EU rev. RBC-010510 Pozor: Tento návod k použití je v souladu se směrnicí IVD 98/79/ES a je určen pro zákazníky z členských států Evropské unie. AIA-PACK RBC FOLATE Pro kvantitativní měření folát v červených krvinkách (RBC folát) ve vzorku plné krve (heparin nebo EDTA). NÁZEV A ÚČEL POUŽITÍ AIA-PACK RBC FOLATE je učený pouze pro diagnostické použití in vitro pro kvantitativní měření folátu v červených krvinkách (RBC folát) ve vzorku plné krve (heparin nebo EDTA) na analyzátorech systému TOSOH AIA. SHRNUTÍ A VYSVĚTLENÍ TESTU Folát a kyselina listová (pteroylglutamová kyselina) jsou generické názvy pro skupinu složek a koenzymů, které dodávají jednouhlíkové jednotky v intermediárním metabolismu vedoucímu k biosyntéze DNA. Folát je esenciální látka ve výživě a je možné ho nalézt ve formě polyglutamátu v různých listnatých rostlinách a tkáních orgánů u živočichů. Folát se přeměňuje na monoglutamáty a je vstřebáván ve sliznici jejuna v tenkém střevě. Po konverzi v enterocytu je kyselina listová uvolňována do portální cirkulace. Většina kyseliny listové cirkuluje primárně v lidském séru jako N5-methyltetrahydrofolát. N5-methyltetrahydrofolát je závislý na vitamínu B12 minimálně ve dvou biochemických cestách. Vzhledem k této závislosti je důležité stanovení sérových hladin folátu i vitamínu B12, aby bylo možné určit příčinu jakéhokoliv klinického stavu souvisejícího s deficitem. Deficit folátu nebo vitamínu B12 může způsobit megaloblastickou anémii a neuropatii. Deficit folátu může vzniknout v důsledku mnoha faktorů, které zahrnují neadekvátní dietní příjem, střevní malabsorbci, těhotenství, alkoholismus a různé léky, které zahrnují perorální antikoncepci a antikonvulziva (1-4, 6, 8, and 10). Přestože sérová hladina folátu je spolehlivým testem, kolísá v důsledku dietních změn. Folát v erytrocytech nebo folát v červených krvinkách se nevyčerpává tak rychle jako v séru a je koncentrovanější než v séru. Koncentrace folátu v erytrocytech korelují dobře s jinými indexy nedostatku folátu, jako například morfologie buněk v kostní dřeni a hematologické změny. Z tohoto důvodu je koncentrace folátu v erytrocytu považována za spolehlivý indikátor stavu folátu (5, 7, d 9). PRINCIP STANOVENÍ AIA-PACK RBC FOLATE je kompetitivní enzymatická imunoanalýza prováděná po hemolýze a předošetření vzorku zcela v testovacích kelímcích AIA-PACK RBC FOLATE. Nejprve se proveden hemolýza vzorku, aby bylo dosaženo úplné hemolýzy erytrocytů a dekonjugace na monoglutamát ve vzorku plné krve pomocí hemolyzačních činidel vzorku (obsahujících kyselinu askorbovou). Po hemolýze vzorku se provede předošetření, aby se uvolnil folát z endogenních vazebných proteinů v hemolyzovaném vzorku pomocí činidel pro předošetření (obsahujících hydroxid sodný a dithiothreitol). Folát přítomný v předošetřeném testovaném vzorku soutěží s folátem značeným enzymem o omezený počet vazebných míst na fluoresceinem značeném vazebném proteinu pro hovězí folát, který se pak váže na protilátku anti-fitc (fluorescein isothiokyanát) imobilizovanou na magnetická zrna. Magnetická zrna jsou promytím zbavena nenavázaného enzymem značeného folátu a pak jsou inkubována s fluorogenním substrátem 4-methylumbeliferylfosfátem (4MUP). Množství enzymem značeného folátu, 1-15 který se váže na zrna, je nepřímo úměrné koncentraci folátu v testovaném vzorku. Je vynesena standardní křivka a neznámé koncentrace vzorků jsou vypočítány pomocí této křivky. DODÁVANÝ MATERIÁL Kat. č. 0020214 Plastové testovací kelímky obsahující dvanáct lyofilizovaných magnetických zrn potažených myší monoklonální protilátkou anti-fitc a fluoresceinem značený vazebný protein pro hovězí folát a 100 µl folátu konjugovaného s hovězí alkalickou fosfatázou s azidem sodným jako konzervační látkou. MATERIÁL POTŘEBNÝ, NEDODÁVANÝ Následující materiály jsou vyžadovány, ale nejsou dodávány, k provedení analýzy folátu pomocí AIA-PACK RBC FOLATE (Kat. č. 0020214) na analyzátorech systému TOSOH AIA. Následující materiály společnost TOSOH dodává samostatně. Materiály Kat. č. AIA Nex IA nebo AIA-21 0018539 AIA Nex IA nebo AIA-21 LA 0018540 AIA-1800 ST 0019836 AIA-1800 LA 0019837 AIA-2000 ST 0022100 AIA-2000 LA 0022101 AIA-600 II 0019014 AIA-600 II BCR 0019328 AIA-PACK SUBSTRATE SET II 0020968 AIA-PACK SUBSTRATE REAGENT II/AIA-PACK SUBSTRATE RECONSTITUENT II AIA-PACK RBC FOLATE CALIBRATOR SET 0020314 AIA-PACK RBC FOLATE CALIBRATOR (1) 0 ng/ml AIA-PACK RBC FOLATE CALIBRATOR (2) 3,25 ng/ml (přibližně) AIA-PACK RBC FOLATE CALIBRATOR (3) 6,50 ng/ml (přibližně) AIA-PACK RBC FOLATE CALIBRATOR (4) 13,5 ng/ml (přibližně) AIA-PACK RBC FOLATE CALIBRATOR (5) 25,0 ng/ml (přibližně) AIA-PACK RBC FOLATE CALIBRATOR (6) 44,0 ng/ml (přibližně) AIA-PACK RBC FOLATE SAMPLE DILUTING SOLUTION 0020514 AIA-PACK RBC FOLATE PRETREATMENT SET 0020710 AIA-PACK RBC FOLATE PRETREATMENT-1 AIA-PACK RBC FOLATE PRETREATMENT-2 AIA-PACK RBC FOLATE PRETREATMENT-3 AIA-PACK RBC FOLATE HEMOLYZING REAGENT SET 0020711 AIA-PACK RBC FOLATE HEMOLYZING REAGENT-1 AIA-PACK RBC FOLATE HEMOLYZING REAGENT-2 AIA-PACK WASH CONCENTRATE 0020955 AIA-PACK DILUENT CONCENTRATE 0020956 KELÍMKY NA VZORKY 0018581 AIA-PACK DETECTOR STANDARDIZATION TEST CUP 0020970 AIA-PACK SAMPLE TREATMENT CUP 0020971 Další požadavky pouze pro AIA Nex IA /AIA-21: PIPETOVACÍ ŠPIČKY 0018552 PŘEDEM VLOŽENÉ PIPETOVACÍ ŠPIČKY 0018583 2-15
Další požadavky pro AIA-600 II, AIA-1800 a AIA-2000: PIPETOVACÍ ŠPIČKY 0019215 STOJAN PRO PIPETOVACÍ ŠPIČKY 0019216 PŘEDEM VLOŽENÉ PIPETOVACÍ ŠPIČKY 0022103 Používejte pouze materiály dodané společností TOSOH. Nepoužívejte materiály získané z jiných zdrojů, protože výkonnost testu je charakterizována přísně na základě materiálů společnosti TOSOH. VAROVÁNÍ A BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ 1. AIA-PACK RBC FOLATE je určen pouze pro diagnostické použití in vitro. 2. V rámci jednoho zásobníku nemíchejte testovací kelímky různých šarží nebo různých testů. 3. AIA-PACK RBC FOLATE, AIA-PACK RBC FOLATE CALIBRATOR (1), AIA-PACK RBC FOLATE SAMPLE DILUTING SOLUTION a AIA-PACK RBC FOLATE HEMOLYZING REAGENT-2 obsahují konzervační látku - azid sodný, který může reagovat s olověným nebo měděným potrubím za vzniku potenciálně výbušných azidů kovu. Při likvidaci těchto činidel do kanalizace je vždy spláchněte velkým množstvím vody, aby nedocházelo k hromadění azidu. 4. Při přípravě tohoto výrobku není používáno lidské krve. Protože však pro přípravu vzorků budou používány lidské vzorky a další výrobky pro kontrolu kvality v laboratoři mohou být deriváty lidského séra, dodržujte prosím při manipulaci se všemi vzorky a kontrolními vzorky standardní laboratorní bezpečnostní opatření. 5. Nepoužívejte po uplynutí data exspirace. 6. AIA-PACK RBC FOLATE PRETREATMENT SET používaný spolu s testem AIA-PACK RBC FOLATE obsahuje hydroxid sodný. Vyvarujte se styku s očima, kůží nebo oděvem. Po manipulaci důkladně opláchněte. 7. Poraďte se s místním odborníkem ohledně likvidace materiálu v AIA-PACK RBC FOLATE PRETREATMENT SET. Zajistěte, že je likvidace v souladu s místními, státními a národními předpisy. Při likvidaci do výpusti propláchněte velkým množstvím vody. 8. Koncentrace folátu (hodnota vytištěná jako výsledek testu na analyzátorech systému Tosoh AIA) v kalibračním roztoku a hemolyzovaném vzorku se zobrazuje v jednotkách ng/ml nebo ng folátu/ml. ng/ml se rovná ng folátu/ml. Koncentrace folátu v červených krvinkách musí být přepočtena pomocí faktoru ředění a hodnotou hematokritu navíc k hodnotě folátu v hemolyzovaných vzorcích. Proto se koncentrace folátu v červených krvinkách zobrazuje pomocí ng RBC folát/ml namísto ng folátu/ml". SKLADOVÁNÍ A STABILITA Veškeré neotevřené materiály jsou stabilní do data exspirace uvedeného na štítku, jsou-li uchovávány při specifikované teplotě. Materiály Kat. č. 2 8 C: AIA-PACK RBC FOLATE 0020214 AIA-PACK RBC FOLATE CALIBRATOR SET 0020314 AIA-PACK RBC FOLATE SAMPLE DILUTING SOLUTION 0020514 AIA-PACK RBC FOLATE PRETREATMENT SET 0020710 AIA-PACK RBC FOLATE HEMOLYZING REAGENT SET 0020711 AIA-PACK SUBSTRATE SET II 0020968 AIA-PACK WASH CONCENTRATE 0020955 AIA-PACK DILUENT CONCENTRATE 0020956 1 30 C: AIA-PACK DETECTOR STANDARDIZATION TEST CUP 0020970 AIA-PACK SAMPLE TREATMENT CUP 0020971 - Testovací kelímky AIA-PACK RBC FOLATE mohou být skladovány až 1 den při teplotě 18 25 C. - AIA-PACK RBC FOLATE CALIBRATOR SET musí být vždy těsně uzavřený a skladovaný při teplotě 2 8 C. Po otevření se doporučuje kalibrační roztoky použít do jednoho dne. - AIA-PACK RBC FOLATE SAMPLE DILUTING SOLUTION musí být vždy těsně uzavřený a skladovaný při teplotě 2 8 C. Roztok na ředění vzorků může být používán po dobu až 90 dnů, pokud lahvičky jsou vždy bezprostředně po použití těsně uzavřeny a uloženy v chladničce. - Doporučujeme použít otevřený AIA-PACK RBC FOLATE PRETREATMENT SET použít do jednoho dne, pokud byl skladován při teplotě 18-25 ºC. - Doporučujeme použít otevřený AIA-PACK RBC FOLATE HEMOLYZING REAGENT-1 použít do jednoho dne, pokud byl skladován při teplotě 18-25 ºC. AIA-PACK RBC FOLATE HEMOLYZING REAGENT-2 bude stabilní 30 dnů při teplotě 2-8 ºC. Měly by být použité po dosažení teploty 18 25 C za přibližně 30 minut. - Rekonstituovaný roztok substrátu je stabilní 3 dny při teplotě 18 25 C nebo 7 dnů při teplotě 2 8 C. - Pracovní ředicí roztok a promývací roztoky jsou stabilní po dobu 30 dnů při 18 25 C. Jestliže se činidla zakalí nebo změní barvu, nepoužívejte je. ODBĚR VZORKŮ A MANIPULACE S NIMI 1. Vzorky je třeba odebírat od jednotlivců nalačno, protože by nedávný příjem potravu mohl významně zvýšit hladinu folátu. 2. K analýze je nutná plná krev (heparin nebo EDTA). Sérum nebo plazma SE NESMÍ POUŽÍVAT. 3. URČETE A ZAZNAMENEJTE HEMATOKRIT (%), aby se přeložil výsledek v plné krvi do výsledků folátu v červených krvinkách. 4. Během sériového sledování jednotlivého pacienta nestřídejte druhy vzorků. U určitých pacientů se mohou koncentrace naměřené v různých druzích vzorků poněkud lišit. 5. Před provedením analýzy mohou být vzorky uloženy při teplotě 2 8 C po dobu maximálně 24 hodin. Nelze-li analýzu provést do 24 hodin, musí být vzorek uchován zmražený při teplotě -20 C nebo nižší po dobu maximálně 60 dnů. 6. Před analýzou pomocí AIA-PACK RBC FOLATE je nutné vzorky plné krve a kontrol hemolyzovat a předošetřit. Proces hemolýzy se prování manuálně. Hemolyzované vzorky musí být předošetřeny během 5 hodin při teplotě 18-25 ºC po dokončení procesu hemolýzy. Nelze-li analýzu provést do 5 hodin po procesu hemolýzy, musí být hemolyzovaný vzorek uchováván zmražený při teplotě -20 C nebo nižší po dobu maximálně 60 dnů. AIA-PACK RBC FOLATE CALIBRATOR SET nevyžaduje hemolýzu. 7. Předošetření všech vzorků (hemolyzát, kontroly a kalibrační roztoky) se provádí automaticky na AIA Nex IA / AIA-21, AIA-600 II, AIA-1800 a AIA-2000. 8. Pro přípravu hemolyzátu je nutný vzorek plné krve o objemu 50 µl. 9. Objem vyžadovaný pro analýzu RBC folátu je 160 µl. POSTUP Podrobné pokyny pro AIA Nex IA/AIA-21, AIA-600 II, AIA-1800 a AIA-2000 naleznete v uživatelském manuálu. 3-15 4-15
I. Příprava činidla A. Substrátový roztok Před přípravou pracovního činidla ponechte všechna činidla, aby dosáhla teploty 18 25 C. Přidejte celý obsah AIA-PACK SUBSTRATE RECONSTITUENT II (100 ml) k AIA-PACK SUBSTRATE REAGENT II (lyofilizovaný) a důkladně promíchejte, aby se pevný materiál rozpustil. B. Promývací roztok Přidejte celý obsah AIA-PACK WASH CONCENTRATE (100 ml) k přibližně 2,0 l vody reagenční čistoty třídy I CAP nebo typu I NCCLS, dobře promíchejte a upravte konečný objem na 2,5 l. C. Ředicí roztok Přidejte celý obsah AIA-PACK DILUENT CONCENTRATE (100 ml) k přibližně 4,0 l vody reagenční čistoty třídy I CAP nebo typu I NCCLS, dobře promíchejte a upravte konečný objem na 5,0 l. II. Hemolýza Hemolýza je nutná k získání hemolyzátu pro AIA-PACK RBC FOLATE. PROCES HEMOLÝZY SE AUTOMATICKY NEPROVÁDÍ NA VŠECH ANALYZÁTORECH SYSTÉMU TOSOH AIA. Postupujte dle níže uvedených pokynů pro manuální postup. A. Příprava hemolyzačního činidla Umožněte, aby všechny hemolyzační činidla dosáhla teplotu 18-25 ºC. Pomocí volumetrické pipety rekonstituujte lyofilizovaný AIA-PACK RBC FOLATE HEMOLYZING REAGENT-1 doplněním vodou reagenční čistoty třídy I CAP nebo typu 1 NCCLS přesně na objem 5,0 ml. Lyofilizovaný materiál ponechte zcela rozpustit. Rekonstituovaný činidlo-1 by se měl spotřebovat do 1 dne. B. Postup hemolýzy 1. Pipetujte 500 µl rekonstituovaného hemolyzačního činidla-1 do zkumavky. 2. Pipetujte 50 µl vzorku plné krve do rekonstituovaného hemolyzačního činidla-1. Dobře promíchejte pomocí vířivkového mixéru (směs-1). 3. Chraňte směs-1 před světlem a ponechte směs-1 stát 30 minut při teplotě 18-25 ºC. 4. Pipetujte 550 µl AIA-PACK RBC FOLATE HEMOLYZING REAGENT-2 do směsi-1. Dobře promíchejte pomocí vířivkového mixéru (směs-2). Tato směs-2 musí být nedošetřena během 5 hodin po přidání hemolyzačního činidla-2. 5. Směs-2 bude připravena po předošetření pro analýzu pomocí AIA-PACK RBC FOLATE. III. Předošetření A. Postup předošetření Všechny vzorky (hemolyzát, kalibrační a kontrolní roztoky) vyžadují předošetření. Na AIA Nex IA / AIA-21, AIA-600 II, AIA-1800 a AIA-2000 se předošetření provádí automaticky pomocí parametrů definovaných v testovém souboru. 1. Nechejte všechna předošetřená činidla a vzorky dosáhnout teplotu 18 až 25 C. 2. Pomocí volumetrické pipety rekonstituujte lyofilizovaný AIA-PACK RBC FOLATE PRETREATMENT-1 přesně na objem 5,0 ml s AIA-PACK RBC FOLATE PRETREATMENT-2. Ponechte lyofilizovaný materiál, aby se zcela rozpustil. 3. Na AIA Nex IA / AIA-21 umístěte rekonstituovaný pretreatment-1 do středové pozice kazety s činidly (čárový kód pro lahvičku pretreatment-1 musí směřovat do středu karuselu se vzorky). AIA-PACK RBC FOLATE PRETREATMENT-3 umístěte do pozice vlevo v kazetě s činidly. Na AIA-1800 a AIA-2000 umístěte pretreatment-3 do další pozice rekonstituovaného 5-15 pretreatment-1. Na AIA-600 II je pretreatment-3 umístěn do pozice určené jako pro pretreatment-2. IV. Postup kalibrace A. Kalibrační křivka Kalibrační roztoky pro použití s AIA-PACK RBC FOLATE byly porovnány s WHO IS 03/178. Průměrná výtěžnost tohoto IS 03/178 v rozsahu testu je 144 %. Kalibrační křivka pro AIA-PACK RBC FOLATE bude stabilní až 90 dnů. Stabilita kalibrace je sledována prováděním kontroly kvality a závisí na správné manipulace s činidlem a na řádné údržbě systému TOSOH AIA podle pokynů výrobce. Pokud se změnilo číslo šarže AIA-PACK RBC FOLATE PRETREATMENT SET, je třeba provést novou kalibraci. Opětovná kalibrace může být nutná častěji, když jsou kontroly mimo nastavené rozmezí pro tento test nebo když jsou prováděny určité servisní postupy (např. nastavení teploty, změny mechanismu odběru vzorků, údržba promývací sondy nebo nastavení či výměna žárovky detektoru). Další informace o provozu přístroje naleznete v uživatelském manuálu systému TOSOH AIA. Kalibrační křivka vzorku z AIA-1800 sleduje a znázorňuje algoritmus použitý při výpočtu výsledků. B. Postup kalibrace 1. Pokyny o postupu naleznete v příslušném uživatelském manuál systému TOSOH AIA. 2. Ověřte, že kalibrační šarže a čísla koncentrací byly správně zadány do softwaru. 3. AIA-PACK RBC FOLATE CALIBRATOR (1) je dodáván připravený k použití. 4. AIA-PACK RBC FOLATE CALIBRATOR (2)-(6) jsou lyofilizované. Všechny hodnoty by měly být rekonstituovány s 1,0 ml vody reagenční čistoty třídy I CAP nebo typu I NCCLS. Společnost TOSOH doporučuje, aby všechny kalibrační roztoky byly spuštěny trojmo. 5. Ověřte, že rekonstituovaný pretreatment-1 a pretreatment-3 byly umístěny do kazety na činidla tak, jak bylo definováno v REGISTRACI ČINIDLA. Podrobné pokyny o postupu REGISTRACE ČINIDLA naleznete v uživatelském manuálu systému TOSOH AIA. C. Kritéria přijatelnosti kalibrace 1. Průměrná rychlost pro AIA-PACK RBC FOLATE CALIBRATOR (1) nesmí přesáhnout 42 nmol/(l s). 6-15
2. Vzhledem k tomu, že existuje nepřímý vztah mezi koncentrací a rychlostí, musí rychlost klesat s narůstající koncentrací. 3. Hodnoty replikátů musí být v rozmezí 10 %. D. Kontrola kalibrace a přijetí 1. Pečlivě zkontrolujte křivku kalibrace s použitím výše uvedených kritérií. 2. Je-li to nutné, editujte kalibraci a potom kalibraci akceptujte. Další informace o kalibraci naleznete v uživatelském manuálu systému TOSOH AIA. V. Postup kontroly kvality A. Komerčně dostupné kontroly Komerčně dostupné kontroly by měly být spuštěny nejméně jednou denně. Doporučuje se, aby byly použity nejméně dva stupně kontrol, normální a abnormální. Metoda laboratoře pro tento určitý test specifikuje následující: Kontrolní materiál: Frekvence: Číslo šarže kontrolního materiálu, přijatelné limity a nápravná opatření v případě, že kontroly nesplní laboratorní kritéria, můžete nalézt ve zvláštním dokumentu o kontrole kvality, který je v laboratoři. B. Postup kontroly kvality 1. Proveďte analýzu vzorků kontroly kvality dle pokynů specifického uživatelského manuálu pro váš analyzátor. Podrobné pokyny o definici a editaci souborů naleznete v uživatelském manuálu systému TOSOH AIA. 2. Materiál kontroly kvality, který má projít tímto testem, je specifikovaný individuální metodou laboratoře. VI. Zpracování vzorků A. Příprava Podle specifických pokynů v uživatelském manuálu analyzátoru umístěte příslušným způsobem vzorky do přístroje. Primární zkumavky a také kelímky na vzorky jsou kódovány čárovým kódem a mohou být použité v AIA Nex IA / AIA-21, AIA-600 II, AIA-1800 a AIA-2000. B. Postup analýzy 1. Poskytněte dostatečné množství testovacích kelímků AIA-PACK RBC FOLATE pro počet vzorků, které mají být analyzovány. 2. Vložte vzorky pacienta podle pokynů v uživatelském manuálu a pokračujte v analýze. Poznámka: Kelímky AIA-PACK SAMPLE TREATMENT CUP budou v případě použití vestavěných ředění vyžadovány systémem AIA Nex IA/AIA-21, AIA-600 II, AIA-1800 a AIA-2000. POZNÁMKY K POSTUPU 1. Lyofilizovaný substrát musí být zcela rozpuštěn. 2. Ligandové testy prováděné analyzátory systému TOSOH AIA vyžadují, aby laboratoř používala vodu označenou Společností amerických patologů třídou I nebo podle NCCLS typem I. Voda musí být testována nejméně jednou měsíčně a neměla by osahovat částicovou hmotu včetně bakterií. ph vody by mělo být také rutinně testováno. Další informace naleznete v dokumentu NCCLS Příprava a testování reagenční vody v klinické laboratoři, dokument NCCLS C3-A3, svazek 11, č. 13, původně odsouhlaseném jako směrnice NCCLS v říjnu 1997. 3. Pokud je hodnota hemolyzovaného folátu vyšší než horní hranice rozsahu testu, 24,0 ng folátu/ml, musí se vzorek naředit AIA-PACK RBC FOLATE SAMPLE DILUTING SOLUTION a opětovně analyzovat podle postupu testu v příbalové informaci AIA-PACK RBC FOLATE. Před hemolýzou 7-15 musí být vzorek plné krve naředěn. Doporučované ředění pro vzorky obsahující koncentraci větší než 24,0 ng folátu/ml je 5násobné ředění. Je žádoucí naředit vzorky tak, aby byl naředěný vzorek odečten v rozsahu 0,5 až 24,0 ng folátu/ml. 4. V analyzátorech systémů TOSOH AIA mohou být současně uloženy dvě různé kalibrační křivky pro každý analyt. Tak mohou být v rámci téhož cyklu použity dvě různé šarže testovacích kelímků AIA-PACK RBC FOLATE. 5. Nejsou-li pro tento test specifikace analýzy připraveny v softwaru systému, musí být specifikace zadány pod kódem testu 016. VÝPOČET VÝSLEDKŮ Analyzátory systémů TOSOH AIA odečítají míru fluorescence generovanou reakcí a automaticky ji převádějí na míru koncentrace folátu (ne RBC folátu) v ng/ml. Vynásobte výsledek pro folát v hemolyzátu číslem 22 (ředění 1:21 bylo provedeno při přípravě RBC hemolyzátu). Tato hodnota představuje koncentraci folátu v plné krvi v ng RBC folátu/ml. Vydělte tento výsledek hematokritem a vynásobte 100, abyste upravili hematokrit, který je procentem. RBC folát = (hodnota folátu v hemolyzátu (ng/ml)) x 22 x 100 Hematokrit (%) *Ve většině případů jsou hodnoty folátu v séru velmi nízké v porovnání s hodnotami folátu v červených krvinkách. Avšak v některých případech mohou být hodnoty folátu v séru vysoké, zatímco hodnoty folátu v červených krvinkách jsou nízké. V těchto případech musí být vypočtená korigovaná hodnota pomocí následující rovnice. Korigovaný RBC folát = RBC folát folát v séru (pomocí AIA-PACK FOLATE) Vývojový diagram postupu testu je následující: 8-15
Vzorek nebo kontrola (plná krev) 5násobné ředění Hemolyzační činidlo Roztok pro ředění vzorků 22násobné ředění Hemolyzát (manuální provoz) PŘÍKLADY VÝPOČTŮ: Příklad 1: 1. Hodnota folátu v hemolyzátu se vypočítá automaticky analyzátory systému TOSOH AIA pomocí kalibrační křivky. Hodnota folátu v hemolyzátu = 5,05 ng/ml (Hodnota vytištěná na analyzátorech systému TOSOH AIA) 2. Hodnota hematokritu se musí měřit před analýzou jinou metodou. Hodnota hematokritu (%) = 45,1 % Hodnota hematokritu (jinou metodou) Ředící roztok Testovací kelímek Imunitní reakce Kalibrační roztok Ošetřovací kelímek pro vzorek Činidlo předošetření Ředění 2,5násobné Předošetření 3. Hodnota RBC folátu se vypočítá manuálně následujícím způsobem. (1) Vynásobte hodnotu folátu v hemolyzátu (5,05 ng/ml) číslem 22. (Tato hodnota vznikne při přípravě hemolyzátu). (2) Tento výsledek vydělte hodnotou hematokritu (%) (45,1 / 100), abyste získaly RBC folát. Hodnota RBC folátu = 5,05 x 22 x 100 = 246 ng RBC folátu/ml 45.1 Příklad 2: 1. Pokud je hodnota folátu v hemolyzátu větší než horní hranice rozsahu testu, bude zobrazený výsledek na analyzátorech systému TOSOH AIA >H nebo DO. Vázaná/volná separace Enzymatická reakce Vynásobte 2,5krát Automatický výpočet (ng folátu/ml) Automatický provoz (analyzátory system AIA) Pokud je vzorek větší než limita linearity testu Vynásobte 22 (x faktor ředění pomocí Sample Diluting Solution) Manuální výpočet (ng folátu/ml) Vydělte (hematokrit % /100) Manuální výpočet (ng RBC folátu/ml) Promývací roztok Roztok substrátu Hodnota folátu v hemolyzátu = >H nebo DO (Hodnota vytištěná na analyzátorech systému TOSOH AIA) 2. Vzorek musí být před provedením hemolýzy naředěn 5krát (1:4) pomocí AIA-PACK RBC FOLATE SAMPLE DILUTING SOLUTION. Naředěný vzorek analyzujte jako běžný vzorek. 3. Pokud je výsledek naředěného vzorku 10,5 ng/ml, hodnota RBC folátu se vypočítá manuálně následujícím způsobem: Hodnota folátu v hemolyzátu = 10,5 ng/ml (Hodnota vytištěná na analyzátorech systému TOSOH AIA) Hodnota hematokritu (%) = 55,1 % (1) Vynásobte hodnotu folátu v hemolyzátu číslem 5. (Tato hodnota je faktor ředění). (2) Vynásobte hodnotu folátu v hemolyzátu číslem 22. (Tato hodnota je faktor ředění při přípravě hemolyzátu). (3) Tento výsledek vydělte hodnotou hematokritu (%) (55,1/100), abyste získaly RBC folát. Hodnota RBC folátu = 10,5 x 22 x 100 = 2 096 ng RBC folátu/ml 55.1 U vzorků vyžadujících ředění provedou systémy AIA Nex IA/AIA-21, AIA-600 II, AIA-1800 a AIA-2000 automaticky ředění a vypočtou výsledky, pokud byly faktory ředění zadány do softwaru. Faktory ředění 9-15 10-15
faktory mohou být zadány do testového souboru nebo mohou být při zpracování vzorku zvoleny předem definované faktory ředění. VYHODNOCENÍ VÝSLEDKŮ Kontrola kvality Za účelem sledování a vyhodnocení přesnosti analytické výkonnosti se doporučuje v souladu s místními nařízeními analyzovat komerčně dostupné kontrolní vzorky. Minimální doporučená frekvence zpracování interního kontrolního materiálu je: Po kalibraci je spuštěna třístupňová analýza interních kontrolních vzorků, aby byla akceptována kalibrační křivka. Tři stupně kontrol jsou opakovány, když jsou provedeny určité servisní postupy (např. nastavení teploty, změna mechanismu pro odběr vzorků, údržba promývací sondy nebo nastavení či výměna žárovky detektoru). K ověření celkového výkonnosti analyzátorů systému TOSOH AIA by měly být po denní údržbě provedeny nejméně dva stupně kontroly. Pokud se objeví jedna nebo více hodnot kontrolního vzorku mimo přípustné rozmezí, je třeba před ohlášením výsledků pacienta prověřit validitu kalibrační křivky. Je nutno dodržovat standardní laboratorní postupy podle přísného zákonného orgánu, který na provoz laboratoře dohlíží. OMEZENÍ POSTUPU 1. Pro diagnostické účely je nutné využívat výsledky tohoto testu společně s dalšími údaji (např. symptomy, výsledky dalších testů, klinickými dojmy, léčbou atd.). 2. Při používání soupravy AIA-PACK RBC FOLATE je nejvyšší měřitelná koncentrace folátu ve vzorcích bez ředění 24,0 ng folátu/ml a nejnižší měřitelná koncentrace je 0,5 ng folátu/ml (citlivost testu). 3. Přestože přibližná hodnota koncentrace nejvyššího kalibračního roztoku je 44,0 ng/ml, přesná koncentrace se může poněkud lišit. Specifikaci testu ASSAY RANGE HIGH (VYSOKÝ ROZSAH TESTU) je nutno definovat jako horní hranici rozsahu testu, a to 24,0 ng folátu/ml. 4. Lipémie má na test nevýznamný vliv, kromě případu silné lipémie, kdy může dojít k prostorové interferenci. 5. Vzorky pacientů, kteří užívají léky anebo u kterých probíhá léčba, mohou vykazovat chybné výsledky. 6. Vzorky od pacientů, kterým byly podány přípravky myších monoklonálních protilátek k diagnostice nebo terapii, mohou obsahovat lidské protilátky proti myším protilátkám (HAMA). Takové vzorky mohou dávat falešně zvýšené hodnoty, pokud jsou testovány na RBC folát. 7. Vzorky pacientů, kteří dostali injekci fluoresceinu, který se používá v fluresceinové angiografii fundu, mohou způsobit falešně zvýšené výsledky. 8. Pro úplné pochopení omezení tohoto postupu, si laskavě přečtěte kapitoly ODBĚR A MANIPULACE SE VZORKY, VAROVÁNÍ A BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ, SKLADOVÁNÍ A STABILITA a POZNÁMKY K POSTUPU této příbalové informace. PŘEDPOKLÁDANÉ HODNOTY Každá laboratoř si musí stanovit svůj vlastní referenční interval, který odpovídá charakteristikám testované populace. Podobně jako u všech diagnostických postupů musí být klinické výsledky interpretovány s ohledem na léky v současnosti podávané pacientovi. I. Referenční rozmezí Zde uvedený interval byl stanoven ve vzorcích plné krve (EDTA) od 122 zjevně zdravých Asiatů. Referenční rozmezí studie bylo stanoveno na základě pokynů Ústavu pro klinické a laboratorní standardy (CLSI) v protokolu C28-A2. n = 122 2,5. percentil = 148,3 ng RBC folátu/ml 97,5. percentil = 531,1 ng RBC folátu/ml II. Konverzní faktory Koncentrace RBC folátu v této aplikaci jsou vyjádřeny v jednotkách ng RBC folátu/ml. Konverze na jednotky SI soustavy nmol/l může být provedena s použitím následující rovnice: nmol/l = ng RBC folátu/ml x 2,265 VÝKONNOSTNÍ CHARAKTERISTIKY PŘESNOST a. Výtěžnost: Tři vzorky plné krve (EDTA) byly označeny třemi rozdílnými hladinami RBC folátu a testovány před a po označení. Vzorek Původní Přidaný Předpokládaná Naměřená Procento hodnota folát hodnota hodnota výtěžnosti (ng RBC folátu/ml) (ng/ml) (ng RBC folátu/ml) (ng RBC folátu/ml) (%) Vzorek A1 239,0 5,1 487,0 500,1 102,7 Hematokrit 239,0 10,1 735,0 744,4 101,3 45,0% 239,0 20,3 1230,9 1205,0 97,9 Vzorek B1 96,7 5,3 353,6 352,8 99,8 Hematokrit 96,7 10,5 610,5 601,7 98,6 45,0% 96,7 21,0 1124,2 1095,4 97,4 Vzorek C1 263,9 5,3 520,7 521,6 100,2 Hematokrit 263,9 10,5 777,6 743,0 95,5 45,0% 263,9 21,0 1291,4 1216,1 94,2 b. Ředění: Tři vzorky plné krve (EDTA) obsahující vysoké koncentrace folátu byly sériově naředěny pomocí AIA--PACK RBC FOLATE SAMPLE DILUTING SOLUTION a analyzovány. Vzorek Faktor Předpokládaná Naměřená Procento ředění hodnota hodnota výtěžnosti (ng RBC folátu/ml) (ng RBC folátu/ml) (%) Vzorek A2 žádný 1583,7 1583,7 100,0 Hematokrit 7,5/10 1187,7 1242,9 104,6 45,0% 5,0/10 791,8 844,2 106,6 2,5/10 395,9 419,1 105,9 1,0/10 158,4 158,4 100,0 Vzorek B2 žádný 1098,8 1098,8 100,0 Hematokrit 7,5/10 824,1 840,2 102,0 45,0% 5,0/10 549,4 566,4 103,1 2,5/10 274,7 315,2 114,7 1,0/10 109,9 124,3 113,1 11-15 12-15
Vzorek C2 žádný 444,5 444,5 100,0 Hematokrit 7,5/10 333,4 348,0 104,4 37,9% 5,0/10 222,3 238,3 107,2 2,5/10 111,1 125,1 112,5 1,0/10 44,5 45,8 103,0 c. Linearita: Linearita pro AIA-PACK RBC FOLATE byla stanovena na základě pokynů CLSI protokolu EP6-A. Linearita byla měřena přístrojem AIA-1800 a byla demonstrována linearita od 0,5 do 40,0 ng s rozdílem +/- 10 % tohoto intervalu. Potvrzená linearita je 0,5 až 24,0 ng folátu/ml. Vzorek Schéma Předpokládané Naměřená Procento ředění hodnota hodnota výtěžnosti Vysoké:nízké (ng folátu/ml) (ng folátu/ml) (%) 1 Nízký neředěný 0,43 0,43 100,0 2 9:1 4,72 4,60 97,5 3 8:2 8,68 9,10 104,8 4 7:3 12,83 12,77 99,5 5 6:4 17,24 17,11 99,2 6 5:5 21,83 22,10 101,2 7 4:6 25,91 25,88 99,9 8 3:7 30,08 30,49 101,4 9 2:8 34,51 35,63 103,2 10 1:9 38,58 39,17 101,5 11 Vysoký neředěný 42,98 42,37 98,6 PŘESNOST Přesnost pro AIA-PACK RBC FOLATE byla stanovena na základě pokynů CLSI protokolu EP5-A2. a. Přesnost v rámci jednoho cyklu byla stanovena pomocí tří komerčně dostupných kontrolních vzorků séra a jednoho kontrolního vzorku plné krve (EDTA) v celkem 20 cyklech. V rámci jednoho cyklu byla provedena analýza jedné sady dvou paralelních vzorků na jeden kontrolní vzorek. Průměrná hodnota každých dvou paralelních vzorků byla použita k získání sdružené směrodatné odchylky (SO), která pak byla použita k výpočtu variačního koeficientu (KV). Vzorek Střední hodnota Sdružená směrodatná odchylka KV (ng RBC folátu/ml) (ng RBC folátu/ml) (%) Kontrola 1 92,8 5,474 5,9 Kontrola 2 338,2 11,366 3,4 Kontrola 3 1140,5 24,863 2,2 Vzorek A3 300,4 6,481 2,2 b. Celková přesnost byla stanovena paralelním stanovením tří komerčně dostupných kontrolních vzorků séra a jedno kontrolní vzorku plné krve (EDTA) ve 20 samostatných cyklech. Průměrné hodnoty každého cyklu byly použity k výpočtu sdružené směrodatné odchylky (SD) a variačního koeficientu (KV). Vzorek Střední hodnota Sdružená směrodatná odchylka KV (ng RBC folátu/ml) (ng RBC folátu/ml) (%) Kontrola 1 92,8 7,579 8,2 Kontrola 2 338,2 15,507 4,6 Kontrola 3 1140,5 37,192 3,3 Vzorek A3 300,4 12,532 4,2 KORELACE a. Korelace mezi AIA-PACK RBC FOLATE a alternativní metodou byla provedena pomocí 120 vzorků pacientů podle protokolu EP9-A2 CLSI. Směrnice 0,84 Průsečík s osou y 0,783 Korelační koeficient 0,86 Rozmezí vzorků -22,32 ng RBC folátu/ml Počet vzorků 102 b. Korelace mezi plnou krví (EDTA) (x) a plnou krví (heparin) (y) v ST AIA-PACK RBC FOLATE byla provedena s použitím 56 pacientských vzorků. Směrnice 0,963 Průsečík s osou y -8,131 Korelační koeficient 0,991 Počet vzorků 56 SPECIFICITA Zkřížená reaktivita byla testována u následujících látek. Zkřížená reaktivita (%) je procento látky, které bude identifikováno jako RBC folát. Látka Koncentrace Zkřížená reaktivita (%) Amethopterin 2,518 ng/ml 0,66 Leukovorin 5,231 ng/ml 0,34 SENZITIVITA Mez detekce: Mez detekce pro AIA-PACK RBC FOLATE byla stanovena dle CLSI pokynu EP17-A. Slepý vzorek byl měřen v 60 replikátech. Šest vzorků s nízkou hladinou bylo změřeno každý v 10 replikátech. Mez detekce pro AIA-PACK RBC FOLATE byla stanovena 0,44 ng folátu/ml. INTERFERENCE Interference je v rámci této studie definována jako výtěžnost přesahující 10 % známé koncentrace vzorku po přidání následujících látek k lidským vzorkům. Hemoglobin (až do 470 mg/dl), konjugovaný bilirubin (do 19 mg/dl) a volný bilirubin (do 18 mg/dl) neinterferují s testem. Lipémie vyjádřená koncentrací triglyceridu (do 1600 mg/dl) neinterferuje s testem. Kyselina askorbová (do 20 mg/dl) neinterferuje s testem. Bílkoviny určené koncentrací lidského albuminu (až do 50 mg/ml) neinterferují s testem. Heparin (do 100 U/ml) neinterferuje s testem. EDTA 2K (až do 10 mg/ml) neinterferuje s tímto testem. 13-15 14-15
REFERENCE 1) R. E. Davis, D. J. Nicol, Folic Acid, Int. J. Biochem. 20:2; 133-139(1988). 2) J. M. Scott, et al., Folic Acid Metabolism and Mechanisms of Neural Tube Defects. Ciba Fdn. Symp. (Netherlands), 180-191(1994). 3) J. Grinblat, et al., Folate and Vitamin B12 Levels in an Urban Elderly Population With Chronic Diseases. Assessment of Two Laboratory Folate Assays: Microbiologic and Radio assay. J. Am. Geriatr. Soc. 34:9; 627-632(1986). 4) F. M. Huennekens, et al., Folic Acid Metabolism and Its Disruption by Pharmacologic Agents. NCI Monogr. 5; 1-8(1987). 5) E. L. McGown, C. M. Lewis, M. H. Dong, H. E. Sauberiich, Results with Commercial Radioassay Kits Compared with Microbiological Assay of Folate in Serum and Whole-Blood. Clin Chem 24; 2186-2191(1978). 6) S. Levine, Analytical inaccuracy for folic acid with a popular commercial vitamin B12/folate kit. Clin Chem 39; 2209-2210(1993). 7) S. Manzella, A. Gronowski, J. Ladenson, M. G. Scott, Limited Linear Range of the Abbott AxSYM Serum and Erythrocyte Folate Methods. Clin Chem 45; 582-583(1999). 8) G. Thame, E. M. Guerra-Shinohara, A. F. Moron, Serum Folate by Two Methods in Pregnant Women Carrying Fetuses with Neural Tube Defects. Clin Chem 48; 1094-1095(2002). 9) W. E. Owen, W. L. Roberts, Comparison of Five Automated Serum and Whole Blood Folate Assays. Am J Clin Pathol 120; 121-126(2003). 10) A. J. Clifford, E. M. Noceti, A. Block-Joy, T. Block, G. Block, Erythrocyte Folate and Its Response to Folic Acid Supplementation Is Assay Dependent in Women. J Nutr. 135(1); 137-143(2005). TOSOH CORPORATION 3-8-2, Shiba-Koen, Minato-ku TOKYO 105-8623 (JAPONSKO) Tel.: +81 (0)3 5427 5181 Fax: +81 (0)3 5427 5220 TOSOH EUROPE N.V. Transportstraat 4 B-3980 TESSENDERLO BELGIE Tel.: +32 (0)13 66 88 30 Fax: +32 (0)13 66 47 49 TOSOH BIOSCIENCE, INC. 6000 Shoreline Court, Suite 101 South San Francisco, CA 94080, USA Telefon: +1 650 615 49 70 Objem netto (po rekonstituci pro lyofilizovaný materiál) 15-15