Rapid-VIDITEST Campylobacter jejuni Blister (Jednokrokový blisterový test pro detekci Campylobacter jejuni ) Návod k použití soupravy Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II č.365, Vestec u Prahy, 252 42 Jesenice, Česká republika, tel: +420 261 090 565, fax +420 261 090 566, web: www.vidia.cz, e-mail: info@vidia.cz POUŽITÍ: Rapid-VIDITEST Campylobacter jejuni Blister je jednokrokový imunochromatografický test pro kvalitativní detekci Campylobacter jejuni (C. jejuni) ve vzorcích stolice, který může být užitečný pro diagnózu kampylobakterióz. ÚVOD: Kampylobakterióza je infekční onemocnění způsobené bakterií rodu Campylobacter. Většina lidí, kteří onemocní kampylobakteriózou, dostane během 2 až 5 dnů po vystavení organismu průjem, křeče, bolesti břicha a horečku. Průjem může být krvavý a může být doprovázen nevolností a zvracením. Onemocnění obvykle trvá jeden týden. U některých nemocných osob se nemusí projevit žádné symptomy. U osob s poruchou imunitního systému se někdy Campylobacter šíří do krevního řečiště a způsobuje závažné, život-ohrožující infekce. PRINCIP TESTU: Rapid-VIDITEST Campylobacter jejuni Blister je kvalitativní imunochromatografický test pro stanovení Campylobacter ve stolici. Na testovacích zónách membrány blisteru jsou navázány monoklonální protilátky proti antigenům C. jejuni. V průběhu testování vzorek reaguje s barevným konjugátem, který byl imobilizovaný na membráně (anti-c. jejuni monoklonální protilátky červená mikrosféra). Směs pak kapilárním efektem vzlíná vzhůru po membráně blisteru. V případě pozitivního výsledku je barevný konjugát zachycen specifickými protilátkami, což se ve výsledkové zóně projeví jako barevná linka. Směs pak vzlíná dále po membráně k imobilizovaným protilátkám v kontrolní zóně, kde se vždy na konci testu objeví zelená linka. Přítomnost zelené linky ověřuje: 1) že se použil dostatečný objem vzorku, 2) že došlo ke správné vzlínavosti vzorku, 3) interní kontrolu reagencií. 1
OBSAH SOUPRAVY: - testovací blister - odběrová zkumavka s aplikační tyčinkou obsahující ředicí roztok pro vzorky - návod k použití - certifikát kontroly balení POTŘEBNÝ MATERIÁL NEDODÁVANÝ SE SOUPRAVOU - nádoba na sběr vzorků - jednorázové rukavice - stopky SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ: Odeberte dostatečné množství stolice (1-2 g nebo ml v případě tekuté stolice). Vzorky odebírejte do čistých a suchých odběrových nádob (bez konzervačních látek nebo transportního média). Vzorky lze uchovávat 1-2 dny před testováním v chladničce při teplotě +2 až +10 C. V případě delšího skladování se musí vzorky uchovávat zmrazené při -18 až -28 C. Cyklus zmrazení a rozmrazení se nedoporučuje opakovat více než třikrát. Před použitím nechte vzorky vytemperovat na laboratorní teplotu a důkladně promíchejte. PRACOVNÍ POSTUP: Před testováním nechte vzorky stolice a odběrové zkumavky s ředicím roztokem vytemperovat na laboratorní teplotu (+15 až +30 C). Neotvírejte sáček, dokud nejste připraveni provést test. Na laboratorní teplotu nechte vytemperovat jen takový počet blisterů, jaký potřebujete k testování. a) Odšroubujte víčko odběrové zkumavky s ředicím roztokem (1). b) Pomocí aplikační tyčinky na víčku odběrové zkumavky odeberte malé množství vzorku stolice (2). Zašroubováním víčka odběrové zkumavky ponoříte aplikační tyčinku do ředicího roztoku. c) Důkladně promíchejte zkumavku za účelem dobré homogenizace vzorku (3). 2
Pro provedení testu můžete zvolit způsob označený A nebo B. A. Aplikace kapky vzorku z odběrové zkumavky na blister 1. Po vytemperování blisteru otevřete obalovou folii v označeném místě. 2. Před použitím vyjměte blister z obalové folie a položte ho na vodorovnou podložku. Nedotýkejte se membrány v místě testovací zóny a zóny pro aplikaci vzorku. 3. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré homogenizace vzorku. Uřízněte nebo ustřihněte konec špičky zkumavky (4). 4. Přidejte 5 kapek naředěného vzorku z odběrové zkumavky na bílý konec blisteru (zóna pro aplikaci vzorku )(5). Začněte stopovat čas. 5. Po 10 minutách odečtěte výsledek. B. Ponořením blisteru do zkumavky 1. Odstřihněte z plata jeden zatavený blister a tahem za nezatavený konec horní hliníkové fólie jej otevřete. 2. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré homogenizace vzorku. Uřízněte nebo ustřihněte konec špičky zkumavky (4). 3. Přeneste 5 kapek vzorku homogenizovaného v ředicím roztoku z odběrové zkumavky do čisté lahvičky nebo zkumavky. Ponořte testovací blister bílým koncem do zkumavky (6). Neponořujte blister hlouběji než po rysku vyznačenou pod bílými šipkami. (zóna pro aplikaci vzorku). 4. Po 10 minutách odečtěte výsledek bez další manipulace s blisterem. 3
INTERPRETACE VÝSLEDKU: Vzorky se aplikují na bílý konec blisteru. Výsledky se odečítají v prostředním bílém okénku. Úsek tohoto okénka blíže k bílému konci blisteru se nazývá výsledková zóna. Úsek okénka dále od bílého konce se nazývá kontrolní zóna. Obr. 7 Kontrolní zóna Výsledková zóna Zelená Červená Červená Zóna pro nanesení vzorku pozitivní negativní neplatný Negativní: V kontrolní zóně C se objeví pouze jedna zelená linka. Výsledková zóna T zůstane čistá (Obr. 7). Pozitivní: Kromě zelené linky v kontrolní zóně C se objeví také červená linka ve výsledkové zóně T (Obr. 7). To může znamenat infekci způsobenou Campylobacter jejuni. Neplatný: Test je neplatný, pokud se v kontrolní zóně C neobjeví zelená linka bez ohledu na přítomnost červené linky ve výsledkové zóně T. Nejčastějšími příčinami selhání testu jsou: nedostatečná koncentrace vzorku, nesprávný pracovní postup nebo poškození reagencií. Zkontrolujte pracovní postup a opakujte test s novou testovací sadou. Pokud potíže přetrvávají, kontaktujte svého dodavatele. Poznámka k interpretaci výsledku: Intenzita červené barevné linky v místě označeném T závisí na koncentraci antigenů ve vzorku. Nicméně tímto testem nelze kvantitativně stanovit množství antigenu ani jeho nárůst v průběhu onemocnění. PLATNOST TESTU: V testu je použit interní standard. Test je platný pouze v případě, když se v kontrolní zóně objeví zelená linka. Zelená linka, která se objevuje v kontrolní zóně je vnitřní kontrolou testu. Potvrzuje dostatečný objem vzorku a správný průběh testu. 4
OČEKÁVANÉ VÝSLEDKY: Campylobacter spp. jsou bakterie, které jsou hlavní příčinou průjmových onemocnění u lidí a jsou celosvětově považovány za hlavní příčinu bakteriálních gastroenteritid. V rozvojových zemích je průjmové onemocnění častěji způsobeno právě těmito bakteriemi než například bakteriemi rodu Salmonella. V rozvojových zemích jsou u dětí do dvou let infekce bakterií Campylobacter hodně frekventované, někdy končí až smrtí. Téměř ve všech rozvojových zemích již několik let neustále roste výskyt lidské kampylobakteriální infekce. Důvody toho jsou neznámé. OMEZENÍ TESTU: 1. Test musí být proveden do 2 hodin po otevření vzduchotěsného obalu blisteru. 2. Nadbytečné množství vzorku stolice může vést k nesprávnému výsledku (objevují se hnědé linky). Vzorek více zřeďte ředicím roztokem a opakujte test. 3. Některé vzorky stolice mohou způsobit snížení intenzity kontrolní zelené linky. 4. Opakované zmrazení a rozmrazení vzorku stolice může vést k nesprávnému výsledku. 5. Test poskytuje pravděpodobnou diagnózu kampylobakteriózy. Potvrzení diagnózy může provést až lékař po zvážení klinického a laboratorního nálezu. ÚČINNOST TESTU: Citlivost a Specifita: Bylo provedeno hodnocení Rapid-VIDITEST Campylobacter jejinu Blister testu. Bylo otestováno 35 vzorků stolice a výsledky byly potvrzeny na soupravě ImmunoCard STAT! CAMPY. Výsledky vykazovaly > 99% shodu v citlivosti i specifitě. Použití myší monoklonální protilátky v Rapid-VIDITEST Cympylobacter jejuni Blister testu zaručuje vysoký stupeň specificity pro detekci těchto bakterií. Protilátky použité k vyhodnocení tohoto testu rozpoznají epitopy přítomné v antigenu, který se nalézá ve vzorku stolice pacienta, stejně dobře jako z bakteriálních kultur in vitro. Toto hodnocení je třeba brát jako předběžné dokud nebudou dostupná další ověřující data. Křížová reaktivita: Ke stanovení křížové reaktivity byl použit Rapid-VIDITEST Campylobacter jejuni Blister. Nebyla nalezena žádná křížová reaktivita s běžnými střevními patogeny, dalšími organismy a látkami občas přítomnými ve stolici (H. pylori, Escherichia coli, Listeria monocytogenes, Salmonella). SKLADOVÁNÍ A STABILITA: Skladujte v originálním obalu při teplotě +2 až +30 C. Test je stabilní do data expirace uvedeného na obalu. Test by měl zůstat v uzavřeném obalu až do doby použití. Nezmrazujte. 5
BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ: - pouze pro in vitro diagnostiku - nepoužívejte po uplynutí expirační doby - test by měl zůstat v uzavřeném obalu až do doby použití - test nepoužívejte jestliže je obal poškozen - během testu nejezte, nepijte a nekuřte, dodržujte Správnou laboratorní praxi, používejte ochranný oděv a jednorázové rukavice - se vzorky manipulujte jako s potenciálně infekčním materiálem - odpad likvidujte jako biologický infekční odpad v souladu s příslušnými předpisy - test musí být proveden do dvou hodin od otevření obalu REFERENCE: 1. Fernández, H. and Farace, M.I.: Manual de Procedimientos Campylobacter. INEI. 2003. 2. Kawatsu, K. et. Al.: Development and Evalution of Immunochromatographic Assay for Simple and Rapid Detection of Campylobacter jejuni and Campylobacter coli in Human Stool Specimens. Journal of Clinical Microbiology, Apr. 2008 Vol. 46, No. 4, p. 1226-1231. POUŽITÉ SYMBOLY: Určeno pro diagnostiku in vitro Datum expirace Číslo šarže (LOT) Výrobce Poslední revize tohoto návodu: 11/2010 6