Rapid-VIDITEST FOB (Jednokrokový blisterový test pro detekci hemoglobinu ve stolici) Návod k použití soupravy Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II 365, Vestec, 252 42 Jesenice u Prahy, Tel: 261 090 565, Fax: 261 090 566, E-mail: objednavky@vidia.cz, Web: www.vidia.cz POUŽITÍ: Rapid-VIDITEST FOB je jednokrokový imunochromatografický (neinvazivní) test pro kvalitativní stanovení lidského hemoglobinu (Hb) ve stolici k detekci gastrointestinálního krvácení, které může být indikátorem kolorektálního karcinomu, karcinomu žaludku nebo peptických vředů. Jen pro profesionální in vitro diagnostiku. Pouze pro laboratorní použití. ÚVOD: Kolorektální karcinom je rakovina, která se vyskytuje v tlustém střevě nebo konečníku, postihuje muže i ženy všech rasových a etnických skupin a nejčastěji se vyskytuje u lidí ve věku 50 let a více. U mužů je kolorektální karcinom třetím nejčastějším typem rakoviny po rakovině prostaty a plic. U žen je kolorektální karcinom třetím nejčastějším typem rakoviny po rakovině prsu a plic. Krev ve stolici může být jediným příznakem rakoviny tlustého střeva, ale ne vždy je přítomnost krve ve stolici způsobena rakovinou. Mezi další onemocnění, která mohou způsobit krvácení do stolice, patří: hemoroidy, anální trhliny, polypy tlustého střeva, peptické vředy, ulcerózní kolitidy, refluxní choroba jícnu (GERD), Crohnova nemoc, používání aspirinu nebo nesteroidních protizánětlivých léků (NSAID). PRINCIP TESTU: Rapid-VIDITEST FOB je kvalitativní imunochromatografický test pro stanovení lidského hemoglobinu ve stolici. Na testovacích zónách membrány jsou navázány monoklonální protilátky proti lidskému hemoglobinu. V průběhu testování vzorek reaguje s barevným konjugátem, který byl imobilizován na membráně. Směs pak kapilárním efektem vzlíná vzhůru po membráně. V případě pozitivního výsledku specifické protilátky přítomné na membráně reagují se směsí konjugátu a vytvoří barevnou linku. Zelená linka se objeví vždy v kontrolní linii a její přítomnost ověřuje, že se použil dostatečný objem vzorku, že došlo ke správné vzlínavosti vzorku a slouží jako vnitřní kontrola reagencií. OBSAH SOUPRAVY: - testovací blistery - odběrové zkumavky s ředicím roztokem - návod k použití 1
POTŘEBNÝ MATERIÁL NEDODÁVANÝ SE SOUPRAVOU: - nádoba na sběr vzorků - jednorázové rukavice - stopky - testovací zkumavky nebo lahvičky SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ: Odeberte dostatečné množství stolice (1-2 g nebo ml kapalného vzorku). Vzorky stolice odebírejte do čistých a suchých odběrových nádob (bez konzervačních látek nebo transportních médií). Vzorky lze uchovávat 7 dní před testováním v chladničce při 2-8 C. V případě delšího skladování (maximálně 6 měsíců) by se měly vzorky uchovávat zmrazené při -20 C. V tomto případě nechte vzorek před použitím zcela roztát a vytemperovat na laboratorní teplotu. Příprava vzorků Použijte novou odběrovou zkumavku pro každý vzorek. Odšroubujte víčko odběrové zkumavky a ponořením aplikační tyčinky na víčku odběrové zkumavky čtyřikrát do různých částí vzorky naberete vzorku stolice. Zašroubujte víčko odběrové zkumavky s ředicím roztokem a vzorkem stolice. Odběrovou zkumavku se vzorkem lze skladovat 7 dní při 2-8 C. Za účelem dobré homogenizace vzorku zkumavku důkladně promíchejte. V případě, že je vzorek tekutý, promíchejte vzorek kapátkem a odeberte 15 µl do odběrové zkumavky s ředícím roztokem. Naberte malé množství vzorku Promíchejte vzorek s pufrem Odlomte špičku zkumavky PRACOVNÍ POSTUP: Před testováním nechte testovací blister, vzorek stolice a ředící roztok vytemperovat na laboratorní teplotu (15-30 C). Neotvírejte obal, dokud nejste připraveni provést test. Existují dvě možnosti provedení testu: A. Použití blisteru jako kazetového testu 1. Odstřihněte z plata jeden zatavený blister a tahem za nezatavený konec horní hliníkové fólie jej otevřete. Blister nevyndávejte z fólie a použijte ho co možná nejdříve. 2. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré homogenizace vzorku. Položte blister na vodorovnou podložku a označte jej. 3. Na bílý konec blisteru naneste přesně 5 kapek roztoku z testovací zkumavky. Zapněte stopky. 4. 10 minut po aplikaci vzorku odečtěte výsledek. 2
B. Ponořením blisteru do zkumavky 1. Odstřihněte z plata jeden zatavený blister a tahem za nezatavený konec horní hliníkové fólie jej otevřete. 2. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré homogenizace vzorku. Přidejte 10 kapek roztoku se vzorkem do označené lahvičky a nechte testovací proužek stát vertikálně v lahvičce. Neponořujte blister hlouběji než po hranici označenou šipkami. Nechte působit 1-3 minuty a umístěte blister na rovný povrch. Spusťte stopky. Výsledek odečtěte za 10 minut. A) Jako kazetový test Aplikujte 5 kapek B) Ponořením Přidejte 10 kapek Ponořte strip Vyčkejte 10 minut Vzorek INTERPRETACE VÝSLEDKŮ: POZITIVNÍ NEGATIVNÍ NEPLATNÝ NEPLATNÝ Pozitivní: V centrálním okénku se objeví dvě linky, červená linka ve výsledkové zóně (T), a zelená linka v kontrolní zóně (C). Negativní: Objeví se pouze zelená linka v kontrolní zóně (C). Neplatný: Test je neplatný, pokud se v kontrolní zóně neobjeví zelená linka bez ohledu na to, zda se ve výsledkové zóně objeví červená linka. Pozn.: Nejčastějšími příčinami selhání testu jsou: nedostatečná koncentrace vzorku, nesprávný pracovní postup nebo poškození reagencií. Zkontrolujte pracovní postup a opakujte test s novou testovací sadou. Pokud potíže přetrvávají, kontaktujte svého dodavatele. Poznámka k interpretaci výsledku: Intenzita červené barevné linky v místě označeném (T) závisí na koncentraci hemoglobinu ve vzorku. Nicméně tímto kvalitativním testem nelze kvantitativně stanovit množství ani rychlost nárůstu hemoglobinu. 3
PLATNOST TESTU: Kontrolní body pracovního postupu jsou zahrnuty v testu: - Přítomnost zelené linky v kontrolní zóně (C) potvrzuje dostatečnou koncentraci vzorku a správný pracovní postup. OMEZENÍ TESTU: 1. Rapid-VIDITEST FOB blister slouží jen k určení přítomnosti lidského hemoglobinu ve vzorku (kvalitativní detekci) a měl by být použit pouze pro detekci hemoglobinu ve vzorcích stolice. Testem nelze stanovit kvantitativní hodnotu ani nárůst koncentrace hemoglobinu. 2. Nadbytečné množství vzorku stolice může vést k nesprávnému výsledku (objevují se hnědé linky). Nařeďte vzorek ředícím roztokem a test zopakujte. 3. Některé vzorky stolice mohou snížit intenzitu kontrolní linky. 4. Vzorky by neměly být odebírány u žen v období menstruace, u pacientů s krvácivými hemoroidy, u pacientů s nálezem krve v moči a u lidí s narušenou peristaltikou (namáhavé vyprazdňování). 5. Pozitivní výsledek potvrzuje přítomnost lidského hemoglobinu ve stolici, nicméně může být pozitivní i v jiných případech, jako jsou hemoroidy, anální trhliny, polypy tlustého střeva, peptické vředy, ulcerózní kolitidy, refluxní choroba jícnu (GERD), Crohnova nemoc. Pozitivní výsledek by měl vést k dalším vyšetřením ke zjištění zdroje krvácení a příčiny výskytu krve ve stolici. 6. Negativní výsledek nevylučuje krvácení, protože polypy a kolorektální karcinom může způsobovat pouze intermitentní krvácení anebo nemusí krvácet během určitých stádií onemocnění. Krev se může vyskytovat ve stolici nerovnoměrně (může chybět právě jen v odebraném vzorku). 7. Tento test může být méně citlivý pro detekci horního gastrointestinálního krvácení, protože se krev při průchodu gastrointestinálním traktem degraduje. OČEKÁVANÉ VÝSLEDKY: Kolorektální karcinom je rakovina, která se vyskytuje v tlustém střevě nebo konečníku, postihuje muže i ženy všech rasových a etnických skupin a nejčastěji se vyskytuje u lidí ve věku 50 let a více. U mužů je kolorektální karcinom třetím nejčastějším typem rakoviny po rakovině prostaty a plic. U žen je kolorektální karcinom třetím nejčastějším typem rakoviny po rakovině prsu a plic. ÚČINNOST TESTU: Hodnota cut-off Cut-off hodnota testu je 75 ng/ml lidského hemoglobinu. Citlivost a specifita Bylo provedeno vyhodnocení testu Rapid-VIDITEST FOB. Rapid-VIDITEST FOB byl srovnán s komerčně dostupnými testy (ACTIM FECAL BLOOD, Medix Biochemica). Citlivost a specifita byla >99%. Křížová reaktivita Bylo provedeno vyhodnocení křížové reaktivity testu Rapid-VIDITEST FOB. Nebyla nalezena žádná křížová reaktivita s dalšími markery příležitostně přítomnými ve stolici: - bovinní a prasečí hemoglobin - lidský calprotectin - bovinní a prasečí transferrin - lidský lactoferrin - bovinní lactoferrin - lidský transferrin 4
Před testováním není nutné dodržovat žádnou speciální dietu. Test neinterferuje s jídlem (vitamín C, brokolice, mrkev..). SKLADOVÁNÍ A STABILITA: Skladujte v originálním uzavřeném obalu buď chlazené nebo při pokojové teplotě (2-30 C). Test je stabilní do data exspirace uvedeného na obalu. Test musí zůstat v uzavřeném obalu až do doby použití. Nezmrazujte. BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ: - pouze pro in vitro diagnostiku - nepoužívejte po uplynutí expirační doby - Test by měl zůstat v uzavřeném obalu až do doby použití. - Nepoužívejte test, pokud je sáček poškozen. - Dodržujte správnou laboratorní praxi, používejte ochranný oděv, ochranné rukavice, nejezte, nepijte a nekuřte během provádění testu. - Všechny vzorky by měly být považovány za potenciálně nebezpečné a mělo by s nimi být zacházeno stejným způsobem jako s infekčním materiálem. - Odpad likvidujte jako biologický infekční odpad v souladu s příslušnými předpisy. - Test musí být proveden do 2 hodin od otevření zapečetěných sáčků. REFERENCE: WALKER C.W., Fecal occult blood tests reduce colorectal cancer mortality., Am Fam Physician. 2007 Jun 1;75(11):1652-3. POUŽITÉ SYMBOLY: Určeno pro diagnostiku in vitro Datum expirace Teplotní omezení Číslo šarže (LOT) Výrobce Poslední revize tohoto návodu: 02/2015 5