Rapid-VIDITEST Enterovirus Card (Jednokrokový kazetový test pro detekci enterovirů) Návod k použití soupravy Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II č.365, Vestec u Prahy, 252 42 Jesenice, Česká republika, tel: +420 261 090 565, fax +420 261 090 566, web: www.vidia.cz, e-mail: info@vidia.cz POUŽITÍ: Rapid-VIDITEST Enterovirus Card je jednokrokový imunochromatografický test pro kvalitativní detekci enterovirů ve vzorcích stolice. ÚVOD: Lidské enteroviry se podle biologických vlastností dělí na polioviry, viry coxsackie, echoviry a další enteroviry označeny pořadovým číslem (typy 68-71). Enteroviry patří mezi jednovláknové RNA viry. Enteroviry můžou vyvolat široké spektrum onemocnění u lidí. Všechny enteroviry se přenáší fekálně-orální cestou, ale některé klinické příznaky mohou jít nad rámec gastroenteritidy, pokud se některé viry dostanou krví z trávicího traktu k ostatním cílovým orgánům. Polioviry vyvolávají dětskou obrnu, poliomyelitis anterior acuta. V plně rozvinuté formě vede infekce k postižení CNS a následným trvalým paralýzám. Viry coxsackie jsou spojovány nejenom se vznikem respiračních infekcí a gastroenteritidy, ale také s inzulindependentním diabetem a nemocemi srdce, jako je zánět myokardu nebo perikardu. Echoviry jsou obecně méně infekční než ostatní enteroviry a obyčejně jsou spojovány se vznikem rýmy a jiných respiračních nemocí. Enteroviry označeny pořadovým číslem (typy 68-71) nebyly dosud rozsáhle prozkoumány, zatím byly izolovány u pacientů trpících bronchitidou, hemoragickou konjunktivitidou, meningitidou nebo ochrnutím připomínajícím dětskou obrnu. Rapid-VIDITEST Enterovirus Card umožňuje rychlou detekci enterovirů přímo ze vzorku stolice. PRINCIP TESTU: Rapid-VIDITEST Enterovirus Card je kazetový kvalitativní imunochromatografický test pro detekci VP1 peptidu enteroviru ve stolici. Na testovacích zónách membrány kazety jsou navázány myší monoklonální protilátky proti enterovirovým antigenům. V průběhu testování vzorek reaguje s barevným konjugátem, který byl ponechán vyschnout na membráně v místě aplikace vzorku (anti-vp1 peptid viru protilátka červená latexová mikrosféra). Směs pak kapilárním efektem vzlíná vzhůru po membráně kazety. V případě pozitivního výsledku je barevný konjugát zachycen specifickými protilátkami ve výsledkové zóně, což se projeví jako barevná linka. Směs pak vzlíná dále po membráně k imobilizovaným protilátkám v kontrolní zóně, kde se vždy na konci testu objeví zelená linka. 1
Přítomnost zelené linky ověřuje: 1) že se použil dostatečný objem vzorku, 2) že došlo ke správné vzlínavosti vzorku, 3) slouží jako vnitřní kontrola reagencií. OBSAH SOUPRAVY: - testovací kazety - zkumavky na vzorky obsahující odběrovou tyčinku a ředicí roztok - návod k použití - certifikát kontroly balení POTŘEBNÝ MATERIÁL NEDODÁVANÝ SE SOUPRAVOU - nádoba na sběr vzorků - jednorázové rukavice - stopky SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ: Odeberte odpovídající množství vzorku stolice (1-2 g anebo ml tekutého vzorku) do čistých a suchých odběrových nádob. Test by měl proběhnout co nejdříve po odebrání vzorku stolice, pokud to není možné, lze vzorky uchovávat 1-2 dny před testováním v chladničce (+2 až +4 C). V případě delšího skladování by se měly vzorky uchovávat zmrazené při -20 C, avšak maximálně 1 rok. Více než 3 opakování zmrazení a rozmrazení vzorků se nedoporučují. Před použitím nechte vzorky vytemperovat na laboratorní teplotu a důkladně promíchejte. Zpracování vzorků stolice a) Pro každý vzorek použijte vlastní odběrovou zkumavku. Odšroubujte víčko odběrové zkumavky s ředicím roztokem (1). b) Pomocí aplikační tyčinky na víčku odběrové zkumavky odeberte malé množství vzorku stolice (cca 100mg) (2). Vraťte víčko s tyčinkou do zkumavky, zašroubováním víčka odběrové zkumavky ponoříte aplikační tyčinku do ředicího roztoku. c) Důkladně promíchejte obsah zkumavky za účelem dobré homogenizace vzorku (3). 2
PRACOVNÍ POSTUP: Před testováním nechte kazetu, vzorek stolice a kontroly vytemperovat na laboratorní teplotu (+15 až +30 C). Neotvírejte sáček, dokud nejste připraveni provést test. 1. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré homogenizace vzorku. Uřízněte nebo odstřihněte špičku víčka zkumavky (obr. 4). 2. Těsně před použitím vyjměte kazetu Rapid-VIDITEST Enterovirus Card z obalové folie a položte ji na vodorovnou podložku. Nedotýkejte se membrány v místě testovací zóny a zóny pro aplikaci vzorku. Pro každý vzorek a kontrolu použijte samostatnou odběrovou zkumavku a kazetu. 3. Do okénka označeného šipkou aplikujte z odběrové zkumavky přesně 4 kapky (100 μl) naředěného vzorku (obr. 5). Vyvarujte se aplikace pevných částic stolice. 4. Po 10 minutách odečtěte výsledek. 3
INTERPRETACE VÝSLEDKU: Vzorky se aplikují do oválného okénka označeného S (sample vzorek), výsledky se odečítají v obdélníkovém okénku vprostřed kazety označeném C (kontrolní zóna) a T (výsledková-test zóna). Zelená Červená Červená Negativní Enterovirus pozitivní Neplatný Neplatný Negativní: V kontrolní zóně C se objeví pouze jedna zelená linka. Výsledková zóna T zůstane čistá. Enterovirus pozitivní: Kromě zelené linky v kontrolní zóně C se objeví také červená linka ve výsledkové zóně T. To může znamenat infekci způsobenou enteroviry. Neplatný: Test je neplatný, pokud se v kontrolní zóně C neobjeví zelená linka, a to bez ohledu na přítomnost červené linky ve výsledkové zóně T. Nejčastějšími příčinami selhání testu jsou: nedostatečný objem vzorku, nesprávný pracovní postup nebo zkáza/stárnutí reagencií. Zkontrolujte pracovní postup a zopakujte test s novou testovací sadou. Pokud potíže přetrvávají, kontaktujte svého dodavatele. Poznámka k interpretaci výsledků: Intenzita červené barevné linky v místě označeném T závisí na koncentraci antigenů ve vzorku. Nicméně, tímto testem nelze množství antigenu kvantitativně stanovit a ani hodnotit vzestup nebo pokles koncentrace v průběhu onemocnění. PLATNOST TESTU: V testu je použit interní standard. Test je platný pouze v případě, když se v kontrolní zóně objeví zelená linka. Objevení se zelené linky v kontrolní zóně je vnitřní kontrolou testu a potvrzuje použití dostatečného objemu a správnou techniku provedení testu. 4
OČEKÁVANÉ VÝSLEDKY: Infekce vyvolány enteroviry u lidí jsou častější u dětí než u dospělé populace a nejvyšší výskyt bývá hlášen v létě nebo na začátku podzimu, co souvisí s intenzivnějším kontaktem lidí s vodou během rekreačních aktivit. OMEZENÍ TESTU: 1. Test musí být proveden do 2 hodin po otevření vzduchotěsného obalu kazety. 2. Nadbytečné množství vzorku stolice může vést k nesprávnému výsledku (objevují se hnědé linky). 3. Po měsíci od počátku infekce množství virů ve stolici klesne natolik, že může dojít ke snížení intenzity kontrolní zelené linky. Vzorky stolice by měly být shromažďovány co nejdříve od výskytu symptomů (24 48 hodin). 4. Test poskytuje pravděpodobnou diagnózu infekce vyvolané enteroviry. Potvrzení diagnózy může provést až lékař po zvážení klinického a laboratorního nálezu. 5. V případě, že byl pacient již očkován (např. proti poliovirům), objeví se v testu pozitivní výsledek. ÚČINNOST TESTU: Citlivost a Specifita: Byla provedená předběžná klinická studie pro Rapid-VIDITEST Enterovirus Card, kde bylo otestováno 35 vzorků stolice a výsledky byly porovnány s testy IDEIA Enterovirus assay (Dako) a IMAGEN TM Enterovirus (Oxoid). Z výsledků studie lze konstatovat, že Rapid-VIDITEST Enterovirus Card vykazuje > 99% citlivost a > 99% specifitu. Protilátky použité k sestavení tohoto testu rozpoznávají antigenní epitopy virů, nacházených ve stolici pacientů, ale také antigeny připravené z bakteriálních kultur pěstovaných in vitro. Výsledky předběžné hodnotící studie je třeba brát s opatrností, dokud nebudou dostupná početnější data. Zkřížená reaktivita: Ke stanovení zkřížené reaktivity byl použit Rapid-VIDITEST Enterovirus Card test. Nebyla nalezena žádná zkřížená reaktivita s běžnými střevními viry občasně se vyskytujícími ve stolici (Rotavirus, Adenovirus, Astrovirus, HAV). SKLADOVÁNÍ A STABILITA: Skladujte v originálním obalu při teplotě +2 až +30 C. Test je stabilní do data exspirace uvedeného na obalu. Nezmrazujte. 5
BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ: - pouze pro diagnostiku in vitro - nepoužívejte po uplynutí expirační doby - testovací kazeta by měla zůstat uzavřená ve vzduchotěsném obalu až do doby bezprostředně před provedením testu - nepoužívejte, pokud byl vzduchotěsný obal před použitím poškozen - dodržujte zásady správné laboratorní praxe, chraňte se odpovídajícím laboratorním oděvem, používejte laboratorní rukavice, při práci nejezte, nepijte a nekuřte - se vzorky manipulujte jako s potenciálně infekčním materiálem - odpad likvidujte jako biologický infekční odpad v souladu s příslušnými předpisy - test musí být proveden do 2 hodin po otevření vzduchotěsného obalu REFERENCE: 1. Fong T. et al.: Enteric Viruses of Humans and Animals in Aquatic Environments: Health Risks, Detection, and Potential Water Quality Assessment Tools. Microbiology and Molecular Biology Reviews, June 2005, Vol. 69, No. 2: p. 357-371. 2. Afffi S. et. al.: Isolation and Identification of Non-Polio Enteroviruses from Children in Different Egyptian Governorates. Australian Journal of Basic and Applied Sciences, 2009, Vol. 3, No. 4: p. 3230-3238. POUŽITÉ SYMBOLY: Určeno pro diagnostiku in vitro Datum expirace Číslo šarže (LOT) Výrobce Poslední revize tohoto návodu: 11/2010 6