Rapid-VIDITEST Legionella Jednokrokový kazetový test pro detekci Legionella pneumophila ze vzorku moči Návod k použití soupravy Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II 365, Vestec, 252 42 Jesenice u Prahy, Tel: 261 090 565, Fax: 261 090 566, E-mail: objednavky@vidia.cz, Web: www.vidia.cz POUŽITÍ: Rapid-VIDITEST Legionella je jednokrokový barevný imunochromatografický test pro kvalitativní stanovení antigenu Legionella pneumophila sérotyp 1. Test je určen ke stanovení ve vzorku moči u pacientů se symptomy pneumónie. Test je určen pro diagnostiku pravděpodobné infekce legionelou (diagnostika legionářské nemoci) způsobenou bakterií Legionella pneumophila sérotyp 1 v souhře s kultivací a jinými metodami. ÚVOD: Legionářská nemoc je vážná forma pneumonie, která je v 10-15 % smrtelná. Příznaky jsou podobné chřipkovému onemocnění, následuje suchý kašel a často rozvoj pneumonie. Přibližně u 30% infikovaných se objevují průjmy a zvracení a u zhruba 50 % mohou být příznaky zmatenosti. Inkubační doba se obvykle pohybuje mezi 2-10 dny, s typickým nástupem příznaků nemoci mezi 3. - 6. dnem od infekce. Legionářská nemoc se může objevit jako dva či více případů v souvislosti s předchozí místně i časově omezenou expozici jedinému zdroji nákazy, nebo jako série na sobě nezávislých případů v oblastech endemického výskytu Legionelly, anebo jako sporadicky se objevující případy bez zjevné časové a místní souvislosti. K propuknutí infekce dříve docházelo opakovaně v budovách, jako jsou hotely a nemocnice. Kazetový test Legionella umožňuje včasnou diagnostiku Legionella pneumophila sérotyp 1 detekcí specifického solubilního antigenu v moči pacientů. Antigen se v moči objevuje již třetí den po nástupu příznaků. Test je rychlý, výsledky poskytuje během 15 minut, je vhodný pro detekci v časném i pozdějším stadiu nemoci. PRINCIP: Rapid-VIDITEST Legionella je jednokrokový barevný imunochromatografický test pro detekci solubilního antigenu Legionella sérotyp 1 v lidské moči. Testovací zóna obsahuje protilátky proti Legionella sérotyp 1 navázané na nitrocelulózové membráně. Protilátky v kontrolní zóně jsou navázány na stejné membráně, ale v jiném proužku. Protilátky proti Legionella sérotyp 1 konjugované s barevnými mikrokuličkami jsou předsušené na inertní podložce. Během testu vzorek reaguje s konjugátem, který je předsušený v místě aplikace vzorku. Směs se pak pohybuje směrem nahoru po membráně pomocí kapilárního efektu. Jak vzorek putuje membránou, barevné částice se pohybují. V případě pozitivního výsledku na specifické 1
protilátky bude na membráně zachycená barevná linka konjugátu. Konjugované protilátky nevyvázané v testovací zóně se dále pohybují po membráně k imobilizovaným protilátkám v kontrolní zóně a vychytávají se vytvářejíce kontrolní proužek. Pozitivní výsledek lze odečíst během 10-15 min. i dříve, záleží na koncentraci antigenu ve vzorku. Negativní výsledek je odečítán za 15 minut a udává, že antigen Legionelly séroskupiny 1 nebyl zjištěn v daném vzorku moči. Test vyhodnocujeme na základě přítomnosti nebo nepřítomnosti barevných proužků. Při pozitivním výsledku bude proužek v testované i v kontrolní zóně, zatím co v případě negativního výsledku bude proužek pouze v kontrolní zóně. Pokud se v kontrolní zóně proužek neobjeví, test je považován za neplatný. OBSAH SOUPRAVY: - Testovací kazety - Návod k použití - Pozitivní kontrola: L. pneumophila pozitivní stěr (inaktivovaný), lahvička s kontrolním roztokem (+) a testovací zkumavka - Negativní kontrola: L. pneumophila negativní stěr, lahvička s kontrolním roztokem (-) a testovací zkumavka POTŘEBNÝ MATERIÁL NEDODÁVANÝ SE SOUPRAVOU: - Nádobka na odběr vzorku - Jednorázové rukavice - Stopky SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ: Vzorky moči by měly být odebírány do standardních nádob a skladovány při pokojové teplotě (15-30 C), pokud budou testovány do 24 hodin od odběru. Alternativně je možné vzorky skladovat při +2 až +8 C pro testování do 14 dnů nebo při -10 až -20 C pro skladování na delší dobu. Jako konzervační činidlo lze použít kyselinu boritou. Pokud je to nutné, měly by být vzorky moči dodávány v prosáknutí odolných nádobách při teplotě +2 až +8 C nebo zmrzlé. Všechny vzorky vytemperovat před testováním na pokojovou teplotu. PRACOVNÍ POSTUP: Postup pro vzorky pacientů Neotvírejte balení Rapid-VIDITEST Legionella test před tím, než vzorky dosáhnou pokojové teploty. 1. Pro každý vzorek použijte zvláštní zkumavku. 2. Test vyndejte z balení těsně před použitím. Pro každý vzorek použijte nový test. 3. Test položte na rovný povrch. Používejte pro každý vzorek zvláštní kapátko a testovací kazetu. Nakapejte přesně 4 kapky (100 μl) vzorky moči do oválného okénka označeného šipkou, zapněte stopky. 4. Odečítejte výsledky po 15 minutách. Přidejte 4 kapky (vzorek moči) S 2
Postup pro pozitivní a negativní kontroly: Vyndejte Rapid-VIDITEST Legionella testy těsně před použitím. Postupujte takto: 1. Držte zkumavku pro pozitivní kontrolu ve vertikální poloze a pomalu přidejte 10 kapek kontrolního roztoku+ do testovací zkumavky. 2. Bez prodlení vyndejte tampon s kontrolním stěrem ze sáčku a vložte ho do testovací zkumavky, míchejte 1 minutu. Tampon vyjměte, vytlačte z tampónu co nejvíce tekutiny vytažením přes stlačením zúžené hrdlo plastové zkumavky. Zlikvidujte tampon. 3. Vyndejte Rapid-VIDITEST Legionella test z balení těsně před použitím. 4. Položte test na rovný povrch. Používejte pro každý vzorek zvláštní kapátko a testovací kazetu. Odeberte přesně 4 kapky (100 μl) z testovací zkumavky a naneste do oválného okénka označené šipkou. Zapněte stopky. 5. Odečítejte výsledky po 15 minutách. Opakujte postup také s negativní kontrolou (tamponem) a místo kontrolního (+) roztoku použijte kontrolní (-) roztok. 1. Přidejte 10 kapek kontrolního roztoku (+) nebo (-) 2. Vložte tampon a extrahujte tekutinu Přidejte 4 kapky T C Počkejte 15 minut INTERPRETACE VÝSLEDKŮ: POZITIVNÍ NEGATIVNÍ NEPLATNÝ POZITIVNÍ: Pozitivní vzorek nebo pozitivní kontrolní stěr vykazují načervenalý proužek přes centrální okénko ve výsledkové části (výsledková zóna je označena písmenkem T) a 3
v kontrolní části (kontrolní zóna je označena písmenkem C). To znamená, že antigen byl ve vzorku zjištěn. Doporučení: Předpokládaná pozitivita na antigen L. pneumophila serotyp 1 v moči může znamenat probíhající nebo prodělanou infekci. NEGATIVNÍ: Negativní vzorek nebo kontrola vykazují pouze jeden červený proužek v kontrolní zóně, označené písmenkem C. Kontrolní proužek znamená, že test byl správně proveden, ale antigen L. pneumophila serotyp 1 nebyl ve vzorku zjištěn. Doporučení: Předpokládaná negativita na antigen L. pneumophila serotyp 1 v moči znamená neprobíhající infekci. Infekci Legionellou nelze vyloučit, protože příčinou onemocnění mohou být i jiné sérotypy, antigen nemusí být v raném stadiu infekce přítomen v moči anebo koncentrace antigenu v moči může být pod detekčním limitem testu. NEPLATNÝ: Test je neplatný, pokud se neobjeví žádné proužky a/nebo pokud jsou pouze v testovací a nikoliv v kontrolní zóně. Neplatný test by měl být opakován. Pokud problém přetrvává, test přestaňte používat a kontaktujte svého distributora. KONTROLA KVALITY: Denní kontrola kvality: Rapid-VIDITEST Legionella obsahuje kontrolní složky. Doporučení od výrobce je používat a dokumentovat výsledky kontrol pro každý test. Vnitřní pozitivní kontrola: Červenou linku v kontrolní zóně lze považovat za interní pozitivní procedurální kontrolu. Pokud došlo k dostatečnému kapilárnímu vzlínání, bude tento proužek vždy zobrazen. Vnitřní negativní kontrola: Barevný odstín na pozadí ve výsledkovém okně znamená negativní kontrolu pozadí. Barva pozadí v okně by měla být bílá až světle růžová za 10-15 minut a neměla by svojí intenzitou bránit ve vyhodnocení testu. Vnější pozitivní a negativní kontrola: Podle správné laboratorní praxe je doporučeno používat vnější pozitivní a negativní kontroly k ověření funkčnosti reagencií a řádného provedení testu. Pozitivní a negativní kontrolní stěry (tampóny) jsou poskytovány spolu s testem. Lze také použít jako kontroly vzorky moče, jednoduše je zpracovávejte jako pacientské vzorky. Pozitivní a negativní kontrola by měla být použita vždy, když je otevřen nový testovací kit a také tehdy, když to vyžadují vnitřní laboratorní předpisy. OMEZENÍ TESTU: 1. Rapid-VIDITEST Legionella je validován pouze pro vzorky moči. Jiné vzorky (např. plazma, sérum nebo jiné tělní tekutiny), které mohou obsahovat antigen Legionelly, nemohou být na tomto testu hodnoceny. Test nemůže být používán na vzorky z prostředí (tj. pitná voda). 2. Tento test nedetekuje infekce způsobené jinými sérotypy L. pneumophila nebo jinými druhy Legionelly. Negativní výsledek nevylučuje infekci L. pneumophila sérotyp 1. U suspektních pneumonií je k detekci jiných infekčních agens než L. pneumophila doporučená kultivace, kultivace je také vhodná k průkazu L. pneumophila v případě negativního testu z moče. 3. Choroby způsobené Legionellou nemohou být diagnostikovány na základě klinického a radiologického vyšetření. Neexistuje jediný uspokojivý test na Legionářskou nemoc. 4
Proto by měli být použity souběžně s klinickým vyšetřením výsledky kultivace, sérologie a metody detekující antigen, aby byla zajištěna co nejpřesnější diagnóza. 4. Vylučování antigenu do moči se muže u jednotlivých pacientů lišit. Vylučování antigenu může začít již 3. den po nástupu příznaků a může poté přetrvávat až 1 rok. Pozitivní výsledky se mohou objevit v důsledku probíhající i v minulosti prodělané infekce, proto výsledek nepovažujeme za potvrzení infekce bez dalších diagnózu podporujících výsledků vyšetření. Rapid-VIDITEST Legionella nebyl prověřován na vzorcích od pacientů se zvýšenou diurézou (na léčbě diuretiky). Rapid-VIDITEST Legionella byl testován pouze na hospitalizovaných pacientech. Nebyl testován na ambulantně ošetřovaných pacientech. OČEKÁVANÉ HODNOTY: Tato choroba se vyskytuje v epidemické i v endemické formě, ojedinělé případy jsou těžko odlišitelné od jiných respiračních infekcí s podobnými klinickými příznaky. V USA se objevuje odhadem 25 000 až 100 000 infekcí za rok. Smrtnost se pohybuje v rozmezí mezi 25% až 40%. Pokud je choroba diagnostikována rychle a včas se zahájí příslušná antimikrobiální léčba, mohla by být tato čísla nižší. TECHNICKÉ PARAMETRY TESTU: Citlivost a specificita Rapid-VIDITEST Legionella byl vysoce specifický (>99%) a také citlivý (>99%) ve srovnání s výsledky testu Binax NOW Legionella Urinary Antigen Test. Rapid-VIDITEST Legionella Card byl použit k hodnocení 64 zmrazených vzorků moči. 17 z těchto vzorků bylo pozitivní na infekci Legionella pneumophila seroskupiny 1, jak prokázal test Binax NOW Legionella Urinary Antigen Test. Celková shoda Rapid-VIDITEST Legionella s Binax NOW Legionella Urinary Antigen Test byla >99%. Citlivost a specificita byla >99%. SKLADOVÁNÍ A STABILITA: Skladujte v originálním obalu, buď chlazené nebo při pokojové teplotě (2-30ºC). Test je stabilní do data expirace uvedeného na obalu. Nepoužívejte test po uplynutí data expirace. BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ: - Pouze pro odborné in vitro diagnostické použití - Nepoužívejte komponenty po uplynutí data expirace. - Nemíchejte s komponenty z jiných šarží testu. - Roztoky použité pro přípravu kontrolních tamponů byly inaktivovány standardními metodami. Se vzorky manipulujte jako s potencionálně infekčním materiálem, kontrolní tampony a roztoky likvidujte pomocí standardních postupů a metod. - Odpad likvidujte jako biologický infekční odpad v souladu s příslušnými předpisy REFERENCE: 1. Roig, J., X. Aquiler, J. Ruiz, et. al. Comparative study of Legionella pneumophila and other nosocomial-acquired pneumoniaes. Chest. 1991;99:344-50. 2. Berdal, B.P., C.E. Farshy, and J.C. Feeley. Detection of Legionella pneumophila antigen in urine by enzyme-linked immunospecific assay. J. Clin. Microbiol. 1979;9:575-578. 3. White A., et al. Rapad diagnosis of Legionnaires disease. Trans Am Clin. Climatol. Assoc.l 1982;93:50-62. 5
4. Bibb, W.F., P.M. Arnow, L. Thacker, and R.M. McKinney. Detection of soluble Legionella pneumophila antigens in serum and urine specimens by enzyme-linked immunosorbent assay with monoclonal and polyclonal antibodies. J. Clin. Microbiol. 1984;20:478-482. 5. Tang, P.W., and S. Toma. Broad-spectrum enzyme-linked immunosorbent assay for detection of Legionella soluble antigens. J. Clin. Microbiol. 1986;24:556-558. 6. Kohler, R.B., W.C. Winn, Jr., and L.J. Wheat. Onset and duration of urinary antigen excretion in Legionnaires disease. J. Clin. Microbiol. 1984;20:605-607. POUŽITÉ SYMBOLY: Určeno pro diagnostiku in vitro Datum expirace Číslo šarže (LOT) Výrobce Poslední revize: 06/2013 6