-360 naleznete v uživatelském manuálu. I. Příprava činidla A. Substrátový roztok Před přípravou roztoku pracovního substrátu ponechte všechna činidla dosáhnout teploty 18 25 C. Přidejte jednu lahvičku AIA-PACK SUBSTRATE RECONSTITUENT II k lyofilizovanému AIA_PACK SUBSTRATE REAGENT II a důkladně promíchejte, aby se všechny pevné materiály rozpustily. B. Promývací roztok Přidejte celý obsah AIA-PACK WASH CONCENTRATE (100 ml) k přibližně 2,0 l vody reagenční čistoty třídy I CAP nebo typu I NCCLS, dobře promíchejte a upravte konečný objem na 2,5 l. C. Ředicí roztok Přidejte celý obsah AIA-PACK DILUENT CONCENTRATE (100 ml) k přibližně 4,0 l vody reagenční čistoty třídy I CAP nebo typu I NCCLS, dobře promíchejte a upravte konečný objem na 5,0 l. II. Postup kalibrace A. Kalibrační křivka Kalibrační roztoky pro použití s ST AIA-PACK Intact PTH byly porovnány s WHO 1 st IRP 79/500. Průměrná výtěžnost tohoto IRP 79/500 v rozsahu testu je 48 %, pokud je rekonstituován s ST AIA-PACK Intact PTH SAMPLE DILUTING SOLUTION. 3-11 4-11
Kalibrační křivka pro ST AIA-PACK Intact PTH je stabilní až 90 dnů. Stabilita kalibrace je sledována prováděním kontroly kvality a závisí na správné manipulaci s činidlem a na řádné údržbě systému Tosoh AIA podle pokynů výrobce. Opětovná kalibrace může být nutná častěji, když jsou kontroly mimo nastavené rozmezí pro tento test nebo když jsou prováděny určité servisní postupy (např. nastavení teploty, změny mechanismu odběru vzorků, údržba promývací sondy nebo nastavení či výměna žárovky detektoru). Kalibrační křivka vzorku z AIA-1800 sleduje a znázorňuje algoritmus použitý při výpočtu výsledků. B. Postup kalibrace 1. Pokyny postupu viz příslušný uživatelský manuál systému AIA. 2. Ověřte, že kalibrační šarže a čísla koncentrací byly správně zadány do softwaru. 3. Calibrator (1) ST AIA-PACK Intact PTH je dodávaný připravený k použití. Společnost Tosoh doporučuje, aby všechny kalibrační roztoky byly spuštěny trojmo. 4. Calibrators (2) (6) ST AIA-PACK Intact PTH jsou lyofilizované. Všechny hodnoty by měly být rekonstituovány 1 ml vody reagenční čistoty třídy I CAP nebo typu I NCCLS. Společnost Tosoh doporučuje, aby všechny kalibrační roztoky byly spuštěny trojmo. C. Kritéria přijatelnosti kalibrace 1. Průměrná rychlost pro CALIBRATOR (1) má být < 0,5 nmol/(l s). 2. Vzhledem k tomu, že existuje přímý vztah mezi koncentrací a rychlostí, musí rychlost vzrůstat s narůstající koncentrací. 3. Opakující se hodnoty musí být v rozmezí 10 %. D. Kontrola kalibrace a schválení 1. Pečlivě zkontrolujte křivku kalibrace a použijte výše uvedená kritéria. 2. Je-li to nutné, editujte kalibraci a potom kalibraci akceptujte. Podrobné informace o kalibraci naleznete v uživatelském manuálu systému AIA. 5-11 III. Postup kontroly kvality A. Komerčně dostupné kontroly Komerčně dostupné kontroly by měly být spuštěny nejméně jednou denně. Doporučuje se, aby byly použity nejméně dva (2) stupně kontrol, normální a abnormální. Metoda laboratoře pro tento určitý test specifikuje následující: Kontrolní materiál: Frekvenci: Číslo šarže kontrolního materiálu, přijatelné limity a nápravné opatření v případě, že kontroly nesplní laboratorní kritéria, můžete nalézt ve zvláštním dokumentu o kontrole kvality, který je v laboratoři. B. Postup kontroly kvality 1. Proveďte analýzu vzorků kontroly kvality dle pokynů specifického uživatelského manuálu pro váš analyzátor. Podrobné pokyny o definici a editaci souborů naleznete v uživatelském manuálu systému AIA. 2. Materiál kontroly kvality, který má projít tímto testem, je specifikovaný individuální metodou laboratoře. IV. Zpracování vzorků A. Příprava Podle specifických pokynů v uživatelském manuálu analyzátoru příslušným způsobem umístěte vzorky do přístroje. Primární zkumavky a také kelímky na vzorky jsou kódovány čárovým kódem a mohou být použité v AIA Nex IA/AIA-21, AIA-600 II, AIA-1800, AIA-2000 a AIA-360. B. Postup analýzy 1. Poskytněte dostatečné množství testovacích kelímků ST AIA-PACK Intact PTH pro počet vzorků, které mají být analyzovány. 2. Vložte vzorky pacienta podle pokynů v uživatelském manuálu a pokračujte v analýze. Poznámka: AIA-PACK SAMPLE TREATMENT CUP bude v případě použití vestavěných ředění vyžadován systémem AIA Nex IA/AIA-21, AIA-600 II, AIA-1800 a AIA-2000. POZNÁMKY K POSTUPU 1. Lyofilizovaný substrát musí být zcela rozpuštěn. 2. Ligandové analýzy prováděné analyzátory systému Tosoh AIA vyžadují, aby laboratoř používala vodu označenou Společností amerických patologů třídou I nebo podle NCCLS typem I. Voda musí být testována nejméně jednou měsíčně a neměla by osahovat částicovou hmotu včetně bakterií. ph vody by mělo být také pravidelně testováno. Další informace naleznete v dokumentu NCCLS Příprava a testování reagenční vody v klinické laboratoři, dokument NCCLS C3-A3, svazek 11, č. 13, původně odsouhlaseném jako směrnice NCCLS v říjnu 1997. 3. Vyskytne-li se vzorek séra nebo plazmy který obsahuje koncentraci intaktního PTH vyšší, než je horní hranice rozsahu testu, 2 000 pg/ml, je nutno tento vzorek naředit ST AIA-PACK Intact PTH SAMPLE DILUTING SOLUTION a provést analýzu znovu podle postupu analýzy. Doporučené ředění pro vzorky obsahující více než 2 000 pg/ml je 1:10 nebo 1:100. Je žádoucí takové ředění, aby byl odečet naředěného vzorku mezi 1,0 a 2 000 pg/ml. Faktor ředění musí být zadán do softwaru. Další informace o ředění vzorků naleznete v uživatelském manuálu systému AIA. 4. V systémech AIA mohou být současně uloženy dvě různé kalibrační křivky pro každý analyt. Tak mohou být v rámci téhož cyklu použity dvě různé šarže testovacích kelímků ST AIA-PACK Intact PTH. 5. Nejsou-li pro tento test specifikace analýzy připraveny v softwaru systému, musí být specifikace zadány pod kódem testu 052. 6-11
VÝPOČET VÝSLEDKŮ Analyzátory systémů AIA provádějí všechny operace manipulace se vzorky a činidly automaticky. Analyzátory systému Tosoh AIA odečítají míru fluorescence generovanou reakcí a automaticky ji převádějí na koncentraci intaktního PTH v pg/ml. U vzorků vyžadujících ředění provedou systémy AIA Nex IA/AIA-21, AIA-600 II, AIA-1800 a AIA-2000 automaticky ředění a vypočtou výsledky, pokud byly faktory ředění zadány do softwaru. Podrobné informace o programování ředění naleznete v příslušném uživatelském manuálu. VYHODNOCENÍ VÝSLEDKŮ Kontrola kvalita Za účelem sledování a vyhodnocení přesnosti analytické výkonnosti se doporučuje v souladu s místními nařízeními denně analyzovat komerčně dostupné kontrolní vzorky. Minimální doporučená frekvence zpracování interního kontrolního materiálu je: Po kalibraci je spuštěna třístupňová analýza interních kontrolních vzorků, aby byla akceptována kalibrační křivka. Tři stupně kontrol jsou opakovány, když jsou provedeny určité servisní postupy (např. nastavení teploty, změna mechanismu pro odběr vzorků, údržba promývací sondy nebo nastavení či výměna žárovky detektoru). K ověření celkového výkonu analyzátorů systému Tosoh AIA by měly být po denní údržbě provedeny nejméně dva stupně kontroly. Je-li jedna nebo více hodnot kontrolního vzorku(ů) mimo přípustné rozmezí, bude před ohlášením výsledků pacientů nutné prošetřit validitu kalibrační křivky. Je nutno dodržovat standardní laboratorní postupy podle přísného zákonného orgánu, který na provoz laboratoře dohlíží. OMEZENÍ Pro diagnostické účely je nutné využívat výsledky tohoto testu společně s dalšími údaji (např. symptomy, výsledky dalších testů, klinickými dojmy, léčbou atd.). Při používání soupravy ST AIA-PACK Intact PTH je nejvyšší měřitelná koncentrace intaktního parathormonu bez ředění 2 000 pg/ml a nejnižší měřitelná koncentrace je 1,0 pg/ml (citlivost testu). Přestože přibližná hodnota koncentrace nejvyššího kalibračního roztoku je 2 400 pg/ml, přesná koncentrace se může poněkud lišit. Specifikaci testu ASSAY RANGE HIGH je nutno definovat jako horní hranici rozsahu testu, 2 000 pg/ml. Přestože hemolýza nemá významný vliv na test, mohou hemolyzované vzorky poukazovat na špatné zacházení se vzorkem před analýzou a výsledky je nutno interpretovat opatrně. Lipémie má na test nevýznamný vliv, kromě případu silné lipémie, kdy může dojít k prostorové interferenci. Vzorky pacientů, kteří užívají léky a/nebo u kterých probíhá léčba, mohou vykazovat chybné výsledky. Vzorky obsahující heterofylní protilátky mohou vykazovat falešně zvýšené nebo snížené hodnoty intaktního PTH. Pro úplnější pochopení omezeních tohoto postupu, si laskavě přečtěte oddíly ODBĚR A MANIPULACE SE VZORKY, VAROVÁNÍ A BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ, SKLADOVÁNÍ A STABILITA a POZNÁMKY K POSTUPU této příbalové informace. PŘEDPOKLÁDANÉ HODNOTY Každá laboratoř by měla stanovit referenční interval, který odpovídá charakteristikám testované populace. Podobně jako u všech diagnostických postupů musí být klinické výsledky interpretovány s ohledem na současně podávané léky. I. Referenční rozmezí Zde uvedený interval byl stanoven ve vzorcích plazmy s EDTA od 90 zjevně zdravých Asiatů. Referenční interval 8,7-79,6 pg/ml (± 1,96 SO) II. Konverzní faktory Koncentrace intact PTH v této aplikaci jsou vyjádřeny v jednotkách pg/ml. Konverze na jednotky SI soustavy µg/l může být provedena s použitím následující rovnice: µg intact PTH /l = pg intact PTH/ml x 1000 VÝKONNOSTNÍ CHARAKTERISTIKY PŘESNOST a. Výtěžnost: Tři vzorky séra a tři vzorky plazmy s EDTA byly označeny třemi různými hladinami intaktního PTH a bylo provedeno stanovení před označením a po něm. Vzorek Původní PTH Předpokládaná Naměřená Procento hodnota přidaný hodnota hodnota výtěžnosti (pg/ml) (pg/ml) (pg/ml) (pg/ml) (%) Sérum A1 20.1 94.5 114.6 114.9 100.3 20.1 47.3 67.4 69.4 103.0 20.1 23.6 43.7 44.0 100.6 Sérum B1 11.3 94.5 105.8 115.4 109.0 11.3 47.3 58.6 60.7 103.6 11.3 23.6 34.9 34.3 98.1 Sérum C1 22.5 94.5 117.0 126.9 108.5 22.5 47.3 69.8 75.2 107.8 22.5 23.6 34.8 36.3 104.4 Plazma A1 11.2 94.5 105.7 115.0 108.8 11.2 47.3 58.4 61.9 106.0 11.2 23.6 34.8 36.3 104.4 Plazma B1 28.8 94.5 123.4 133.8 108.4 28.8 47.3 76.1 79.4 104.3 28.8 23.6 52.5 55.8 106.4 Plazma C1 38.9 94.5 133.4 139.0 104.2 38.9 47.3 86.1 91.1 105.7 38.9 23.6 62.5 62.7 100.4 b. Ředění: Tři vzorky séra a tři vzorky plazmy s EDTA obsahující vysoké koncentrace intaktní PTH byly sériově ředěny ST AIA-PACK Intact PTH SAMPLE DILUTING SOLUTION a byla provedena analýza. 7-11 8-11
Vzorek Faktor Předpokládaná Naměřená Procento ředění hodnota hodnota výtěžnosti (pg/ml) (pg/ml) (%) Sérum A2 žádný 1278.7 1278.7 100.0 7.5/10 959.0 943.4 98.4 5.0/10 639.3 653.4 102.2 2.5/10 319.7 320.1 100.1 1.0/10 127.9 123.6 96.7 Sérum B2 žádný 1356.2 1356.2 100.0 7.5/10 1017.2 1042.0 102.4 5.0/10 678.1 691.1 101.9 2.5/10 339.1 344.4 101.6 1.0/10 135.6 132.6 97.8 Sérum C2 žádný 1269.2 1269.2 100.0 7.5/10 951.9 989.7 104.0 5.0/10 634.6 638.8 100.7 2.5/10 317.3 323.8 102.0 1.0/10 126.9 127.6 100.6 Plazma A2 žádný 1263.0 1263.0 100.0 7.5/10 947.3 936.1 98.8 5.0/10 631.5 673.8 106.7 2.5/10 315.8 319.2 101.1 1.0/10 126.3 128.5 101.8 Plazma B2 žádný 1484.3 1484.3 100.0 7.5/10 1113.2 1037.2 93.2 5.0/10 742.2 674.0 90.8 2.5/10 371.1 339.4 91.5 1.0/10 148.4 140.0 94.3 Plazma C2 žádný 1388.0 1388.0 100.0 7.5/10 1041.0 1020.1 98.0 5.0/10 694.0 661.5 95.3 2.5/10 347.0 347.7 100.2 1.0/10 138.8 136.7 98.5 PŘESNOST a. Přesnost v rámci jednoho cyklu byla stanovena pomocí šesti kontrolních roztoků v celkem 20 cyklech. V rámci jednoho cyklu byla provedena analýza jedné sady dvou paralelních vzorků na jeden kontrolní vzorek. Průměrná hodnota každých dvou paralelních vzorků byla použita k získání sdružené směrodatné odchylky (SO), která pak byla použita k výpočtu variačního koeficientu (CV). Vzorek Průměr Sdružená Variační směrodatná odchylka koeficient (pg/ml) (pg/ml) (%) Sérum A3 27.7 0.892 3.2 Sérum B3 243.6 8.683 3.6 Sérum C3 1123.5 45.493 4.0 Plazma A3 27.1 1.068 3.9 Plazma B3 247.1 9.517 3.9 Plazma C3 1217.2 40.126 3.3 9-11 b. Celková přesnost byla stanovena paralelním stanovením šesti kontrolních vzorků ve 20 samostatných cyklech. Střední hodnoty každého cyklu byly použity k výpočtu směrodatné odchylky (SO) a variačního koeficientu (CV). Vzorek Průměr Sdružená Variační směrodatná odchylka koeficient (pg/ml) (pg/ml) (%) Sérum A3 27.7 1.005 3.6 Sérum B3 243.6 8.936 3.7 Sérum C3 1123.5 44.540 4.0 Plazma A3 27.1 1.320 4.9 Plazma B3 247.1 11.497 4.7 Plazma C3 1217.2 44.159 3.6 KORELACE Korelace mezi sérem (x) a plazmou s EDTA (y) na soupravě ST AIA-PACK Intact PTH byla provedena s použitím 134 pacientských vzorků. Směrnice 0.992 Průsečík s osou y 7.882 Korelační koeficient 0.998 Počet vzorků 134 SPECIFICITA Zkřížená reaktivita byla testována u následujících látek. Zkřížená reaktivita (%) je procento látky, které bude identifikováno jako intaktní PTH. Jsou-li ve vzorku přítomny tyto látky ve stejné koncentraci jako intaktní PTH, bude konečný výsledek zvýšen o tato procenta. Látka Zkřížená reaktivita (%) PTH(7-84) 107.4 PTH(1-34) < 0.02 PTH(13-34) < 0.02 PTH(39-84) < 0.02 PTH(53-84) < 0.02 SENZITIVITA Minimální detekovatelná koncentrace: Minimální detekovatelná koncentrace (MDC) intaktního PTH byla stanovena jako 1,0 pg/ml. Nejnižší detekovatelná koncentrace (MDC) je definována jako taková koncentrace intaktního PTH, která odpovídá míře fluorescence, jež je dvě směrodatné odchylky od průměrné hodnoty míry fluorescence pěti opakovaných stanovení pomocí calibrator (1). INTERFERENCE Interference je pro účely této studie definovaná jako výtěžnost přesahující 10 % známé průměrné hodnoty koncentrace vzorku po přidání následujících látek k vzorkům pacienta. Hemoglobin (až do 440 mg/dl), volný bilirubin (do 17 mg/dl) a konjugovaný bilirubin (do 17 mg/dl) neinterferují s testem. Lipémie indikovaná koncentrací triglyceridů (do 1 600 mg/dl) neinterferuje s testem. Kyselina askorbová (do 20 mg/dl) neinterferuje s testem. Bílkoviny, jak ukazuje koncentrace lidského albuminu (až do 50 mg/ml), neinterferují s tímto testem. 10-11
EDTA dvojdraselná sůl, (až do 10 mg/ml) neinterferuje s tímto testem. Heparin (do 100 U/ml) neinterferuje s testem. REFERENCE 1) E. K. Amitage, Parathyrin(parathyroid hormone): Metabolism and methods for assay. Clin Chem 32; 418-424(1986). 2) S. R. Nussbaum, R. J. Zahradnik, J. R. Lavigne, et al., Highly Sensitive Two-Site immunoradiometric assay of parathyrin, and its clinical utility in evaluating patients with hypercalcemia. Clin Chem 33; 1364-1367(1987). 3) D. B. Endres, R. V. Villanueva, C. F. Sharp, Jr and F. R. Singer, Immunochemiluminometric and immunoradiometric determinations of intact and total immunoreactive parathyrin: Performance in the differential diagnosis of hypercalcemia and hypoparathyroidism. Clin Chem 37; 162-168(1991). 4) R. Lepage, S. Whittom, S. Bertrand, G. Bahsali, and P. D Amour, Superiority of dynamic over static reference intervals for intact, mid molecule, and C-terminal parathyrin in evaluating calcemic disorders. Clin Chem 38; 2129-2135(1992). 5) M. J. Evans, J. H. Livesey, M. J. Ellis, T. G. Yandle, Effect of anticoagulants and storage temperatures on stability of plasma and serum hormones. Clin Biochem 34; 107-112(2001). 6) P. Glendenning, L. L. A. Laffer, H. K. Weber, A. A. Musk, and S. D. Vasikaran, Parathyroid hormone is more stable in EDTA plasma than in serum. Clin Chem 48; 766-767(2002). 7) D. Hermsen, L. Franzson, J. P. Hoffmann, A. Isaksson, et al., Multicenter evaluation of a new immunoassay for intact PTH measurement on the Elecsys System 2010 and 1010. Clin. Lab. 48; 131-141(2002). TOSOH CORPORATION 3-8-2, Shiba, Minato-ku TOKYO 105-8623 (JAPONSKO) Tel.: +81 (0)3 5427 5181 Fax: +81 (0)3 5427 5220 TOSOH EUROPE N.V. Transportstraat 4 B-3980 TESSENDERLO (BELGIE) Tel.: +32 (0)13 66 88 30 Fax: +32 (0)13 66 47 49 TOSOH BIOSCIENCE, INC. 6000 Shoreline Court, Suite 101 South San Francisco, CA 94080, USA Telefon: +1 650 615 49 70 Objem netto (po rekonstituci pro lyofilizovaný materiál) 11-11