EU rev. CPEP-010311 Upozornění: Tento návod k použití je v souladu se směrnicí IVD 98/79/ES a je určen pro zákazníky z členských států Evropské unie. ÚČEL POUŽITÍ ST AIA-PACK C-Peptide ST AIA-PACK C-Peptide je určen pro diagnostické použití in vitro pouze ke kvantitativnímu měření C-peptidu v lidském séru, heparinizované plazmě, EDTA plazmě nebo moči na analyzátorech systému Tosoh AIA. SOUHRN A VYSVĚTLENÍ C-peptid je polypeptid o délce 31 aminokyselin, který je tvořen v B-buňkách pankreatu jako metabolicky inertní produkt syntézy inzulínu z proinzulínu (1). Inzulín a C-peptid jsou uvolňovány z proinzulínu v ekvimolárních koncentracích do portálního oběhu (2). Z tohoto důvodu mohou hladiny C-peptidu sloužit jako index inzulínové sekrece (3,4). V případech, kdy je sekrece inzulínu snížena, jako například u inzulín-dependentního diabetu, se předpokládají nízké hladiny C-peptidu. Zvýšené hladiny C-peptidu mohou být způsobeny zvýšenou aktivitou B-buněk související s inzulinomy (4-6). Protilátky proti inzulínu se běžně nacházejí u pacientů, kteří užívají inzulín. Tyto cirkulující protilátky proti inzulínu mohou interferovat s určitými imunoanalýzami inzulínu, což je činí obtížnými při jejich použití při měření reziduální aktivity B-buněk. Měření C-peptidu se proto užívá jako alternativní index měření v tomto kontextu (7). Měření C-peptidu se také používá jako další způsob hodnocení glukózových tolerančních testů (8). PRINCIP STANOVENÍ ST AIA-PACK C-Peptide je dvoumístná imunoenzymometrická analýza, která je celá prováděná v testovacích miskách AIA-PACK C-Peptide. C-peptid přítomný v testovaném vzorku je vázaný na protilátku imobilizovanou na pevnou fázi a na enzymem označenou monoklonální protilátku v testovacích kelímcích. Magnetická zrna jsou promytím zbavena nenavázaných, enzymem značených monoklonálních protilátek a jsou pak inkubována s fluorogenním substrátem, 4-methylumbeliferylfosfátem (4MUP). Množství enzymem značených monoklonálních protilátek, které se vážou na zrna, je přímo úměrné koncentraci C-peptidu v testovaném vzorku. Je vynesena standardní křivka a neznámé koncentrace vzorků jsou vypočítány pomocí této křivky. DODÁVANÝ MATERIÁL Katalogové č. 0025284 Plastové testovací kelímky obsahující dvanáct lyofilizovaných magnetických zrn s králičími polyklonálními protilátkami anti-c-peptid a 100 µl myších monoklonálních protilátek anti-c-peptid konjugovaných s hovězí alkalickou fosfatázou s azidem sodným jako konzervační látkou. POTŘEBNÉ MATERIÁLY, KTERÉ NEJSOU SOUČÁSTÍ DODÁVKY Následující materiály jsou požadovány pro provedení analýzy C-peptidu pomocí ST AIA-PACK C-Peptide (kat. č. 0025284) na analyzátorech systému Tosoh AIA. Následující materiály společnost Tosoh dodává samostatně. Materiály Kat. č. AIA Nex IA nebo AIA-21 0018539 AIA Nex IA nebo AIA-21 LA 0018540 AIA-1800 ST 0019836 AIA-1800 LA 0019837 AIA-2000 ST 0022100 AIA-2000 LA 0022101 AIA-600 II 0019014 AIA-600 II BCR 0019328 AIA-900 0022930 AIA-360 0019945 AIA-PACK SUBSTRATE SET II 0020968 AIA-PACK SUBSTRATE REAGENT II/AIA-PACK SUBSTRATE RECONSTITUENT II AIA-PACK C-Peptide CALIBRATOR SET 0020384 AIA-PACK C-Peptide CALIBRATOR (1) 0 ng/ml AIA-PACK C-Peptide CALIBRATOR (2) 0.5 ng/ml (přibližně) AIA-PACK C-Peptide CALIBRATOR (3) 2 ng/ml (přibližně) AIA-PACK C-Peptide CALIBRATOR (4) 6 ng/ml (přibližně) AIA-PACK C-Peptide CALIBRATOR (5) 15 ng/ml (přibližně) AIA-PACK C-Peptide CALIBRATOR (6) 33 ng/ml (přibližně) AIA-PACK C-Peptide SAMPLE DILUTING SOLUTION 0020584 AIA-PACK WASH CONCENTRATE 0020955 AIA-PACK DILUENT CONCENTRATE 0020956 KELÍMKY NA VZORKY 0018581 AIA-PACK DETECTOR STANDARDIZATION TEST CUP 0020970 AIA-PACK SAMPLE TREATMENT CUP 0020971 Další požadavky pouze pro AIA Nex IA /AIA-21: PIPETOVACÍ ŠPIČKY 0018552 PŘEDEM VLOŽENÉ PIPETOVACÍ ŠPIČKY 0018583 Další požadavky pouze pro AIA-600 II, AIA-900, AIA-1800 a AIA-2000: PIPETOVACÍ ŠPIČKY 0019215 STOJAN PRO PIPETOVACÍ ŠPIČKY 0019216 PŘEDEM VLOŽENÉ PIPETOVACÍ ŠPIČKY 0022103 Používejte pouze materiály dodané společností Tosoh. Nepoužívejte náhradní materiály získané z jiných zdrojů, protože výkonnost testu je charakterizována přísně na základě materiálů společnosti Tosoh. VAROVÁNÍ A BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ 1. ST AIA-PACK C-Peptide je určen pouze pro diagnostické použití in vitro. 2. Před použitím zkontrolujte obal a vnější povrch hliníkového obalu, zda nejsou poškozeny. Pokud jsou patrná jakákoli poškození, kontaktujte vašeho místního obchodního zástupce společnosti Tosoh. 3. V rámci jednoho zásobníku nemíchejte testovací kelímky různých šarží nebo různých testů. 4. ST AIA-PACK C-Peptide obsahuje azid sodný, který může reagovat s olověným nebo měděným potrubím za vzniku potenciálně výbušných azidů kovu. Při likvidaci těchto činidel do kanalizace je vždy spláchněte velkým množstvím vody, aby nedocházelo k hromadění azidu. 5. Při přípravě tohoto výrobku není používáno lidské sérum. Protože však pro přípravu vzorků budou používány lidské vzorky a další výrobky pro kontrolu kvality v laboratoři mohou být deriváty lidského 1-12 2-12
séra, dodržujte prosím při manipulaci se všemi vzorky a kontrolními vzorky standardní laboratorní bezpečnostní opatření. 6. Nepoužívejte po uplynutí data exspirace. 7. ST AIA-PACK C-Peptide byl navržený tak, aby u převážné většiny vzorků nedocházelo k problémům způsobeným zakřivením kalibrační křivky při vysokých koncentracích, tzv. hook effect. Vzorky séra, heparinizované plazmy nebo EDTA plazmy s koncentracemi C-peptidu mezi 30 a 90 ng/ml budou odečteny jako > 30 ng/ml. Při doporučeném 10násobném ředění budou vzorky moči s koncentracemi mezi 300 a 900 ng/ml odečteny jako > 300 ng/ml. Fenomén "hook effect" se může vyskytnout u koncentrací C-peptidu > 90 ng/ml v séru, heparinizované plazmě nebo EDTA plazmě a > 900 ng/ml v moči. 8. Pro bezpečnou likvidaci odpadu se doporučuje, aby každá laboratoř dodržovala zavedené laboratorní postupy a místní, národní či federální nařízení. SKLADOVÁNÍ A STABILITA Veškeré neotevřené materiály jsou stabilní do data exspirace uvedeného na štítku, jsou-li uchovávány při specifikované teplotě. Materiály Kat. č. 2 8 C: ST AIA-PACK C-Peptide 0025284 AIA-PACK C-Peptide CALIBRATOR SET 0020384 AIA-PACK C-Peptide SAMPLE DILUTING SOLUTION 0020584 AIA-PACK SUBSTRATE SET II 0020968 AIA-PACK WASH CONCENTRATE 0020955 AIA-PACK DILUENT CONCENTRATE 0020956 1 30 C: AIA-PACK DETECTOR STANDARDIZATION TEST CUP 0020970 AIA-PACK SAMPLE TREATMENT CUP 0020971 - Po otevření hliníkového sáčku lze testovací kelímky ST AIA-PACK C-Peptide ponechat v analyzátorech systému TOSOH AIA (18 25 C) po dobu maximálně 10 dnů (10 x 24 hodin). Pokud jsou přes noc uchovávány při teplotě 2 8 C, lze testovací kelímky použít až po dobu 30 dnů (30 cyklů při 8 hodinách v systému a 16 hodinách v chladničce). Jakmile otevřete hliníkový sáček, musí se testovací kelímky spotřebovat do 30 dnů. - AIA-PACK C-Peptide CALIBRATOR SET a AIA-PACK C-Peptide SAMPLE DILUTING SOLUTION se musí spotřebovat do 1 dne a do 7 dnů od otevření nebo rekonstituce, za předpokladu, že jsou lahvičky těsně uzavřeny a uloženy v chladu při teplotě 2 8 C. Prostředky lze použít po dosažení teploty 18 25 C po dobu 30 minut. - Roztok pro ředění vzorků může být používán až 90 dnů, za předpokladu, že: 1) je používán POUZE k ručním ředěním; 2) lahvičky jsou vždy bezprostředně po použití těsně uzavřeny a uloženy v chladničce.rekonstituovaný roztok substrátu je stabilní 3 dny při teplotě 18 25 C nebo 7 dnů při teplotě 2 8 C. - Pracovní ředidlo a promývací roztoky budou stabilní po dobu 30 dnů při teplotě 18 25 C. - Činidla nesmí být užívána, když se jeví zakalená či zabarvená. ODBĚR VZORKŮ A MANIPULACE S NIMI Pro test je nutno použít sérum, EDTA plazmu nebo moč. NEPOUŽÍVEJTE plazmu s citrátem. Používá-li se sérum, vzorek žilní krve se odebírá asepticky bez konzervačních látek. Uchovávejte při teplotě 18 25 C než se vytvoří sraženina (obvykle 15 45 minut), pak odstředěním získejte vzorek séra pro test. 3-12 Používá-li se heparinizovaná plazma nebo plasma s EDTA, vzorek žilní krve se odebírá asepticky se specifikovanou konzervační látkou. Co nejdříve odstřeďte a oddělte plazmu od sedimentovaných buněk. Pro moč odeberte moč za 24 hodin bez konzervačních látek a vzorek uchovávejte zchlazený v průběhu procesu odběru. Zaznamenejte celkový objem odběru a pro analýzu použijte dobře promíchané alikvotní části. Před analýzou očistěte vzorek filtrací nebo odstředěním. Během sériového sledování jednotlivého pacienta nestřídejte druhy vzorků. U určitých pacientů se mohou koncentrace naměřené v různých druzích vzorků poněkud lišit. Před provedením analýzy mohou být vzorky uloženy při teplotě 2 8 C po dobu maximálně 24 hodin. Nelze-li analýzu provést do 24 hodin, musí být vzorek uchováván zmražený při teplotě -20 C nebo nižší po dobu maximálně 60 dnů. Zabraňte opakovanému zmrazování a rozmrazování vzorků. Zakalené vzorky séra nebo vzorky, které obsahují částice hmoty, musí být před analýzou odstředěny. Před analýzou pomalu ponechte vzorky dosáhnout teploty 18 25 C a jemně je promíchejte. Všechny vzorky moči musí být před analýzou naředěny nejméně 10násobně pomocí AIA-PACK C-Peptide SAMPLE DILUTING SOLUTION. Faktor ředění je označený v testovém souboru jako 2. AIA Nex IA / AIA-21, AIA-600 II, AIA-900, AIA-1800 a AIA-2000 provedou automaticky tato ředění a vypočítají výsledky. Objem vzorku potřebný pro analýzu je 20 µl. POSTUP Podrobné pokyny pro AIA Nex IA / AIA-21, AIA-600 II, AIA-900, AIA-1800, AIA-2000 a AIA-360 naleznete v jejich uživatelském manuálu. I. Příprava činidla A. Substrátový roztok Před přípravou pracovního činidla ponechte všechna činidla, aby dosáhla teploty 18 25 C. Přidejte celý obsah lahvičky AIA-PACK SUBSTRATE RECONSTITUENT II (100 ml) k lyofilizovanému AIA-PACK SUBSTRATE REAGENT II a důkladně promíchejte, aby se všechny pevné materiály rozpustily. B. Promývací roztok Přidejte celý obsah AIA-PACK WASH CONCENTRATE (100 ml) do přibližně 2,0 l vody reagenční čistoty třídy I CAP nebo reagenční vody pro klinické laboratoře definované směrnicí CLSI C3-A4 (dříve známou pod názvem typ 1 NCCLS), důkladně promíchejte a upravte na konečný objem 2,5 l. C. Ředicí roztok Přidejte celý obsah AIA-PACK DILUENT CONCENTRATE (100 ml) do přibližně 4,0 l vody reagenční čistoty třídy I CAP nebo reagenční vody pro klinické laboratoře definované směrnicí CLSI C3-A4 (dříve známou pod názvem typ 1 NCCLS), důkladně promíchejte a upravte na konečný objem 5,0 l. II. Postup kalibrace A. Kalibrační křivka Kalibrační roztoky pro použití s ST AIA-PACK C-Peptide byly standardizovány podle WHO 1st IS 84/510 (1986). Kalibrační křivka pro ST AIA-PACK C-Peptide bude stabilní až 90 dnů. Stabilita kalibrace je sledována prováděním kontroly kvality a závisí na správné manipulaci s činidlem a na řádné údržbě systému Tosoh AIA podle pokynů výrobce. 4-12
Opětovná kalibrace může být nutná častěji, když jsou kontroly mimo nastavené rozmezí pro tento test nebo když jsou prováděny určité servisní postupy (např. nastavení teploty, změny mechanismu odběru vzorků, údržba promývací sondy nebo nastavení či výměna žárovky detektoru). Další informace o provozu přístroje naleznete v uživatelském manuálu systému Tosoh AIA. Kalibrační křivka vzorku z AIA-1800 sleduje a znázorňuje algoritmus použitý při výpočtu výsledků. Rozsah koncentrací kalibrační křivky je zobrazen v 1/10 rozsahu testu pro vzorky moči. Koncentrace vzorků moči jsou vypočítány vynásobením koncentrací získaných z kalibrační křivky a faktorem ředění. AIA Nex IA /AIA-21, AIA-600 II, AIA-900, AIA-1800 a AIA-2000 automaticky vypočítají koncentrace vzorků moči pomocí faktoru ředění a ohlásí výsledky. B. Postup kalibrace 1. Pokyny k postupu viz příslušný uživatelský manuál systému Tosoh AIA. 2. Ověřte, že kalibrační šarže a čísla koncentrací byly správně zadány do softwaru. 3. AIA-PACK C-Peptide CALIBRATOR (1) je dodávaný připravený k použití. 4. AIA-PACK C-Peptide CALIBRATOR (2)-(6) jsou lyofilizované. Všechny hladiny musí být rekonstituovány pomocí 1 ml vody reagenční čistoty třídy I CAP nebo reagenční vody pro klinické laboratoře definované směrnicí CLSI C3-A4 (dříve známou pod názvem typ 1 NCCLS) 5. Společnost TOSOH doporučuje, aby všechny kalibrační roztoky byly spuštěny trojmo. C. Kritéria přijatelnosti kalibrace 1. Průměrná rychlost pro AIA-PACK C-Peptide CALIBRATOR (1) má být < 3,0 nmol/(ls). 2. Vzhledem k tomu, že existuje přímý vztah mezi koncentrací a rychlostí, musí rychlost vzrůstat s narůstající koncentrací. 3. Opakující se hodnoty musí být v rozmezí 10%. D. Kontrola kalibrace a přijetí 1. Pečlivě zkontrolujte křivku kalibrace a použijte výše uvedená kritéria. 2. Je-li to nutné, editujte kalibraci a potom kalibraci akceptujte. Podrobné informace o kalibraci naleznete v uživatelském manuálu systému Tosoh AIA. 5-12 III. Postup kontroly kvality A. Komerčně dostupné kontroly Komerčně dostupné kontroly by měly být spuštěny nejméně jednou denně. Doporučuje se, aby byly použity nejméně dva stupně kontrol, normální a abnormální. Metoda laboratoře pro tento určitý test specifikuje následující: Kontrolní materiál: Frekvenci: Číslo šarže kontrolního materiálu, přijatelné limity a nápravné opatření v případě, že kontroly nesplňují laboratorní kritéria, můžete nalézt ve zvláštním dokumentu o kontrole kvality, který je v laboratoři. B. Postup kontroly kvality 1. Proveďte analýzu vzorků kontroly kvality dle pokynů specifického uživatelského manuálu pro váš analyzátor. Podrobné pokyny o definici a editaci souborů naleznete v uživatelském manuálu systému Tosoh AIA. 2. Materiál kontroly kvality, který má projít tímto testem, je specifikovaný individuální metodou laboratoře. IV. Zpracování vzorků A. Příprava Vzorky séra, heparinizované plazmy nebo EDTA plazmy nevyžadují před analýzou ředění. Vzorky moči musí být před analýzou naředěny nejméně 10násobně pomocí AIA-PACK C-Peptide SAMPLE DILUTING SOLUTION. Naředěné nebo nenaředěné vzorky pacientů jsou umístěny na příslušné pozice analyzátorů systému TOSOH AIA. Pro AIA-360 musí být vzorky moči naředěny manuálně v testovacích kelímcích a testovací kelímky musí být vloženy do AIA-360. Další informace o přípravě vzorků a provozu přístroje naleznete v kapitole ODBĚR A MANIPULACE SE VZORKY a konzultujte specifický uživatelský manuál systému TOSOH AIA. Primární zkumavky a také kelímky na vzorky kódované čárovým kódem lze použít v AIA Nex IA / AIA-21, AIA-600 II, AIA-900, AIA-1800 a AIA-2000. B. Postup analýzy 1. Poskytněte dostatečné množství testovacích kelímků ST AIA-PACK C-Peptide pro počet vzorků, které mají být analyzovány. 2. Vložte vzorky pacienta podle pokynů v uživatelském manuálu a pokračujte v analýze. Poznámka: AIA-PACK SAMPLE TREATMENT CUP bude v případě použití vestavěných ředění vyžadován systémem AIA Nex IA/AIA-21, AIA-600 II, AIA-900, AIA-1800 a AIA-2000. POZNÁMKY K POSTUPU 1. Lyofilizovaný substrát musí být zcela rozpuštěn. 2. Analýzy ligand prováděné na analyzátorech systému TOSOH AIA vyžadují, aby laboratoř používala vodu reagenční čistoty třídy I dle CAP nebo reagenční vodu pro klinické laboratoře dle CLSI. Voda musí být testována nejméně jednou měsíčně a nesmí obsahovat částicovou hmotu včetně bakterií. ph vody by mělo být také rutinně testováno. Další informace naleznete v dokumentu CLSI C3-A4, Příprava a testování reagenční vody v klinické laboratoři ; schválené 4. vydání směrnice. 3. Vyskytne-li se vzorek obsahující koncentraci C-peptidu vyšší než 30 ng/ml v séru, heparinizované plazmě nebo EDTA plazmě či 300 ng/ml ve vzorku moči, musíte tento vzorek dále naředit AIA-PACK C-Peptide SAMPLE DILUTING SOLUTION a opět provést analýzu podle postupu analýzy. Doporučené ředění pro vzorky obsahující více než 30 ng/ml (sérum, heparinizovaná plazma nebo EDTA plazma) nebo 300 ng/ml (moč) je 1:10. Je žádoucí naředit vzorek tak, aby byl naředěný vzorek odečten mezi 5,0 a 15,0 ng/l v séru, heparinizované plazmě či EDTA plazmě nebo mezi 50 a 150 ng/l 6-12
ve vzorku moči. Faktor ředění je nutné zadat do softwaru. Další informace o ředění vzorků naleznete v uživatelském manuálu systému Tosoh AIA. 4. V analyzátorech systémů Tosoh AIA mohou být současně uloženy dvě různé kalibrační křivky pro každý analyt. Tak mohou být v rámci téhož cyklu použity dvě různé šarže testovacích kelímků ST AIA-PACK C-Peptide. 5. Nejsou-li pro tento test specifikace analýzy připraveny v softwaru systému, musí být specifikace zadány pod kódem testu 059. VÝPOČET VÝSLEDKŮ Analyzátory systémů Tosoh AIA provádějí všechny operace manipulací se vzorky a činidly automaticky. Analyzátory systémů Tosoh AIA odečítají míru fluorescence generovanou reakcí a automaticky ji převádějí na míru koncentrace C-peptidu v ng/ml. U vzorků vyžadujících ředění provedou systémy AIA Nex IA/AIA-21, AIA-600 II, AIA-900, AIA-1800 a AIA-2000 automaticky ředění a vypočtou výsledky, pokud byly faktory ředění zadány do softwaru. Podrobné informace o programování ředění naleznete v příslušném manuálu k obsluze systému TOSOH AIA. VYHODNOCENÍ VÝSLEDKŮ Kontrola kvality Za účelem sledování a vyhodnocení přesnosti analytické výkonnosti se doporučuje v souladu s místními nařízeními analyzovat komerčně dostupné kontrolní vzorky. Minimální doporučená frekvence zpracování interního kontrolního materiálu je: Po kalibraci je spuštěna dvoustupňová analýza interních kontrolních vzorků, aby byla akceptována kalibrační křivka. Dvě stupně kontrol jsou opakovány, když jsou provedeny určité servisní postupy (např. nastavení teploty, změna mechanismu pro odběr vzorků, údržba promývací sondy nebo nastavení či výměna žárovky detektoru). K ověření celkového výkonu analyzátorů systému Tosoh AIA by měly být po denní údržbě provedeny nejméně dva stupně kontroly. Pokud se objeví jedna nebo více hodnot kontrolního vzorku mimo přípustné rozmezí, je třeba před ohlášením výsledků pacienta prověřit validitu kalibrační křivky. Je nutno dodržovat standardní laboratorní postupy podle přísného zákonného orgánu, který na provoz laboratoře dohlíží. OMEZENÍ Pro diagnostické účely je nutné využívat výsledky tohoto testu společně s dalšími údaji (např. symptomy, výsledky dalších testů, klinickými dojmy, léčbou atd.). Pomocí ST AIA-PACK C-Peptide je nejvyšší měřitelná koncentrace C-peptidu ve vzorcích séra, heparinizované plazmy nebo EDTA plazmy bez ředění nebo ve vzorcích séra naředěných 10násobně pomocí AIA-PACK C-Peptide SAMPLE DILUTING SOLUTION 30 ng/ml, která odpovídá 300 ng/ml v původních vzorcích moči a nejnižší měřitelná koncentrace ve vzorcích séra, heparinizované plazmy nebo EDTA plazmy bez ředění nebo ve vzorcích moči naředěných 10násobně pomocí AIA-PACK C-Peptide SAMPLE DILUTING SOLUTION je 0,2 ng/ml (senzitivita testu), která odpovídá 2,0 ng/ml v původních vzorcích moči. Přestože přibližná hodnota koncentrace nejvyššího kalibračního roztoku je 33 ng/ml, přesná koncentrace se může poněkud lišit. Specifikace testu ASSAY RANGE HIGH (VYSOKÝ ROZSAH TESTU) musí být definován jako horní hranice rozsahu testu, která odpovídá 300 ng/ml v původních vzorcích moči (faktor ředění 10). Přestože hemolýza nemá významný vliv na test, mohou hemolyzované vzorky poukazovat na špatné zacházení se vzorkem před analýzou a výsledky je nutno interpretovat opatrně. Lipémie má na test nevýznamný vliv, kromě případu silné lipémie, kdy může dojít k prostorové interferenci. Vzorky pacientů, kteří užívají léky a/nebo u kterých probíhá léčba, mohou vykazovat chybné výsledky. Vzorky obsahující fibrin mohou vykazovat buď falešně zvýšené, nebo falešně snížené výsledky. Vzorky od pacientů, kterým byly podány přípravky myších monoklonálních protilátek k diagnostice nebo terapii, mohou obsahovat lidské protilátky proti myším (HAMA). Takové vzorky mohou dávat falešně zvýšené hodnoty, pokud jsou testovány na C-peptid. Sérové koncentrace jsou v typickém případě zvýšené po jídle. Pro úplnější pochopení omezení tohoto postupu, si laskavě přečtěte kapitoly ODBĚR VZORKŮ A MANIPULACE S NIMI, VAROVÁNÍ A BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ, SKLADOVÁNÍ A STABILITA a POZNÁMKY K POSTUPU v této příbalové informaci. PŘEDPOKLÁDANÉ HODNOTY Každá laboratoř by měla stanovit referenční interval, který odpovídá charakteristikám testované populace. Podobně jako u všech diagnostických postupů musí být klinické výsledky interpretovány s ohledem na léky, které jsou současně podávány pacientovi. I. Referenční rozmezí Zde uvedený interval byl stanoven ve vzorcích séra od 103 zjevně zdravých Asiatů. Sérum: Referenční interval = 1,1 3,3 ng/ml II. Konverzní faktory Koncentrace C-peptidu v této aplikaci jsou vyjádřeny v jednotkách ng/ml. Konverze na jednotky SI soustavy µg/l může být provedena s použitím následující rovnice: µg C-peptid /l = ng C-peptid /ml x 1,0 VÝKONNOSTNÍ CHARAKTERISTIKY PŘESNOST a.1. Výtěžnost (sérum): Tři sdružené vzorky séra byly označeny třemi rozdílnými hladinami C-peptidu a testovány před a po označení. Sérum A1 Sérum B1 Sérum C1 Původní C-peptid Předpokládaná Naměřená Procento hodnota přidaný hodnota hodnota Výtěžnost (ng/ml) (ng/ml) (ng/ml) (ng/ml) (%) 0.68 21.35 22.03 19.83 90.0 0.68 10.68 11.35 10.30 90.7 0.68 5.34 6.01 5.54 92.1 0.21 21.35 21.56 19.61 90.9 0.21 10.68 10.89 9.91 91.1 0.21 5.34 5.55 4.93 88.9 0.42 21.35 21.77 19.65 90.3 0.42 10.68 11.09 10.10 91.1 0.42 5.34 5.75 5.17 89.8 7-12 8-12
a.2. Moč A1 a.3. EDTA plazma A1 Heparininizovaná plazma A1 b.1. Sérum A2 Sérum B2 Sérum C2 Výtěžnost (moč): Jeden sdružený vzorek moči byl označený třemi rozdílnými hladinami C-peptidu a testován před a po označení. Původní C-peptid Předpokládaná Naměřená Procento hodnota přidaný hodnota hodnota Výtěžnost (ng/ml) (ng/ml) (ng/ml) (ng/ml) (%) 4.99 21.35 26.35 23.59 89.5 4.99 10.68 15.67 14.02 89.4 4.99 5.34 10.33 9.56 92.5 Výtěžnost (plazma): Dva sdružené vzorky plazmy byly označeny třemi rozdílnými hladinami C-peptidu a testovány před a po označení. Původní C-peptid Předpokládaná Naměřená Procento hodnota přidaný hodnota hodnota Výtěžnost (ng/ml) (ng/ml) (ng/ml) (ng/ml) (%) 1.83 21.35 23.18 21.03 90.7 1.83 10.68 12.51 11.71 93.6 1.83 5.34 7.17 6.69 93.4 1.90 21.35 23.25 21.17 91.1 1.90 10.68 12.57 12.02 95.6 1.90 5.34 7.24 6.74 93.2 Ředění (sérum): Tři vzorky séra obsahující vysoké koncentrace C-peptidu byly sériově naředěny pomocí AIA-PACK C-peptide SAMPLE DILUTING SOLUTION a analyzovány. Faktor Předpokládaná Naměřená Procento ředění hodnota hodnota Výtěžnost (ng/ml) (ng/ml) (%) žádný 18.47 7.5/10 14.00 14.32 102.3 5.0/10 9.40 9.79 104.2 2.5/10 4.74 5.03 106.3 1.0/10 1.91 2.11 110.4 žádný 20.82 7.5/10 15.83 16.21 102.4 5.0/10 10.58 11.29 106.7 2.5/10 5.31 5.81 109.3 1.0/10 2.20 2.46 111.8 žádný 22.55 7.5/10 17.07 17.13 100.4 5.0/10 11.46 11.93 104.1 2.5/10 5.76 6.04 104.8 1.0/10 2.40 2.58 107.4 b.3. Ředění (plazma): Dva vzorky plazmy obsahující vysoké koncentrace C-peptidu byly sériově naředěny pomocí AIA-PACK C-peptide SAMPLE DILUTING SOLUTION a analyzovány. EDTA plazma A2 Heparininizovaná plazma A2 Faktor Předpokládaná Naměřená Procento ředění hodnota hodnota Výtěžnost (ng/ml) (ng/ml) (%) žádný 22.02 7.5/10 16.61 17.24 103.8 5.0/10 11.13 11.82 106.2 2.5/10 5.60 6.05 108.0 1.0/10 2.28 2.52 110.8 žádný 21.69 7.5/10 16.37 16.94 103.5 5.0/10 10.98 11.76 107.0 2.5/10 5.50 6.01 109.1 1.0/10 2.20 2.44 110.8 KORELACE a. Korelace mezi sérem (x) a heparinizovanou plazmou (y) v ST AIA-PACK C-Peptide byla provedena s použitím 50 pacientských vzorků. Směrnice 0.978 Průsečík s osou y -0.015 Korelační koeficient 0.997 Rozmezí vzorků 1.0-11.5 Počet vzorků 50 b. Korelace mezi heparinizovanou plazmou (x) a EDTA plazmou (y) v ST AIA-PACK C-Peptide byla provedena s použitím 50 pacientských vzorků. Směrnice 0.972 Průsečík s osou y 0.085 Korelační koeficient 0.996 Rozmezí vzorků 1.0-11.4 Počet vzorků 50 PŘESNOST a. Přesnost v rámci jednoho cyklu byla stanovena pomocí šesti kontrolních roztoků v celkem 20 cyklech. V rámci jednoho cyklu byla provedena analýza jedné sady dvou paralelních vzorků na jeden kontrolní vzorek. Průměrná hodnota každých dvou paralelních vzorků byla použita k získání sdružené směrodatné odchylky (SO), která pak byla použita k výpočtu variačního koeficientu (CV). b.2. Moč A2 Ředění (moč): Jeden vzorek moči obsahující vysoké koncentrace C-peptidu byl sériově naředěný pomocí AIA-PACK C-peptide SAMPLE DILUTING SOLUTION a analyzován. Faktor Předpokládaná Naměřená Procento ředění hodnota hodnota Výtěžnost (ng/ml) (ng/ml) (%) žádný 18.96 7.5/10 14.24 14.60 102.5 5.0/10 9.50 9.89 104.1 2.5/10 4.74 5.15 108.6 1.0/10 1.83 1.98 108.0 9-12 Průměr Sdružená Variační směrodatná koeficient (ng/ml) odchylka (ng/ml) (%) Sérum A3 4.67 0.0843 1.8 Sérum B3 8.88 0.1341 1.5 Sérum C3 18.06 0.2623 1.5 Heparininizovaná plazma A3 8.88 0.1288 1.5 EDTA plazma A3 10.22 0.1472 1.4 Moč A3 2.23 0.0393 1.8 10-12
b. Celková přesnost byla stanovena paralelním stanovením šesti kontrolních vzorků ve 20 samostatných cyklech. Průměrné hodnoty každého cyklu byly použity k výpočtu sdružené směrodatné odchylky (SD) a variačního koeficientu (CV). Průměr Sdružená Variační směrodatná koeficient (ng/ml) odchylka (ng/ml) (%) Sérum A3 4.67 0.1401 3.0 Sérum B3 8.88 0.2617 3.0 Sérum C3 18.06 0.5004 2.8 Heparininizovaná plazma A3 8.88 0.2149 2.4 EDTA plazma A3 10.22 0.2431 2.4 Moč A3 2.23 0.0739 3.3 SPECIFICITA Zkřížená reaktivita byla testována u následujících látek. Zkřížená reaktivita (%) je procento látky, které bude identifikováno jako C-peptid. Jsou-li ve vzorku přítomny tyto látky ve stejné koncentraci jako C-peptid, bude konečný výsledek zvýšen o tato procenta. Látka Zkřížená reaktivita (%) C-peptid 100 Proinzulín 31,5 Inzulín nedetekovatelný SENZITIVITA Minimální detekovatelná koncentrace (MDC) C-peptidu je odhadnuta na 0,2 ng/ml, která odpovídá koncentraci 2,0 ng/ml v původních vzorcích moči (faktor ředění 10). Minimální detekovatelná koncentrace (MDC) je definována jako taková koncentrace C-peptidu, která odpovídá míře fluorescence, jež je dvě směrodatné odchylky od průměrné míry fluorescence dvaceti opakovaných stanovení pomocí AIA-PACK C-Peptide CALIBRATOR (1). 5) Rubenstein, A., et al., Clinical Significance of Circulating C-Peptide in Diabetes Mellitus and Hypoglycemic Disorders. Archives of Internal Medicine 137: 625-632 (1977). 6) Rendall, M., Expanding Clinical Use of C-Peptide Radioimmunoassay. Acta Diabetological Latine 20: 105-113 (1983). 7) Hoogwerf, B. J., Goetz, F. C., Urinary C-peptide - A Simple Measure of Integrated Insulin Production with Emphasis on Body Size, Diet, and Corticosteroids. J Clin Endocrinol Metab, 56: 60-67 (1982). 8) Kaneko, T., et al., Demonstration of C-Peptide Immunoreactivity in Various Body Fluids and Clinical Evaluation of the Determination of Urinary C-Peptide Immunoreactivity. Endocrinol. Jap., 22: 207-212 (1975). TOSOH CORPORATION 3-8-2, Shiba, Minato-ku TOKYO 105-8623 (JAPONSKO) Tel.: +81 (0)3 5427 5181 Fax: +81 (0)3 5427 5220 TOSOH EUROPE N.V. Transportstraat 4 B-3980 TESSENDERLO BELGIE Tel.: +32 (0)13 66 88 30 Fax: +32 (0)13 66 47 49 TOSOH BIOSCIENCE, INC. 6000 Shoreline Court, Suite 101 South San Francisco, CA 94080, USA Telefon: +1 650 615 49 70 INTERFERENCE Interference je v rámci této studie definována jako výtěžnost přesahující 10 % známé koncentrace vzorku po přidání následujících látek k lidským vzorkům. Hemoglobin (až do 410 mg/dl), volný bilirubin (do 16 mg/dl) a konjugovaný bilirubin (do 17 mg/dl) neinterferují s testem. Lipémie indikovaná koncentrací triglyceridů (do 1600 mg/dl) neinterferuje s testem. Kyselina askorbová (do 20 mg/dl) neinterferuje s testem. Bílkoviny, jak ukazuje koncentrace lidského albuminu (až do 5,0 g/dl), neinterferují s tímto testem. Heparin (do 100 U/ml) neinterferuje s testem. EDTA (až do 10 mg/ml) neinterferuje s tímto testem. REFERENCE 1) Beischer, W., Proinsulin and C-peptide in Humans. Hormones in Normal and Abnormal Human Tissues Vol 3.pp 1-43 (1983). 2) Beyer, J., et al., C-Peptide: Its Biogenesis, Structure, Determination and Clinical Significance. Giernale Italiano di Chimica Clinica 4 (Supp.1) pp. 9-22 (1979). 3) Rubenstein A., et al., Secretion of Proinsulin C-Peptide by Pancreatic by Pancreatic B-cells and Its Circulation in Blood. Nature 224: 697-699 (1969). 4) Horwitz, D., et al., Circulating Serum C-Peptide. New England Journal of Medicine 295: 207-209 (1976). 11-12 Objem netto (po rekonstituci pro lyofilizovaný materiál) 12-12