Principy a postupy výkonnostního testování analytické způsobilosti měření chemického složení v mléčných laboratořích

Transkript

1 Uplatněná metodika QF 3019 UM 2 - název: Principy a postupy výkonnostního testování analytické způsobilosti měření chemického složení v mléčných laboratořích Uplatněná metodika a technicko-organizační doporučení, opatření a postupy v systému QA/QC (quality assurance/quality control, zajištění a řízení kvality) k řešení referenčně-rutinních systémů analytických laboratoří testace kvality syrového mléka pro zvýšení věrohodnosti výsledků. Cíl uplatněné metodiky: Cílem je zajištění a zvýšení věrohodnosti výsledků a provozní jistoty managementu rutinních mléčných laboratoří při kontrole složení a kvality mléka pro účely kontroly užitkovosti (metodická podpora šlechtění zvířat) a proplácení mléka (metodické zajištění kvality mléčného potravinového řetězce). Náplň uplatněné metodiky: Implementace dosažených výsledků, získaných na základě předchozího výzkumu a vývoje v rámci řešení projektů NAZV, MZe-ČR, QF 3019 a INGO, MŠMT-ČR, LA 244 a v rámci koordinační a konzultační metodické činnosti Národní referenční laboratoře pro syrové mléko (NRL-SM) Rapotín, do prostředí mlékařských analytických laboratoří Českomoravské společnosti chovatelů, a.s. Praha. Zdroj uplatněné metodiky: projekt NAZV, MZe-ČR, QF 3019, Výzkum a vývoj zdokonalení nástrojů kontroly kvality analýz základního složení mléka pro hospodářské účely. Zpracovali dne: Oto Hanuš, Libor Janů, Václava Genčurová, Radoslava Jedelská, Jaroslav Kopecký, Alena Dolínková Výzkumný ústav pro chov skotu, s.r.o. Akreditovaná Zkušební laboratoř č Národní referenční laboratoř pro syrové mléko (NRL-SM) Referenční laboratoř pracovní sítě referenčních mléčných laboratoří ICAR-CECALAIT Uplatnění bylo provedeno zavedením všech principů metodiky od

2 Struktura uplatněné metodiky: 1) Design přípravy výkonnostních testů analytické způsobilosti 2) Příprava variačního oboru výsledků kontrolních vzorků mléka 3) Konzervování, příprava a transport sad kontrolních vzorků 4) Vyhodnocení výsledků výkonnostního testování 5) Přílohy s příklady metodik vyhodnocení modifikací výkonnostních testů analytické způsobilosti Použité zkratky: LRM = laboratoř rozborů mléka; NRL-SM = Národní referenční laboratoř pro syrové mléko; T = obsah tuku; HB = obsah hrubých bílkovin; K = obsah kaseinu; L = obsah laktózy; TPS = obsah tukuprosté sušiny; C = koncentrace kyseliny citrónové; PSB = počet somatických buněk; N = obsah dusíku; G = metoda podle Gerbera pro určení T; RG = metoda podle Röse-Gottlieba pro určení T; ČSN = Česká státní norma; ICAR = Mezinárodní výbor pro kontrolu užitkovosti zvířat; IDF = Mezinárodní mlékařská federace; AFEMA = Pracovní skupina pro podporu zdraví vemene a hygieny mléka v alpských zemích; CECALAIT = Ústav pro kontrolu kvality mlékařských analýz; QA/QC = zajištění a řízení jakosti. Principy a postupy výkonnostního testování analytické způsobilosti měření chemického složení v mléčných laboratořích 1) Design přípravy výkonnostních testů analytické způsobilosti Test je proveden NRL-SM nad výsledky měření desíti stejných vzorků mléka účastníky testu (T, HB, L, BMM). Test BMM je zároveň proveden nad výsledky měření dvou vodných roztoků NaCl s bodem mrznutí odpovídajícím depresi bodu mrznutí syrového kravského mléka. Výkonnostní testy na národní úrovni jsou určeny pro nepřímé metody (zpravidla infraanalýzu) u T, HB a L, pro referenční (kryoskopii) i nepřímé (infraanalýza s konduktometrií a navazující regresní kalkulací) metody u BMM, pro referenční metodu u deprese bodu mrznutí na vodných vzorcích a pro specifické (ureolytické s fotometrickým, konduktometrickým nebo ph-metrickým výstupem měření) i nespecifické (ostatní fotometrické, FT-MIR infraanalýza) u koncentrace močoviny v mléce. Test na T, HB a L je prováděn měsíčně, test na M a BMM je prováděn čtvrtletně. Použity jsou následující jednotky: obsah tuku (T; %; g/100g); obsah bílkovin (HB; %; g/100g; hrubé bílkoviny); obsah laktózy (L; %; g/100g; monohydrát); obsah močoviny (M; mg/100ml); bod mrznutí mléka (BMM; ºC). 2) Příprava variačního oboru výsledků kontrolních vzorků mléka Kontrolní vzorky mléka mají upraven rozptyl hodnot prostřednictvím artificiálních manipulací (T, HB, L, M, BMM). U T, HB a L jsou použity: bazénové vzorky mléka; náhodný výběr individuálních vzorků, které jsou přimíchány k bazénovým vzorkům; manipulace s obsahem tuku (odstátí a separace); ředění roztokem vody s minerální kompozicí. U BMM je použito mimo bazénových a individuálních vzorků mléka ředění vzorků mléka destilovanou vodou. U M jsou použity přirozené vzorky mléka bazénové a individuální a rovněž artificiální přídavky u vybraných vzorků. Variační obory referenčních nebo kontrolních sad vzorků jsou přibližně: T 2 až 3 % (od 2 do 5 %); HB 0,5 až 0,8 % (od 2,8 do 3,6 %); L 0,5

3 až 0,8 % (od 4,4 do 5,2 %); M 30 mg/100ml (od 15 do 45 mg/100ml); BMM 0,040 ºC (od -0,530 do - 0,490 ºC). Kvalita kontrolních vzorků je rovněž posouzena změřením počtu somatických buněk (PSB) v jednotlivých vzorcích (n = 10) v NRL-SM. Zde by výsledky PSB měly být v hodnotách <400 tis./ml u vzorků nemanipulovaných a <800 tis./ml u vzorků s uměle zvýšeným obsahem tuku. 3) Konzervování, příprava a transport sad kontrolních vzorků Konzervace kontrolních vzorků je provedena prostředkem a koncentrací (podle požadavků klienta), které se většinou shodují s ošetřením rutinně měřených vzorků tak, aby byla udržena kvalita vzorků. Nyní se jedná zpravidla o 2-brom, 2-nitro, 1, 3, propandiol (bronopol, DaF Control System Microtabs), tabletovaný, v konečné koncentraci ředění v mléce 0,2 nebo případně 0,4 %. Po rozdělení a nakonzervování jsou kontrolní vzorky v plastových vzorkovnicích o relevantním objemu podle potřeby klienta (50 až 750 ml) umístěny v chladničce 6 ºC a před transportem zchlazeny (3 hod.). Poté jsou vychlazené vzorky (<10 ºC) zabaleny do transportních termoboxů se zmrazenými chladicími vložkami. Termoboxy jsou odeslány v den odběru dráhou, poštou nebo kurýrem jako spěšná zásilka. Na místě určení jsou vzorky podle podmínek obvykle do 48 hod., nejčastěji však do 24 hod. Tato doba transportu zaručuje zachování potřebné kvality kontrolních vzorků. 4) Vyhodnocení výsledků výkonnostního testování Výsledky změřených vzorků mléka jsou z účastnických laboratoří zaslány do NRL-SM v příslušných protokolech pomocí elektronické pošty. Zde jsou data zaznamenána a v příslušných podsouborech (týkajících se měření identických vzorků) ošetřena testem odlehlosti (Grubbs na hladině pravděpodobnosti 95 % pro zahrnutí výsledku do hodnoceného souboru). Následně jsou stanoveny referenční hodnoty pro jednotlivé ukazatele a vzorky. Variabilita diferencí hodnot změřených účastníky od hodnot referenčních je posouzena systémem Z-score (deprese bodu mrznutí vodné roztoky NaCl), ale častěji Euklidické vzdálenosti od počátku (T, HB, L, M a BMM). V případě M je rovněž použito vyhodnocení recovery u vybraných vzorků mléka (%). Výsledky jsou zobrazeny graficky a shrnuty tabulkově, přičemž je postiženo pořadí a úspěšnost účastníků v testu, tzn. jejich postavení vůči příslušným referenčním průměrům a derivovaným diskriminačním limitům. Konkrétní příklady vyhodnocení různých používaných modifikací výkonnostních testů jsou obsaženy v přílohách. Design systému Euklidické vzdálenosti od počátku (E) určuje pořadí účastníků v hodnocení výsledků výkonnostního testování analytické způsobilosti. E = (d 2 + sd 2 ) 1/2, kde d = průměrná diference od referenčních hodnot a sd = směrodatná odchylka d. Poskytuje možnost rozkladu případné výsledkové nashody na složku systematickou a náhodnou, narozdíl od Z-score. Design systému Z-score pro vzorek = diference (x i - rx)/rsx, kde x i = hodnota vzorku v laboratoři, rx = referenční průměr hodnot měření vzorku bez odlehlých hodnot a rsx jeho směrodatná odchylka. 5) Přílohy s příklady metodik vyhodnocení modifikací výkonnostních testů analytické způsobilosti

4 VÝZKUMNÝ ÚSTAV PRO CHOV SKOTU, s. r. o. Rapotín, Výzkumníků 267, Vikýřovice Vyhodnocení x. kruhového testu způsobilosti rutinních výsledků analýz základního složení syrového mléka (AZSSM) v laboratořích ČR 1. Úvod Test byl proveden při prvním měření výsledků AZSSM v rámci pravidelné rutinní kalibrace (za měsíc). Na infraanalyzátorech mléka v laboratořích kontroly mléčné užitkovosti krav byla ve stejnou dobu měřena totožná sada desíti mléčných referenčních standardů. 2. Design provedení testu a kontrolní vzorky Vzorky byly do sady sestaveny cíleně s potřebným variačním rozpětím hodnot pro všechny tři obsahové složky (tuk (T) v g/100g = %; bílkoviny (B) v g/100g = % hrubých bílkovin (celkový N 6,38); laktóza (L) v g/100g = % monohydrátu). Rozpětí byla získána záměrným výběrem vzorků a dále účelovými arteficiálními manipulacemi s mlékem. 10 vzorků mléka bylo konzervováno (bronopol v tabletách, tzv. DF Control System, 0,04 % účinné látky v mléce), zchlazeno (< 10 C) a v termoboxech vlakem rozesláno do laboratoří kontroly užitkovosti. Vzorky byly určeny pro centrální adjustaci infraanalyzátorů, nicméně výsledky prvních měření na původně adjustovaných hladinách jsou využitelné k vyhodnocení kruhového testu způsobilosti výsledků přístrojových měření. Kontrolní vzorky mléka byly z hlediska kvality při příjmu považovány za bezproblémové. Všechny přístroje měřily totožné vzorky mléka. Výpočty byly provedeny po Grubbsově testu odlehlosti na hladině 95 %. Výsledky byly statisticky vyhodnoceny a přístroje seřazeny uvnitř mléčných složek dle hodnoty Euklidické vzdálenosti (míra správnosti výsledku) od nejpravděpodobněji správné hodnoty. Tabulkové a grafické diskriminační limity úspěšnosti účasti v testu byly derivovány následujícím způsobem: - půlkruh: 1) pro průměrnou diferenci (d) jako 1,96 násobek hodnoty směrodatné odchylky d souboru, tzn. na konvenční hladině 95 % intervalu spolehlivosti; 2) pro směrodatnou odchylku průměrné diference (sd) metodou robustního odhadu jako součet mediánu sd souboru a 1,65 násobku standardizovaného kvartilového odhadu směrodatné odchylky, tzn. na konvenční hladině 95 %; 3) kombinací obou předchozích (d a sd) limitů na bázi průměrování vznikl limit (půlkruh v grafu) s dlouhodobým diskriminačním tlakem přibližně 90 %; - čtyřúhelník: 4) pro d jako hodnota jedné směrodatné odchylky d souboru; 5) pro sd jako součet průměru sd souboru a jeho směrodatné odchylky. Výskyt účastníka testu v čtyřúhelníkovém poli, pokud spadá do půlkruhu, značí výborný výsledek a v půlkruhovém poli uspokojivý výsledek. Každá laboratoř může nalézt výsledné pozice hodnoty způsobilosti svých přístrojových měření na základě číselného identifikačního kódu v rámci anonymního klíče. 3. Výsledky způsobilosti Způsobilost měření výsledků AZSSM je shrnuta v tabulkách, kde lze hledat pozice jednotlivých přístrojů a laboratoří, podobně jako v grafickém zobrazení podle jednotlivých mléčných složek. 4. Důležité upozornění Materiály s výsledky kruhových testů obecně, včetně tohoto, jsou velmi diskrétní povahy, určené výhradně odbornému vedení dané zkušební laboratoře, nikoliv hospodářskému vedení, popřípadě dalším osobám (viz. příručka kvality akreditovaných laboratoří a její přílohy, prohlášení o nezávislosti). Uvedené dokládá i použití anonymního kódovacího klíče, jak patrno, kdy i naše pracoviště setrvává v diskrétnosti. Materiály mají posloužit výhradně korekturám v rámci QA/QC (quality assurance/quality control, tzn. zajištění a řízení kvality) systému zkušební laboratoře, tzn. svému jedinému a původnímu účelu. Striktní anonymita a diskrétnost jsou základními podmínkami korektního provedení jakéhokoliv výkonnostního mezilaboratorního testu. Dbejte prosím důsledně tohoto upozornění, aby provádění testu mohlo být účelné a účinné a nestalo se zdrojem nežádoucích nepříjemností pro Vaše i naše pracoviště. Test není pranýřem, ale prostředkem postupného zlepšování kvality. Bohužel, každý test ve svém vyhodnocení musí provést určité seřazení od prvního po poslední. Zvláště druhá varianta nemusí být příjemná, může však potkat postupně kohokoliv. I tak nemusí být poslední výsledky špatné, je však pravděpodobné, že jsou horší v rámci možného a budou vyžadovat korektury. Proto je výsledky testu nutno interpretovat profesionálně a střízlivě. 5. Závěr Všeobecně lze konstatovat, že soubor byl charakterizován podobným rozptylem pro tuk, mírně vyšším pro bílkoviny a stejným pro laktózu oproti předchozímu testu. Bylo více vybočujících případů u tuku, více u bílkovin a méně u laktózy v porovnání k předchozímu testu. Vybočující přístroje je nutno zkontrolovat, případně korigovat novou kalibrací (pravděpodobně bylo provedeno) nebo seřídit, resp. v případě potřeby opravit. K testům je třeba přistupovat bez obav s cílem vytěžit z jejich informací. V Rapotíně: xx. xx. rok podpis vedoucí akreditované Zkušební laboratoře Výzkumného ústavu pro chov skotu, s.r.o. Národní referenční laboratoře pro syrové mléko mléčné laboratoře ústavu pro chov skotu, s.r.o. vedoucí mléčné laboratoře Výzkumného ústavu pro chov skotu, s.r.o.

5 Tab. 1 Hodnoty jednotlivých přístrojů Tuk (%; g/100g) ref.hod.1 1 3,77 3,62 3,64 3,78 3,71 3,67 3,71 3,74 3,70 3,73 3,74 3,71 2 3,98 3,79 3,84 4,01 3,91 3,92 3,84 3,90 3,94 3,86 3,88 3,90 3 3,99 3,78 3,86 4,00 3,93 3,88 3,79 3,87 3,90 3,81 3,85 3,88 4 3,63 3,51 3,53 3,67 3,64 3,57 3,60 3,60 3,62 3,57 3,55 3,59 5 3,17 3,05 3,03 3,14 3,13 3,09 3,03 3,05 3,12 3,08 3,07 3,09 6 3,03 2,90 2,87 3,01 3,01 2,86 2,97 2,97 2,95 2,94 2,93 2,95 7 3,78 3,63 3,62 3,82 3,71 3,67 3,70 3,73 3,71 3,69 3,66 3,70 8 3,88 3,71 3,74 3,89 3,82 3,77 3,77 3,78 3,81 3,79 3,74 3,79 9 2,75 2,62 2,66 2,79 2,73 2,81 2,64 2,72 2,75 2,70 2,67 2, ,13 2,00 1,98 2,01 2,05 1,96 2,01 2,06 2,05 2,04 1,95 2,02 n x 3,411 3,261 3,277 3,412 3,364 3,320 3,306 3,342 3,355 3,321 3,304 3,334 sx 0,589 0,570 0,589 0,624 0,587 0,596 0,588 0,584 0,587 0,578 0,602 0,591 vx 17,27 17,48 17,97 18,29 17,45 17,95 17,79 17,47 17,50 17,40 18,22 17,73 min 2,13 2,00 1,98 2,01 2,05 1,96 2,01 2,06 2,05 2,04 1,95 2,02 max 3,99 3,79 3,86 4,01 3,93 3,92 3,84 3,90 3,94 3,86 3,88 3,90 Bílkoviny (%; g/100g) ref.hod.1 1 3,17 3,11 3,20 3,14 3,17 3,19 3,26 3,20 3,28 3,20 3,17 3,19 2 3,23 3,17 3,26 3,19 3,23 3,23 3,29 3,26 3,32 3,23 3,24 3,24 3 3,23 3,16 3,25 3,20 3,23 3,23 3,29 3,26 3,32 3,23 3,25 3,24 4 3,17 3,11 3,17 3,13 3,17 3,15 3,24 3,16 3,26 3,17 3,16 3,17 5 3,28 3,21 3,30 3,28 3,29 3,26 3,33 3,27 3,35 3,26 3,29 3,28 6 3,16 3,10 3,13 3,13 3,17 3,14 3,24 3,16 3,25 3,17 3,18 3,17 7 3,19 3,12 3,18 3,15 3,18 3,18 3,25 3,21 3,26 3,19 3,19 3,19 8 3,20 3,15 3,20 3,14 3,21 3,19 3,27 3,23 3,29 3,21 3,22 3,21 9 2,75 2,70 2,84 2,80 2,75 2,79 3,03 * 2,76 2,82 2,81 2,79 2, ,23 3,19 3,22 3,24 3,25 3,21 3,31 3,21 3,33 3,22 3,24 3,24 n x 3,161 3,102 3,175 3,140 3,165 3,157 3,251 3,172 3,248 3,169 3,173 3,171 sx 0,141 0,138 0,121 0,123 0,143 0,127 0,079 0,142 0,146 0,123 0,133 0,135 vx 4,46 4,45 3,81 3,92 4,52 4,02 2,43 4,48 4,50 3,88 4,19 4,26 min 2,75 2,70 2,84 2,80 2,75 2,79 3,03 2,76 2,82 2,81 2,79 2,78 max 3,28 3,21 3,30 3,28 3,29 3,26 3,33 3,27 3,35 3,26 3,29 3,28 Laktóza (%; g/100g) ref.hod.1 1 4,95 4,98 4,93 4,95 4,93 4,95 4,97 4,98 4,95 4,98 4,90 4,95 2 4,91 4,94 4,88 4,90 4,88 4,90 4,92 4,94 4,89 4,94 4,86 4,91 3 4,90 4,93 4,88 4,91 4,87 4,89 4,93 4,94 4,90 4,93 4,87 4,91 4 4,98 5,02 4,94 4,96 4,94 4,94 4,98 5,00 4,95 4,99 4,92 4,97 5 4,83 4,88 4,80 4,83 4,79 4,82 4,83 4,86 4,81 4,85 4,79 4,83 6 5,07 5,13 5,04 5,06 5,07 5,01 5,04 5,07 5,01 5,09 5,04 5,06 7 4,95 5,00 4,95 4,94 4,93 4,93 4,97 4,99 4,93 4,98 4,93 4,96 8 4,93 4,98 4,91 4,91 4,91 4,92 4,94 4,97 4,92 4,95 4,91 4,93 9 4,08 4,15 4,00 4,15 4,04 4,06 4,15 4,15 4,04 4,14 3,99 4, ,04 5,11 4,97 4,99 5,03 4,97 4,96 5,03 4,96 5,03 5,00 5,01 n x 4,864 4,912 4,830 4,860 4,839 4,839 4,869 4,893 4,836 4,888 4,821 4,862 sx 0,269 0,264 0,283 0,244 0,277 0,264 0,245 0,253 0,270 0,256 0,285 0,264 vx 5,53 5,37 5,86 5,02 5,72 5,46 5,03 5,17 5,58 5,24 5,91 5,43 min 4,08 4,15 4,00 4,15 4,04 4,06 4,15 4,15 4,04 4,14 3,99 4,09 max 5,07 5,13 5,04 5,06 5,07 5,01 5,04 5,07 5,01 5,09 5,04 5,06 Hodnoty označené * nevyhověly Grubbsově testu odlehlosti a byly vyloučeny z výpočtu referenčních hodnot Ref. hod. 1 = Referenční hodnoty jsou získané průměrem výsledků naměřených jednotlivými přístroji s vyloučením hodnot odlehlých n = počet vzorků; x = aritmetický průměr; sx = směrodatná odchylka; vx = variační koeficient v %; min. = minimum; max. = maximum;

6 Tab. 2 Základní statistika rozdílů od referenčních hodnot pro jednotlivé přístroje Referenční hodnoty byly vypočítány z hodnot změřených jednotlivými laboratořemi po Grubbsově testu KOD Tuk Bílkoviny Laktóza KOD Tuk Bílkoviny Laktóza (%; g/100g) (%; g/100g) (%; g/100g) (%; g/100g) (%; g/100g) (%; g/100g) 53-5 n n d 0,077-0,011 0,005 d -0,028 0,079 0,010 sd 0,024 0,009 0,011 sd 0,036 0,057 0,027 min 0,04-0,03-0,01 min -0,09 0,05-0,05 max 0,11 0,00 0,03 max 0,02 0,25 0, n n d -0,073-0,070 0,053 d 0,008 0,000 0,034 sd 0,027 0,009 0,022 sd 0,022 0,018 0,012 min -0,11-0,08 0,03 min -0,04-0,03 0,01 max -0,02-0,05 0,10 max 0,04 0,02 0, n n d -0,057 0,003-0,029 d 0,021 0,076-0,023 sd 0,018 0,025 0,021 sd 0,016 0,015 0,017 min -0,08-0,04-0,09 min -0,01 0,04-0,05 max -0,02 0,06-0,01 max 0,04 0,09 0, n n d 0,078-0,032 0,001 d -0,013-0,003 0,029 sd 0,038 0,026 0,023 sd 0,024 0,015 0,010 min -0,01-0,07-0,02 min -0,07-0,02 0,02 max 0,12 0,02 0,06 max 0,02 0,03 0, n n d 0,030-0,007-0,020 d -0,030 0,001-0,038 sd 0,020 0,012 0,020 sd 0,026 0,010 0,023 min 0,00-0,03-0,05 min -0,07-0,02-0,10 max 0,06 0,01 0,02 max 0,03 0,01-0, n d -0,014-0,015-0,020 sd 0,048 0,012 0,014 min -0,09-0,03-0,05 max 0,10 0,01 0,00

7 Tab. 3 Variabilita diferencí přístrojů od referenčních hodnot pro měřené složky (reprodukovatelnost a správnost). Referenční hodnoty byly vypočítány z výsledků naměřených jednotlivými přístroji po Grubbsově testu odlehlosti Vysvětlivky k symbolům: d = průměrná diference;sd = směrodatná odchylka průměrné diference; RE = Euklidická vzdálenost od počátku = syntetický ukazatel; t = testovací kritérium; význ. = statistická významnost;ns = p > 0,05; * = p < 0,05; ** = p < 0,01; *** = p < 0,001; D = průměr absolutních hodnot diferenčních parametrů laboratoří;sd = směrodatná odchylka průměru diferenčních parametrů laboratoří; Tuk diference LAB.-REF. (%; g/100g) d sd RE t význ ,008 0,022 0,0234 1,15 ns ,021 0,016 0,0264 4,15 ** ,013 0,024 0,0273 1,71 ns ,030 0,020 0,0361 4,74 ** ,030 0,026 0,0397 3,65 ** ,028 0,036 0,0456 2,46 * ,014 0,048 0,0500 0,92 ns ,057 0,018 0, ,01 *** ,073 0,027 0,0778 8,55 *** Ν ,077 0,024 0, ,15 *** Ν ,078 0,038 0,0868 6,49 *** Ν diskriminační limit úspěšnosti účastníků (90 %) D 0,0390 0,0296 sd 0,0540 0,0095 Bílkoviny diference LAB.-REF. (%; g/100g) d sd RE t význ ,001 0,010 0,0100 0,32 ns ,007 0,012 0,0139 1,84 ns ,011 0,009 0,0142 3,87 ** ,003 0,015 0,0153 0,63 ns ,000 0,018 0,0180 0,00 ns ,015 0,012 0,0192 3,95 ** ,003 0,025 0,0252 0,38 ns ,032 0,026 0,0412 3,89 ** ,070 0,009 0, ,60 *** Ν ,076 0,015 0, ,02 *** Ν ,079 0,057 0,0974 4,38 ** Ν diskriminační limit úspěšnosti účastníků (90 %) D 0,0270 0,0189 sd 0,0408 0,0133 Laktóza diference LAB.-REF. (%; g/100g) d sd RE t význ ,005 0,011 0,0121 1,44 ns ,001 0,023 0,0230 0,14 ns ,020 0,014 0,0244 4,52 ** ,020 0,020 0,0283 3,16 * ,023 0,017 0,0286 4,28 ** ,010 0,027 0,0288 1,17 ns ,029 0,010 0,0307 9,17 *** ,029 0,021 0,0358 4,37 ** ,034 0,012 0,0361 8,96 *** ,038 0,023 0,0444 5,22 *** ,053 0,022 0,0574 7,62 *** Ν Ν diskriminační limit úspěšnosti účastníků (90 %) D 0,0238 0,0182 sd 0,0279 0,0054

8 Obr. 1 Pozice přístrojů pro měřené složky vzhledem k imaginárnímu středu a cílovým oblastem. Referenční hodnoty byly vypočítány z výsledků naměřených jednotlivými přístroji po Grubbsově testu odlehlosti Tuk % 0,080 0,070 0,060 0,050 sd 0,040 0,030 0,020 0,010 0,000-0,100-0,050 0,000 0,050 0,100 d ''Půlkruh'' znázorňuje 90%ní interval spolehlivosti, resp. diskriminační tlak, r = 0,0672 Bílkoviny % 0,070 0,060 0,050 0,040 sd 0,030 0,020 0,010 0,000-0,100-0,050 0,000 0,050 0,100 d ''Půlkruh'' znázorňuje 90%ní interval spolehlivosti, resp. diskriminační tlak, r = 0,056 Laktóza % 0,050 0,045 0,040 0,035 0,030 sd 0,025 0,020 0,015 0,010 0,005 0,000-0,060-0,040-0,020 0,000 0,020 0,040 0,060 d ''Půlkruh'' znázorňuje 90%ní interval spolehlivosti, resp. diskriminační tlak, r = 0,0433 Linie vycházející z centra grafu představují statistickou významnost na hladině 5 % (Student)

9 VÝZKUMNÝ ÚSTAV PRO CHOV SKOTU, s. r. o. Rapotín, Výzkumníků 267, Vikýřovice Vyhodnocení X. kruhového testu stanovení bodu mrznutí mléka ( C) v analytických laboratořích ČR. 1) Struktura provedení testu kvality analytické práce Deset vzorků mléka v testu bylo původních nebo upraveno z hlediska daného parametru BMM do relevantní škály, také pomocí artificiálních složkových manipulací. Mléko bylo rozpipetováno (10 ml na vzorek), konzervováno bronopolem (0,02 %, původní substance), zchlazeno (< 10 C) a distribuováno vlakem v izolačních termoboxech do laboratoří. V laboratořích byly vzorky zahřáty, rehomogenizovány a duplicitně proměřeny na BMM na mléčných kryoskopech dle příslušných standardních operačních postupů a protokolových požadavků testu. Kvalita vzorků nebyla zpochybněna. Získané výsledky byly statisticky vyhodnoceny (viz. přiložená zpráva). 2) Hodnocení kruhového testu Opakovatelnost měření byla stanovena jako variabilita rozdílů duplicitních měření jednotlivých vzorků uvnitř laboratoří (přístrojů). Výsledky referenčních hodnot byly stanoveny pro jednotlivé vzorky jako aritmetické průměry vzorků z měření všech laboratoří po Grubbsově testu odlehlosti (0,05 %). Byly vypočteny průměrné odchylky a variability odchylek laboratoří od referenčních hodnot a Euklidické vzdálenosti laboratoří od středu. V tabulkách a zobrazeních může nalézt každá laboratoř svou pozici z hlediska opakovatelnosti a reprodukovatelnosti (správnosti) měřených výsledků. Při zhoršených výsledcích je třeba uvažovat o nápravných opatřeních. Tabulkové a grafické diskriminační limity úspěšnosti účasti v testu byly derivovány následujícím způsobem: - půlkruh: 1) pro průměrnou diferenci (d) jako 1,96 násobek hodnoty směrodatné odchylky d souboru, tzn. na konvenční hladině 95 % intervalu spolehlivosti; 2) pro směrodatnou odchylku průměrné diference (sd) metodou robustního odhadu jako součet mediánu sd souboru a 1,65 násobku standardizovaného kvartilového odhadu směrodatné odchylky, tzn. na konvenční hladině 95 %; 3) kombinací obou předchozích (d a sd) limitů na bázi průměrování vznikl limit (půlkruh v grafu) s dlouhodobým diskriminačním tlakem přibližně 90 %; - čtyřúhelník: 4) pro d jako hodnota jedné směrodatné odchylky d souboru; 5) pro sd jako součet průměru sd souboru a jeho směrodatné odchylky. Výskyt účastníka testu v čtyřúhelníkovém poli, pokud spadá do půlkruhu, značí výborný výsledek a v půlkruhovém poli uspokojivý výsledek. Každá laboratoř může nalézt výsledné pozice hodnoty způsobilosti svých přístrojových měření na základě číselného identifikačního kódu v rámci anonymního klíče. 3) Důležité upozornění Materiály s výsledky kruhových testů obecně, včetně tohoto, jsou velmi diskrétní povahy, určené výhradně odbornému vedení dané zkušební laboratoře, nikoliv hospodářskému vedení, popřípadě dalším osobám (viz. příručka kvality akreditovaných laboratoří a její přílohy, prohlášení o nezávislosti). Uvedené dokládá i použití anonymního kódovacího klíče, jak patrno, kdy i naše pracoviště setrvává v diskrétnosti. Materiály mají posloužit výhradně korekturám v rámci QA/QC (quality assurance/quality control, tzn. zajištění a řízení kvality) systému zkušební laboratoře, tzn. svému jedinému a původnímu účelu. Striktní anonymita a diskrétnost jsou základními podmínkami korektního provedení jakéhokoliv výkonnostního mezilaboratorního testu. Dbejte prosím důsledně tohoto upozornění, aby provádění testu mohlo být účelné a účinné a nestalo se zdrojem nežádoucích nepříjemností pro Vaše i naše pracoviště. Test není pranýřem, ale prostředkem postupného zlepšování kvality. Bohužel, každý test ve svém vyhodnocení musí provést určité seřazení od prvního po poslední. Zvláště druhá varianta nemusí být příjemná, může však potkat postupně kohokoliv. I tak nemusí být poslední výsledky špatné, je však pravděpodobné, že jsou horší v rámci možného a budou vyžadovat korektury. Proto je výsledky testu nutno interpretovat profesionálně a střízlivě. podpis vedoucí akreditované Zkušební laboratoře Výzkumného ústavu pro chov skotu, s.r.o. Národní referenční laboratoře pro syrové mléko mléčné laboratoře ústavu pro chov skotu, s.r.o. vedoucí mléčné laboratoře Výzkumného ústavu pro chov skotu, s.r.o. V Rapotíně: xx. xx. rok

10 Výkonnostní test měření bodu mrznutí vodných roztoků NaCl za účelem zajištění referenčních hodnot bodu mrznutí mléka v kruhovém testu Postup přípravy Výchozím předpisem pro přípravu kontrolních vodných roztoků NaCl je norma 91/180/EHS (Rozhodnutí komise ze 14. února 1991 ukládající určité metody analýz a testování syrového mléka a tepelně ošetřeného mléka). Byly připraveny dva vodné roztoky NaCl v testu označené čísly 11 a 12. Koncentrace roztoku č. 11 je 8,149 g.l -1, koncentrace roztoku č. 12 činí 8,977 g.l -1. NaCl je pro tento účel sušený při teplotě 300 ± 25 C po dobu 5 hodin nebo při teplotě 130 ± 1 C po dobu nejméně 24 hodin. Takto vysušený NaCl je chlazen při pokojové teplotě v účinném exikátoru. Očekávané hodnoty bodu mrznutí pro jednotlivé roztoky jsou: Roztok č. 11: -0,483 C Roztok č. 12: -0,531 C Metodika Podle výše uvedené metodiky dva roztoky NaCl byly duplicitně měřeny všemi účastníky. Statistickým x vyhodnocením těchto výsledků pomocí Z-score ( i x ) byly stanoveny pozice laboratoří v terči na hladině sx 95% pravděpodobnosti. Polohy účastníků jsou definovány pomocí kartézských souřadnic Z-score pro vzorky č. 11 a 12. Odůvodnění Tento postup byl zvolen jako doplňkový pro případnou eliminaci možných externích, špatně kontrolovatelných vlivů na nativní vzorky mléka zasílané souběžně pro výkonnostní test měření bodu mrznutí syrového mléka. podpis vedoucí akreditované Zkušební laboratoře Výzkumného ústavu pro chov skotu, s.r.o. Národní referenční laboratoře pro syrové mléko mléčné laboratoře ústavu pro chov skotu, s.r.o. vedoucí mléčné laboratoře Výzkumného ústavu pro chov skotu, s.r.o. V Rapotíně: xx. xx. rok

11 Tab. 1 Hodnoty jednotlivých přístrojů č.v. BMM a BMM b BMM BMM a BMM b BMM BMM a BMM b BMM 1-0,5286-0,5275-0,5281-0,5292-0,5317-0,5305-0,5278-0,5285-0, ,5264-0,5270-0,5267 * -0,5300-0,5299-0,5300-0,5296-0,5298-0, ,5289-0,5315-0,5302-0,5349-0,5341-0,5345-0,5304-0,5303-0, ,5120-0,5113-0,5117 * -0,5141-0,5137-0,5139-0,5134-0,5132-0, ,5110-0,5111-0,5111 * -0,5145-0,5140-0,5143-0,5130-0,5132-0, ,5278-0,5260-0,5269 * -0,5283-0,5298-0,5291-0,5292-0,5289-0, ,5277-0,5280-0,5279 * -0,5324-0,5329-0,5327-0,5309-0,5309-0, ,5047-0,5040-0,5044 * -0,5115-0,5115-0,5115-0,5075-0,5082-0, ,5281-0,5268-0,5275 * -0,5311-0,5301-0,5306-0,5290-0,5290-0, ,5262-0,5262-0,5262 * -0,5296-0,5317-0,5307-0,5297-0,5293-0,5295 Základní statistika n x -0,5221-0,5258-0,5241 sx 0,0088 0,0084 0,0084 vx -1,6855-1,5976-1,6027 min -0,5302-0,5345-0,5309 max -0,5044-0,5115-0,5079 Rmax-min 0,0258 0,0230 0,0230 Statistika rozdílů od referenčních hodnot n d 0,0017-0,0020 0,0004 sd 0,0008 0,0016 0,0008 min 0,0001-0,0048-0,0016 max 0,0026 0,0004 0, Ref. hod. č.v. BMM a BMM b BMM BMM a BMM b BMM BMM a BMM b BMM 1-0,5267-0,5271-0,5269-0,5280-0,5300-0,5290-0,5290-0,5300-0,5295-0, ,5292-0,5289-0,5291-0,5280-0,5310-0,5295-0,5270-0,5290-0,5280-0, ,5293-0,5291-0,5292-0,5290-0,5310-0,5300-0,5280-0,5270-0,5275-0, ,5128-0,5129-0,5129-0,5190-0,5150-0,5170-0,5180-0,5160-0,5170-0, ,5114-0,5113-0,5114-0,5110-0,5120-0,5115-0,5130-0,5110-0,5120-0, ,5281-0,5277-0,5279-0,5310-0,5320-0,5315-0,5300-0,5320-0,5310-0, ,5287-0,5293-0,5290-0,5310-0,5290-0,5300-0,5290-0,5300-0,5295-0, ,5069-0,5047-0,5058-0,5050-0,5060-0,5055-0,5050-0,5050-0,5050-0, ,5300-0,5300-0,5300-0,5290-0,5310-0,5300-0,5270-0,5290-0,5280-0, ,5288-0,5274-0,5281-0,5270-0,5260-0,5265-0,5280-0,5250-0,5265-0,5279 Základní statistika n x -0,5230-0,5241-0,5234-0,5237 sx 0,0087 0,0088 0,0084 0,0085 vx -1,6635-1,6791-1,6049-1,6231 min -0,5300-0,5315-0,5310-0,5303 max -0,5058-0,5055-0,5050-0,5067 Rmax-min 0,0242 0,0260 0,0260 0,0236 Statistika rozdílů od referenčních hodnot n d 0,0007 0,0003 0,0003 sd 0,0008 0,0013 0,0016 min -0,0008-0,0027-0,0027 max 0,0018 0,0014 0,0028 Vysvětlivky: BMM a a BMM b = hodnoty změřené jednotlivými přístroji v C (absolutní hodnoty); BMM = jejich průměrná hodnota; n = počet vzorků; x = aritmetický průměr; sx = směrodatná odchylka; vx = variační koeficient v %; min. = minimum; max. = maximum; Rmax-min = rozdíl mezi nejvyšší a nejnižší hodnotou; d = průměrná diference; sd = směrodatná odchylka; Ref.hod. = Referenční hodnoty jsou získané průměrem výsledků naměřených jednotlivými přístroji s vyloučením hodnot odlehlých; Hodnoty označené * nevyhověly Grubbsově testu odlehlosti a byly vyloučeny z výpočtu referenčních hodnot

12 Tab. 2 Opakovatelnost jednotlivých přístrojů sr w % 88 0, , , , , , , , , , , ,0496 průměr 0, ,1706 Vysvětlivky k symbolům: sr = směrodatná odchylka opakovatelnosti; w = variační koeficient opakovatelnosti; Tab. 3 Variabilita diferencí přístrojů od referenčních hodnot pro měřené složky (reprodukovatelnost a správnost). Referenční hodnoty vlastního testu stanovené po Grubbsově testu odlehlosti. BMM; diference LAB.-REF. d sd RE t význ 83-0, , ,0009 1,46 ns 84 0, , ,0011 2,77 * 88-0, , ,0013 0,77 ns 89 0, , ,0016 0,68 ns 81 0, , ,0018 6,77 *** 82-0, , ,0026 4,03 ** Ν diskriminační limit úspěšnosti účastníků (90 %) D 0,0009 0,0011 sd 0,0011 0,0004 Vysvětlivky k symbolům: d = průměrná diference; sd = směrodatná odchylka průměrné diference; RE = Euklidická vzdálenost od počátku = syntetický ukazatel; t = testovací kritérium; význ. = statistická významnost; ns = p > 0,05; * = p < 0,05; ** = p < 0,01; *** = p < 0,001; D = průměr absolutních hodnot diferenčních parametrů laboratoří; sd = směrodatná odchylka průměru diferenčních parametrů laboratoří; Obr. 1 Pozice přístrojů pro měřené složky vzhledem k imaginárnímu středu a cílovým oblastem. BMM 0, ,00200 sd 0, , , , , , , , , , , , , , ,00250 d Linie vycházející z centra grafu predstavují statistickou významnost na hladine 5 % (Student) "Půlkruh" znázorňuje 90%ní interval spolehlivosti, resp. diskriminační tlak, pro r = 0,00204

13 Tab. 4 Srovnání konkrétních hodnot BMM účastníků výkonnostního testu na dvou vodných vzorcích NaCl. Očekávaná hodnota Laboratoře průměr vodného roztoku laboratoří Vz. 11-0,4830-0,4851-0,4842-0,4844-0,4842-0,4840-0,4830-0,4841 Vz. 12-0,5310-0,5334-0,5326-0,5324-0,5330-0,5315-0,5310-0,5323 Tab. 5 Hodnoty Z-score u mezilaboratorního testu měření BMM v solných roztocích Vzorek č. 11-1,5653-0,0270-0,3508-0,1080 0,2159 1,8352 Vzorek č. 12-1,3203-0,2923-0,1109-0,8365 0,9776 1,5823 Obr. 2 Grafické zobrazení Z-score dvouvzorkového systému výkonnostního testu analytické způsobilosti měření BMM ve vodných standardních roztocích NaCl. 3,0000 2, , , ,0000-2, ,0000-3,0000-2,0000-1,0000 0,0000 1,0000 2,0000 3,0000 Vyhodnocení provedeno v měsíci roce. Zpracoval: jména

14 VÝZKUMNÝ ÚSTAV PRO CHOV SKOTU, s. r. o. Rapotín, Výzkumníků 267, Vikýřovice Vyhodnocení x. kruhového testu stanovení koncentrace močoviny v mléce v analytických laboratořích ČR 1) Struktura provedení testu kvality analytické práce: Deset vzorků mléka v testu bylo upraveno z hlediska hledaného analytu do koncentrační škály vzájemnou kombinací nativních obsahů močoviny a také pomocí artificiálních manipulací. Mléko bylo rozpipetováno (20 ml na vzorek), konzervováno čistým bronopolem (bílá barva, 0,03 %), zchlazeno (< 10 C) a distribuováno vlakem v izolačních termoboxech do laboratoří. V laboratořích byly vzorky zahřáty, rehomogenizovány a duplicitně proměřeny na obsah močoviny na přístrojích Ureakvant (ureolytickokonduktometrická metoda) nebo dalších relevantních metodách dle příslušných standardních operačních postupů. Kvalita vzorků nebyla zpochybněna. Získané výsledky byly ve VÚCHS Rapotín statisticky vyhodnoceny (viz. přiložená zpráva). 2) Hodnocení kruhového testu: Opakovatelnost měření byla stanovena jako variabilita rozdílů duplicitních měření jednotlivých vzorků uvnitř laboratoří. Výsledky referenčních hodnot byly stanoveny pro jednotlivé vzorky jako aritmetické průměry vzorků z měření všech laboratoří po Grubbsově testu odlehlosti (0,05 %). Byly vypočteny průměrné odchylky a variability odchylek laboratoří od referenčních hodnot a Euklidické vzdálenosti laboratoří od středu. V tabulkách a zobrazeních může nalézt každá laboratoř svou pozici z hlediska opakovatelnosti a správnosti měřených výsledků. Odhadnutý diskriminační limit (interval spolehlivosti 95 %) z hlediska opakovatelnosti měření činí >2,80 %. U těchto hodnot je třeba případně překontrolovat postupy. Při celkovém pohledu, rozdíly ve správnosti jsou pro laboratoře relativně větší, celkový rozptyl souboru byl oproti minulému testu mírně zvětšen, což je do určité míry varující zjištění. Vzhledem k většímu rozptylu většina laboratoří splnila obecný konvenční diskriminační limit pro dosažení pozice v 95 %ním konfidenčním intervalu (při diskriminačním dlouhodobém tlaku testu cca 90 %). Tabulkové a grafické diskriminační limity úspěšnosti účasti v testu byly derivovány následujícím způsobem: - půlkruh: 1) pro průměrnou diferenci (d) jako 1,96 násobek hodnoty směrodatné odchylky d souboru, tzn. na konvenční hladině 95 % intervalu spolehlivosti; 2) pro směrodatnou odchylku průměrné diference (sd) metodou robustního odhadu jako součet mediánu sd souboru a 1,65 násobku standardizovaného kvartilového odhadu směrodatné odchylky, tzn. na konvenční hladině 95 %; 3) kombinací obou předchozích (d a sd) limitů na bázi průměrování vznikl limit (půlkruh v grafu) s dlouhodobým diskriminačním tlakem přibližně 90 %; - čtyřúhelník: 4) pro d jako hodnota jedné směrodatné odchylky d souboru; 5) pro sd jako součet průměru sd souboru a jeho směrodatné odchylky. Výskyt účastníka testu v čtyřúhelníkovém poli, pokud spadá do půlkruhu, značí výborný výsledek a v půlkruhovém poli uspokojivý výsledek. Každá laboratoř může nalézt výsledné pozice hodnoty způsobilosti svých přístrojových měření na základě číselného identifikačního kódu v rámci anonymního klíče. 3) Důležité upozornění Materiály s výsledky kruhových testů obecně, včetně tohoto, jsou velmi diskrétní povahy, určené výhradně odbornému vedení dané zkušební laboratoře, nikoliv hospodářskému vedení, popřípadě dalším osobám (viz. příručka kvality akreditovaných laboratoří a její přílohy, prohlášení o nezávislosti). Uvedené dokládá i použití anonymního kódovacího klíče, jak patrno, kdy i naše pracoviště setrvává v diskrétnosti. Materiály mají posloužit výhradně korekturám v rámci QA/QC (quality assurance/quality control, tzn. zajištění a řízení kvality) systému zkušební laboratoře, tzn. svému jedinému a původnímu účelu. Striktní anonymita a diskrétnost jsou základními podmínkami korektního provedení jakéhokoliv výkonnostního mezilaboratorního testu. Dbejte prosím důsledně tohoto upozornění, aby provádění testu mohlo být účelné a účinné a nestalo se zdrojem nežádoucích nepříjemností pro Vaše i naše pracoviště. Test není pranýřem, ale prostředkem postupného zlepšování kvality. Bohužel, každý test ve svém vyhodnocení musí provést určité seřazení od prvního po poslední. Zvláště druhá varianta nemusí být příjemná, může však potkat postupně kohokoliv. I tak nemusí být poslední výsledky špatné, je však pravděpodobné, že jsou horší v rámci možného a budou vyžadovat korektury. Proto je výsledky testu nutno interpretovat profesionálně a střízlivě. podpis vedoucí akreditované Zkušební laboratoře Výzkumného ústavu pro chov skotu, s.r.o. Národní referenční laboratoře pro syrové mléko mléčné laboratoře ústavu pro chov skotu, s.r.o. vedoucí mléčné laboratoře Výzkumného ústavu pro chov skotu, s.r.o. V Rapotíně: xx. xx. rok

15 Tab. 1 Hodnoty jednotlivých přístrojů č.v. M a M b M M a M b M M a M b M 1 27,2 27,2 27,2 26,1 26,2 26,2 26,1 26,1 2 20,8 20,3 20,6 20,9 20,3 20,6 18,5 18,5 3 29,7 29,7 29,7 29,8 29,9 29,9 29,0 29,0 4 23,9 24,0 24,0 23,8 24,0 23,9 26,5 26,5 5 25,5 26,0 25,8 25,7 25,5 25,6 25,0 25,0 6 29,4 30,9 30,2 30,1 29,8 30,0 28,6 28,6 7 37,5 37,6 37,6 35,5 35,7 35,6 36,7 36,7 8 46,5 45,8 46,2 43,6 43,5 43,6 45,6 45,6 9 38,7 38,9 38,8 37,6 37,8 37,7 34,8 34, ,7 71,3 71,0 67,1 66,7 66,9 66,2 66,2 Základní statistika n x 35,11 34,00 33,70 sx 14,03 12,79 12,93 vx 39,96 37,62 38,37 min 20,6 20,6 18,5 max 71,0 66,9 66,2 Rmax-min 50,4 46,3 47,7 Statistika rozdílů od referenčních hodnot n d 0,920-0,190-0,490 sd 1,321 0,563 1,192 min -0,80-0,90-2,40 max 4,10 0,80 1, Ref. hod. č.v. M a M b M M a M b M 1 22,90 25,50 24,2 31,4 31,9 31,7 27,1 2 19,10 20,00 19,6 25,1 25,3 25,2 19,8 3 25,70 26,00 25,9 34,6 34,8 34,7 29,8 4 20,40 21,80 21,1 28,2 28,4 28,3 24,8 5 22,30 22,10 22,2 29,8 29,5 29,7 25,7 6 26,80 25,80 26,3 34,5 34,8 34,7 30,0 7 30,10 29,80 30,0 40,8 40,9 40,9 36,2 8 37,40 36,30 36,9 49,7 49,7 49,7 44,4 9 32,40 31,70 32,1 42,7 42,5 42,6 37, ,50 55,90 54,7 75,3 75,7 75,5 66,9 Základní statistika n x 29,30 39,30 34,19 sx 9,85 13,94 12,81 vx 33,62 35,47 37,47 min 19,6 25,2 19,8 max 54,7 75,5 66,9 Rmax-min 35,1 50,3 47,1 Statistika rozdílů od referenčních hodnot n d -4,890 5,110 sd 3,061 1,298 min -12,20 3,50 max -0,20 8,60 Vysvětlivky: Ma a M b = hodnoty změřené jednotlivými přístroji v mg/dl; M = jejich průměrná hodnota; n = počet vzorků; x = aritmetický průměr; sx = směrodatná odchylka; vx = variační koeficient v %; min. = minimum; max. = maximum; Rmax-min = rozdíl mezi nejvyšší a nejnižší hodnotou; d = průměrná diference; sd = směrodatná odchylka; Ref. hod. = Referenční hodnoty jsou získané průměrem výsledků naměřených jednotlivými přístroji s vyloučením hodnot odlehlých; Hodnoty označené * nevyhověly Grubbsově testu odlehlosti a byly vyloučeny z výpočtu referenčních hodnot

16 Tab. 2 Opakovatelnost jednotlivých přístrojů sr w mg/dl % ,1949 0, ,2000 0, ,4278 1, ,9542 3, průměr 0,6910 2,24 Vysvětlivky k symbolům: sr = směrodatná odchylka opakovatelnosti; w = variační koeficient opakovatelnosti; Tab. 3 Variabilita diferencí přístrojů od referenčních hodnot pro měřené složky (reprodukovatelnost a správnost). Referenční hodnoty vlastního testu stanovené po Grubbsově testu odlehlosti. Mo; diference LAB.-REF. mg/dl d sd RE t význ 224-0,190 0,563 0,5942 1,07 ns 229-0,490 1,192 1,2888 1,30 ns 222 0,920 1,321 1,6098 2,20 ns ,110 1,298 5, ,45 *** Ν 226-4,890 3,061 5,7690 5,05 *** Ν diskriminační limit úspěšnosti účastníků (90 %) D 2,3200 1,4870 sd 3,1970 0,8345 Vysvětlivky k symbolům: d = průměrná diference; sd = směrodatná odchylka průměrné diference; RE = Euklidická vzdálenost od počátku = syntetický ukazatel; t = testovací kritérium; význ. = statistická významnost; ns = p > 0,05; * = p < 0,05; ** = p < 0,01; *** = p < 0,001; D = průměr absolutních hodnot diferenčních parametrů laboratoří; sd = směrodatná odchylka průměru diferenčních parametrů laboratoří; Tab. 4 Výtěžnost (recovery, v %) měření uměle přidané močoviny do mléka. a b c d % d % d % 222 1,40 86,0 1,80 91,0-3,40 111, ,00 80,0 2,90 85,5-1,30 104, ,10 89,0 3,70 81,5 0,50 98, ,10 69,0 7,50 62,5 5,30 82, ,20 88,0 2,60 87,0-4,60 115,3 Vysvětlivky k symbolům: d = rozdíl hodnot očekávaná - změřená v mg/100 ml

17 Obr. 1 Pozice přístrojů pro měřené složky vzhledem k imaginárnímu středu a cílovým oblastem. s d M očov in a 4,500 4,000 3,500 3,000 2,500 2,000 1,500 1,000 0,500 0,000-6,000-4,000-2,000 0,000 2,000 4,000 6,000 d Linie vy ch áz ející z cent ra grafu p reds t avu jí s t at is t icko u vý z nam n os t n a hlad ine 5 % (St u den t ) "Půlkruh" znázorňuje 90%ní interval spolehlivosti, resp. diskriminační tlak, pro r = 3,861 Obr. 2 Recovery artificiálně přidané močoviny do mléka pro zvýšení a dosažení hodnověrného oboru hodnot pro 10 (a), 20 (b) a 30 (c) mg/100 ml a) Přídavek 10 mg/100ml 100,0 Recovery (%) 75,0 50,0 25,0 0, b) Přídavek 20 mg/100ml 100,0 Recovery (%) 75,0 50,0 25,0 0, c) Přídavek 30 mg/100ml 125,0 100,0 Recovery (%) 75,0 50,0 25,0 0,

18 Předání uplatněné metodiky Principy a postupy výkonnostního testování analytické způsobilosti měření chemického složení v mléčných laboratořích vyvinutá uplatněná metodika byla předána do užívání rutinních mlékařských laboratoří ČMSCH a.s. Praha, LRM Buštěhrad a LRM Brno-Tuřany v elektronické i písemné formě Kontrola uplatnění metodiky: kontrola aplikace uplatněné metodiky je proveditelná prostřednictvím revize dokladů a dokumentů o pravidelně prováděných pracovních postupech na referenčním pracovišti NRL-SM (Rapotín) a v rutinních mléčných laboratořích LRM (Buštěhrad a Brno-Tuřany) a rovněž na ústředním pracovišti klienta ČMSCH a.s. Praha na pracovišti Hradištko pod Medníkem. Přílohy, dokumenty a doklady: technická řešení a postupy této uplatněné metodiky byly zčásti převzaty z vědecké a odborné literatury a zejména podpořeny výsledky vlastního výzkumu, vývoje a empirických poznatků, které byly postupně publikovány a jako dokladové materiály mohou tvořit přílohu tohoto metodického materiálu. Datum:... Za zhotovitele: Doc. Dr. Ing. Oto Hanuš Výzkumný ústav pro chov skotu, s.r.o. Za uživatele: Prof. Ing. Jaroslav Pytloun, DrSc. Českomoravská společnost chovatelů, a.s., Praha Přílohy a seznam použitých podkladů: Normy zohledněné v sestavené uplatněné metodice: ČSN ISO ( ): Mléko definice a vyhodnocení celkové přesnosti nepřímých metod pro analýzu mléka Část 1: Analytické atributy nepřímých metod. (In Czech) Český normalizační institut, Praha, ČSN : Determination of freezing point in milk cryoscope method. (In Czech) Český normalizační institut, Praha, ČSN : Determination of milk composition by mid-infrared analyzer. (In Czech) Český normalizační institut, Praha, IDF Standard, International, Provisional 141A: 1990: International Dairy Federation, May 1991, 1-7. VĚSTNÍK Ministerstva zemědělství České republiky, 2003, částka 4, s. 17. Odborná literatura použitá při sestavení uplatněné metodiky: ARDÖ, Y.: Bronopol as a preservative in milk samples. Milchwissenschaft, 34, 1979, 1, ARNDT, G.- WEISS, H.- UBBEN, E. H.: Der Gehalt somatischer Zellen in der Rohmilch: Beiträge zu Messung, Interpretation und praktischer Bedeutung für Milchqualität und Mastitisbekämpfung. I. Statistische Verfahren zur Beurteilung der Datenqualität von Ringversuchsergebnissen, dargestellt am Beispiel der Zählung somatischer Zellen in Milch. Kieler Milchwirtschaftliche Forschungsberichte, 43, 1991, BARBANO, D. M.- LYNCH, J. M.- FLEMING, J. R.: Direct and indirect determination of true protein content of milk by Kjeldahl analysis: collaborative study. Journal of the AOAC, 1991,

19 BENDA, P.: Vliv některých konzervačních činidel na přirozenou mikroflóru vzorků mléka. The effect of some preservatives on natural microflora in milk samples. Vet. Med.-Czech, 40, 1995, 11, BIGGS, D. A.: Precision and accuracy of infrared milk analysis. Journal of the AOAC, 55, 1972, 3, BIGGS, D. A.: Instrumental infrared estimation of fat, protein, and lactose in milk: collaborative study. Journal of the AOAC, 61, 1978, 5, BIGGS, D. A.- SZIJARTO, L. F.- VOORT VAN DE, F. R.: Fresh milk sampling for centralized milk testing. J. Dairy Sci., 67, 1984, BROUTIN, P. J.: Use of highly accurate enzymatic method to evaluate the relationship between milk urea nitrogen and milk composition and yield on bulk and individual milk samples. 35th ICAR Session, Kuopio, Finland, 2006 b. BROUTIN, P. J.: Evaluation of an enzymatic method for the rapid and specific determination of urea in raw milk. Proceeding of 32nd ICAR Session, Bled 2000, Slovenia. BUCHBERGER, J- KIERMEIER, F.: Über die Eignung von Natriumazid zur Konservierung von Milchproben. Deutsche Molkerei-Zeitung (Kempten Allgäu), F 8, 1975, BUCHBERGER, J.- WEISS, G.- KIERMEIER, F.- PROBST, A.: Reproduzierbarkeit und Genauigkeit bei Fett-, Eiweiss- und Lactosebestimmung mit Hilfe der Infrarot-Spektrophotometrie (IRMA II-Gerät). Milchwissenschaft, 26, 1971, 11, BÜHLMANN, G.- AEBI, R.: Die Schweizer Bactoscan 8000S-Geräte im Spiegel der MS Standard Collaborative Study. AFEMA Tagung, Mosonmagyaróvár 2000, a. BÜHLMANN, G.- AEBI, R.: AFEMA-Keimzähl-Geräte im Hüfner Kontrollmilch Proficiency Test, Januar bis Mai AFEMA Tagung, Mosonmagyaróvár 2000, b. BÜHLMANN, G.- AEBI, R.: BactoScan-Geräte der AFEMA in der Hüfner Collaborative Study Erster Teil: Regelkarten Richtigkeit und Präzision. FAM-Bericht 98/2001, Liebefeld, BÜHLMANN, G.- AEBI, R.: BactoScan-8000-Keimzähl-Geräte QK-Labors MIBD Startroutinen FAM- Bericht 86/2002, Liebefeld, CIANA, L. D.- CAPUTO, G.: Robust, reliable biosensor for continuous monitoring of urea during dialysis. Clinical Chemistry, 1996, 47, 7, COLEMAN, D. A.- MOSS, B. R.: Effects of several factors on quantification of fat, protein, and somatic cells in milk. J. Dairy Sci., 72, 1989, COVENEY, L.: Milk testing proficiency scheme, Round 26 November Example laboratory, Savant Technologies, 2001, 12. FICNAR, J.: The analytical parameters of the automatic analyzer Ureakvant evaluating the urea content in a cow s milk. Validation of the method. RICB Rapotín, FUCHS, M.: Der AFEMA-Sterntest: ein Beitrag zur internationalen Harmonisierung der Rohmilchanalytik. XXVIII ÓVÁRI TUDOMÁNYOS NAPOK, Mosonmagyaróvár 2000, GOLC-TEGER, S.: Slovenia in the European network of dairy laboratories. V: 5 th International Symposium Animal Science Days, Opatija, September Animal science days, Agriculturae Conspectus Scientificus, 62, 1997, GOLC-TEGER, S.: Zagotavljanje kakovosti analiz v mlekarskih laboratorijih = Analytical quality assurance in dairy laboratories. V: 1. slovenski mednarodni kongres Mleko in mlečni izdelki, Portorož, Slovenija, September Zbornik Biotehniške fakultete Univerze v Ljubljani, 1996, GOLC-TEGER, S.- POGAČAR, J.- VALINGER, E.: The Slovenian dairy laboratories proficiency testing scheme. V: Analytical quality and economic efficiency in dairy food laboratories: abstracts. Sonthofen, International Dairy Federation (IDF), AOAC International, German Dairy Association, 1996, 3. GRAPPIN, R. Definition and evaluation of the overall accuracy of indirect methods of milk analysis - aplication to calibration procedure and quality control in dairy laboratory. Bulletin of the International Dairy Federation, Doc. 208, IDF Provisional Standard 128, 1987, GRAPPIN, R. European network of dairy laboratories. V: Proceedings of an International Analytical Quality Assurance and Good Laboratory Practice in Dairy Laboratories. Sonthofen / Germany, /20, Brussels 1993, GRAPPIN, R.- PACKARD, V. S.- GINN, R. E.: Repeatability and accuracy of Dye-binding and Infra-red methods for analyzing protein and other milk components. Journal of Food Protection, 43, 1980, 5, GUILBAULT, G. G.- MONTALVO, J. G.: An enzyme electrode for the substrate urea. J. Amer. Chem. Soc., 1970, 92, 8,

20 HEESCHEN, W. H.- UBBEN, E. H.- RATHJEN, G.: Somatic cell counting in milk: the use of the principle of flow cytometry for somatic cell counting (Somacount) and comparison with the results obtained with the fluorescent optical principle (Fossomatic 360). Kieler Milchwirtschaftlichen Forschungsberichte, May HERRE, A.: Den Harnstoff-Werten nicht blind vertrauen! Top Agrar, 2, 1998, R10. JENKINS, D. M.- DELWICHE, M. J.- BONDURANT, R. H.: Automated biosensor for measurement of milk-urea. Presentation at the 1998 ASAE Annual International Meeting. 1998, JENKINS, D. M.- DELWICHE, M. J.- DEPETERS, E. J.- BONDURANT, R. H.: Chemical assay of urea for automated sensing in milk. Work, unpublished results. 1997, KIRST, E.- TSCHÖP, J.- JAHN, D.- JACOBI, U.: Untersuchungen zur Harnstoff und Ammoniakbestimmung von Milch mittels kontinuierlicher Durchflussanalyse. Milchforsch. Milchpraxis, 27, 1985, KONCKI, R.- MOHR, G. J.- WOLFBEIS, O. S.: Enzyme biosensor for urea based on a novel ph bulk optode membrane. Biosensors and Bioelectronics, 1995, 10, KROGER, M.: Milk sample preservation. J. Dairy Sci., 68, 1985, KUPKA, K.: Statistické řízení jakosti. TriloByte. ISBN X, 1997, 119. KVAPILÍK, J.- SUCHÁNEK, B.: Vliv konzervace vzorků mléka na výsledky rozborů. Živočišná Výroba, 19, 1974, 1, LEFIER, D.: Comparison of the analytical characteristics of the enzymatic methods for urea determination in milk IDF Questionnaire-Report, Urea determination - selection of a reference method for the determination of the urea content of milk. 2099/E. LERAY, O.: CECALAIT: an organization to support analytical quality assurance in dairy laboratories. V: Proceedings of an International Analytical Quality Assurance and Good Laboratory Practice in Dairy Laboratories. Sonthofen / Germany, /20, Brussels, 1993, MICHALAK, W.: Porównanie oznaczeň zawartošci bialka w mleku wykonywanych przez Laboratoria Wojewodzkich Stacji Oceny Zwierzat. Biul. Inst. Gen. Hodow. Zwierzat PAN, 27, MICHALAK, W.- CYNALEWSKA, H.- OCZKOWICZ, H.: Collaborative testing among laboratories routinely testing fat and protein milk. J. Dairy Sci., 61, 1978, NG-KWAI-HANG, K. F.- HAYES, J. F.: Effects of potassium dichromate and sample storage time on fat and protein by Milko-Scan and on protein and casein by a modified Pro-Milk Mk II method. J. Dairy Sci., 65, 1982, OLTNER, R.- BENGTSSON, S.- LARSON, K.: Flow injection analysis for the determination of urea in cows milk. Acta vet. scand., 26, 1985, PENCA-HABJAN, V.- GOLC-TEGER, S.: Determination of milk urea content in relation to freezing point of milk. 2. Slovenian Congress Milk and Dairy Products Portorož, 1999, PB-16, 61. PETTIPHER, G. L.- UBALDINA M. RODRIGUES: A bacteriostatic mixture for milk samples and its effect on bacteriological, cytological and chemical compositional analysis. Journal of Applied Bacteriology, 52, 1982, PITKÄLÄ, A.- GINDONIS, V.- WALLIN, H.- HONKANEN-BUZALSKI, T.: Interlaboratory proficiency testing as a tool for improving performance in laboratories diagnosing bovine mastitis. J. Dairy Sci., 88, 2005, 2, RAPP, M.- MÜNCH, S.: Neuentwicklung von flüssigen Konservierungsmitteln für Milchproben. Deutsche Molkerei-Zeitung, 105, 1984, RAJAMÄKI, S.- RAURAMAA, A.: The automated determination of urea in milk. Finn. Chem. Lett., 1984, RYCHEN, M.- BIGLER, A.: Die Qualität der Milchproben. Schweizer Fleckvieh, 2003, 5, SANSUBRINO, A.- MASCINI, M.: Development of an optical fibre sensor of ammonia, urea, urease and IgG. Biosensors and Bioelectronics, 1994, 9, SHEPPARD, N. F.- MEARS, D. J.- GUISEPPI-ELIE, A.: Model of an immobilized enzyme conductimetric urea biosensor. Biosensors and Bioelectronics, 1996, 11, 10, SHERBON, J. W.: Collaborative study of the Pro-Milk method for the determination of protein in milk. Journal of the AOAC, 58, 1975, 4, SUHREN, G.- WALTE, H. G.: Determination of precision data of the Bactoscan FC-method by an interlaboratory study. Kieler Milchwirtschaftliche Forschungsberichte, 53, 2001, SUNDARAM, P.V.: Immobilized - Enzyme Pipette. Biochem. J., 1979, 179, SZIJARTO, L. F.- HARDING, F.- HILL, A. R.- MELICHERCIK, J.: Cooling systems for transport of unpreserved milk samples. J. Dairy Sci., 73, 1990, THAVARUNGKUL, P.- HÄKANSON, H.- HOLST, O.- MATIASSON, B.: Continuous monitoring of urea in blood during dialysis. Biosensors and Bioelectronics, 1991,