TUBULIN-FOLDING COFACTOR A (TFC A) u Arabidopsis

Rozměr: px

Začít zobrazení ze stránky:

Download "TUBULIN-FOLDING COFACTOR A (TFC A) u Arabidopsis"

Olga Tomanová
před 4 lety
Počet zobrazení:

1 TUBULIN-FOLDING COFACTOR A (TFC A) u Arabidopsis

2 Mikrotubuly

5 Formace heterodimerů α/βtubulinu Translace α a β -tubulin monomerů chaperonin c-cpn správný folding α-tubulin se váže na TFC B a β na TFC A ty jsou posléze nahrazeny TFCs E a D vzniká kvartérní komplex TFCs E a D a α a β-tubulin monomerů po navázání TFC C heterodimer α/βtubulinu opouští komplex

6 Tento systém neslouží pouze pro skládání α/β-tubulinu, ale i pro kontrolu balance mezi α/β-tubulinem a α a β-tubulin monomery! Např. u kvasinek se ukázalo, že vyšší konc. β-tubulinu je lethální

7 TFC A Overexprese β-tubulinu může být v kvasinkách vyvážena overexpresí TFC A Ukázalo se, že TFC A není in vitro potřeba k balení proteinu a u kvasinek není esenciální podílí se na regulaci balance mezi monomery tubulinu.

8 Důležité funkce mikrotubulů u rostlin - Separace chromosomu -Buněčné dělení -Určení buň. polarity

9 Článek : The Arabidopsis TUBULIN- FOLDING COFACTOR A Gene Is Involved in the Control of the α/βtubulin Monomer Balance -ukazuje na důležitost TFC A u roslin v kontrole balance mezi α a β-tubulin monomery

10 Pokusy

Morfogenetické defekty kis-t1 mutanta (Arabidopsis) - Ukázalo se, že Kiesel (KIS) je gen kódující TFC A u Arabidopsis - Recesivní silný mutant v tomto genu je lethální (na

11 Morfogenetické defekty kis-t1 mutanta (Arabidopsis) - Ukázalo se, že Kiesel (KIS) je gen kódující TFC A u Arabidopsis - Recesivní silný mutant v tomto genu je lethální (na rozdíl od kvasinek) - Heterozygot nevykazuje žádné rozdíly Recesivní slabý mutant v tomto genu vykazuje ve fenotypu: menší rostlina, zduřelé, krátké a méně nebo vůbec větvené trichomy

12 Dvojití mutanti prokázali, že TFC A se neúčastí přímo regulace větvení trichomů a není závislý na aktinu

13 Na kořenech u kis-t1 nejsou patrné změny, ale když rostliny rostou ve tmě a hypocotyl rapidně roste pak oproti wild-typu krátký (D), vyboulený (E) ztratil polaritu růstu

14 Hlavně u listů kis-t1 mutanta je vidět problém s buněčným a jaderným dělením buňky jsou velké (D) a mají víc jader (F)

15 kis-t1 mutanti jsou sterilní

16 Ukázalo se, že u kis-t1 mutant T-DNA je lokalizovaná v promotorové oblasti

17 Ukázalo se, že u kis- T1 mutanta zfúzoval gen pro TFC A s dalším transkriptem BAR a je pod regulací 35S-promotor řídícím BAR exprese i velikost transkriptu byla větší než u Wt

podobné savčímu TFC A a asi 28% identity a 45% podobnosti s

18 KIS je transkribován ve všech částech rostliny (L=list, R=kořen, F=květ, S=stonek) KIS má 39% sekvence identické a 52% podobné savčímu TFC A a asi 28% identity a 45% podobnosti s kvasinkovým TFC A. Žádný jiný gen arabidopsis v databázích není tak podobný.

19 Po vnesení myšího genu pro TFC A do kis-t1 mutanta pod regulací 35S promotoru viru květákové mozaiky je mutant (4) nerozeznatelný od Wt (1)

20 Overexprese α-tubulinu pod kontrolou 35S promotoru v kis-t1 mutantu také zapříčiní potlačení fenotypu mutanta, pouze větvení trichomu není úplně jako u Wt

Pomocí fluorescenčního značení mikrotubulů (35S::MAP4 GFP) se ukázalo, že TFC A nehraje roli ani v koncentraci tubulinu (trichomy A,B) ani v stabilitě mikrotubulů,

21 Pomocí fluorescenčního značení mikrotubulů (35S::MAP4 GFP) se ukázalo, že TFC A nehraje roli ani v koncentraci tubulinu (trichomy A,B) ani v stabilitě mikrotubulů, protože stabilizace mikrotubulů taxolem není efektivní, ale mikrotubuly jsou špatně orientovány, protože je porušen poměr mezi monomery α a β a tím je inhibována přestavba.

22 V hypokotylu jsou mikrotubuly špatně orientovány u ve tmě rostoucích rostlin

23 Výsledek TFC A u rostlin je esenciální v udržování balance mezi monomery α a β-tubulinu je to jakýsi reservoár β-tubulinu. Má sice téměř stejnou funkci jako u kvasinek, ale i několik důležitých odlišností. Mutant v genu pro TFC A (kis-t1) má porušenou stavbu a dynamiku mikrotubulů a tím je poznamenáno buněčné a jaderné dělení a buněčná polarita.

Podobné dokumenty

Růst a vývoj rostlin - praktikum MB130C78

Růst a vývoj rostlin - praktikum MB130C78 Blok 3 Role aktinového cytoskeletu v morfogenezi rostlinných buněk - analýza fenotypu Úlohy: 1. Kvantifikace počtu zkroucených a správně tvarovaných trichomů u