chsp60-igg-elisa medac Český 435-VPCZ/010512

Transkript

1 chsp60-igg-elisa medac Český VPCZ/010512

2 VÝROBCE medac Gesellschaft für klinische Spezialpräparate mbh Fehlandtstrasse 3 D Hamburg Tel.: Fax: MARKETING medac Gesellschaft für klinische Spezialpräparate mbh Geschäftseinheit Diagnostika Theaterstrasse 6 D Wedel Tel.: Fax: DISTRIBUCE/ADRESA PRO PŘÍJEM OBJEDNÁVEK: ASCO-MED s.r.o. Pod Cihelnou Praha 6 Telefon: ,79,80 Fax: Literatura: s VPCZ/010512

3 . chsp60-igg-elisa medac Rekombinantní enzymo-imunologický test na kvantitativní průkaz protilátek IgG proti chlamydiálnímu proteinu tepelného šoku 60 Katalogové číslo: 435 POUZE PRO DIAGNOSTIKU IN VITRO ÚVOD Proteiny tepelného šoku (HSP) jsou vysoce konzervované buňkové stresové proteiny, kterých aminokyselinový sestav se po dobu evoluce velmi nezměnil. Tyto proteiny se s vysokou homologií exprimují u prokaryontů a také u eukaryontů. Homologie u HSP mezi člověkem a myší činí 99,9 %, mezi člověkem a bakteriemi ca. 60 %, mezi člověkem a chlamydiemi ca. 50 % a mezi druhy chlamydií > 95 %. Nadčeleď proteinů tepelného šoku obsahuje různé čeledě, které se klasifikují na základě jejich molekulové váhy: HSP10, HSP25 (alpha B- crystallin), HSP27, HSP60, HSP70, HSP90 a HSP110. Jednotlivé druhy HSP lze rozdělit do dvou hlavních skupin: konstitutivní proteiny tepelného šoku (HSC) a indukované proteiny tepelného šoku (HSP). HSC se za určitých fyziologických podmínek vytvářejí permanentně a jsou vlastně intracelulárními strážci pořádku na molekulární úrovni. Jsou zodpovědné za správný průběh anabolizmu a katabolizmu. Buňka produkuje HSP jako okamžitou a silnou odpověď na různé fyzikální a chemické stresové stimuly (stresové proteiny), čímž reaguje na zvýšenou ochranou funkci buňky. Mikrobiální HSP představují dominantní antigeny a jsou u člověka extrémně imunogenní. V průběhu infekce syntéza mikrobiálních HSP (mhsp) silně vzrůstá, aby se takým způsobem mohla chránit před imunitními ochrannými mechanizmy hostitele. Přitom dominuje exprese mhsp60. Imunita vytvořená po primární infekci se obyčejně ohraničuje na specifické epitopy mikrobů molekuly mhsp60. Chlamydiální HSP60 (chsp60) je jedním z mhsp60, který se nejintenzivněji sleduje. Nepoznané nebo nedostatečně léčené mikrobiální infekce můžou vést k chronické perzistenci agens. V tomto stadiu se chsp60 preexprimuje, t.z. že humánní imunitní systém se musí permanentně s vyrovnávat s tímto cizím proteinem. Dostávají se do pohybu buněční a humorální imunitní odezvy. Dále se začíná preexprimovat humánní HSP60 (hhsp60), aby se tím ochránily humánní buňky od chlamydiálních ofenziv. Protilátky proti konzervativním 435-VPCZ/

4 částím chsp60 můžou křížově reagovat s konzervativními regiony hhsp60, co vede v konečném důsledku k autoimunitním reakcím. Imunitu proti konzervativním epitopům chsp60 a paralelně existující křížovou imunitu proti hhsp60 a v důsledku toho vzniklou možnou autoimunitu nelze poznat bez cíleného standardizovaného průkazu. Mnohé pozdní následky chlamydiálních infekcí se dávají do souvislosti s autoimunitními reakcemi indukovanými chsp60, např. narušení průběhu těhotenství, předčasné porodní bolesti, opakované a spontánní aborty, mimoděložní těhotenství, neplodnost v důsledku neprůchodnosti vejcovodů (TFI) a neúspěšné oplození in vitro (IVF). O jiných autoimunitních onemocněních, jako reaktivní artritidě, některých formách astmatu nebo arterioskleróze a koronární onemocnění srdce jako možných autoimunitních onemocnění v důsledku senzibilizujících procesů vůči HSP60, se diskutuje částečně kontroverzně. Různé výsledky bádání lze zdůvodnit tím, že byli použity nestandardizované testy in house, které nelze mezi sebou porovnat. Proto se vyžaduje standardizovaný, reprodukovatelný objektivní test, který by umožnil na základě porovnatelných výsledků jednoznačné závěry pro jednotlivé incidence. Test chsp60-igg-elisa medac používá jako antigen rekombinantní protein tepelného šoku 60 (chsp60) z Chlamydia trachomatis. Tento test je vhodný na průkaz protilátek IgG proti chsp60 z C. trachomatis. I když je homologie mezi druhy chlamydií na úrovni proteinů velmi vysoká (95 %), tento test zachytává převážně protilátky proti HSP60 Chlamydia trachomatis. Test chsp60-igg-elisa medac lze použít pro diagnostiku statusu vejcovodů před oplozením in vitro. V kombinaci se sérologií MOMP pomocí testu Chlamydia trachomatis medac se stává tento test doplňujícím márkrem pro průkaz poškození vejcovodů v důsledku infekce Chlamydia trachomatis. 435-VPCZ/

5 PRINCIP TESTU Mikrotitrační destička je pokryta rekombinantním proteinem tepelného šoku (HSP60) z Chlamydia trachomatis. Protilátky proti chsp60 ze séra pacienta se vážou na antigen. Peroxidázou konjugované protihumánní protilátky IgG se vážou na protilátky IgG(P = peroxidáza). Inkubace se substrátem TMB (*). Reakce se zastaví přidáním kyseliny sírové. Absorpce se odečte fotometricky. Výhody testu Rekombinantní antigen chsp60. Lámací proužky umožňují optimální využití testu. Test lze automatizovat na otevřených systémech ELISA. 435-VPCZ/

6 OBSAH SOUPRAVY Katalogové číslo: MTP Mikrotitrační destička: 12 testovacích proužků po 8 jamkách, (označena jako HSP, s držícím rámem a lepenkovým desikantem v hliníkovém vakuovém balení), lámací, dno tvaru písmene U, pokryté rekombinantním proteinem tepelného šoku 60 z Chlamydia trachomatis a FKS, připravena k použití. 2. CONTROL - Negativní kontrola: 1 lahvička s obsahem 1,5 ml, lidské sérum, připravena k použití, zbarvená modře, obsahuje NBCS, fenol, ProClin 300 a gentamycin sulfát. 3. CONTROL + Pozitivní kontrola: 1 lahvička s obsahem 1,5 ml, lidské sérum, připravena k použití, zbarvená modře, obsahuje BSA, fenol, ProClin 300 a gentamycin sulfát. 4. WB Promývací roztok: 1 láhev s obsahem 100 ml, PBS/Tween (10x), ph 7,2-7,4, obsahuje ProClin BAC-DIL Roztok na ředění vzorků: 1 láhev s obsahem 110 ml, PBS/Tween/NBCS, ph 7,2-7,4, připraven k použití, zbarvený modře, obsahuje, ProClin CON Konjugát: 3 lahvičky s obsahem každá po 4,5 ml, kozí protihumánní protilátky IgG, konjugovaný HRP, připraven k použití, zbarvený zeleně, obsahuje BSA, fenol, ProClin 300 a gentamycin sulfát. 7. TMB Substrát TMB: 1 lahvička s obsahem 10 ml, připraven k použití. 8. STOP Roztok na zastavení reakce: 2 lahvičky s obsahem každá po 11 ml, 0,5 M kyselina sírová (H 2 SO 4 ), připravena k použití. 435-VPCZ/

7 1. SKLADOVÁNÍ A STABILITA MATERIÁL/REAGENCIE STAV SKLADOVÁNÍ STABILITA Zkušební souprava neotevřená C do uplynutí data použitelnosti C v sáčku Mikrotitrační destička otevřená 12 týdnů s desikantem Kontroly otevřené C 12 týdnů Promývací roztok ředěný C 12 týdnů Roztok na ředění 12 týdnů vzorků otevřen C Konjugát otevřen C 12 týdnů Substrát TMB otevřen C 12 týdnů Roztok na zastavení reakce otevřen C do uplynutí data použitelnosti Reagencie nepoužívejte po uplynutí data jejich použitelnosti. 2. DALŠÍ POŽADOVANÉ REAGENCIE A MATERIÁLY, KTERÉ NEJSOU SOUČÁSTÍ SOUPRAVY 2.1. Aqua ad iniectabilia (bidest. H 2 O). Použití pouze deionizované, vody může negativně ovlivnit průběh testu Mikropipety s potřebnými objemy Čisté skleněné nádoby nebo nádoby z umělé hmoty na ředění promývacího roztoku a vzorků Vhodné zařízení na promývání mikrotitračních destiček (např. multikanálové pipety nebo promývačka na testy ELISA) Inkubátor na teplotu 37 C Fotometr na mikrotitrační destičky s filtry na 450 nm a nm. 3. PŘÍPRAVA REAGENCIÍ Před zahájením testu vytemperujte všechny komponenty testu na pokojovou teplotu. Stanovte požadovaný počet mikrotitračních jamek Mikrotitrační destička Po každém vyjmutí proužků vložte mikrotitrační destičku spolu s lepenkovým desikantem znovu do hliníkového sáčku a dokonale ho uzavřete. Skladování a životnost nepoužitých mikrotitračních jamek je uvedena pod bodem VPCZ/

8 3.2. Promývací roztok Smíchejte jednu objemovou část koncentrátu promývacího roztoku (10x) s devíti částmi Aqua ad iniectabilia (např. 50 ml promývacího roztoku (10x) se 450 ml Aqua ad iniectabilia). Na 8 jamek budete potřebovat 10 ml promývacího roztoku. Krystaly v promývacím roztoku (10x) se musí před použitím rozpustit zahřáním (max. na 37 C) a/nebo promícháním při pokojové teplotě. Reagencie specifické pro test (mikrotitrační destička, kontroly a konjugát) nezaměňujte s reagenciemi jiných šarží. Oproti tomu se roztok na ředění vzorků, promývací roztok, substát TMB a roztok na zastavení reakce u všech testů ELISA firmy medac na chlamydie und mykoplazmata mohou zásadně zaměňovat. Reagencie jiných výrobců nelze v tomto testu zásadně použit. Validní a reprodukovatelné výsledky získáte pouze tehdy, pokud přesně dodržíte pracovní předpisy. 4. VZORKY 4.1. Test je vhodný pro vzorky séra. Vzorky pacientů uchovávejte maximálně 7 dní při teplotě 2 8 C. Delší uchovávaní se musí provádět při teplotě -20 C. Vzorky se nesmí opakovaně zamrazovat a odmrazovat 4.2. Před testem není nutno provádět žádnou úpravu séra, např. deaktivaci. Testované vzorky séra však nesmí být kontaminovány mikroorganizmy a nesmí obsahovat lidské erytrocyty Séra se musí zředit roztokem na ředění vzorků v poměru 1:50. 5.A. PRACOVNÝ POSTUP TESTU 5.1. Otevřete hliníkový sáček a vyberte požadovaný počet mikrotitračních jamek (viz 3.1.). Mikrotitrační jamky jsou připraveny k použití a nemusí se promývat Do jamky A1 napipetujte 50 µl roztoku na ředění vzorků pro stanovení pozadí (viz 6.A). Do jamek dále napipetujte dvakrát po 50 µl negativní kontroly, jednou pozitivní kontrolu (50 µl) a po jednou zředěné vzorky pacientů (50 µl). V případe potřeby je možné uchovávat destičku před dalším zpracováním maximálně po dobu 30 minut ve vlhké komoře při pokojové teplotě. 435-VPCZ/

9 5.3. Mikrotitrační destičku inkubujte 60 minut ( 5 minut) při teplotě 37 C ( 1 C) ve vlhké komoře nebo pod uzavřenou inkubační krycí fólií Po inkubaci promyjte každou mikrotitrační jamku třikrát 200 µl promývacího roztoku. Při promývání dbejte na to, aby se všechny jamky pořádně naplnily. Po promytí vyklepejte mikrotitrační jamky na filtračním papíru. Jamky nesmí vyschnout! S prácí pokračujte okamžitě! 5.5. Do všech jamek přidejte konjugát (zbarvený zeleně). Pokud provádíte test manuálně, musíte do každé jamky napipetovat 50 µl konjugátu. Poznámka: Při práci s automatickými zařízeními se musí do každé jamky napipetovat 60 µl konjugátu, protože v inkubačních komorách těchto zařízení dochází k intenzivnímu vypařování. V rámkách validace testu bylo zjištěno, že test je principiálně vhodný pro automatické zpracování. Přesto doporučujeme verifikovat kompatibilitu testu s používaným přístrojovým systémem Inkubujte znovu 60 minut ( 5 minut) při teplotě 37 C ( 1 C) ve vlhké komoře nebo pod uzavřenou inkubační krycí fólií Po inkubaci promyjte mikrotitrační jamky znovu(viz 5.4.) Do všech jamek napipetujte 50 µl roztoku substrátu TMB a inkubujte ve tmě 30 minut ( 2 minuty) při teplotě 37 C ( 1 C) ve vlhké komoře nebo pod uzavřenou inkubační krycí fólií. Pozitivní vzorky se zbarví modře Reakci zastavte přidáním do každé jamky 100 µl roztoku na zastavení reakce. Pozitivní vzorky se zbarví žlutě. Před fotometrickým měřením vyčistěte ze spodu mikrotitrační proužky a zkontrolujte, zda-li v jamkách nejsou žádné bublinky vzduchu. Měření je nutné provést během 15 minut po přidání roztoku na zastavení reakce! 435-VPCZ/

10 5.B. TABULKA ZNÁZORŇUJÍCÍ PRACOVNÝ POSTUP Pozadí Negativní Pozitivní Vzorek (jamka A1) kontrola kontrola Roztok na ředění 50 μl vzorků Negativní kontrola - 50 μl - - Pozitivní kontrola μl - Vzorek μl Inkubujte 60 minut při teplotě 37 C, 3x promyjte 200 μl promývacího roztoku. Konjugát 50/60 μl *) 50/60 μl *) 50/60 μl *) 50/60 μl *) Inkubujte 60 minut při teplotě 37 C, 3 x promyjte 200 μl promývacího roztoku. Substrát TMB 50 μl 50 μl 50 μl 50 μl Roztok na zastavení reakce Inkubujte 30 minut při teplotě 37 C ve tmě. 100 μl 100 μl 100 μl 100 μl Fotometrické odečtení hodnoty optické hustoty při 450 nm (ref. vln. délka nm). *) manuální/automatický postup (viz 5.5.) 6.A. HODNOCENÍ TESTU (VALIDITA) * Fotometrické vyhodnocení se provádí při vlnové délce 450 nm (referenční vlnová délka nm). * Od všech hodnot OD odečtěte OD pozadí (jamka A1). * OD pozadí musí být < 0,100. * Střední hodnota OD negativní kontroly musí být < 0,100. * Hodnota OD pozitivní kontroly musí být > 0,800. * Cut-off = střední hodnota OD negativní kontroly + 0,350 * Šedá zóna = Cut-off 10 %. Pokud kritéria validity nebyly splněny, musí se test opakovat znovu! 435-VPCZ/

11 6.B. HODNOCENÍ VÝSLEDKŮ 6.B.1. KVALITATIVNÍ Výsledek OD < šedá zóna OD cut-off ± 10 % OD > šedá zóna Hodnocení negativní hraniční pozitivní 6.B.2. SEMIKVANTITATIVNÍ Index cut-off: OD vzorku OD cut-off Hodnocení < 0,9 negativní 0,9 1,1 hraniční > 1,1 pozitivní 6.B.3. KVANTITATIVNÍ Konečný titr (= poslední pozitivní nebo hraniční ředění) každého vzorku lze vypočítat. Nejdřív se musí v každém případě vypočítat index cut-off. Index cut-off = OD vzorku Cut-off Poté lze vypočítat konečný titr dvěma způsoby: 1. 1 : Konečný titr = 55,5 x (OD/cut-off) Výsledek zaokrouhlete na nejbližší celou hodnotu stupně titru, t.z. na 1:50, 1:100, 1:200 atd. Tento výpočet platí pro hodnoty OD 2,0. Vzorky s hodnotami OD > 2,0 se musí vypočítat znovu při vyšším ředění (např. 1:400). Pokud se vycházelo z vyššího ředění než 1:50, musí se výsledek nahoru uvedeného vzorce vynásobit ředícím faktorem vyššího ředění. 435-VPCZ/

12 Příklad: Ředění séra bylo 1:400, t.z. 8-násobně vyšší. OD = 1,78 Cut-off = 0,42 1 : konečný titr = 55,5 x (1,78/0,42) x 8 = 1882 = 1: Titr zodpovídající indexu cut-off najdete také v následující tabulce. Index cut-off: IgG Výsledek Titr < 0,9 Negativní < 1: 50 0,9 1,10 Šedá zóna 1,11-1,80 Pozitivní 1: 50 1,81-3,60 Pozitivní 1: 100 3,61-7,20 pozitivní 1: 200 Tento výpočet platí pouze pro hodnoty 2,0; v jiném případě použijte příklad nahoru. * Vzorky s hodnotami v hraniční oblasti se musí zkontrolovat tím, že se pacientům odebere po 14 dnech nový vzorek, který se musí testovat spolu s prvním vzorkem na pohyb titru. * Výsledky testu se musí interpretovat vždycky v souvislosti s výsledky protilátek IgG a IgA proti C. trachomatis (pelisa medac), s klinickým obrazem pacienta a jinými diagnostickými parametry. * Vysoké hodnoty hemoglobinu, bilirubinu a lipidů v séru neovlivňují výsledky testu. * Křížové reakce s protilátkami proti jiným mikrobiálním HSP60 nelze vyloučit. 435-VPCZ/

13 6.C. SPECIFICKÁ INTERPRETACE Možné výsledky pelisa chsp60 Interpretace IgG IgA IgG Vysoká pravděpodobnost TFI indukované C. trachomatis Příznak infekce C. trachomatis Příznak proběhlé infekce C. trachomatis. Žádný sérologický příznak infekce C. trachomatis; Možnost křížových reakcí s protilátkami proti HSP60 jiných baktérií. Žádný sérologický příznak infekce C. trachomatis. 7. CHARAKTERISTIKY TESTU V rámci validace jsme vypracovali následující charakteristiky testu. 7.A. PREVALENCE Pro různé skupiny dárců (zdraví a kolektivy pacientů) byly zjištěny následující prevalence protilátek proti chsp60-igg: Skupina dárců Prevalence chsp60-igg Dárci krve 14 % (n=100) Neplodné pacientky 59 % (n=73) Pacienti s revmatickými onemocněními 64 % (n=44) Pacienti s koronárními onemocněními srdce 18 % (n=44) 435-VPCZ/

14 7.B. KLINICKY-DIAGNOSTICKÉ HODNOCENÍ Výsledky mnohých studií dokazují, že sérologie chsp60 v kombinaci se specifickou sérologií MOMP C. trachomatis (pelisa medac) je doplňkovým márkrem pro spoznání poškození vejcovodů indukovaném Chlamydia trachomatis. 7.B.1. CITLIVOSTI A POZITIVNÍ PREDIKTIVNÍ HODNOTY (PPH) VE VZTAHU K NEPRŮCHODNOSTI VEJCOVODŮ Autoři: Den Hartog J et. al. (2003) Kolektivy: IVF-Pacientkyse (n=59) a bez (n=254) distální patologie vejcovodů (DTP) Pozitivní průkazy protilátek DTP pozitivní (n=59)) C. trachomatis- IgG 32/59 (54 %) chsp60-igg 30/59 (51 %) C. trach. a 28/59 chsp60-igg (47 %) Citlivost PPH 54 % 61 % 51 % 44 % 47 % 68 % Autoři: Clad et al. (2004) Kolektivy: IVF-pacientky s intaktními (n=102) a neprůchodnými Pozitivní průkazy protilátek vejcovody (n=24) C. trach. a chsp60-igg TFIpozitivní (n=24) C. trachomatis- 21/24 IgG (87,5 %) chsp60-igg 19/24 (79 %) 19/24 (79 %) Citlivost PPV 87,5 % 54 % 79 % 39 % 79 % 63 % Autoři: Surcel et al. (2004) Kolektivy: IVF-Pacientky s neprůchodnými vejcovody (n=88)a dárci krve (n=163) Pozitivní průkazy protilátek TFIpozitivní (n=88) C. trachomatis- IgG 38/88 (43 %) chsp60-igg 52/88 (59 %) C. trach. a 30/88 chsp60-igg (34 %) Citlivost PPV 43 % 63 % 59 % 59 % 34 % 70 % 435-VPCZ/

15 7.B.2. SPECIFITY A NEGATIVNÍ PREDIKTIVNÍ HODNOTY (NPH) VE VZTAHU K PRŮCHODNÝM VEJCOVODŮM Autoři: Den Hartog J et. al. (2003) Kolektivy: IVF-Pacientky se (n=59) a bez (n=254) distální patologie vejcovodů(dtp) Autoři: Clad et al. (2004) Kolektivy: IVF-Pacientky s průchodnými (n=102) a neprůchodnými vejcovody (n=24) Autoři: Surcel et al. (2004) Kolektivy: IVF-Pacientky s neprůchodnými vejcovody n=88)a dárci krve (n=163) Negativní průkaz protilátek DTP negativní (n=254) 234/254 (92 %) C. trachomatis- IgG chsp60-igg 216/254 (85 %) C. trach. a 241/254 chsp60-igg (95 %) Negativní průkaz protilátek TFI negativní (n=102) 84/102 (82 %) C. trachomatis- IgG chsp60-igg 72/102 (71 %) C. trach. a 91/102 chsp60-igg (89 %) Negativní průkaz protilátek TFInegativní (n=163) 141/163 (87 %) C. trachomatis- IgG chsp60-igg 127/163 (78 %) C. trach. a 150/163 chsp60-igg (92 %) Citlivost NPH 92 % 90 % 85 % 88 % 95 % 89 % Citlivost NPH 82 % 97 % 71 % 94 % 89 % 95 % Citlivost NPH 87 % 74 % 78 % 78 % 92 % 72 % 435-VPCZ/

16 7.C. PŘESNOST VZOREK Variace intraassay (n=22) Vzorek Variace interassay (n=11) OD S VK OD S VK NK 0,053 0,006 11,3 NK 0,045 0,009 20,0 SPK 0,683 0,023 3,4 SPK 0,649 0,033 5,1 PK 1,324 0,057 4,3 PK 1,293 0,083 6,4 Č. 1 0,067 0,003 4,5 Č. 4 0,090 0,021 23,3 Č. 2 0,653 0,013 2,0 Č. 5 1,047 0,087 8,3 Č. 3 1,305 0,047 3,6 Č. 6 1,310 0,113 8,6 Č. 7 1,657 0,087 5,2 NK = negativní kontrola; SPK = slabě pozitivní kontrola (není obsáhnutá v testu); PK = pozitivní kontrola VŠEOBECNÉ PRACOVNÍ POKYNY Nezaměňujte lahvičky s reagenciemi a jejich uzávěry, aby se předešlo křížovým kontaminacím. Po použití lahvičky s reagenciemi hned pevně uzavřete, aby se předešlo vypařování a mikrobiální kontaminaci. Po použití se musí reagencie hned uskladnit tak, jak je uvedeno v pokynech, aby se zaručila předepsaná použitelnost. Aby se předešlo záměně s reagenciemi jiných testovacích systémů a šarží, musí se všechny komponenty jednoho testu po použití uskladnit spolu v originálním balení(viz také 3.). INFORMACE TÝKAJÍCÍ SE BEZPEČNOSTI PRÁCE * Je nevyhnutné dodržovat místní předpisy týkající se bezpečnosti práce. * Reagencie lidského původu použité při výrobě této soupravy byly testovány a bylo zjištěno, že jsou HBsAg, HIV-1/2 a HCV negativní. Přesto by se měly všechny reagencie včetně obsahujících zvířecí materiál (viz obsah soupravy) považovat za infekční, aby se předešlo riziku nákazy. RADY TÝKAJÍCÍ SE LIKVIDACE Chemikálie a přípravky patřící k tomuto produktu a také jejich zbytky, vznikající při použití tohoto produktu, se považují zpravidla za odpady, které se musí odstraňovat dle předpisů. Odstraňování těchto odpadů se řídí národními zákony týkající se odpadů. Informace o možnostech odstraňování odpadů Vám podají zodpovědný úřad nebo společnosti zabývající se odstraňováním odpadů. Datum vydání: VPCZ/

17 LITERATURA Burian K, Kis Z, Virok D, Endresz V, Prohaszka Z, Duba J, Berencsi K, Boda K, Horvath L, Romics L, Fust G, Gonczol E: Independent and joint effects of antibodies to human heat-shock protein 60 and Chlamydia pneumoniae infection in the development of coronary atherosclerosis. Circulation (2001) 103: Clad A, Petersen EE, Böttcher M: Expanded Chlamydia trachomatis serology: chsp60 IgG and its association with tubal occlusion. In: Deák J (ed.) Proceedings of the European Society for Chlamydia Research. Pauker Nyomdaipari Kft., Budapest, Hungary (2004) p 86 Den Hartog J, Land J, Stassen F, Slobbe M, Kessels A, Bruggemann C: Predictive value of chsp60 antibodies in screening for tubal subfertility. 19 th Annual Meeting of the European Society for Human Reproduction and Embryo Transfer (EHSRE) June 29-July 2, 2003, Madrid, Spain, xviii183, P-549 Fajac I, Roisman GL, Lacronique J, Polla BS, Dusser DJ: Bronchial gamma delta T-lymphocytes and expression of heat shock proteins in mild asthma. Eur Respir J (1997) 10: Hahn DL, Peeling RW, Dillon E, McDonald R, Saikku P: Serologic markers for Chlamydia pneumoniae in asthma. Ann Allergy Asthma Immunol (2000) 84: Hoppichler F, Koch T, Dzien A, Gschwandtner G, Lechleitner M: Prognostic value of antibody titre to heat-shock protein 65 on cardiovascular events. Cardiology (2000) 94: Jantos CA, Krombach C, Wuppermann FN, Gardemann A, Bepler S, Asslan H, Hegemann JH, Haberbosch W: Antibody response to the 60-kDa heat-shock protein of Chlamydia pneumoniae in patients with coronary artery disease. J Infect Dis (2000) 181: Kalayoglu MV, Indrawati, Morrison RP, Morrison SG, Yuan Y, Byrne GI: Chlamydial virulence determinantds in atherogenesis: the role of chlamydial lipopolysaccharide and heat shock protein 60 in macrophage-lipoprotein interactions. I Infect Dis (2000) 181 Suppl 3:S Kikuta LC, Puolakkainen M, Kuo CC, Campbell LA: Isolation and sequence analysis of the Chlamydia pneumoniae GroE operon. Infect Immun (1991) 59: Larsen B, Birkelund S, Mordhorst CH, Ejstrup L, Andersen LS, Christiansen G: The humoral immune response to Chlamydia trachomatis in patients with acute reactive arthritis. Br J Rheumatol (1994) 33: Lindquist SC, Craig EA: The heat shock proteins. Annu Rev Genet (1988) 22: VPCZ/

18 Mayr C, Richter K, Lilie H, Buchner J: Cpr6 and Cpr7, two closely related HSP90-associated immunophils from Saccharomyces cerevisiae, differ in their functional properties. J Biol Chem (2000) 275: Morrison RP, Belland RJ, Lyng K, Caldwell HD: Chlamydial disease pathogenesis. The 57-kD chlamydial hypersensitivity antigen is a stress response protein. J Exp Med (1989) 170: Neuer A, Spandorfer SC, Giraldo P, Dieterle S, Rosenwaks Z, Witkin SS: The role of heat shock proteins in reproduction. Hum Reprod Update (2000) 6: Neuer A, Gao Y, Sziller I, Dieterle S: Strategies for extended Chlamydia trachomatis serology in infertile patients: A clinical evaluation of Chlamydia trachomatis MOMP-, chlamydial 60KD heat shock protein and human HSP60ß serology. In: Deák J (ed.) Proceedings of the European Society for Chlamydia Research. Pauker Nyomdaipari Kft., Budapest, Hungary (2004) p. 242 Shinnik TM: Heat shock proteins as antigens of bacterial and parasitic pathogens. Current Topics Microbiol Immunol (1991) 167: Surcel HM, Bloigu A, Öhman H, Halttunen M, Birkelund S, Tiitinen A, Christiansen G, Koskela P, Morrison R, Paavonen J: C. trachomatis specific immune responses and infertility. In: Deák J (ed.) Proceedings of the European Society for Chlamydia Research. Pauker Nyomdaipari Kft., Budapest, Hungary (2004) p 162 Tishler M, Shoenfeld Y: Anti-heat-shock proetin antibodies in rheumatic and autoimmune diseases. Semin Arthritis Rheum (1996) 26: Wang JD, Michelitsch MD, Weissmann JS: GroEL-GroES-mediated protein folding requires an intact central cavity. Proc Natl Acad Sci USA (1998) 95: Wick G, Xu Q: Atherosclerosis an autoimmune disease. Exp Gerontol (1999) 34: Zügel U, Kaufmann SHE: Role of heat shock poteins in protection from and pathognesais of infectious diseases. Clin Microbiol Rev (1999) 12: VPCZ/