Rapid-VIDITEST Influenza A Card Jednokrokový kazetový test pro detekci antigenu viru chřipky typu A z nosních výtěrů, výplachů a aspirátů.. Návod k použití soupravy Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II č.365, Vestec, 252 42 Jesenice u Prahy, ČR, tel: +420 261 090 565, www.vidia.cz POUŽITÍ: Rapid-VIDITEST Influenza A Card je jednokrokový barevný imunochromatografický test pro kvalitativní stanovení antigenu viru chřipky typu A. Je určen pro humánní diagnostiku infekce chřipky z nosních výtěrů, výplachů a aspirátů. ÚVOD: Virus chřipky atakuje zejména horní cesty dýchací sliznici nosu, hrtan a průdušky, někdy také plíce. Infekce většinou odezní do jednoho týdne. Hlavními symptomy infekce jsou vysoké horečky, bolesti svalů, bolesti hlavy, nevolnost, dráždivý kašel, bolest v krku a rýma. Většina lidí se uzdraví za jeden až dva týdny bez podávání léků. U velmi malých dětí, osob ve vysokém věku a osob se závažným onemocněním jako je onemocnění plic, diabetes, nádorové onemocnění nebo onemocnění srdce a ledvin je infekce virem chřipky velmi riziková. U těchto lidí může infekce vést k různým komplikacím výše popsaných chorob, pneumonii a dokonce i k úmrtí. Běžně cirkulující typy viru chřipky, které způsobují onemocnění u lidí, lze rozdělit do dvou skupin: A a B. Dva subtypy Influenzy A infikující lidi - A(H3N2) a A(H1N1) jsou spojovány i s případy úmrtí. Virus chřipky je definován dvěma rozdílnými povrchovými proteinovými komponenty, antigeny, které se nazývají hemaglutinin (H) a neuramidáza (N). Byly také zaznamenány propuknutí infekce i sporadické infekce lidí prasečí chřipkou nebo ptačí chřipkou. PRINCIP TESTU: Rapid-VIDITEST Influenza A Card je jednokrokový barevný imunochromatografický test pro kvalitativní stanovení antigenu viru chřipky typu A. V testovacích zónách kazety je navázána myší monoklonální protilátka proti virovému antigenu. V průběhu testování vzorek reaguje s barevným konjugátem (anti-typ A myší monoklonální protilátky červené mikročástice), imobilizoavným na membráně testu. Směs pak kapilárním efektem vzlíná vzhůru po membráně. V případě pozitivního výsledku je barevný konjugát zachycen specifickými protilátkami, což se ve výsledkové zóně projeví jako barevná linka. Vzlínání pokračuje až k imobilizovaným kontrolním protilátkám v kontrolní zóně, kde se vždy na konci testu objeví zelená linka. Přítomnost zelené linky ověřuje: 1
1) že se použil dostatečný objem vzorku, 2) že došlo ke správné vzlínavosti vzorku, 3) interní kontrolu reagencií. OBSAH SOUPRAVY: - Testovací kazety (obsahují jednorázové plastové pipety) - Sterilní odběrové tampóny - Roztok B (ředicí roztok pro vzorky) - Testovací zkumavky - Návod k použití - Certifikát kontroly balení POTŘEBNÝ MATERIÁL NEDODÁVANÝ SE SOUPRAVOU: - Sterilní nádoba pro odběr vzorků - jednorázové rukavice - stopky SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ: Vzorky nosních výtěrů: - Ohněte tyčinku odběrového tamponu tak, aby jste kopírovali křivku nosohltanu - Vnořte vatový tampón skrze nosní dírku do oblasti zadního nosohltanu. - Rotačním pohybem tampónu setřete infikované buňky. - Pro získání optimálního vzorku, opakujte postup i u druhé nosní dírky. Vzorky nosních výplachů a aspirátů (odsávací zařízení, sterilní odsávací cévka): - Nakapejte do každé nosní dírky několik kapek solného roztoku. - Zaveďte cévku skrze nosní dírku do oblasti zadního nosohltanu. - Jemně nasajte. Rotačním pohybem pomalu vyjměte cévku. - Pro získání optimálního vzorku, opakujte postup i u druhé nosní dírky. Odešlete ihned po odběru do laboratoře (citlivost s časem klesá). Vzorky z nosohltanu během skladování a transportu udržujte chlazené na 2º-4ºC. PRACOVNÍ POSTUP: Před testováním nechte testovací kazetu, vzorky a roztok B vytemperovat na laboratorní teplotu (15 až 30 C). Neotvírejte obal, dokud nejste připraveni provést test. Postup pro vzorky nosních výplachů nebo aspirátů: Pro každý vzorek použijte novou testovací zkumavku a dávkovací pipetu. 1. Do testovací zkumavky přidejte vzorek výplachu nebo aspirátu z nosohltanu (6 kapek nebo 300 µl) (1). 2. Přidejte roztok B (3 kapky nebo 150 µl) a zamíchejte (2). Vyjměte testovací kazetu z obalu a ihned po otevření ji použijte. Pro každý vzorek použijte novou testovací kazetu. 3. Aplikujte 100 µl do oválného okénka, které je označeno písmenem S (3). Začněte měřit čas. Po 10 minutách odečtěte výsledek (objeví se barevné linky). 2
Postup pro vzorky nosních výtěrů: Pro každý vzorek (stěr) použijte novou testovací zkumavku a dávkovací pipetu.. 1. Do testovací zkumavky aplikujte 15 kapek nebo 500uL roztoku B (1). 2. Vložte do ní odběrový tampon. Krouživým pohybem tamponu důkladně roztok promíchejte. Třete tampon o stěnu zkumavky, vytlačte z něj co nejvíce tekutiny (2). Vyjměte testovací kazetu z obalu a ihned po otevření ji použijte. Pro každý vzorek použijte novou testovací kazetu. 3. Aplikujte 100 µl do oválného okénka, které je označeno písmenem S (3). Začněte měřit čas. Po 10 minutách odečtěte výsledek. 3
INTERPRETACE VÝSLEDKŮ: ZELENÁ ČERVENÁ ČERVENÁ Negativní Pozitivní Neplatný Neplatný POZITIVNÍ: Kromě zelené linky v kontrolní zóně C se objeví také červená linka ve výsledkové zóně T. NEGATIVNÍ: V kontrolní zóně C se objeví jedna zelená linka. Výsledková zóna T zůstane prázdná. NEPLATNÝ: Test je neplatný, pokud se v kontrolní zóně C neobjeví zelená linka bez ohledu na přítomnost červené linky ve výsledkové zóně T. Nejčastějšími příčinami selhání testu jsou: nedostatečný objem vzorku, nesprávný pracovní postup nebo poškození reagencií. Zkontrolujte pracovní postup a opakujte test s novou testovací sadou. Pokud potíže přetrvávají, kontaktujte svého dodavatele. POZNÁMKA K INTERPRETACI VÝSLEDKU: Intenzita červené linky v místě označeném T se může měnit v závislosti na koncentraci antigenů ve vzorku. Nicméně tímto kvalitativním testem nelze posuzovat množství antigenu ani odhadovat nárůst nebo pokles. PLATNOST TESTU: V testu je použit interní standard. Zelená linka, která se objevuje v kontrolní zóně je vnitřní kontrolou testu. Potvrzuje dostatečný objem vzorku a správný průběh testu. OČEKÁVANÝ PŘÍNOS: Virus chřipky typu A způsobuje epidemie téměř každou zimu. Ve Spojených státech nákaza chřipkou v zimě způsobuje onemocnění u 10-20% obyvatel a je zodpovědná za přibližně 36 000 úmrtní a více než 200 000 hospitalizací za rok. 4
OMEZENÍ TESTU: 1. Test musí proběhnout do 2 hodin od otevření zataveného obalu. 2. Tento test slouží pouze k pravděpodobné diagnóze chřipkové infekce. Potvrzení infekce musí být provedeno lékařem poté, co byly vyhodnoceny všechny klinické a laboratorní nálezy. 3. Použitím nedostatečného množství vzorku, nebo vzorku s příliš nízkou koncentrací antigenu může dojít k falešné negativitě výsledku. Proto se doporučuje, aby všechny negativní výsledky získané Rapid-VIDITEST Influenza A Card testem byly otestovány jinou metodou a/nebo na buněčných kulturách. VLASTNOSTI TESTU: Citlivost a specifita Různá ředění virového extraktu byla testována přímo v ředicím roztoku nebo v negativním vzorku nosního výtěru. Detekce byla provedena podle návodu. Rapid-VIDITEST Influenza A Card test vykazoval >99% citlivost a >99% specifitu ve srovnání s jiným komerčně dostupným rychlotestem. Křížové reakce S testem Rapid-VIDITEST Influenza A Card byla provedena studie křížové reaktivity. Nebyla nalezena žádná křížová reaktivita s běžnými respiračními patogeny a dalšími organizmy a látkami, které se příležitostně mohou nacházet ve vzorcích z nosohltanu, např. RSV (Respiračně syncytiální virus), Adenovirus. SKLADOVÁNÍ A STABILITA: Skladujte v originálním obalu v chladničce nebo při pokojové teplotě (2 až 30 C). Test je stabilní do data expirace uvedeného na obalu. Nezmrazujte. BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ: - Pouze pro in vitro diagnostiku. - Nepoužívejte po uplynutí expirační doby. - Testy až do použití uchovávejte zatavené v neporušených obalech. - Pokud je hliníkový obal porušený test nepoužívejte. - Dodržujte zásady Správné laboratorní praxe, používejte ochranný oděv a ochranné rukavice, při práci nejezte, nepijte a nekuřte. - Se vzorky manipulujte jako s potenciálně infekčním materiálem. - Testovací kazetu likvidujte jako biologický infekční odpad v souladu s příslušnými předpisy. - Test provádějte nejpozději do 2 hodin od otevření hliníkového obalu. 5
REFERENCE: 1. Daniel E. Noyola, et al. Comparison of a New Neuraminidase Detection Assay with an Enzyme Immunoassay, Immunofluorescence, and Culture for Rapid Detection of Influenza A and B Viruses in Nasal Wash Specimens. Journal of Clinical Microbiology, Mar. 2000, p. 1161 1165 Vol. 38, No. 3. 2. Newman A.P. et al. Human Case of Swine Influenza A (H1N1) Triple Reassortant Virus Infection, Wisconsin. Emerging Infectious Diseases, Sept 2008, Vol 14, No. 9, pp1470-1472. 3. Andreea C. Cazacu, Gail J. Demmler et al. Comparison of a New Lateral-Flow Chromatographic Membrane Immunoassay to Viral Culture for Rapid Detection and Differentiation of Influenza A and B Viruses in Respiratory Specimens. Journal of Clinical Microbiology, Aug. 2004, p. 3661 3664 Vol. 42, No. 8. 4. Kenneth E. Irmen and James J. Kelleher. Use of Monoclonal Antibodies for Rapid Diagnosis of Respiratory Viruses in a Community Hospital. Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology, May 2000, p. 396 403 Vol. 7, No. 3. POUŽITÉ SYMBOLY: Určeno pro diagnostiku in vitro Datum expirace Číslo šarže Výrobce Datum poslední revize: Leden 2011 6