Calcitonin IRMA (CT)

Návod k použití Fiche technique Calcitonin IRMA (CT) Radioreceptorový test ke kvantitativnímu in vitro diagnostickému stanovení kalcitoninu v lidském séru. RE13031 100 2-8 C I B L I N T E R N A T I O N A L G M B H Flughafenstrasse 52a Phone: +49 (0)40-53 28 91-0 IBL@IBL-International.com D-22335 Hamburg, Germany Fax: +49 (0)40-53 28 91-11 www.ibl-international.com

URČENÉ POUŽITÍ Radioreceptorový test ke kvantitativnímu in vitro diagnostickému stanovení kalcitoninu v lidském séru. FYZIOLOGIE Kalcitonin je polypeptid o 32 aminokyselinách, který je vylučován převážně parafolikulárními C-buňkami štítné žlázy. Jeho hlavním biologickým účinkem je potlačení osteoklastické resorpce kostní tkáně. Z tohoto důvodu je kalcitonin využíván při onemocněních charakterizovaných zvýšenou resorpční aktivitou (například při Pagetově chorobě) a u některých pacientů s osteoporózou. Aminokyselinové sekvence kalcitoninu prasat, skotu, lososa a lidí jsou známy a na základě tohoto poznatku byly syntetizovány biologicky aktivní molekuly. Strukturně jsou si tyto kalcitoniny podobné, jejich imunologická aktivita se však značně liší. Nejvýznamnější chorobou, při níž dochází k poruše regulace a hypersekreci kalcitoninu je medulární karcinom štítné žlázy (MTC). Jedná se o nádor C-buněk štítné žlázy, produkujících kalcitonin. Tento typ nádoru se objevuje u 5-10 % všech malignit štítné žlázy. Může se vyskytnout náhodně nebo ve familiární formě, která je přenášena autozomálně a její gen je dominantní. Přestože jde o nádor poměrně neobvyklý, má vzhledem k dědičnosti familiární formy velký klinický význam. Kromě toho jej lze v časném stádiu diagnostikovat měřením sérové hladiny kalcitoninu. Nádor má často i jiné klinické projevy a je dobře léčitelný chirurgickým zákrokem. Ačkoli jde o vzácný nádor, může se familiárně projevit jako mnohočetná endokrinní neoplazie typu II. Tyto nádory obvykle produkují zvýšené sérové koncentrace kalcitoninu, takže lze jejím imunochemickým měřením diagnosticky prokázat MTC s mimořádnou přesností a specifičností. U malého, ale rostoucího procenta pacientů ovšem nelze bazální hladiny hormonů rozlišit od normálního stavu. U některých z nich se jedná o ranou fázi neoplazie nebo hyperplazie C-buněk, kterou lze nejsnáze řešit chirurgicky. Při diagnostice těchto pacientů jsou nezbytné testy stimulované sekrece kalcitoninu k vyloučení falešně negativních výsledků, které se objevují při měření bazálního kalcitoninu samotného. Většina nádorů reaguje zvýšenou sekrecí kalcitoninu na podání vápníku, pentagastrinu nebo jejich kombinace, každá z těchto látek však může stále přinést zavádějící výsledky. V případech s klinickou manifestací je tedy vhodné provést diagnostické testování s oběma těmito látkami. Měření hladin kalcitoninu lze také využít ke sledování účinnosti léčby u pacientů s nádory produkujícími kalcitonin. Hladiny kalcitoninu mohou být zvýšené i u malignit jiných neuroendokrinních buněk. Nejlepším příkladem je malobuněčný karcinom plic, podobné účinky však mají i jiné tumory, např. karcinoidy a nádory alfa a beta buněk slinivky. Zvýšení sérové hladiny kalcitoninu bylo také zaznamenáno při akutním a chronickém selhání ledvin, hyperkalciurii a hypokalcémii. PRINCIP TESTU Calcitonin IRMA je sendvičové imunoradiometrické stanovení k měření hladin kalcitoninu. Jeho základem jsou dvě různé kozí polyklonální protilátky proti lidskému kalcitoninu, přečištěné afinitní chromatografií a specifické pro přesně definované oblasti na molekule kalcitoninu. Vzorek obsahující kalcitonin je inkubován s imobilizační protilátkou (na povrchu zkumavky) a protilátkou označenou izotopem 125 I. Kalcitonin přítomný ve vzorku se váže na imobilizovanou i izotopicky označenou protilátku a vytvoří tzv. sendvičový komplex: protilátka na zkumavce --- neporušený kalcitonin (1 32) --- protilátka označená 125 I Na konci inkubace jsou ze zkumavky vypláchnuty nenavázané částice. Radioaktivita vázaná na pevné fázi se měří na čítači gama záření. Ke vzniku sendvičového komplexu dochází jen v přítomnosti kalcitoninové molekuly, takže radioaktivita komplexu vázaného na zkumavku je přímo úměrná množství kalcitoninu ve vzorku. Z výsledků standardů měřených současně s analyzovanými vzorky se pak vygeneruje křivka závislosti výše radioaktivity na koncentraci analytu. Z ní pak lze přímo stanovit koncentrace kalcitoninu v kontrolách a vzorcích od pacientů. Pozitivní hodnotu kalcitoninu je třeba potvrdit změřením stejného vzorku ve specifickém testu na prokalcitonin k vyloučení falešně pozitivních nálezů. Version 11-1 2007-02-13 1 / 10

REAGENCIE Souprava stanovení obsahuje dostatek reagencií ke změření 100 zkumavek. Její obsah je stabilní při teplotě 2 8 C až do uvedeného data exspirace. KALCITONINOVÉ STANDARDY CAL Jedna sada standardů se skládá z šesti lahviček obsahujících lyofilizované lidské sérum s různými koncentracemi lidského kalcitoninu a 0.1 % azidu sodného. Tyto standardy jsou kalibrovány podle mezinárodního kalcitoninového standardu Světové zdravotnické organizace (druhý mezinárodní standard 89/620). Lahvičky skladujte při teplotě 2 8 C až do uvedeného data exspirace. KONTROLNÍ SÉRUM S KALCITONINEM CONTROL Dvě lahvičky obsahující lyofilizované lidské sérum s lidským kalcitoninem a 0.1 % azidu sodného. Rozsahy pro konkrétní šarži naleznete na štítku lahvičky. Lahvičky skladujte při teplotě 2 8 C až do uvedeného data exspirace. PROTILÁTKA PROTI KALCITONINU OZNAČENÁ 125 I TRACER Jedná se o dvě lahvičky po 5.0 ml protilátky v pufrovaném proteinovém roztoku. Skladujte při teplotě 2 8 C až do uvedeného data exspirace. Každá lahvička obsahuje méně než 10 µci (370 kbq) izotopu 125 I. ZKUMAVKY POTAŽENÉ PROTILÁTKOU PROTI KALCITONINU TUB Dva balíčky po 50 polystyrenových zkumavkách. Zkumavky jsou potažené kozí polyklonální protilátkou proti lidskému kalcitoninu. Skladujte při teplotě 2 8 C až do uvedeného data exspirace. Chraňte před vlhkostí. Před otevřením balíčku nechte zkumavky vytemperovat na teplotu laboratoře. Ihned po vyjmutí potřebných zkumavek balíček uzavřete. Neodstraňujte desikační látku. PROMÝVACÍ ROZTOK (30x koncentrovaný) WASHBUF Jedna lahvička obsahuje 30 ml surfaktantu ve fosfátem pufrovaném fyziologickém roztoku a konzervační látku 1.5 % azidu sodného. PŘÍPRAVA REAGENCIÍ NULOVÝ STANDARD PRO KALCITONIN Rozpusťte lahvičku ve 4.0 ml destilované nebo deionizované vody. Ponechte odstát po 30 minut při pokojové teplotě (15-30 C), pak důkladně promíchejte opatrným obracením a zcela rekonstituovaný roztok uložte do ledové lázně. Rekonstituované standardy jsou stabilní alespoň 6 týdnů, jsou-li uchovávány při teplotě -20 C. Standard nerozmrazujte více než 3x. KALCITONINOVÉ STANDARDY Rekonstituci každé lahvičky provádějte ve 2.0 ml destilované nebo deionizované vody. Ponechte odstát po 30 minut při pokojové teplotě, pak důkladně promíchejte opatrným obracením a zcela rekonstituovaný roztok uložte do ledové lázně. Rekonstituované standardy jsou stabilní alespoň 6 týdnů, jsou-li uchovávány při teplotě -20 C. Standardy nerozmrazujte více než 3x. KONTROLNÍ SÉRUM S KALCITONINEM Rekonstituci každé lahvičky provádějte ve 2.0 ml destilované nebo deionizované vody. Ponechte odstát po 30 minut při pokojové teplotě, pak důkladně promíchejte opatrným obracením a zcela rekonstituovaný roztok uložte do ledové lázně. Rekonstituované kontroly jsou stabilní alespoň 6 týdnů, jsou-li uchovávány při teplotě -20 C. Kontroly nerozmrazujte více než 3x. PROMÝVACÍ ROZTOK (30x koncentrovaný) Koncentrát promývacího roztoku důkladně promíchejte v 870 ml destilované nebo deionizované vody. Skladujte při pokojové teplotě až do uvedeného data exspirace soupravy. Koncentrát obsahuje vysoké procento soli, která při nižších teplotách může precipitovat. Tento precipitát není na závadu, pokud jej důkladně promícháte s vodou. UPOZORNĚNÍ A ZVLÁŠTNÍ OPATŘENÍ PRO POUŽITÍ Použití stanovení Reagencie jsou určeny pouze pro diagnostické použití in vitro. Upozornění na rizikovost lidského séra Lidské sérum v této soupravě bylo připraveno z materiálů od lidských dárců, kteří v testech provedených pomocí imunoanalýz schválených FDA nevykázali reakci na povrchový antigen hepatitidy B (HBsAg), Version 11-1 2007-02-13 2 / 10

protilátky proti HIV I/II ani HCV. Nicméně doporučujeme standardy a kontroly považovat za potenciálně biologicky nebezpečné a zacházet s nimi stejně opatrně, jako s netestovanými vzorky pacientů. Upozornění na radioaktivní materiál Všechny radioaktivní materiály je nutno likvidovat podle předpisů dané země a pokynů orgánů s pravomocí v oblasti, kde laboratoř sídlí. V prostorách, kde jsou využívány radioaktivní materiály, je zakázáno jíst, pít, kouřit a aplikovat si kosmetiku. Skladování radioaktivních materiálů by je možné pouze ve speciálně určených a náležitě zabezpečených prostorách. Přístup k radioaktivnímu materiálu smí mít pouze autorizovaný a vyškolený personál. Nepipetujte radioaktivní roztoky ústy. Chraňte se před přímým kontaktem s radioaktivními materiály pomocí ochranných pomůcek (laboratorní pláště a jednorázové rukavice). Radioaktivní materiály je nutno skladovat v určených prostorách, v původních obalech nebo v kontejnerech, které poskytují odpovídající ochranu proti záření. O likvidaci všech radioaktivních materiálů je nutné vést evidenci. Rozlité roztoky ihned odstraňte a kontaminované přístroje a zařízení dekontaminujte. Laboratorní vybavení a sklo pravidelně kontrolujte, zda není kontaminováno radioizotopy. S tímto radioaktivním materiálem mohou manipulovat a využívat jej pouze lékaři, klinické laboratoře a nemocnice, a to pouze k in vitro klinickým nebo laboratorním testům, při nichž materiál není podáván ani jeho záření aplikováno vnitřně nebo externě lidem nebo zvířatům. Jeho přijetí, pořízení, držení, používání a převod podléhají předpisům a povolením země použití. Upozornění azid sodný Některé reagencie v kalcitoninovém testu obsahují azid sodný (NaN 3 ). Azid sodný může reagovat s olověnými a měděnými armaturami a vytvářet vysoce výbušné kovové azidy. Při likvidaci spláchněte velkým množstvím vody, abyste tvorbě azidů předešli. Zamezte přímému styku s pokožkou. PŘÍPRAVA A SKLADOVÁNÍ VZORKŮ Stanovení lidského kalcitoninu se provádí na vzorcích séra. K jeho provedení je nutný vzorek 400 µl séra (v duplikátu). Krev odeberte do zkumavky neobsahující žádné přísady. Nechte krev srážet 1 4 hodiny (v ledové lázni nebo v chladničce). Poté zkumavku odstřeďte (nejlépe v chlazené odstředivce) a odeberte sérum. Pokud nebudete vzorek měřit ihned po odběru séra, okamžitě sérum zamrazte na -20 C. Nepoužívejte silně hemolyzované nebo lipemické vzorky. Zamezte opakovanému zmrazování a rozmrazování. POSTUP STANOVENÍ Dodávané materiály Souprava k měření kalcitoninu je dodávána s těmito komponentami: Popis Kalcitoninové standardy Kontrolní sérum s kalcitoninem Zkumavky potažené protilátkou proti kalcitoninu Protilátka proti kalcitoninu označená 125 I Koncentrát promývacího roztoku Návod k použití Počet 6 lahvičky 2 lahvičky 2 balíčky po 50 zkumavkách (celkem 100 zkumavek) 2 lahvičky 1 lahvička 1 leták Potřebné, ale nedodávané vybavení a spotřební materiál: Polystyrénové nebo polypropylenové zkumavky, 12 x 75 mm Přesné pipety: 200 µl Krokovací pipeta umožňující opakované dávkování: 100µL Stojánek na zkumavky Parafilm nebo ekvivalentní materiál k uzavření zkumavek Destilovaná či deionizovaná voda Třepačka typu vortex Budík schopný odměřit 24 hodin Rotátor schopný udržovat 180 ± 20 otáček/min Čítač gama záření kalibrovaný k detekci 125 I Version 11-1 2007-02-13 3 / 10

Příprava stanovení Při každém stanovení si připravte následující zkumavky a vložte je do stojanu (stanovení v duplikátech; při dostatečných zkušenostech není duplikát nutný): 2 zkumavky (nepotahované) ke změření celkové radiace izotopu 2 zkumavky pro každou z koncentrací standardu 2 zkumavky pro každou z kontrol 2 zkumavky pro každý vzorek od pacienta Postup pipetování a inkubace 1. 200 µl standardů, vzorků a kontrolních sér napipetujte do odpovídajících zkumavek. Pipetujte přímo na dno zkumavky. 2. Do každé zkumavky napipetujte 100 µl protilátky proti kalcitoninu označené 125 I. 3. Jemně zkumavky protřepejte na vortexové třepačce. 4. Stojan se zkumavkami zakryjte parafilmem nebo ekvivalentním materiálem. 5. Zkumavky inkubujte při pokojové teplotě (15 30 C) po 16 24 hodin na rotátoru (180 ± 20 otáček/min). 6. Odsajte obsah zkumavek (s výjimkou zkumavek k měření celkové radiace) a přidejte 2 ml promývacího roztoku. Odsajte promývací roztok. Opakujte promývání ještě dvakrát. 7. Radioaktivitu promytých zkumavek měřte jednu minutu na čítači gama záření. Schématické znázornění imunoanalýzy Calcitonin IRMA Tube Standardů/ Promývacího Incubace Promývacího Měří Kontrol roztoku roztoku Radioactivité 125 I-Calcitonin Nulového standardu 200 µl 100 µl 2 ml 10 pg/ml 30 pg/ml 100 pg/ml 300 pg/ml Vortex všechny 1000 pg/ml Contrôle I 16-24 hodiny na třepačce 180 + 20 rpm odsáváni roztoku 3 x opatření jedna minuta Contrôle II Vzorek 1 Vzorek 2 Pokud je nutné změřit i celkovou radiaci izotopu, označte příslušným způsobem jednu zkumavku (nebo dvě k zajištění duplikátu), napipetujte do každé 100 µl protilátky proti kalcitoninu označené 125 I a uzavřete. POZNÁMKY K POSTUPU Známé rušivé vlivy: Silně hemolyzované nebo lipemické vzorky. Vzorky od pacientů, kteří (z diagnostických nebo terapeutických důvodů) obdrželi dávku radioizotopů. Kontaminace vzorku nebo měřené zkumavky izotopem 125 I nebo jinými radioizotopy. Mezi soupravami nelze zaměňovat reagencie s různými čísly šarží. Všechny reagencie aplikované do zkumavek je třeba pipetovat přímo na dno zkumavek. V opačném případě může dojít ke ztrátám látky na stěně zkumavek. Version 11-1 2007-02-13 4 / 10

Promývání je důležitou součástí analýzy. Zásadním předpokladem k dosažení deklarované citlivosti a přesnosti stanovení a nízkého pozadí je přesné dávkování promývacího roztoku a úplná aspirace obsahu zkumavek. Standardy a vzorky pacientů doporučujeme měřit v duplikátech. Ke zjednodušení výpočtu výsledků lze použít průměry CPM za oba duplikáty. Na každý vzorek použijte novou špičku pipety, abyste do něj nezanesli kontaminaci ze vzorků předchozích. VÝPOČET VÝSLEDKŮ Vyhodnocení Z výsledků kalcitoninových standardů se vytvoří kalibrační křivka. Přesné koncentrace jednotlivých standardů najdete na jejich lahvičkách. Křivku vytvořte takto:*: 1. Vypočítejte průměrné CPM za každý duplikát měřených zkumavek. 2. Od získané hodnoty odečtěte CPM zkumavek s nulovým standardem získáte tak korigované hodnoty CPM. 3. Kalibrační křivka se vytváří na logaritmickém papíru; na ose Y mají být korigované hodnoty CPM standardů, na ose X jejich koncentrace. *K výpočtu lze také použít počítačové programy určené k redukci dat v analýzách IRMA, například 9, 10 čtyřparametrový logistický program nebo algoritmus Kubický splajn Příklad výpočtu standardů: Průměrné CPM nulového standardu = 442 Průměrné CPM standardu s koncentrací 10 pg/ml = 1087 CPM (10 pg/ml) CPM (0 pg/ml) = 1087-442 Korigované CPM = 645 Koncentrace pod hodnotou standardu s nejnižší koncentrací Korigované CPM (Neznámá) Neznámá koncentrace = Korigované CPM Nejnižší standard x Koncentrace nejnižšího standardu Data vzorků Tube CPM CPM průměrné Celková radiace 261362 251421 256391 Nulovy standard 444 440 442 CPM korigované 10 pg/ml 1095 1080 1087 645 30 pg/ml 2422 2283 2352 1910 100 pg/ml 6268 6323 6295 5853 300 pg/ml 17245 17102 17173 16731 1000 pg/ml 53197 53711 53454 53012 Kalcitonin Kontrol I 1676 1673 1674 1232 19 Kontrol II 12187 12056 12121 11679 207 POZNÁMKA: Uváděné údaje jsou pouze demonstrační a nelze je používat místo dat získaných při měření. Version 11-1 2007-02-13 5 / 10

R e p r e z e n t a t iv n í k a lib r a c n í k r iv k a 1 0 0 0 0 0 C P M 1 0 0 0 0 k o r i g o v a n é 1 0 0 0 1 0 0 1 1 0 1 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0 K a lc it o n in K vytvoření kalibrační křivky kalcitoninu lze také použít automatickou redukci dat. Chcete-li naprogramovat systém k automatizované redukci dat nebo si přizpůsobit existující program, poraďte se s dodavatelem programu nebo programátorem. KONTROLA KVALITY S každou dávkou standardů a vzorků pacientů měřte i kontrolní séra. Výsledky analýzy kontrolních sér zkontrolujte pomocí vhodných statistických metod, zda jsou přijatelné. Pokud některá z hodnot kontrolních sér leží mimo přípustné meze, výsledky pacientských vzorků z daného běhu nemusí být platné. OMEZENÍ METODY Získané výsledky kalcitoninu musí být stejně jako hodnoty jiných diagnostických analytů interpretovány opatrně a s přihlédnutím k celkovému klinickému stavu a výsledkům jiných diagnostických testů. Imunologické analýzy jsou optimalizovány a kalibrovány ke stanovení antigenů v neporušeném a nezměněném stavu. Obecné varianty nebo degradace antigenů (rozpad na podjednotky nebo jiné fragmenty) mohou změnit jejich vazebné vlastnosti vzhledem k protilátkám a tak ovlivnit konečné výsledky. Dopad takových změn nemusí být stejný u všech analytických metod, takže se mohou výsledky různých testů lišit. U analýzy nebyla ověřována interference žádnými léky. OČEKÁVANÉ HODNOTY Doporučujeme, aby si každá laboratoř stanovila rozsahy očekávaných hodnot. Stanovení Calcitonin IRMA bylo použito ke stanovení hladiny kalcitoninu v séru od 125 zjevně zdravých dospělých, a to podle směrnic NCCLS (CA28-A). Do studie bylo zařazeno 72 žen a 53 mužů. Naměřené hladiny kalcitoninu byly v souladu s literaturou obecně nižší u normálních žen než u normálních mužů. Rozsah pozorovaný u 53 mužů činil 3 21 pg/ml, očekávaná hodnota u 72 žen byla 1 8 pg/ml. PRACOVNÍ CHARAKTERISTIKA Přesnost a reprodukovatelnost Přesnost (variabilita uvnitř testu) stanovení Calcitonin IRMA byla vypočtena z 20 opakovaných měření tři vzorků séra ve stejném testu. Reprodukovatelnost stanovení (variabilita mezi jednotlivými testy) byla zjištěna provedením 20 různých testů se třemi vzorky séra. Version 11-1 2007-02-13 6 / 10

Variabilita uvnitř testu Čísly šarží Std. Průměrná hodnota. Směrodatné odchylky % Koeficient de variace E1 1 19.58 0.68 3.48 E1 2 189.37 3.33 1.76 E1 3 504.61 10.44 2.07 E2 1 16.93 0.37 2.17 E2 2 186.97 3.35 1.79 E2 3 511.59 9.10 1.78 E3 1 15.72 1.45 9.24 E3 2 178.52 8.93 5.00 E3 3 475.11 12.20 2.57 Poznámka: Studie prokázaly, že při uplynutí doby exspirace soupravy se přesnost změní o méně než 10 %. Variabilita mezi jednotlivými testy Čísly Std. šarží Průměrná hodnota. Směrodatné odchylky % Koeficient de variace E1 1 19.73 1.81 9.18 E1 2 188.09 14.05 7.47 E1 3 487.73 32.19 6.6 E2 1 16.48 0.38 2.33 E2 2 178.78 6.44 3.60 E2 3 466.79 18.27 3.91 E3 1 17.31 1.68 9.72 E3 2 180.97 7.69 4.25 E3 3 483.93 18.71 3.87 Citlivost a limit detekce Detekčním limitem stanovení se rozumí nejnižší měřitelná hodnota odlišitelná od nuly. Tato citlivost byla stanovena měřením nulového kalibrátoru 20x ve stejném testu. U stanovení Calcitonin IRMA tento limit činí přibližně 1 pg/ml při hodnotě průměr nulového standardu CT plus dvě směrodatné odchylky. Funkční citlivostí se rozumí koncentrace, naměřitelná s koeficientem variability uvnitř testu ve výši 20 %. Předpokládaná citlivost činí 1 pg/ml. Nejvyšší koncentrace kalcitoninu měřitelná bez ředění vzorku je koncentrace nejvyššího (nejkoncentrovanějšího) kalibrátoru (asi 1000 pg/ml). Version 11-1 2007-02-13 7 / 10

Saturační efekt (High Dose Hook) při vysoké koncentraci Žádný saturační efekt nebyl zjištěn až do hodnoty 1000 pg/ml, což je hodnota v lineární části křivky stanovení. Tento poznatek byl zjištěn měřením CPM u roztoku obohaceného o syntetický kalcitonin (1 32) v sérii ředění od 100000 pg/ml až po hodnotu nejnižšího standardu. Při 12500 pg/ml je hodnota CPM stále vyšší než u nejvyššího standardu. Všechny vzorky s výsledkem přes 100 pg/ml proto doporučujeme naředit 1:10 nulovým standardem a případně ředit dále (vždy 10x), dokud není naměřený výsledek opakovatelný. Interferující látka Koncentrace Interferující látka Kalcitonin bez Interferující látka Kalcitonin s Interferující látka Změna koncentrace Kalcitonin Zkřížená reaktivita (%) PTH 100.000 pg/ml 25.000 pg/ml 10.000 pg/ml 363.35 349.80 350.79 3.97-9.58-8.59 0.00397-0.03832-0.0859 TSH 5.000 µlu/ml 500 µlu/ml 50 µlu/ml 354.26 360.00 359.52-5.12 0.62 0.14-0.1024 0.124 0.28 Kalcitoninu příbuzný peptid (CGRP) 1.000.000 pg/ml 100.000 pg/ml 353.28 363.08-6.1 3.7 0.0061 0.0037 Prasečí kalcitonin 1.000.000 pg/ml 100.000 pg/ml 350.17 365.33-9.21 5.95-0.000921 0.00595 Lososí kalcitonin 1.000.000 pg/ml 100.000 pg/ml 311.62 349.80-47.76-9.58-0.004776-0.00958 Souhrn: Každá interferující látka byla uměle přidána do vzorku obsahujícího kalcitonin. Hladina kalcitoninu byla měřena před a po přidání dané látky. Závěr: Koncentrace přidaných interferujících látek nemá vliv na naměřenou koncentraci kalcitoninu. Proto lze konstatovat, že žádná z těchto látek (v testovaných koncentracích) neinterferuje s výsledky stanovení Calcitonin IRMA. Analytická výtěžnost Různá množství kalcitoninu byla přidána do čtyř různých sér od pacientů k posouzení výtěžnosti. Výsledky jsou popsány v následující tabulce: VZOREK ID Endogenní Calcitonin Přidáno Calcitonin Teoretická Měřeno Calcitonin Teoretická měřená hodnota Kalcitonin Výtěžnost (%) Vzorek 1 33.16 33.16 33.16 -- 33.16 +30.77 63.93 68.83 108 33.16 +100.27 133.43 134.79 101 Vzorek 2 170.35 170.35 170.35 -- 170.35 +32.19 202.54 207.18 102 170.35 +108.37 278.72 267.00 96 Vzorek 3 410.26 410.26 410.26 -- 410.26 +63.40 473.66 494.35 104 410.26 +210.83 621.09 678.47 109 Vzorek 4 3.56 3.56 3.56 -- 3.56 +950.00 953.56 988.54 104 Version 11-1 2007-02-13 8 / 10

Linearita ředění pacientských vzorků: Reprodukovatelnost Šest vzorků sér od pacientů bylo naředěno nulovým standardem. Výsledky v pg/ml jsou uvedeny v následující tabulce: Vzorek ID Rozředění Přidáno Calcitonin hodnota pg/ml) Vzorek 1 Vzorek 2 Vzorek 3 Vzorek 4 Vzorek 5 Vzorek 6 Korelace: Non dilué 1:2 1:4 Non dilué 1:2 1:4 1:8 1:16 Non dilué 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 Non dilué 1:2 1:4 Non dilué 1:2 1:4 1:8 1:16 Non dilué 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 54.81 28.24 14.82 261.76 153.81 79.50 35.44 17.04 949.99 589.96 322.23 165.95 81.44 39.1 18.09 9.43 40.99 18.02 10.28 181.30 99.75 41.51 18.66 10.21 523.46 336.56 182.14 89.34 36.73 16.28 Výsledky korigovány faktor ředění 54.81 56.48 59.28 261.76 307.62 318.00 283.52 272.64 949.99 1179.92 1288.92 1327.60 1303.04 1251.20 1157.76 1207.04 40.99 36.04 41.12 181.30 199.50 166.04 149.28 163.36 523.46 673.12 728.56 714.72 587.68 520.96 Výtěžnost (%) -- 103 108 -- 118 121 108 104 -- 124 136 140 137 132 122 127 -- 88 110 -- 110 92 82 90 -- 129 139 137 112 100 U 248 vzorků normálního séra, z nichž některé byly uměle obohaceny o kalcitonin, byl kalcitonin stanoven pomocí imunoradiometrického stanovení IBL a srovnatelné běžně prodávané soupravy. Měření oběma metodami bylo provedeno ve stejný den. Byl zjištěn korelační koeficient (R) 0.98 se směrnicí 1.06 a posunem -1.48, kde na ose x jsou vynesena data z referenční metody a na y výsledky stanovení Calcitonin IRMA. Výpočty byly provedeny se vzorky séra s koncentrací 1.00 951 pg/ml. Version 11-1 2007-02-13 9 / 10

Chemická charakterizace komponent soupravy: Nebezpečné složky: 1) Protilátky na polystyrenových kuličkách (nebo zkumavkách) 2) Radioaktivní izotop (jód 125) s radioaktivitou <10 µci a azidem sodným 0.1 %. 3) Kalibrátory a Kontroly lidské sérum obsahující azid sodný 0.1 %. 4) Koncentrát promývacího roztoku obsahující azid sodný 1.5 %. Radioaktivní izotop (jód 125) @ <10 µci/flacon (<370 kbq) Číslo CAS: 7553-56-2 Symboly: Xn Zdraví škodlivý Fráze R: R22, R52/53 Fráze S: S28, S45, S53, S60, S61 Azid sodny @ 0.1 % Číslo CAS: 026628-22-8 Symboly: Xn Zdraví škodlivý Fráze R: R22, R31, R52/53 Fráze S: S28, S45, S53, S60, S61 Azid sodny @ 1.5 % Číslo CAS: 026628-22-8 Symboly: Velmi toxický T+; N Fráze R: R28, R32, R50/53 Fráze S: S28, S45, S53, S60, S61 LITERATURA KALCITONIN Deftos, L.J., Primer on the Metabolic Bone Diseases and Disorders of Mineral Metabolism, (edited by Favus, N.J.), 1st Edition, American Society for Bone and Mineral Research, 1990. Deftos, L.J., Calcitonin Secretion in Humans. In: Cooper, C.W. (ed). Current Research on Calcium Regulating Hormones. Univ. Of Texas Press, Austin, TX, pp 79-100, 1987. Deftos, L.J., Weisman, M.H., Williams, G.H., Karpf, D.B., Frumar, A.M., Davidson, B.H., Parthemore, J.G., Judd, H.L., Influence of age and sex on plasma calcitonin in human beings. N. Engl. J. Med. 302:1351-1353, 1980. Travis, J.C., (ed) Clinical Radioimmunoassay... State-of-the-Art, Scientific News Letters, Inc. Radioassay - Legend Assay Publishers, Anaheim, CA 92803, 1980, 1st Edition. Austin, L.A., and Heath, H., III, Medical Progress, Calcitonin Physiology and Pathophysiology, N. Engl. J. Med. 304:269,1981. Parthemore, J.G., Bronzert, G.R., and Deftos, L.J., A short calcium infusion in the diagnosis of medullary thyroid carcinoma, J. Clin. Endocrinol. Metab. 39:108,1974. Hennedssy, J.F., Wells, S.A., Ontjes, D.A., and Cooper, C.W., A comparison of pentagastrin injection and calcium infusion as provocative agents for the detection of medullary carcinoma of the thyroid, J. Clin. Endocrinol. Metab. 39:487, 1974. Wells, S.A., Baylin, S.B., Linehan, W.M. et al, Provocative agents and the diagnosis of medullary carcinoma of the thyroid gland. Ann. Surg. 188:139, 1978. Malan, P.G. et al. Curve-fitting to Radioimmunoassay Standard Curves: Spline and Multiple Binding-Site Models. Ann. Clin. Biochem. 15: 132, 1978. Version 11-1 2007-02-13 10 / 10

Symbols / Symbole / Symbôles / Símbolos / Símbolos / Σύµβολα REF LOT Cat.-No.: / Kat.-Nr.: / No.- Cat.: / Cat.-No.: / N.º Cat.: / N. Cat.: / Αριθµός-Κατ.: Lot-No.: / Chargen-Bez.: / No. Lot: / Lot-No.: / Lote N.º: / Lotto n.: / Αριθµός -Παραγωγή: Use by: / Verwendbar bis: / Utiliser à: / Usado por: / Usar até: / Da utilizzare entro: / Χρησιµοποιείται από: No. of Tests: / Kitgröße: / Nb. de Tests: / No. de Determ.: / N.º de Testes: / Quantità dei tests: / Αριθµός εξετάσεων: CONC Concentrate / Konzentrat / Concentré / Concentrar / Concentrado / Concentrato / Συµπύκνωµα LYO IVD Lyophilized / Lyophilisat / Lyophilisé / Liofilizado / Liofilizado / Liofilizzato / Λυοφιλιασµένο In Vitro Diagnostic Medical Device. / In-vitro-Diagnostikum. / Appareil Médical pour Diagnostics In Vitro. / Dispositivo Médico para Diagnóstico In Vitro. / Equipamento Médico de Diagnóstico In Vitro. / Dispositivo Medico Diagnostico In vitro. / Ιατρική συσκευή για In-Vitro ιάγνωση. Evaluation kit. / Nur für Leistungsbewertungszwecke. / Kit pour évaluation. / Juego de Reactivos para Evaluació. / Kit de avaliação. / Kit di evaluazione. / Κιτ Αξιολόγησης. Read instructions before use. / Arbeitsanleitung lesen. / Lire la fiche technique avant emploi. / Lea las instrucciones antes de usar. / Ler as instruções antes de usar. / Leggere le istruzioni prima dell uso. / ιαβάστε τις οδηγίες πριν την χρήση. Keep away from heat or direct sun light. / Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schützen. / Garder à l abri de la chaleur et de toute exposition lumineuse. / Manténgase alejado del calor o la luz solar directa. / Manter longe do calor ou luz solar directa. / Non esporre ai raggi solari. / Να φυλάσσεται µακριά από θερµότητα και άµεση επαφή µε το φως του ηλίου. Store at: / Lagern bei: / Stocker à: / Almacene a: / Armazenar a: / Conservare a: / Αποθήκευση στους: Manufacturer: / Hersteller: / Fabricant: / Productor: / Fabricante: / Fabbricante: / Παραγωγός: Caution! / Vorsicht! / Attention! / Precaución! / Cuidado! / Attenzione! / Προσοχή! Symbols of the kit components see MATERIALS SUPPLIED. Die Symbole der Komponenten sind im Kapitel KOMPONENTEN DES KITS beschrieben. Voir MATERIEL FOURNI pour les symbôles des composants du kit. Símbolos de los componentes del juego de reactivos, vea MATERIALES SUMINISTRADOS. Para símbolos dos componentes do kit ver MATERIAIS FORNECIDOS. Per i simboli dei componenti del kit si veda COMPONENTI DEL KIT. Για τα σύµβολα των συστατικών του κιτ συµβουλευτείτε το ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ. IBL AFFILIATES WORLDWIDE IBL International GmbH Flughafenstr. 52A, 22335 Hamburg, Germany IBL International Corp. 194 Wildcat Road, Toronto, Ontario M3J 2N5, Canada Tel.: + 49 (0) 40 532891-0 Fax: -11 E-MAIL: IBL@IBL-International.com WEB: http://www.ibl-international.com Tel.: +1 (416) 645-1703 Fax: -1704 E-MAIL: Sales@IBL-International.com WEB: http://www.ibl-international.com LIABILITY: Complaints will be accepted in each mode written or vocal. Preferred is that the complaint is accompanied with the test performance and results. Any modification of the test procedure or exchange or mixing of components of different lots could negatively affect the results. These cases invalidate any claim for replacement. Regardless, in the event of any claim, the manufacturer s liability is not to exceed the value of the test kit. Any damage caused to the kit during transportation is not subject to the liability of the manufacturer Symbols Version 3.5 / 2012-01-20