400/800 Methaqualone Metaqualon () Informace pro objednání COBAS INTEGRA 200 testů Kat. č. 20753610 122 Vyznačuje analyzátory, na kterých lze sadu cobas c Abuscreen OnLine Methaqualone Systémové-ID 07 5361 0 použít Preciset DAT Plus I 6 5 ml Kat. č. 03304671 190 CAL 1-6 C.f.a.s. DAT Qualitative Plus 6 5 ml Kat. č. 03304698 190 C.f.a.s. DAT Qualitative Plus Clinical 3 5 ml Kat. č. 04590856 190 Control Set DAT I Kat. č. 03312950 190 PreciPos DAT Set I PreciNeg DAT Set I Control Set DAT Clinical Kat. č. 04500873 190 PreciPos DAT Clinical PreciNeg DAT Clinical Systémové informace COBAS INTEGRA Abuscreen OnLine Methaqualone Test S, test-id 0-633 pro semikvantitativní stanovení Test MTQQL, test-id 0-133 pro kvalitativní stanovení Test MTQQC, test-id 0-533 pro kvalitativní stanovení; použitím C.f.a.s. DAT Qualitative Plus Clinical Použití Methaqualone () je in vitro diagnostický test pro semikvantitativní a kvalitativní detekci metaqualonu a jeho metabolitů v lidské moči při koncentraci cut-off na systémech COBAS INTEGRA. Mohou být získány semikvantitativní výsledky testu, které umožňují laboratořím určit využití stanovení jako součást programu kontroly kvality. Semikvantitativní stanovení je určeno pro měření vhodného naředění vzorku pro potvrzení konfirmační metody, jako je plynová chromatografie / hmotnostní spektrometrie (GC/MS). Metaqualon může být použit jen jako předběžný analytický výsledek. Pro získání potvrzeného analytického výsledku musí být použita specifičtější alternativní chemická metoda. Preferovanou konfirmační metodou je GC/MS. 1 Výsledky testů uživání drog, zvláště jsou-li předběžně pozitivní, je třeba hodnotit s klinickým zřetelem a odborným úsudkem. Souhrn Metaqualon je derivát chinazolinu, který byl syntetizován v roce 1951 a klinické účinky jako seditativa a hypnotika byly zjištěny v roce 1956. 2 Původně byl zaveden jako nenávykové, nebarbiturátové hypnotikum v roce 1965, případy jak fyzické, tak i psychologické závislosti byly hlášeny krátce poté. Brzy si získal popularitu jako pouliční afrodiziakum a od roku 1972 se rozšířil mezi vysokoškolské studenty (300 až 450 mg metaqualonu s vínem). Dokázal tak navodit stav euforie a pocity nezničitelnosti. 3 Metaqualon je podobný jako jiná hypnotika se sedativními účinky, často potlačuje zábrany a snižuje sexuální výkonnost. Metaqualon byl stažen z amerického trhu v roce 1984 pro narůstající zneužívání, ale ilegální produkce zůstala. Symptomy předávkování metaqulonem se objevují v podobě gastrointestinálních obtíží, ospalosti, ataxie, brnění, poruch řeči a svalové hyperaktivity, až po vnitřní krvácení, křeče a koma. 4 Metaqualon je užíván perorálně a je v gastrointestinálním traktu rychle absorbován. Je vysoce lipofiliní a proniká do celého těla. Metaqualon se váže z 70 až 80 % na tkáňové proteiny a má pomalý poločas eliminace, který je u předávkování prolongován. 5 Po 72 hodinách je vyloučeno jen 40 až 50 % přijaté dávky. 6 Odbourávání probíhá v játrech monohydroxylací v mikrozomálním enzymovém systému za tvorby teplotně nestabilního N-oxidu. 7 Mezi 5 hlavními hydroxy- metabolity převažuje 4 -hydroxy-metaqualon. Metabolity se objevují v moči jako glukuronidy a jen <1 % drogy prochází do moči v nezměněné podobě. 7,8 Množství vylučovaných stop metabolitů se liší podle objemu moči, individuálního metabolismu a tolerance drogy. 7,8,9 Princip testu Kinetická interakce mikročástic v roztoku (KIMS), 10,11 měřená změnou intenzity procházejícího světla. V případě absence látky ve vzorku se volné protilátky váží na látku vázanou na mikročástici, a vytváří agregáty. Jak probíhá agregace ve vzorku, který neobsahuje drogu, absorbance roste. Jestliže vzorek moči obsahuje dotyčnou látku, probíhá kompetice s částicemi s navázaným derivátem látky o volné protilátky. Protilátka vázaná na drogu ve vzorku není již dostupná pro podporu agregace částic a následný vznik struktury částic je inhibován. Přítomnost drogy ve vzorku úměrně snižuje nárůst absorbance vůči koncentraci drogy ve vzorku. Obsah drogy ve vzorku je určen poměrem ke známé hodnotě cut-off koncentrace drogy. Reagencie - pracovní roztoky Diluent vzorku (SD) Reagencie s protilátkou (AB) Reagencie s mikročásticemi (MP) Pufr obsahující stabilizátor a 0.09% azid sodný. Protilátka proti metaqualonu (polyklonální kozí) v pufru a 0.09% azid sodný. Mikročástice s konjugovaným derivátem metaqualonu v pufru a 0.09% azid sodný. SD je v pozici A, AB je v pozici B a MP je v pozici C. 2012-03, V 7 CS 1 / 5
Stanovení drog Pipetovací sekvence R1 = AB R2 = SD R3 (SR) = MP R1 = SD R2 = AB R3 (SR) = MP Bezpečnostní opatření a varování Věnujte pozornost všem varováním a bezpečnostním opatřením uvedeným v části 1 / Úvod této Příručky metod. Zacházení s reagenciemi Všechny nové (nepropíchnuté) cobas c packy musí být míchány 1 minutu použitím mixéru kazet před umístěním na palubu přístroje. Všechny cobas c packy, které jsou již v užívání, musí být na počátku každého týdne (jednou týdně) promíchány stejným způsobem. Reagencie je automaticky promíchána 1 minutu po propíchnutí cobas c packu a půl minuty při sekvenci Begin of Day. Uskladnění a stabilita Doba skladování při 2-8 C Čtěte datum exspirace na štítku cobas c packu V přístroji při použití při 10-15 C 83 dní V analyzátoru při použití při 8 C 56 dní Doba stability reagencie v analyzátoru při použití začíná od momentu napíchnutí cobas c packu. Reagencie nemrazit. Reagencie, které byly zamraženy, je nutné odstranit. Odběr vzorků a příprava Pouze níže uvedené vzorky byly testovány a jsou přijatelné: Moč: Vzorky moče odebírejte do čistých skleněných či plastových nádobek. Vzorek čerstvé moče nepotřebuje zvláštní předúpravu nebo zacházení, ale napipetované vzorky by měly být ochráněny před kontaminací. ph vzorků by mělo být ve fyziologickém rozmezí 5 až 8. Aditiva a konzervans nejsou potřebné. Doporučujeme uchovávat vzorky při teplotě 2-8 C a zpracovat je do 5 dnů od odběru. 12 Při delším skladování doporučujeme vzorky zamrazit. Velmi zakalené vzorky před analýzou zcentrifugujte. Příměs či naředění vzorků může způsobit chybný výsledek. Při podezření, že byl vzorek znehodnocen, proveďte nový odběr. Testování validity vzorku je vyžadováno jen u vzorků odebíraných podle Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs. 13 Varování: Ředění vzorků by mělo být použito jen při jejich přípravě pro GC/MS, ale jinak není vhodné. Postup ředění, je-li použit, by měl být validován. Aplikace pro moč COBAS INTEGRA 400/400 plus definice testu Semikvantitativní Kvalitativní Způsob měření Absorbance Absorbance Způsob výpočtu abs. Koncový bod Koncový bod Způsob reakce R1-R2-S-SR R1-R2-S-SR Směr reakce Nárůst Nárůst Start reakce SR SR Vlnová délka A 552 nm 552 nm Rozsah testu 0-600 ng/ml 0-2000 s následným ředěním 0-6000 ng/ml Faktor postdiluce 10 doporučeno a Ne Výpočet první/posl. 49/60 49/60 Jednotka ng/ml a) Pro použití při výpočtu koncentrace při přípravě analýzy GC/MS. Pipetovací parametry Diluent (H 2 O) R1 53 µl 8 µl R2 50 µl 15 µl Vzorek 3 µl 6 µl SR 15 µl 8 µl Celkový objem 158 µl COBAS INTEGRA 800 definice testu Semikvantitativní Kvalitativní Způsob měření Absorbance Absorbance Způsob výpočtu abs. Koncový bod Koncový bod Způsob reakce R1-R2-S-SR R1-R2-S-SR Směr reakce Nárůst Nárůst Start reakce SR SR Vlnová délka A 552 nm 552 nm Rozsah testu 0-600 ng/ml 0-2000 s následným ředěním 0-6000 ng/ml Faktor postdiluce 10 doporučeno b Ne Výpočet první/posl. 44/78 44/78 Jednotka ng/ml b) Pro použití při výpočtu koncentrace při přípravě analýzy GC/MS. Pipetovací parametry Diluent (H 2 O) R1 50 µl 7 µl R2 53 µl 7 µl Vzorek 4 µl 4 µl SR 15 µl 7 µl Celkový objem 147 µl Dodávaný materiál Reagencie jsou uvedeny v části "Reagencie - pracovní roztoky". Stanovení Optimálního využití stanovení dosáhnete, budete-li dodržovat pokyny, uvedené v dokumentaci pro analyzátory. Instrukce, specifické pro jednotlivé analyzátory, vyhledejte v uživatelské příručce. 2 / 5 2012-03, V 7 CS
Stanovení drog Kalibrace Kalibrátory Semikvantitativní aplikace S, 0-633 Preciset DAT Plus I calibrators, CAL 1-4 0, 150, 300, 600 ng/ml metaqualonu (DATS9, syst.-id 07 6798 0) Kvalitativní aplikace MTQQL, 0-133 Preciset DAT Plus I calibrators, CAL 1 0 ng/ml nebo deionizovaná voda a Preciset DAT Plus I calibrators, CAL 3 c nebo C.f.a.s. DAT Qualitative Plus (DATQ1, systémové-id 07 6744 1) MTQQC, 0-533 Preciset DAT Plus I nebo II d, CAL 1 0 ng/ml nebo deionizovaná voda a C.f.a.s. DAT Qualitative Plus Clinical (DATQ5, systémové-id 07 6880 4) Pro kvalitativní aplikace je určená hodnota cut-off 1000. c) Nepoužívejte Preciset DAT Plus 1, CAL 3, kalibrujete-li Opiates 300/2000 kvalitativním stanovením 2000 ng/ml (test OP2QL, test-id 0-410). d) Preciset DAT Plus II, CAL 1, nejsou obecně vyžadovány pro kalibraci metaqualonu, mohou být ovšem použity jako alternativní hladina 0 ng/ml pro DATQ5, systémové-id 07 6880 4. Typ kalibrace Semikvantitativní aplikace Lineární interpolace Kvalitativní aplikace Lineární regrese Opakování kalibrace Doporučen duplikát Kalibrační interval COBAS INTEGRA 400/400 plus: Každou šarži, každých 12 týdnů a jestliže to vyžaduje proces kontroly kvality COBAS INTEGRA 800: Každou šarži, každé 3 týdny a jestliže to vyžaduje proces kontroly kvality Kalibrační křivka je vytvářena použitím kalibrátorů. Kalibrátory musí být umístěny podle hodnot koncentrace od nejvyšší po nejnižší do CAL/QC stojánku. Vytvořená křivka je uložena v paměti systému COBAS INTEGRA a podle potřeby znovu vyvolána. Návaznost: Tato metoda byla standardizována dle primární referenční metody (GC/MS). Kontrola kvality Kontrola kvality Pořadí kontrol Kontrola po kalibraci Control Set DAT I PreciPos DAT Set I (DAT1P, systémové-id 07 6753 0) PreciNeg DAT Set I (DAT1N, systémové ID 07 6754 9) nebo Control Set DAT Clinical PreciPos DAT Clinical (DATCP, systémové-id 07 6879 0) PreciNeg DAT Clinical (DATCN, systémové-id 07 6878 2) Určeno uživatelem Doporučena Ke kontrole kvality použijte kontrolní materiály uvedené v části "Informace pro objednání". Navíc lze použít i jiný vhodný kontrolní materiál. Koncentrace drog v Control Set DAT I a Clinical byly verifikovány GC/MS. Kontrolní intervaly a meze by měly být uzpůsobeny pro každou laboratoř dle individuálních požadavků. Naměřené hodnoty by se měly pohybovat v definovaných mezích. Každá laboratoř by měla mít vypracovaný postup pro případ, že hodnoty kontrol překročí definované meze. Sledujte příslušná vládní nařízení a lokální směrnice kontroly kvality. Výsledky Systémy COBAS INTEGRA vydávají výsledky s následujícím označením: Semikvantitativní hodnocení výsledků Označení COBAS INTEGRA Rozmezí hodnot Bez označení Negativní < <TEST RNG Negativní <0 ng/ml >TEST RNG Pozitivní >600 ng/ml POS 300 Pozitivní Výše uvedená rozmezí hodnot jsou založena na hladině cut-off. Kvalitativní hodnocení výsledků Označení COBAS INTEGRA Rozmezí hodnot Bez označení Negativní <1000 <TEST RNG Negativní <0 >TEST RNG Pozitivní >2000 POS 1000 Pozitivní 1000 Uvedená rozmezí jsou založena na přiřazení hodnoty 1000 ke cut-off. Semikvantitativní hodnocení výsledků Semikvantitativní předběžně pozitivní výsledky by měly být použity v laboratořích pro měření vhodného naředění vzorku potvrzením konfirmační metody, jako je GC/MS. Rovněž umožňuje laboratoři zřídit kontrolní postupy a stanovit využití kontroly. Upozornění: Při použití funkce následného ředění (ředění 1:10) musí mít ředěný výsledek hodnotu alespoň poloviny hodnoty cut-off analytu x10, aby se zaručilo, že vzorek nebyl příliš naředěn. Pokud klesne ředěný výsledek pod polovinu hodnoty cut-off analytu x10, opakujte vzorek s menším naředěním. Ředění, která mají výsledky v blízkosti cut-off, poskytují nejpřesnější stanovení. Chcete-li určit koncentraci předběžně pozitivního vzorku, vynásobte výsledek odpovídajícím faktorem ředění. Ředění by mělo být použito jen při přípravě hodnot pro GC/MS. Omezení - interference Informace o látkách testovaných tímto stanovením jsou uvedeny v kapitole "Specifické údaje o využití" tohoto dokumentu. Možné však je, že mohou interferovat i jiné komponenty nebo faktory, které mohou negativně ovlivnit výsledek (např. technická chyba, nebo chyba postupu). Předběžně pozitivní výsledek dosažený touto metodou indikuje přítomnost metaqualonu a/nebo jeho metabolitů v moči. Nestanoví však míru intoxikace. POTŘEBNÝ KROK Programování speciálního mytí: Použití speciálních mycích cyklů je nutné při zpracovávání určitých kombinací testů na analyzátorech COBAS INTEGRA. Pro další pokyny čtěte Návody metod, Úvod, Extra mycí cykly. Tam, kde je to vyžadováno, musí být před vydáním výsledků provedeno programování speciálního mytí/zamezení přenosu mezi vzorky (carry-over). 2012-03, V 7 CS 3 / 5
Stanovení drog Specifické údaje o využití Reprezentativní údaje o využití pro analyzátory COBAS INTEGRA jsou uvedeny níže. Výsledky, získané v různých laboratořích, se mohou lišit. Preciznost Preciznost byla stanovena podle interního protokolu zpracováním sérií kontrol metaqualonu v 20 replikátech, jednou denně po dobu 5 dní a na 2 analyzátorech. Následující výsledky byly získány analyzátorem COBAS INTEGRA 700: Semikvantitativní preciznost Opakovatelnost e Průměr SD VK ng/ml ng/ml % Level 1 155 9.0 5.8 Level 2 253 7.9 3.1 Level 3 319 11.7 3.7 Level 4 408 13.3 3.3 Analytická specifičnost Specifičnost stanovení COBAS INTEGRA Methaqualone se strukturálně podobnými sloučeninami byla zjištěna vytvořením inhibiční křivky pro jednu každou uvedenou sloučeninu a určením přibližného množství každé sloučeniny, která by byla ekvivalentní reaktivitě metaqualonu při hodnotě cut-off. Sloučenina Přibl. hodnota ng/ml, odpovídající metaqualonu Přibl. % křížové reaktivity Mekloqualon 211 142 4 -hydroxy-metaqualon 266 113 3 -hydroxy-metaqualon 352 85 2 -hydroxymetyl-metaqualon 492 61 2-hydroxymetyl-metaqualon 625 48 6-hydroxy-metaqualon 1560 19 Mezilehlá preciznost f Průměr SD VK ng/ml ng/ml % Level 1 155 11.1 7.2 Level 2 253 10.1 4.0 Level 3 319 17.1 5.4 Level 4 408 17.3 4.2 e) opakovatelnost = preciznost v sérii f) mezilehlá preciznost= celková preciznost/preciznost mezi sériemi/preciznost mezi dny Kvalitativní preciznost cut-off (x) Počet testovaných Správný výsledek Hladina spolehlivosti 0.8x 200 200 >95% negativní odečet 1.2x 200 200 >95% pozitivní odečet Spodní detekční limit testu 38 ng/ml Spodní detekční limit představuje nejnižší měřitelnou hladinu analytu, kterou lze odlišit od nuly. Je vypočítána jako hodnota ležící 2 standardní odchylky nad nulovým kalibrátorem (nulový kalibrátor + 2 SD, opakovatelnost, n = 20). Správnost 100 vzorků moče, získaných v klinických laboratořích, kde byly stanoveny jako negativní v panelu látek jinou technologií, bylo hodnoceno na metaqualon na systému COBAS INTEGRA. Všech 100 klinických vzorků bylo negativních vůči cut-off. 62 vzorků moče, získaných v klinických laboratořích, kde byly stanoveny jako předběžně pozitivní komerčně dostupnou enzymovou imunosoupravou a potvrzeny jako pozitivní metodou GC/MS na metaqualon, bylo rovněž hodnoceno na analyzátoru COBAS INTEGRA 700. Všech 62 vzorků bylo pozitivních stanovením COBAS INTEGRA Methaqualone vůči cut-off. GC/MS + - COBAS INTEGRA 700 + 62 0-0 0 4 / 5 2012-03, V 7 CS
Stanovení drog Interference léčiv Následující sloučeniny byly přidány k alikvotům poolované normální lidské moči v koncentraci 100000 ng/ml. Žádná z těchto sloučenin při testování soupravou nevykázala křížovou reaktivitu větší nebo rovnou 0.1 %. Acetaminofen Kys. acetylsalicylová Aminopyrin Amitriptylin Amobarbital d-amfetamin l-amfetamin Ampicilin Kys. askorbová Aspartam Atropin Benzokain Benzoylecgonin (metabolit kokainu) Benzfetamin Butabarbital Kofein Chlornan vápenatý Chlordiazepoxid Chlorochin Chlorfeniramin Chlorpromazin Kokain Kodein Dextromethorfan Diazepam Difenhydramin Difenylhydantoin Dopamin Doxylamin Ecgonin Ecgonin metylester Efedrin d-efedrin l-efedrin Epinefrin Erytromycin Estriol Fenoprofen Furosemid Kys. gentisová Glutetimid Guajakol glyceroléter Hydrochlorotiazid p-hydroxyamfetamin Ibuprofen Imipramin Izoproterenol Ketamin Lidokain LSD MDA MDMA Melanin Meperidin Metadon d-metamfetamin l-metamfetamin Metylfenidat Metyprylon Morfinsulfát Naloxon Naltrexon Naproxen Niacinamid Nordiazepam Noretindron l-norpseudoefedrin Oxazepam Penicilin G Pentobarbital Fencyklidin β-fenethylamin Fenobarbital Fenothiazin Fentermin Fenylbutazon Fenylpropanolamin d-fenylpropanolamin Prokain Promethazin d-propoxyfen d-pseudoefedrin l-pseudoefedrin Quinidin Chinin Sekobarbital Sulindac Tetracyklin Δ 9 THC-9-karboxylová kys. Tetrahydrozolin Trifluoperazin Tyramin Verapamil Odkazy 1. Karch SB, ed. Drug Abuse Handbook. Boca Raton, FL: CRC Press LLC 1998. 2. Baselt RC. Disposition of Toxic Drugs and Chemicals in Man. 7th ed. Foster City, CA: Biomedical Publications 2004. 3. Ager SA. Luding out. N Engl J Med 1972;287(1):51. 4. Abboud RT, Freedman MT, Rogers RM, et al. Methaqualone poisoning with muscular hyperactivity necessitating the use of curare. Chest 1974;65(2):204-205. 5. Nayak RK, Smyth RD, Chamberlain JH, et. al. Methaqualone pharmacokinetics after single and multiple dose administration in man. J Pharmacokinet Biopharm 1974;2(2):107-121. 6. Smyth RD, Lee JK, Polk A, et. al. Bioavailability of methaqualone. J Clin Pharmacol 1973;13(10):391-400. 7. Reynolds CN, Wilson K, Burnett D. Urinary excretion of methaqualone N-oxide in man. Xenobiotica 1976;6(2):113-124. 8. Wilson K, Burnett D, Oram M, et al. The kinetics of urinary excretion of the N-oxide and glucuronides of methaqualone in man. Eur J Drug Metab Pharmacokinet 1981;6(4):289-295. 9. Ericsson O, Danielsson B. Urinary excretion pattern of methaqualone metabolites in man. Drug Metab Dispos 1977;5(6):497-502. 10. Brenner C, Hui R, Passarelli J, et al. Comparison of methaqualone excretion patterns using Abuscreen ONLINE and EMIT II immunoassays and GC/MS. Forensic Sci Int 1996;79(1):31-41. 11. Armbruster DA, Schwarzhoff RH, Pierce BL, et al. Method comparison of EMIT II and ONLINE with RIA for drug screening. J Forensic Sci 1993;38(6):1326-1341. 12. Toxicology and Drug Testing in the Clinical Laboratory; Approved Guideline. 2nd ed. (C52-A2). Clinical and Laboratory Standards Institute 2007;27:33. 13. Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs (Revised Specimen Validity Testing). Fed Regist 2004;69:19643-19673. Tečka se v tomto metodickém listu vždy používá jako desetinný oddělovač k označení hranice mezi celými a desetinnými místy desetinného čísla. Oddělení tisíců se nepoužívá. Významné doplňky nebo změny jsou označeny pruhem podél textu. 2012 Roche Diagnostics Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, D-68305 Mannheim www.roche.com Jakákoliv modifikace přístroje, jak je zde uvedeno, vyžaduje validaci laboratoří. 2012-03, V 7 CS 5 / 5