Detekce oligoklonálních IgM pásů v likvoru
|
|
- Jaromír Konečný
- před 7 lety
- Počet zobrazení:
Transkript
1 Detekce oligoklonálních IgM pásů v likvoru Zeman D. 1,2, Kušnierová P. 1,2 Klin. Biochem. Metab., 24 (45), 2016, No. 3, p Katedra biomedicínských oborů, Lékařská fakulta, Ostravská univerzita 2 Oddělení klinické biochemie, Ústav laboratorní diagnostiky, Fakultní nemocnice Ostrava SOUHRN Cíl studie: Úprava postupu detekce oligoklonálních IgM pásů v likvoru a séru. Typ studie: Metodická studie. Materiál a metody: Izoelektrická fokusace (IEF) v agarózovém gelu s následným afinitním imunoblottingem. Po výběru nejlepší varianty z testovaných postupů bylo vyšetřeno 35 párových vzorků likvorů a sér. Výsledky: Zlepšení separace IgM bylo dosaženo použitím užšího ph gradientu (4-8), prefokusací a katodickou aplikací vzorku. Separace IgM v nativních vzorcích likvoru a séra se nepodařilo dosáhnout. K uspokojivým výsledkům vedla předúprava vzorků dithiothreitolem, popř. následně akrylamidem. Intrathekální syntéza oligoklonálního IgM byla průkazná u 11 z 35 testovaných vzorků. Vzorky všech pacientů s potvrzenou diagnózou nezánětlivého onemocnění nervového systému (n=9) i symptomatických kontrol (n=3) byly negativní. Průkaz oligoklonálního IgM statisticky významně koreloval s výpočtem intrathekální syntézy IgM podle Reibera (P=0,007) i podle Auera et al. (P=0,026). Závěr: Upravená metoda umožňuje citlivou a reprodukovatelnou detekci oligoklonálního IgM. Další výzkum by měl směřovat jednak k optimalizaci předúpravy vzorku, jednak k pokusům dosáhnout separace IgM izoelektrickou fokusací v nativním (neupraveném) vzorku. Klíčová slova: oligoklonální IgM, izoelektrická fokusace, afinitní imunoblotting, výpočet intrathekální syntézy. SUMMARY Zeman D., Kušnierová P.: Detection of oligoclonal IgM in cerebrospinal fluid Objective: Improvement of the procedure used for cerebrospinal fluid (CSF) and serum oligoclonal IgM detection. Design: Methodical study Material and Methods: Isoelectric focusing (IEF) in agarose gel followed by affinity immunoblotting. After choosing the best variant from the protocols tested, 35 paired CSF and serum samples were examined. Results: Improvement of IgM separation has been achieved by using narrower ph gradient (4-8), prefocusing step and cathodic application of samples. Efforts to separate IgM in native CSF or serum samples have been unsuccessful. Satisfactory results have been obtained using sample pretreatment with dithiothreitol, optionally followed by acrylamide pretreatment. Intrathecal synthesis of oligoclonal IgM was demonstrated in 11 out of 35 patients. Samples of symptomatic controls (n=3) or patients with a proved diagnosis of non-inflammatory neurological disease (n=9) were all negative. Oligoclonal IgM result correlated significantly with intrathecal IgM synthesis estimated either by Reiber s (P=0.007) or Auer s formula (P=0.026). Conclusion: The method described in this article enables sensitive and reproducible detection of oligoclonal IgM bands separated by IEF. Further research should address the optimisation of sample pretreatment as well as experiments aimed at separation of IgM in untreated cerebrospinal fluid and serum samples. Keywords: oligoclonal IgM, isoelectric focusing, affinity immunoblotting, calculation of intrathecal synthesis. Úvod Detekce oligoklonálního (o-) IgM v mozkomíšním moku (CSF) byla popsána již před více než 20 lety [1-3], do popředí zájmu neuroimunologů se však dostala až po zjištění, že intrathekální (ith.) syntéza o-igm může predikovat agresívní průběh onemocnění roztroušenou sklerózou (RS) [4]. Metoda používaná v těchto studiích byla popsána skupinou L. M. Villarové r [5]. Tato skupina později vypracovala i metodu detekce o-igm specifických vůči myelinovým lipidům, které pravděpodobně predikují nepříznivý průběh RS ještě silněji [6]. Přestože klinický význam detekce o-igm je referován v řadě recentních publikací, podrobnější popis metod v novější literatuře téměř chybí. V r bylo publikováno doporučení Sekce pro likvorologii a neuroimunologii České neurologické společnosti [7] zahrnující mezi doporučená vyšetření i detekci o-igm a o- IgA. Vzhledem k opakovaně prokázané vyšší senzitivitě detekce o-igg oproti výpočtům ith. syntézy IgG je tato myšlenka nepochybně opodstatněná. Existuje nicméně určitý rozpor mezi tímto doporučením a zahraničními směrnicemi [8, 9], které uvádějí pouze detekci o-igg, jakož i absencí publikovaných studií v tuzemské literatuře, kde dosud jediné sdělení na toto téma publikovali Kelbich et al. [10]. Použití komerčního kitu pro detekci o-igm bylo popsáno pouze pro imunofixační elektroforézu [11]. Metoda izoelektrické fokusace s následným afinitním imunoblottingem (IEF/AIB) byla propracována C. J. Sindicem nejprve pro detekci oligoklonálních volných lehkých řetězců [12] a později také o-igm [2]. Její výhodou je několikanásobně nižší detekční limit oproti klasickému imunoblottingu. S použitím metody pro detekci o-igg a volných lehkých řetězců máme poměrně rozsáhlé zkušenosti [13-15]. Po úvodních pokusech s metodou Villarové et al. jsme zvolili toto uspořádání i pro studium o-igm, neboť se nám nepodařilo dosáhnout detekčního limitu 0,02 mg/l Klinická biochemie a metabolismus 3/
2 popsaného v původní práci [5]. I přes nesystematický experimentální přístup se nám podařilo vyvinout metodu poskytující přijatelné výsledky. Tuto metodu v našem sdělení podrobně popisujeme a nabízíme tak specializovaným laboratořím k použití, další optimalizaci, klinické validaci a ovšem také kritickým připomínkám. Materiál a metody IEF je prováděna na přístroji Multiphor II (GE Healthcare) se zdrojem EPS-3501XL a termostatickým cirkulátorem. Používáme agarózu pro IEF (kat. č ), amfolyty Pharmalyte 4-6,5 (kat. č ) a 5-8 (kat. č ), GelBond film (kat. č ), filtrační papír (kat. č ) a elektrodové stripy (kat. č ) firmy GE Healthcare; D-sorbitol (kat. č ), DL-dithiothreitol (kat. č ), akrylamid (kat. č ) a tris(hydroxymethyl)aminomethan (kat. č ) firmy Sigma Aldrich; proužky pro aplikaci vzorků (kat. č ), Tween 20 (kat.č ) a bovinní sérový albumin (BSA, kat. č ) firmy Serva; nitrocelulózovou membránu s póry 0,45 µm firmy Sartorius (kat. č BL). Anolytem je kyselina octová (0,25 mol/l), katolytem hydroxid sodný (0,25 mol/l). Pro potah membrán byla použita kozí protilátka proti lidskému IgM firmy Jackson ImmunoResearch (kat. č ). K detekci byl použit biotinem značený F(ab ) 2 fragment kozí protilátky proti lidskému IgM téže firmy (kat. č ) s následnou aplikací konjugátu streptavidinu s alkalickou fosfatázou firmy Vector (kat.č. SA-5100), popř. kozí protilátky proti lehkým řetězcům kappa a lambda firmy Bethyl značené přímo alkalickou fosfatázou (kat.č. A80-115AP a A80-116AP). K vizualizaci signálu byl použit substrát BCIP/NBT firmy Vector (kat. č. SK-5400). Příprava roztoků pufrů Tris-Cl, ph 9,5, Tris-buffered saline (TBS) ph 7,6, TBS s 0,05% Tweenem 20 (TBS-T) a phosphate-buffered saline (PBS) ph 7,4 pro IEF a afinitní imunoblotting je podrobně popsána v práci Bojkové [16]. Po úpravě metody bylo testováno 35 vzorků likvorů a sér zaslaných k vyšetření oligoklonálních pásů. U všech byla provedena kvantifikace albuminu, IgG, IgM a IgA na nefelometru BN ProSpec (Siemens) a detekce o-igg (IEF s imunofixací, Hydrasys, Sebia). Ith. syntéza imunoglobulinů byla vyhodnocena podle Reiberova vztahu [17] i vztahu nově navrženého Auerem et al. [18]. Ve 30 případech byla provedena také detekce oligoklonálních volných lehkých řetězců kappa a lambda (IEF/AIB). Statistické vyhodnocení bylo provedeno programem Med- Calc Statistical Software (verze ). Významnost korelace mezi pozitivitou/negativitou jednotlivých testů byla posouzena Fisherovým exaktním testem. Metoda Agarózový gel připravíme rozpuštěním 2,6 g sorbitolu a 0,2 g agarózy ve 20 ml destilované vody. Roztok zahříváme k varu a pak po 5-10 minutách necháme pomalu chladnout. Po poklesu teploty na 70 C přidáme 0,75 ml Pharmalytu 4-6,5 a 0,75 ml Pharmalytu 5-8. Po šetrném promíchání gel okamžitě nalijeme předehřátou pipetou do předehřáté masky mezi podložní sklo s GelBond filmem a sklo se spacerem (0,5 mm) a necháme 1 hodinu při pokojové teplotě. Poté šetrně odstraníme vrchní sklo a gel inkubujeme ve vlhké komůrce při 2-8 C 3-24 hodin. Nitrocelulózové membrány (rozměr 7,5 12 cm; dvě membrány na jeden gel) inkubujeme 2-3 minuty v destilované vodě, poté minut v TBS. Pak na membránu aplikujeme 8-10 ml neznačené protilátky proti lidskému IgM ředěné v TBS na 10 mg/l. Necháme inkubovat na kývačce při pokojové teplotě 6-14 hodin. Bezprostředně před prefokusací připravíme vzorky. Likvory s koncentrací IgM > 1 mg/l ředíme 0,75% NaCl na 1 mg/l a na stejnou koncentraci ředíme také séra. Likvory s nižší koncentrací IgM aplikujeme neředěné. Séra můžeme ředit na likvorovou koncentraci IgM, nicméně se nám osvědčilo ředění na 1 mg/l, popř. na 0,5 mg/l u vzorků s koncentrací IgM v likvoru 0,5 mg/l. Je nutné dbát na dostatečný objem vzorku (min. 50 µl). Poté napipetujeme do eppendorfek 1 µl zásobního roztoku dithiothreitolu (DTT, 0,5 mol/l v 0,1 mol/l Tris- Cl pufru o ph 9,5) a přidáme 49 µl adekvátně zředěných vzorků likvoru, resp. séra. Důkladně promícháme a inkubujeme minut při 37 C. Poté vzorky přemístíme do pokojové teploty. Fakultativně lze doplnit alkylační krok: do eppendorfek napipetujeme 1 µl roztoku akrylamidu (0,4 mol/l v destilované vodě) a přidáme 19 µl výše popsaným způsobem upravených vzorků; inkubujeme při pokojové teplotě v temnu po dobu minut. IEF provádíme při 10 C. Na gel přiložíme suchý filtrační papír a ihned sejmeme. Na keramickou desku přístroje aplikujeme cca 1,5 ml petroleje a poté na ni umístíme gel. Na něj položíme elektrodové stripy nasycené v roztocích anolytu, resp. katolytu (mezielektrodová vzdálenost 8,5 cm) a cca 1,5 cm zevně od nich proužek filtračního papíru. Prefokusace je jednokroková (250 Vh) s nastavenými maximálními hodnotami 600 V, 30 ma, 4 W. Po jejím ukončení vypneme přístroj a 2 cm od katody položíme aplikační proužek pro vzorky; do každé jamky pipetujeme 7 µl vzorku. Poté spustíme IEF program. Používáme gradientovou metodu, při které voltáž lineárně stoupá od hodnoty předchozí fáze až k naprogramované maximální hodnotě. Program má čtyři fáze: 1) 1 Vh, 300 V, 30 ma, 3 W; 2) 125 Vh, 300 V, 30 ma, 3 W; 3) 500 Vh, 1275 V, 30 ma, 8 W; 4) 575 Vh, 1275 V, 30 ma, 8 W. Po uplynutí 110 Vh fáze 2) IEF přerušíme, vyměníme elektrodové proužky a odsávací papíry za nové a sejmeme aplikační masku. Poté pokračujeme v separaci. Bezprostředně po této operaci omyjeme nitrocelulózové membrány v TBS a inkubujeme v roztoku 3% BSA v TBS (cca minut). Krátce před koncem IEF membrány omyjeme dvakrát v TBS. Po skončení IEF gel oblotujeme filtračním papírem navlhčeným v TBS a následně přiložíme nitrocelulózové membrány (stranou, na níž byla aplikována protilát- 142 Klinická biochemie a metabolismus 3/2016
3 ka, na gel). Přiložíme 1 filtrační papír navlhčený v TBS, dalších 5-7 suchých filtračních papírů, skleněnou desku a závaží (cca 1,5 kg). Ponecháme 50 ± 5 minut. Poté membrány promyjeme v PBS a inkubujeme v roztoku 0,25% glutardialdehydu v PBS po dobu minut při 2-8 C; pak je opláchneme destilovanou vodou a třikrát promyjeme v TBS. Poté inkubujeme v roztoku TBS/0,3% BSA na kývačce po dobu 20 ± 5 minut, znovu promyjeme v TBS a aplikujeme roztok biotinem značené protilátky (ředíme 1/ v TBS/0,3% BSA). Necháme inkubovat 2 2,5 hodiny na kývačce při pokojové teplotě. Membránu pak promyjeme v TBS, dvakrát v TBS-T, dvakrát v TBS. Následně aplikujeme roztok streptavidinu značeného alkalickou fosfatázou (ředíme 1/750 v TBS/0,3% BSA) a inkubujeme 50 ± 5 minut, promyjeme v TBS, TBS-T a TBS jak uvedeno výše a konečně detekujeme pomocí roztoku BCIP/ NBT. Optimálního zbarvení je dosaženo po 30 až 40 minutách. Nakonec membránu promyjeme 5 minut v TBS a 1-2 minuty v destilované vodě a usušíme. Výsledky Ukázky IEF obrazů jsou na obr. 1 a 2. Z 35 vyšetřených pacientů byla ith. syntéza IgM zjištěna výpočtem podle Reibera u šesti a podle Auera et al. u pěti pacientů. Ith. syntéza o-igm (alespoň dva zřetelné pásy v likvoru bez protějšku v séru) byla detekována u 11 pacientů (Tabulka 1). U pěti z nich byla prokázána ith. syntéza IgM podle Reibera a u čtyř i podle Auera et al. U jedné pacientky s vypočtenou výraznou ith. syntézou IgM (intrathekální frakce 48 %, resp. 28 %) vyzněla detekce o-igm negativně i při opakovaném vyšetření. Mezi kvantitativní a kvalitativní metodou nacházíme statisticky významnou korelaci (Fisherův exaktní test, P=0,007 při použití Reiberova vztahu a P=0,026 při použití vztahu dle Auera et al.). Přítomnost ith. syntézy o-igm významně koreluje s přítomností ith. syntézy o-igg (P=0,023) a oligoklonálních volných lehkých řetězců typu lambda (P<0,0001), ale nikoliv typu kappa (P=0,246). Table 1. Clinical diagnoses and the frequency of positive results for intrathecal immunoglobulin synthesis Multiple sclerosis (n=6) or clinically isolated syndrome (n=7) o-igg o-igm IgG loc* IgM loc* 13 (100%) 8 (62%) 5 (38%) Radiologically isolated syndrome (n=3) Other inflammatory neurological diseases (n=3) Non-inflammatory neurological diseases (n=9) Symptomatic controls (n=3) Unknown (n=4) ** (38%) *Ig loc = positive calculation of intrathecal synthesis according to the Reiber s formula or the formula of Auer et al. Qualitative interpretation of the results (positive/negative) was in perfect agreement for IgG, while one MS patient positive for o-igm and positive by Reiber s formula was evaluated as negative using the formula of Auer et al. ** 5 positives by Reiber s formula and 4 positives by the formula of Auer et al. Fig. 1a. IEF/AIB of 8 serum samples with elevated IgM concentration and/or IgM paraprotein detected on immunofixation (P1-P8) and four CSF(C) serum (S) pairs (C1-4 and S1-4). NC = negative control (intravenous IgG preparation diluted to 500 mg/l). At least 2 clear-cut IgM bands not present in serum can be seen in C1, while numerous CSF-restricted IgM bands could be counted in C2. C3 and C4 were evaluated as negative. On the right, it is demonstrated that samples (P1-P4) mostly do not enter the gel without dithiothreitol pretreatment. Klinická biochemie a metabolismus 3/
4 Fig. 1b, c. IgM kappa/lambda detection on immunoblots of 8 serum samples with elevated IgM concentration and/or IgM paraprotein detected on immunofixation. The same gel run as in Fig. 1a. The coating anti-human IgM antibody was the same as for total IgM detection, but biotin-labeled anti-human IgM detection antibody was replaced with alkaline phosphatase labeled anti-human kappa and lambda light chain antibodies, respectively. The background is less clear than in Figure 1a; this possibly suggests that trace amounts of immunoglobulins other than IgM might still be transferred onto the membrane and react with anti-kappa and anti-lambda antibodies. Although the results of IEF/AIB patterns are clearly not so straightforward as those of immunofixation electrophoresis, identical conclusions could be driven by using kappa and lambda light chain detection (P2 and P5, IgM kappa; P1, P7 and P8, IgM lambda; P4, IgM kappa and IgM lambda; P3 and P6, no paraprotein detected). Fig. 2. IEF/AIB of five CSF (C) serum (S) pairs (C1-5 and S1-5). Samples were separated within the same run without (2a) or with (2b) alkylation with acrylamide after incubation with dithiothreitol. C1, C3 and C4 were evaluated as negative, while CSFrestricted IgM bands could be seen in sample C2 (arrowheads). Sample C5 was evaluated as unequivocally positive (bands indicated by asterisks) only when alkylated. Interestingly, sample C1 was negative despite pronounced intrathecal IgM synthesis calculated by both formulas, while sample C2 was negative by quantitative testing and the actual CSF IgM concentration 0.17 mg/l represent the lowest CSF IgM value with positive o-igm test that we have ever met. Diskuse Separace IgM v nativním vzorku likvoru a séra se nepodařilo dosáhnout ani při použití vyšší teploty (15, 25 nebo 35 C), ani použitím gelu obsahujícího nižší koncentraci agarózy (0,8 %), 0,5-1 % detergent (Nonidet P40-Substitute), ani aplikací vzorku při nízkém napětí 150 V podle doporučení Westermeiera [19]. Toto pozorování je v souladu s údaji publikovanými Sindicem [2] a Cornellem [20], přestože některým skupinám se v minulosti podařilo dosáhnout separace nativní molekuly IgM [21-24]. Variantou pro další pokusy může být velmi řídký agarózový gel (<0,8 %), popř. gel obsahující 5-10 % glycerol nebo kompozitní agarózový-polyakrylamidový gel, jehož použití bylo popsáno v práci [22]. V naší studii se separaci IgM podařilo realizovat pouze po předúpravě vzorků DTT, bez níž zůstala ve všech experimentech naprostá většina IgM na startu. Použití redukčního činidla se tedy zdá nutné. Je zajímavé, že ve dvou případech byly o-igm pásy zřetelné pouze ve vzorku inkubovaném v posledním kroku předúpravy s akrylamidem. Potřeba zařazení alkylačního kroku byla v literatuře diskutována [25], v případě námi zvolené kombinace může spolupůsobit i reakce akrylamidu s přebytkem DTT, a tím zabránění jeho interference při separaci. Zlepšení separace IgM bylo dosaženo vřazením prefokusačního kroku, katodickou aplikací vzorku a použitím užšího ph gradientu (4-8) připraveného kombinací Pharmalytů 4-6,5 a 5-8. Ten se jeví jako vhodnější než gradient 5-8, neboť některé práce uvádějí hodnoty izoelektrických bodů IgM mezi 4,5 a 8 [23, 24, 26]. Již v úvodu byl zmíněn potenciál metody pro podstatně citlivější detekci ith. syntézy oproti kvantitativním (výpočtovým) vztahům. Při výpočtu vycházíme z tzv. limitního kvocientu, který vyjadřuje maximální poměr koncentrací imunoglobulinu v likvoru a séru vysvětlitel- 144 Klinická biochemie a metabolismus 3/2016
5 ný difúzí přes hemato-likvorovou bariéru. Nejčastěji se používá Reiberův vztah, který je matematicky ve shodě s teoretickou představou o kinetice difúze proteinů z krve do likvoru [17] a má obecný tvar: s hodnotami parametrů pro IgM: a/b = 0,67; b 2 = 0,00012, c = 0,0071. Recentně publikovali Auer et al. [18] vztah: s hodnotami parametrů pro IgM: a = 1,845; b = 1,34. Vlastní výpočet ith. syntézy je již shodný [17, 18]: resp. Na rozdíl od Reiberova vztahu je rovnice Auera et al. založena na čistě empirickém přístupu; další rozdíl spočívá v tom, že Reiber použil data z ELISA stanovení IgM, Auer et al. měřili IgM nefelometricky na analyzátoru Immage a uvádějí detekční limit 0,3 mg/l. Při použití této metody jsme však v minulosti nalezli v likvoru signifikantně vyšší hodnoty než hodnoty získané nefelometricky na analyzátorech řady BN nebo ELISA metodou [27]. Domníváme se proto, že rovnice Auera et al. může poskytovat falešně negativní hodnoty, resp. hodnoty jejích parametrů bude třeba validovat a upravit v případě použití jiných měřících systémů pro stanovení IgM v likvoru. Výsledky kvalitativní a kvantitativní metody detekce ith. syntézy IgM i v malém souboru statisticky významně korelují, což je v částečném rozporu s výsledky publikovanými na mnohem větším souboru pacientů Kelbichem et al. [10] Navzdory částečně oprávněným výhradám vůči výpočtům ith. syntézy [28] je nutné si uvědomit, že ith. syntéza způsobuje přítomnost určitého množství imunoglobulinu v likvoru navíc oproti množství, které by bylo za daných podmínek (Q Alb a sérové koncentrace imunoglobulinu) přítomno při pouhém pasívním přestupu ze séra. Na tomto elementárním faktu jsou založeny všechny výpočty ith. syntézy. Úplná absence korelace mezi kvantitativní a kvalitativní metodou proto může upozorňovat i na analytické nedostatky jednoho či druhého postupu. Metoda by mohla sloužit i pro detekci nízkých koncentrací monoklonálních imunoglobulinů, podobně jako u IgG [16, 20]. Klinický přínos takové aplikace je však zřejmě s ohledem na jiné možnosti monitorování monoklonálních gamapatií [29] zanedbatelný. Potenciál pro významné snížení detekčního limitu vykazuje luminiscenční detekce. Schneiderovi et al. [30] její použití umožnilo ředit vzorky likvorů a sér na 0,05 mg/l a podíl pacientů s CIS a pozitivitou o-igm je v jejich studii poněkud vyšší (74 %) než v práci Villaro- vé et al. z r (46 %). Mnohem nižší detekční limit luminiscenční detekce oproti chromogenním metodám by také mohl výrazně usnadnit detekci antigen-specifických o-igm (popř. o-iga, o-igd) pásů v likvoru. Pořízení příslušného vybavení je u nás bohužel vzhledem k finanční nákladnosti zatím nemožné. Závěr Detekce o-igm v likvoru je obtížná a stále ne zcela uspokojivě vyřešená metoda, která má nicméně významný diagnostický potenciál u zánětlivých onemocnění nervového systému a významný prognostický potenciál specificky u RS, kde intrathekální syntéza o-igm může signalizovat agresívní průběh onemocnění. Popsaná metoda umožňuje detekovat o-igm i ve vzorcích s nízkou koncentrací IgM v likvoru. Pro další metodický pokrok je nezbytné srovnání různých variant detekce o-igm, ale také validace metod založená na klinických datech. Teprve potom bude možno uvažovat o standardizaci postupu, který se ukáže jako nejvhodnější. Literatura 1. Kaiser, R. Affinity immunoblotting: rapid and sensitive detection of oligoclonal IgG, IgA and IgM in unconcentrated CSF by agarose isoelectric focusing. J. Neurol. Sci. 1991, 103, p Sindic, C. J., Monteyne, P., Laterre, E. C. Occurrence of oligoclonal IgM bands in the cerebrospinal fluid of neurological patients: an immunoaffinity-mediated capillary blot study. J. Neurol. Sci. 1994, 124, p Rijcken, C. A., Thompson, E. J., Teelken, A. W. An improved, ultrasensitive method for the detection of IgM oligoclonal bands in cerebrospinal fluid. J. Immunol. Methods 1997, 203, p Villar, L. M., Masjuán, J., González-Porqué, P. et al. Intrathecal IgM synthesis is a prognostic factor in multiple sclerosis. Ann. Neurol. 2003, 53, p Villar, L. M., González-Porqué, P., Masjuán, J., Alvarez-Cermeño, J. C., Bootello, A., Keir, G. A sensitive and reproducible method for the detection of oligoclonal IgM bands. J. Immunol. Methods 2001, 258, p Villar, L. M., Sádaba, M. C., Roldán, E. et al. Intrathecal synthesis of oligoclonal IgM against myelin lipids predicts an aggressive disease course in MS. J. Clin. Invest. 2005, 115, p Sobek, O., Adam, P., Koudelková, M., Štourač, P., Mareš, J. Algoritmus vyšetření likvoru v návaznosti na doporučení Sekce neuroimunologie a likvorologie České neurologické společnosti JEP. Cesk. Slov. Neurol. N. 2012, 75/108 (2), p Deisenhammer, F., Bartoš, A., Egg, R. et al. Routine cerebrospinal fluid (CSF) analysis. In: Gilhus, N.E., Basrnes, M.P., Brainin, M. (Eds.) European Handbook of Neurological Management: Volume 1, 2 nd Edition. Blackwell Publishing Ltd. 2011, p Wick, M. (Ed.). Ausgewählte Methoden der Liquordiagnostik und Klinischen Neurochemie, 3. vydání, 2014, dostupné na: (sekce Empfehlungen Methodenkatalog) Klinická biochemie a metabolismus 3/
6 10. Kelbich, P., Vachová, M., Kotalová, J., Vondráčková, S., Čujková, O. Detekce intratékální syntézy imunoglobulinů vlastní zkušenosti. Cesk. Slov. Neurol. N. 2014, 77/110 (Suppl), p. S Richard, S., Miossec, V., Moreau, J. F., Taufin, J. L. Detection of oligoclonal immunoglobulins in cerebrospinal fluid by an immunofixation-peroxidase method. Clin. Chem. 2002, 48, p Sindic, C. J., Laterre, E. C. Oligoclonal free kappa and lambda bands in the cerebrospinal fluid of patients with multiple sclerosis and other neurological diseases. An immunoaffinity-mediated capillary blot study. J Neuroimmunol 1991, 33, p Zeman, D., Vaníčková, Z., Benáková, H., Havrdová, E. Volné lehké řetězce typu kappa v likvoru a séru. Klin. Biochem. Metab. 2002, 10 (31), p Nováčková, L., Zeman, D. Detection of oligoclonal IgG bands in cerebrospinal fluid and serum: comparison between commercial immunofixation method and homemade affinity immunoblotting method and evaluation of interobserver agreement. Klin. Biochem. Metab. 2011, 19 (40), p Zeman, D., Hradílek, P., Kušnierová, P. et al. Oligoclonal free light chains in cerebrospinal fluid as markers of intrathecal inflammation. Comparison with oligoclonal IgG. Biomed. Pap. Med. Fac. Univ. Palacky Olomouc, Czech Repub. 2015, 159, p Bojková, J. Detekce nízkých koncentrací paraproteinů v séru a moči metodou izoelektrické fokusace s afinitním imunoblottingem. Diplomová práce. Ústav zdravotnických disciplín, Vysoká škola zdravotníctva a sociálnej práce sv. Alžbety, Bratislava, 2015, p Reiber, H. Flow rate of cerebrospinal fluid (CSF) a concept common to normal blood-csf barrier function and to dysfunction in neurological diseases. J. Neurol. Sci. 1994, 122, p Auer, M., Hegen, H., Zeileis, A., Deisenhammer, F. Quantitation of intrathecal immunoglobulin synthesis a new empirical formula. Eur. J. Neurol. 2016, p Westermeier, R. Agarose IEF. In: Westermeier R. Electrophoresis in practice. Fourth, revised and enlarged edition. Willey-VCH, Weinheim 2005: p Cornell, F. N. Isoelectric focusing, blotting and probing methods for detection and identification of monoclonal proteins. Clin. Biochem. Rev., 2009, 30, p Rosén, A., Ek, K., Åman, P. Agarose isoelectric focusing of native human immunoglobulin M and α2-macroglobulin. J. Immunol. Methods 1979, 28, p Jackson, D. E., Skandera, C. A., Owen, J., Lally, E. T., Montgomery, P. C. Isoelectric focusing of IgA and IgM in composite acrylamide-agarose gels. J. Immunol. Methods 1980, 36, p Chiodi, F., Sidén, Å., Ösby, E. Isoelectric focusing of monoclonal immunoglobulin G, A and M followed by detection with the avidin-biotin system. Electrophoresis 1985, 6, p Schibeci, A., Wade, A. W., Depew, W. T., Szewczuk, M. R. Analysis of serum antibody repertoires by isoelectric focusing and capillary blotting onto nitrocellulose paper. J. Immunol. Methods 1986, 89, p Herbert, B. Some practices and pitfalls of sample preparation for isoelectric focusing in proteomics. In: Garfin D, Ahuja S (Eds.). Handbook of Isoelectric Focusing. Elsevier, Amsterdam 2005, p Wang, Z. Y., Hansen, K., Sidén, Å., Cruz, M. Intrathecal synthesis of anti-borrelia burgdorferi antibodies in neuroborreliosis: a study with special emphasis on oligoclonal IgM antibody bands. Scand. J. Immunol. 1993, 37, p Zeman, D., Kušnierová, P., Gottwaldová, J. et al. Úskalí kvantifikace IgM v likvoru. Klin. Biochem. Metab. 2012, 20 (41), p Kelbich, P. Jsem skeptický vůči výpočtům intrathekální syntézy imunoglobulinů. (Editorial). Klin. Biochem. Metab. 2012, 20 (41), p Keren, D. F., Schroeder, L. Challenges of measuring monoclonal proteins in serum. Clin. Chem. Lab. Med. 2016, Feb 24. doi: /cclm [Epub ahead of print] 30. Schneider, R., Euler, B., Rauer, S. Intrathecal IgMsynthesis does not correlate with the risk of relapse in patients with a primary demyelinating event. Eur. J. Neurol. 2007, 14, p Do redakce došlo Adresa pro korespondenci: MUDr. Ing. David Zeman, Ph.D. Oddělení klinické biochemie Ústav laboratorní diagnostiky Fakultní nemocnice Ostrava 17. listopadu 1790, Ostrava-Poruba david.zeman@osu.cz 146 Klinická biochemie a metabolismus 3/2016
Likvor a jeho základní laboratorní vyšetření. Zdeňka Čermáková OKB FN Brno
Likvor a jeho základní laboratorní vyšetření Zdeňka Čermáková OKB FN Brno Likvor laboratorní vyšetření Cytologické vyšetření Biochemické vyšetření Složení likvoru Krev Likvor Na + (mol/l) 140 140 Cl -
Obtížně interpretovatelné nálezy elektroforéz a imunofixací u pacientů s mnohočetným myelomem po autologní transplantaci
Klin. Biochem. Metab., 25 (46), 2017, No. 2, p. 59 63. Obtížně interpretovatelné nálezy elektroforéz a imunofixací u pacientů s mnohočetným myelomem po autologní transplantaci Kušnierová P. 1,2, Zeman
Úskalí kvantifikace IgM v likvoru
Úskalí kvantifikace IgM v likvoru Klin. Biochem. Metab., 20 (41), 2011, No. 3, p. 136 144. Zeman D. 1, Kušnierová P. 1, Gottwaldová J. 2, Kloudová A. 3, Lochman I. 3, Ženková J. 4, Švagera Z. 1, Bartoš
Validace stanovení volných monoklonálních lehkých řetězců v České republice
Validace stanovení volných monoklonálních lehkých řetězců v České republice Vávrová, J., Tichý, M., Friedecký, B., Maisnar, V., Hájek, R., Čermáková, Z., Dastych, M., Gottwaldová, J., Kučera, P., Krotká,
Kušnierová, P., Zeman D., ÚLD, OKB
Kušnierová, P., Zeman D., ÚLD, OKB Průkaz intratekální syntézy volných lehkých řetězců: porovnání různých kvantitativních metod s detekcí oligoklonálních flc metodou izoelektrické fokusace a afinitního
WWW.DYNEX.CZ DEN LABORATORNÍ DIAGNOSTIKY
DEN LABORATORNÍ DIAGNOSTIKY LYMESKÉ BORRELIÓZY Brno, seminář f. Dynex 1.4.2009 Zdravotní ústav se sídlem v Ostravě Centrum klinických laboratoří Hana Bílková Fránková á Oddělení parazitologie a lékařské
Ústav laboratorní diagnostiky FN Ostrava a LF KBO Ostravské univerzity. pořádá
Ústav laboratorní diagnostiky FN Ostrava a LF KBO Ostravské univerzity pořádá 3. Ostravské likvorové sympozium dedikované památce prim. RNDr. Ludmily Nováčkové k jejím nedožitým 60. narozeninám (proto
Jana Bednářová Oddělení klinické mikrobiologie FN Brno
Jana Bednářová Oddělení klinické mikrobiologie FN Brno Jistá LNB: Splněna následující tři kritéria: (i) neurologické příznaky odpovídající LNB (ii) pleocytóza v CSF (iii) intratekální syntéza Bb-specifických
Návod a protokol k praktickým cvičením z lékařské biochemie
Datum... Jméno... Kroužek... Návod a protokol k praktickým cvičením z lékařské biochemie Téma: Vybrané imunochemické metody 1. Úloha Imunoprecipitační křivka lidského albuminu a stanovení Princip: koncentrace
Stanovení volných lehkých řetězců imunoturbidimetrií a metodou ELISA
Klin. Biochem. Metab., 16 (37), 2008, No. 2, p. 97 101. Stanovení volných lehkých řetězců imunoturbidimetrií a metodou Vávrová J. 1, Friedecký B. 1, Tichý M. 1, Holečková M. 1, Maisnar V. 2, Hájek R. 3
Imunoblot, imunoelektroforéza
Imunoblot, imunoelektroforéza Jana Švarcová. Plazmatické proteiny. http://slideplayer.cz/slide/2345714/ Jana Švarcová. Plazmatické proteiny. http://slideplayer.cz/slide/2345714/ Jana Švarcová. Plazmatické
PROTOKOL WESTERN BLOT
WESTERN BLOT 1. PŘÍPRAVA ELEKTROFORETICKÉ APARATURY Saponátem a vodou se důkladně umyjí skla, plastové vložky a hřebínek, poté se důkladně opláchnou deionizovanou/destilovanou vodou a etanolem a nechají
Elektroforéza. Rozdělení proteinů na základě pohyblivosti v el. poli
Elektroforéza Rozdělení proteinů na základě pohyblivosti v el. poli K realizaci je nutné mít: Stejnosměrný el. proud Speciální elektroforetické vany Vhodný pufr a nosič (dříve papír, acetátcelulóza, agar)
Elektroforéza. Rozdělení proteinů na základě pohyblivosti v el. poli
Elektroforéza Rozdělení proteinů na základě pohyblivosti v el. poli K realizaci je nutné mít: Stejnosměrný el. proud Speciální elektroforetické vany Vhodný pufr a nosič (dříve papír, acetátcelulóza, agar)
Stanovení párů těžkých/lehkých řetězců imunoglobulinu u monoklonální gamapatie nejistého významu - pilotní projekt CMG
Stanovení párů těžkých/lehkých řetězců imunoglobulinu u monoklonální gamapatie nejistého významu - pilotní projekt CMG Pika T., Klincová M., Lochman P., Maisnar V., Tichý M., Ščudla V., Hájek R. Olomouc,
Biochemické vyšetření mozkomíšního moku. MUDr. Zdeňka Čermáková OKB FN Brno
Biochemické vyšetření mozkomíšního moku MUDr. Zdeňka Čermáková OKB FN Brno Základní vyšetření Počet elementů a erytrocytů kvantitativní cytologie Kvalitativní cytologie- trvalý cytologický preparát Celková
Western blotting. 10% APS 20,28 µl 40,56 µl 81,12 µl 20,28 µl 40,56 µl 81,12 µl
Western blotting 1. Příprava gelu složení aparatury hustotu gelu volit podle velikosti proteinů příprava rozdělovacího gelu: 10% 12% počet gelů 1 2 4 1 2 4 objem 6 ml 12 ml 24 ml 6 ml 12 ml 24 ml 40% akrylamid
Systém HevyLite TM u IgA monoklonálních gamapatií první zkušenosti
Klin. Biochem. Metab., 19 (40), 2011, No. 2, p. 85 90. Systém HevyLite TM u IgA monoklonálních gamapatií první zkušenosti Pika T. 1, Heřmanová Z. 2, Lochman P. 3, Zapletalová J. 4, Minařík J. 1, Bačovský
S filtračními papíry a membránou je nutno manipulovat pinzetou s tupým koncem.
Western Blotting Příprava blotovacího sendviče... 1 Blotování... 2 Kontrola přenesení proteinů na membránu... 2 Blokování membrány... 2 Aplikace protilátek... 2 Vizualizace... 3 Vyvolání filmu... 4 Chemikálie
Stanovení asialotransferinu
Stanovení asialotransferinu v mozkomíšním moku metodou HPLC Pracovní den ČSKB Brno 10.11.2010 J. Gottwaldová, M. Dastych OKBH FN Brno Transferin transportní glykoprotein pro železo, váže 2 atomy Fe 3+
Protokoly Transformace plasmidu do elektrokompetentních buněk BL21 Pracovní postup:
Protokoly Pracovní potřeby, pufry a chemikálie jsou uvedeny na konci protokolu. Pracovní postupy jsou odvozeny od těchto kitů: Champion pet160 Directional TOPO Expression Kit with Lumio Technology (Invitrogen)
Současný stav rutinní analytiky některých biochemických markerů. J. Vávrová, B. Friedecký, M. Tichý Ústav klinické biochemie a diagnostiky LF UK
Současný stav rutinní analytiky y některých biochemických markerů J. Vávrová, B. Friedecký, M. Tichý Ústav klinické biochemie a diagnostiky LF UK Fakultní nemocnice, Hradec Králové 22.9.2009 Laboratorní
Revize prosinec 2005 Schváleno výborem ČSKB dne Schváleno výborem ČSAKI dne
Doporučení č. 6 České společnosti klinické biochemie ČLS JEP (ČSKB), Referenční laboratoře MZ pro klinickou biochemii (RL), Sekce pro neuroimunologii a likvorologii České neurologické společnosti ČLS JEP
Novinky VIDIA v di agnost ce Lymeské borreliózy
Novinky VIDIA v diagnostice i Lymeské borreliózy Marie Šteinbachová ELISA testy VIDIA pro diagnostiku LB testy III. generace vysoce specifické rekombinantní antigeny (IgG verze obsahuje VlsE) vysoká specifita
NÁVOD K POUŽITÍ VÁPNÍK 600 KATALOGOVÉ ČÍSLO 207
NÁVOD K POUŽITÍ VÁPNÍK 600 KATALOGOVÉ ČÍSLO 207 POUŽITÍ Souprava Vápník 600 se používá ke kvantitativnímu stanovení koncentrace vápenatých iontů v séru a moči. SOUHRN V lidském organismu je vázána převážná
Imunochemické metody. na principu vazby antigenu a protilátky
Imunochemické metody na principu vazby antigenu a protilátky ANTIGEN (Ag) specifická látka (struktura) vyvolávající imunitní reakci a schopná vazby na protilátku PROTILÁTKA (Ab antibody) molekula bílkoviny
Vybraná vyšetření u pacientů s diabetes mellitus
ÚSTAV LÉKAŘSKÉ BIOCHEMIE A LABORATORNÍ DIAGNOSTIKY 1. LF UK Vybraná vyšetření u pacientů s diabetes mellitus Praktické cvičení z lékařské biochemie Všeobecné lékařství Martin Vejražka 2018/19 Obsah 1.
Obsah Protein Gel Electrophoresis Kitu a jeho skladování
Obsah Protein Gel Electrophoresis Kitu a jeho skladování Protein Gel Electrophoresis Kit obsahuje veškerý potřebný materiál provádění vertikální polyakrilamidové gelové elektroforézy. Experiment provádějí
Nečekané limitace v preanalytické a analytické fázi
Nečekané limitace v preanalytické a analytické fázi Sympozium klinické biochemie FONS 17.9.2018 Lenka Kotačková Ústav lékařské biochemie a laboratorní diagnostiky 1. LF UK a VFN Problematická analýza při
Protokol 04. pšeničná bílkovina. masné výrobky. zkrácená verze
1 Popis vzorku Podle protokolu č. 04 lze vyšetřit vzorky různých druhů masných výrobků na přítomnost pšeničné bílkoviny. 2 Detekční limit vyšetření Přítomnost pšeničné bílkoviny lze spolehlivě prokázat,
Treponema pallidum. Imunoenzymatické soupravy k diagnostice syfilis
Treponema pallidum Imunoenzymatické soupravy k diagnostice ELISA a IMUNOBLOT soupravy jsou určeny ke stanovení specifických protilátek třídy a v lidském séru nebo plazmě ÚVOD Syfilis (lues) je sexuálně
ZÁKLADY OBECNÉ A KLINICKÉ BIOCHEMIE
ZÁKLADY OBECNÉ A KLINICKÉ BIOCHEMIE 2004 Vyšetření likvoru Kateřina Mrázová kapitola ve skriptech - 4.3.6 Co je to likvor Čirá bezbarvá tekutina V subarachnoidální prostoru (mezi arachnoideou a piou mater)
Problematika stanovení monoklonálního imunoglobulinu u nemocných s AL amyloidózou
Klin. Biochem. Metab., 23 (44), 2015, No. 2, p. 37 41. Problematika stanovení monoklonálního imunoglobulinu u nemocných s AL amyloidózou Pika T. 1, Lochman P. 2, Látalová P. 3, Minařík J. 1, Puščiznová
ANALÝZA MARKERŮ OXIDAČNÍHO POŠKOZENÍ DNA, PROTEINŮ A LIPIDŮ PO IN VITRO APLIKACI LÁTEK NA BUNĚČNÉ KULTURY HEL a A549
ANALÝZA MARKERŮ OXIDAČNÍHO POŠKOZENÍ DNA, PROTEINŮ A LIPIDŮ PO IN VITRO APLIKACI LÁTEK NA BUNĚČNÉ KULTURY HEL a A549 O B S A H 1. Aplikace testovaných látek na buněčné kultury 2. Oxidační poškození DNA
Precipitační a aglutinační reakce
Základy imunologických metod: Precipitační a aglutinační reakce Ústav imunologie 2.LF UK a FN Motol Metody, ve kterých se používají protilátky Neznačený antigen/protilátka Precipitace Aglutinace Značený
IMUNOANALÝZA elektroforetické separační metody. 3. ročník Klinická biologie a chemie
IMUNOANALÝZA elektroforetické separační metody 3. ročník Klinická biologie a chemie Princip elektroforézy I. Separační metoda využívající různé pohyblivosti různých iontů (složek směsi) ve stejnosměrném
UNIVERZITA PARDUBICE FAKULTA CHEMICKO-TECHNOLOGICKÁ DISERTAČNÍ PRÁCE
UNIVERZITA PARDUBICE FAKULTA CHEMICKO-TECHNOLOGICKÁ DISERTAČNÍ PRÁCE 2009 Ing. David Kahoun UNIVERZITA PARDUBICE FAKULTA CHEMICKO-TECHNOLOGICKÁ ANALÝZA BIOLOGICKY AKTIVNÍCH LÁTEK V MEDOVINÁCH METODOU HPLC
Typizace amyloidóz pomocí laserové mikrodisekce a hmotnostní spektrometrie
Typizace amyloidóz pomocí laserové mikrodisekce a hmotnostní spektrometrie Dušan Holub Laboratoř experimentální medicíny, Ústav molekulární a translační medicíny Lékařské fakulty Univerzity Palackého v
Monoklonální imunoglobuliny (paraproteiny). Tichý M. ÚKBD LF UK a FN Hradec Králové
Monoklonální imunoglobuliny (paraproteiny). Tichý M. ÚKBD LF UK a FN Hradec Králové MG (paraproteinémie) Heterogenní skupina onemocnění charakterizovaná proliferací jednoho nebo vzácněji i více klonů
Stanovení párů těžkých/lehkých řetězců imunoglobulinu u nemocných s nově diagnostikovanou Waldenströmovou makroglobulinémií
Klin. Biochem. Metab., 23 (44), 2015, No. 2, p. 42 47. Stanovení párů těžkých/lehkých řetězců imunoglobulinu u nemocných s nově diagnostikovanou Waldenströmovou makroglobulinémií Pika T. 1, Lochman P.
laboratorní technologie
14 Laboratorní diagnostika mnohočetného myelomu a dalších monoklonálních gamapatií ve spolupráci OKB a III. interní kliniky Fakultní nemocnice Olomouc P. Lochman, T. Pika Mnohočetný myelom a příbuzné monoklonální
VÝSKYT PROTILÁTEK TŘÍDY IgM PO VAKCINACI PROTI VIROVÉ HEPATITIDĚ A
VÝSKYT PROTILÁTEK TŘÍDY IgM PO VAKCINACI PROTI VIROVÉ HEPATITIDĚ A Ing. František Štumr, Ph.D., RNDr. Stanislava Fabiánová, Ing. Barbara Štumrová, MUDr. Zuzana Kala Grofová PharmDr. Jiří Skalický, Ph.D.
Doporučení k vyšetřování mozkomíšního moku
Doporučení k vyšetřování mozkomíšního moku Klin. Biochem. Metab., 25 (46), 2017, No. 1, p. 43 47. Mrázová K., Zeman D., Bořecká K., Ženková J., Brož P., Mareš J., Hanzalová J., Král V., Krbková L. Česká
MASTABLOT BORRELIA. Western Blot pro detekci IgG / IgM protilátek proti Boreliím ze séra a plazmy. Návod na použití
ABLOT BORRELIA Western Blot pro detekci IgG / IgM protilátek proti Boreliím ze séra a plazmy Pouze pro in vitro diagnostiku Návod na použití Test Kód Kit pro ABLOT BORRELIA IgG 665101 8 testů ABLOT BORRELIA
Porovnání různých elektroforetických systémů v laboratorní diagnostice monoklonálních gamapatií
Klin. Biochem. Metab., 26 (47), 2018, No. 2, p. 82 86. Porovnání různých elektroforetických systémů v laboratorní diagnostice monoklonálních gamapatií Kušnierová P. 1,2, Zeman D. 1,2, Faruzelová I. 1,
ČASOMIL 2009. Kontrolní cyklus SEKK- revmatoidní artritidy. Revmatologický ústav, Praha
Kontrolní cyklus SEKK- Diferenciální diagnostika revmatoidní artritidy Ivana Půtová, Jiří Vencovský Revmatologický ústav, Praha SEKK (RF) Stanovení RF Nefelometrické, turbidimetrické RF screening (ELISA)
Bakteriální bioluminiscenční test. Stanovení účinnosti čištění odpadních vod pomocí bakteriálního bioluminiscenčního testu
Bakteriální bioluminiscenční test Stanovení účinnosti čištění odpadních vod pomocí bakteriálního bioluminiscenčního testu BBTT Cíl: Stanovit účinek odpadních vod na bakterie Vibrio fischeri. Principem
Interpretace sérologických nálezů v diagnostice herpetických virů. K.Roubalová
Interpretace sérologických nálezů v diagnostice herpetických virů K.Roubalová Specifické vlastnosti herpetických virů ovlivňují protilátkovou odpověď Latence a celoživotní nosičství Schopnost reaktivace,
Objednací číslo Určení Třída IgG Substrát Formát EI G Parainfluenza viry typu 1. Ag-potažené mikrotitrační jamky
Protilátky proti virům parainfluenzy 1 (IgG) Návod na použití ELISA testu Objednací číslo Určení Třída IgG Substrát Formát EI 2721-9601 G Parainfluenza viry typu 1 IgG Ag-potažené mikrotitrační jamky 96
CSF IZOELEKTRICKÁ FOKUSACE PRO Microgel a Interlab G26
CSF IZOELEKTRICKÁ FOKUSACE PRO Microgel a Interlab G26 Kit č.: SRE 622K se SCE632M Účel použití Souprava Interlab CSF Isoelectric Focusing Kit je určena pro identifikaci oligoklonálních pásů v párových
Verifikace sérologických testů v imunologických laboratořích ISO 15189 5.5 Postupy vyšetření
Verifikace sérologických testů v imunologických laboratořích ISO 15189 5.5 Postupy vyšetření Andrea Vinciková Centrum imunologie a mikrobiologie Zdravotní ústav se sídlem v Ústí nad Labem Validace Ověřování,
Volba vybraných kardiologických markerů v laboratoři
MEZINÁRODNÍ CENTRUM KLINICKÉHO VÝZKUMU TVOŘÍME BUDOUCNOST MEDICÍNY Volba vybraných kardiologických markerů v laboratoři V. Soška FONS 2016 Pardubice 12.09.2016 Lipidy - základní parametry Celk-ch. Tg LDL-ch.
IMUNOELEKTROFORETICKÉ METODY
IMUNOELEKTROFORETICKÉ METODY Imunoelektroforetické metody kombinace metod elektroforetických + imunodifúzních gel: agarozový (1-2 %) agarový gel pufry: 0,025 M ph 8-9 veronalový borátový Tris-barbitalový
KULOVÝ STEREOTEPLOMĚR NOVÝ přístroj pro měření a hodnocení NEROVNOMĚRNÉ TEPELNÉ ZÁTĚŽE
české pracovní lékařství číslo 1 28 Původní práce SUMMARy KULOVÝ STEREOTEPLOMĚR NOVÝ přístroj pro měření a hodnocení NEROVNOMĚRNÉ TEPELNÉ ZÁTĚŽE globe STEREOTHERMOMETER A NEW DEVICE FOR measurement and
IMUNOCHEMICKÉ METODY
IMUNOCHMICKÉ MTODY Antigeny Protilátky Imunochemické metody Kvantitativní imunoprecipitační křivka Imunoprecipitační metody Imunoanalýza Využití imunochemických metod v rychlé diagnostice Praktické úlohy
Likvorologická diagnostikamultidisciplinární
Likvorologická diagnostikamultidisciplinární přístup XI. Sympozium pro laboratorní a klinické aspekty likvorologie, neuroimunologie a analýzy extravaskulárních tekutin MUDr. Ondřej Sobek, CSc., Prof. MUDr.
Uni- and multi-dimensional parametric tests for comparison of sample results
Uni- and multi-dimensional parametric tests for comparison of sample results Jedno- a více-rozměrné parametrické testy k porovnání výsledků Prof. RNDr. Milan Meloun, DrSc. Katedra analytické chemie, Universita
Sérologická diagnostika chřipky možnosti a diagnostická úskalí
Sérologická diagnostika chřipky možnosti a diagnostická úskalí Martina Havlíčková, Radka Limberková, Pavla Růžičková, Helena Jiřincová NRL pro chřipku, Státní zdravotní ústav K historii vyšetřování sér
Zavedení nového přístroje v hematologické laboratoři
Doporučení laboratorní sekce České hematologické společnosti ČLS JEP Zpracoval: S. Vytisková, J. Juráňová, I. Malíková Recenzent: - Schváleno Laboratorní sekcí ČHS ČLS JEP: 9.3.2017 Schváleno výborem ČHS
Nadační fond IMPULS a Sekce klinické neuroimunologie a likvorologie ČNS ČLS JEP 16. JEDLIČKOVY DNY
PROGRAM Nadační fond IMPULS a Sekce klinické neuroimunologie a likvorologie ČNS ČLS JEP připravují 16. JEDLIČKOVY DNY které se budou konat ve dnech 31. 5. - 1. 6. 2013 na děkanátu 1. LF UK v Praze, Kateřinská
5. BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ PŘI POUŽITÍ A MANIPULACI
N-Histofine Simple Stain AP (M) Univerzální imuno-alkalická fosfatáza polymer, anti-myší N-Histofine imunohistochemické barvicí reagens Skladovat při 2-8 C 1. ÚVOD Firma Nichirei vyvinula jedinečný imunohistochemický
THE ASSOCIATION OF SERUM BILIRUBIN AND PROMOTER VARIATIONS IN UGT1A1 WITH ATHEROSCLEROSIS
THE ASSOCIATION OF SERUM BILIRUBIN AND PROMOTER VARIATIONS IN UGT1A1 WITH ATHEROSCLEROSIS Vítek L 1,2, Jiráskov sková A 1, Šmídová H 1, Dostálov lová G 3, Bělohlávek J 3, Kadlčkov ková L, Linhart,, A 3
Stanovení autoprotilátek proti TSH receptoru
Stanovení autoprotilátek proti TSH receptoru Fejfárková Z., Pikner R. Oddělení klinických laboratoří, Klatovská nemocnice a.s., Klatovy, pikner@nemkt.cz Stanovení autoprotilátek proti TSH receptoru (anti
Roman Hájek. Zbytkové nádorové onemocnění. Mikulov 5.září, 2015
Roman Hájek Zbytkové nádorové onemocnění Mikulov 5.září, 2015 Zbytkové nádorové onemocnění 1. Minimal residual disease (MRD) Proč lékaře zbytkové nádorové onemocnění stále více zajímá? Protože se zásadně
Vizualizace DNA ETHIDIUM BROMID. fluorescenční barva interkalační činidlo. do gelu do pufru barvení po elfu SYBR GREEN
ETHIDIUM BROMID fluorescenční barva interkalační činidlo do gelu do pufru barvení po elfu Vizualizace DNA SYBR GREEN Barvení proteinů Coommassie Brilliant Blue Coomassie Blue x barvení stříbrem Porovnání
Vybrané imunochemické metody
ÚSTAV LÉKAŘSKÉ BIOCHEMIE A LABORATORNÍ DIAGNOSTIKY 1. LF UK Vybrané imunochemické metody Praktické cvičení z lékařské biochemie Všeobecné lékařství Lenka Fialová 2013 Úloha 1 Imunoprecipitační křivka lidského
Vyšetření hevylite přispělo k odhalení nemoci z těžkých řetězců
Vyšetření hevylite přispělo k odhalení nemoci z těžkých řetězců Karel Kalla, OKB Nemocnice Pelhřimov, p.o. Petr Kessler, OHT Nemocnice Pelhřimov, p.o. Petr Šebek, Binding Site, CZ anamnéza Žena, r.narození
DEMEDITEC Bordetella pertussis IgA ELISA
DEMEDITEC Bordetella pertussis IgA ELISA Kat. č. DEBPT02 Návod k použití soupravy VÝROBCE: Demeditec Diagnostics GmbH Lise-Meitner-Straße 2 D-24145 Kiel (Germany), tel: +49 (0)431/71922-0, fax. +49 (0)431/71922-55,
Likvorová diferenciální diagnostika serozních zánětů
Algoritmus likvorologického vyšetření- nejen u Lymeské boreliozy Ondřej Sobek, Pavel Adam, Lenka Hajduková Laboratoř pro likvorologii a neuroimunologii Topelex s.r.o., referenční pracoviště SEKK pro ČR
Evropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti ELEKTROMIGRAČNÍ METODY
Evropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti ELEKTROMIGRAČNÍ METODY ELEKTROFORÉZA K čemu to je? kritérium čistoty preparátu stanovení molekulové hmotnosti makromolekul stanovení izoelektrického
Základy imunologických metod: interakce antigen-protilátka využití v laboratorních metodách
Základy imunologických metod: interakce antigen-protilátka využití v laboratorních metodách Obecné principy reakce antigenprotilátka 1929 Kendall a Heidelberg Precipitační reakce Oblast nadbytku protilátky
Změna typu paraproteinu po transplantační léčbě mnohočetného myelomu
Změna typu paraproteinu po transplantační léčbě mnohočetného myelomu Maisnar V., Tichý M., Smolej L., Kmoníček M., Žák P., Jebavý L., Palička V. a Malý J. II. interní klinika OKH a ÚKIA, FN a LF UK Hradec
Rapid-VIDITEST FOB+Tf
Rapid-VIDITEST FOB+Tf (Jednokrokový kazetový test pro detekci hemoglobinu a transferrinu ve stolici) Návod k použití soupravy Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II 365, Vestec, 252 42 Jesenice u
VOLNÉ ŘETĚZCE IMUNOGLOBULINU V SÉRU
Oddělení laboratorní medicíny Nemocnice Šternberk Jívavská 20, 78516, Sternberk, Czech Republic Zelená linka 800800265 Tel +420585087388 Fax +420585087312 www.nemstbk.cz/olm olm@nemstbk.cz ----------------------------------------------
Jana Bednářová. Oddělení klinické mikrobiologické FN Brno
Aktuální klinická a laboratorní kritéria pro diagnostiku neuroborreliózy Jana Bednářová Oddělení klinické mikrobiologické FN Brno European Journal of Neurology 2010, 17: : 8 16 EFNS guidelines on the diagnosis
VOLNÁ VAZEBNÁ KAPACITA Fe 300
NÁVOD K POUŽITÍ VOLNÁ VAZEBNÁ KAPACITA Fe 300 KATALOGOVÉ ČÍSLO 107 POUŽITÍ Souprava Volná vazebná kapacita železa 300 se používá ke stanovení volné vazebné kapacity železa v krevním séru na automatických
Standardizace laboratorních parametrů u mnohočetného myelomu
Standardizace laboratorních parametrů u mnohočetného myelomu Tichý M., Fridecký B., Vávrová J., Maisnar V. Ústav klinické biochemie a diagnostiky LF UK, Hradec Králové II. interní klinika FN, Hradec Králové
IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE CYTOMEGALOVIROVÉ INFEKCE
INFEKČNÍ SÉROLOGIE Virologie IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE CYTOMEGALOVIROVÉ INFEKCE Cytomegalovirus ELISA soupravy jsou určeny ke stanovení specifických protilátek třídy IgA, IgG a IgM v lidském
Immunoglobulin G (Turbidimetric) Imunoglobulín G (turbidimetrický) (IGGT)
Immunoglobulin G (Turbidimetric) Imunoglobulín G (turbidimetrický) () Informace pro objednání COBAS INTEGRA 100 Tests Kat. č. 20766631 322 Vyznačuje analyzátory, na kterých lze sadu cobas c Immunoglobulin
ZARDĚNKY IgG. ELISA test na stanovení protilátek IgG proti viru zarděnek v lidském séru. Balení Kat.č. : 51208 96 testů kompletní souprava
ZARDĚNKY IgG ELISA test na stanovení protilátek IgG proti viru zarděnek v lidském séru Balení Kat.č. : 5108 96 testů kompletní souprava Účel použití ZARDĚNKY IgG ELISA test je určen pro detekci protilátek
Proteiny krevní plazmy SFST - 194
Plazmatické proteiny Proteiny krevní plazmy SFST - 194 zahrnují proteiny krevní plazmy a intersticiální tekutiny Vladimíra Kvasnicová Distribuce v tělních tekutinách protein M r (x 10 3 ) intravaskulárně
Dodává: GALI spol. s r.o., Ke Stadionu 179, Semily tel fax
Dodává: GALI spol. s r.o., Ke Stadionu 179, Semily 513 01 tel. 481 689 050 fax. 481 689 051 info@gali.cz www.gali.cz IMMUVIEW S. PNEUMONIAE AND L. PNEUMOPHILA URINARY ANTIGEN TEST Kombinovaný průtokový
MEZILABORATORNÍ POROVNÁNÍ stanovení hla znaků asociovaných s chorobami 2016 II. KOLO ALELY VÁZANÉ S CELIAKIÍ
stanovení hla znaků asociovaných s chorobami 6 II. KOLO Organizátor: Národní referenční laboratoř pro DNA diagnostiku Adresa: U Nemocnice, 8 Praha Zodpovědná osoba: Ing. Milena Vraná e-mail: milena.vrana@uhkt.cz
CYTOLOGIE TĚLNÍCH TEKUTIN V KOMPLEXNÍM POJETÍ
CYTOLOGIE TĚLNÍCH TEKUTIN V KOMPLEXNÍM POJETÍ Ondřej Sobek Laboratoř pro likvorologii, neuroimunologii, patologii a speciální diagnostiku Topelex s.r.o. Praha LIKVOR jako prototyp extravaskulární tělní
laboratorní technologie
Analyzátor Flexor a reagencie Lachema L. Šprongl V našich laboratořích jsou předchůdci automatického biochemického analyzátoru Flexor známi pod různými názvy. Nejznámější je asi název Selectra. Výrobcem
SDS polyakrylamidová gelová elektroforéza (SDS PAGE)
SDS polyakrylamidová gelová elektroforéza (SDS PAGE) Princip SDS polyakrylamidová gelová elektroforéza slouží k separaci proteinů na základě jejich velikosti (molekulové hmotnosti). Zahřátím vzorku za
ProGastrin-Releasing Peptide (ProGRP) u nemocných s malobuněčným karcinomem plic
ProGastrin-Releasing Peptide (ProGRP) u nemocných s malobuněčným karcinomem plic FONS Symposium klinické biochemie Pardubice, 23.9. 25.9.202 M. Tomíšková, J. Skřičková, I. Klabenešová, M. Dastych 2 Klinika
Současný algoritmus likvorologického vyšetření
Současný algoritmus likvorologického vyšetření MUDr. Ondřej Sobek, CSc(1), RNDr. Ing. Petr Kelbich(1,2), MUDr. Martina Koudelková (1), MUDr. Jiřina Lukášková(1), MUDr. Lenka Hajduková(1,3) MUDr. Zuzana
Biochemická laboratoř
Biochemická laboratoř školní rok 2013/14 Ing. Jarmila Krotká 3. LF UK, Klinická biochemie, bakalářské studium Hlavní úkol biochemické laboratoře Na základě požadavku lékaře vydat co nejdříve správný výsledek
THE SPECIFIC CONUDUCTIVITY OF THE STALLION EJAKULATE AND SEMEN PLASMA ELEKTRICKÁ VODIVOST EJAKULÁTU A SEMENNÉ PLAZMY HŘEBCŮ
THE SPECIFIC CONUDUCTIVITY OF THE STALLION EJAKULATE AND SEMEN PLASMA ELEKTRICKÁ VODIVOST EJAKULÁTU A SEMENNÉ PLAZMY HŘEBCŮ Mamica O., Máchal L., Křivánek I. Agronomická fakulta Mendelovy zemědělské a
Antinukleární protilátky (ANA) Protilátky proti extrahovatelným nukleárním antigenům (ENA)
Antinukleární protilátky (ANA) Protilátky proti extrahovatelným nukleárním antigenům (ENA) Imunoenzymatické soupravy k diagnostice systémových autoimunitních onemocnění ELISA a IMUNOBLOT soupravy jsou
Posouzení obtížnosti výkladového textu učebnic přírodopisu pro 7. ročník ZŠ pomocí dvou metod
Posouzení obtížnosti výkladového tetu učebnic přírodopisu pro 7. ročník ZŠ pomocí dvou metod Souhrn Libuše Hrabí Katedra přírodopisu a pěstitelství PdF UP Tento článek obsahuje poznatky o porovnání náročnosti
LANDFILL LEACHATE PURIFICATION USING MEMBRANE SEPARATION METHODS ČIŠTĚNÍ PRŮSAKOVÝCH VOD ZE SKLÁDEK METODAMI MEMBRÁNOVÉ SEPARACE
LANDFILL LEACHATE PURIFICATION USING MEMBRANE SEPARATION METHODS ČIŠTĚNÍ PRŮSAKOVÝCH VOD ZE SKLÁDEK METODAMI MEMBRÁNOVÉ SEPARACE Pavel Kocurek, Martin Kubal Vysoká škola chemicko-technologická v Praze,
Přínos vyšetření klonality plazmocytů u monoklonálních gamapatií pomocí polychromatické průtokové cytometrie
Přínos vyšetření klonality plazmocytů u monoklonálních gamapatií pomocí polychromatické průtokové cytometrie Autor: 1 Mgr. Lucie Říhová, Ph.D. Recenzent: 2 prof. MUDr. Roman Hájek, CSc. 1 Oddělení klinické
Laboratorní prùkaz monoklonálních imunoglobulinù
Pøehledný referát Laboratorní prùkaz monoklonálních imunoglobulinù M. Tichý 1, V. Maisnar 2 1 Ústav klinické biochemie a diagnostiky Lékařské fakulty UK a FN Hradec Králové, přednosta prof. MUDr. Vladimír
Vliv různých léčivých přípravků u pacientů s mnohočetným myelomem na laboratorní vyšetření
Kušnierová P. 1,2, Ploticová V. 1,2 1 Oddělení klinické biochemie, Ústav laboratorní diagnostiky, FN Ostrava 2 Katedra biomedicínských oborů, Lékařská fakulta, Ostravská univerzita Vliv různých léčivých
Klinicko-laboratorní aspekty biklonální gamapatie nejistého významu - BGUS
Klin. Biochem. Metab., 21 (42), 2013, No. 2, p. 83 87. Klinicko-laboratorní aspekty biklonální gamapatie nejistého významu - BGUS Pika T. 1, Lochman P. 2, Maisnar V. 3, Tichý M. 4, Minařík J. 1, Hájek
LÉKAŘSKÁ VYŠETŘENÍ A LABORATORNÍ TESTY
LÉKAŘSKÁ VYŠETŘENÍ A LABORATORNÍ TESTY Pokud čtete tento text, pravděpodobně jste v kontaktu s odborníkem na léčbu mnohočetného myelomu. Diagnóza mnohočetného myelomu je stanovena pomocí četných laboratorních
IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE INFEKCE HELICOBACTER PYLORI
INFEKČNÍ SÉROLOGIE Bakteriologie IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE INFEKCE HELICOBACTER PYLORI Helicobacter pylori ELISA a IMUNOBLOT soupravy jsou určeny ke stanovení specifických protilátek třídy
Air Quality Improvement Plans 2019 update Analytical part. Ondřej Vlček, Jana Ďoubalová, Zdeňka Chromcová, Hana Škáchová
Air Quality Improvement Plans 2019 update Analytical part Ondřej Vlček, Jana Ďoubalová, Zdeňka Chromcová, Hana Škáchová vlcek@chmi.cz Task specification by MoE: What were the reasons of limit exceedances