FUNKČNÍ VZOREK. ELISA test pro kvantifikaci bovinního interferonu-gama
|
|
- Klára Bártová
- před 8 lety
- Počet zobrazení:
Transkript
1 VÝZKUMNÝ ÚSTAV VETERINÁRNÍHO LÉKAŘSTVÍ, V.V.I. FUNKČNÍ VZOREK ELISA test pro kvantifikaci bovinního interferonu-gama MVDr. Martin Faldyna, Ph.D. Hana Kudláčková Eva Kotlářová MVDr. Zora Smržová Mgr. Radek Tesařík, Ph.D. prof. MVDr. Vladimír Celer, Ph.D. Mgr. Jitka Janková 2013
2 FUNKČNÍ VZOREK ELISA test pro kvantifikaci bovinního interferonugama Autoři MVDr. Martin Faldyna, Ph.D. 1 Hana Kudláčková 1 Eva Kotlářová 1 MVDr. Zora Smržová 1 Mgr. Radek Tesařík, Ph.D. 1 Mgr. Jitka Janková, Ph.D. 2 prof. MVDr. Vladimír Celer, Ph.D. 2 1 Výzkumný ústav veterinárního lékařství, v.v.i., Brno 2 Veterinární a farmaceutická univerzita Brno Funkční vzorek byl vytvořen v rámci projektu Národní agentury zemědělského výzkumu (QI101A094), Ministerstva zemědělství České republiky (MZe ) a projektu AdmireVet (CZ.1.05/2.1.00/ , ED0006/01/01) a projektu CEITEC Středoevropského technologického institutu (CZ.1.05/1.1.00/ ). ISBN
3 Funkční vzorek ELISA test pro kvantifikaci bovinního interferonu-gama MVDr. Martin Faldyna, Ph.D. Hana Kudláčková Eva Kotlářová MVDr. Zora Smržová Mgr. Radek Tesařík, Ph.D. Mgr. Jitka Janková, Ph.D. prof. MVDr. Vladimír Celer, Ph.D. 2013
4 OBSAH 1. Úvod 3 2. Cíl metodiky 4 3. Vlastní popis metodiky Příprava komponent pro sestavení ELISA soupravy Metodika ELISA reakce Validace ELISA reakce 9 4. Srovnání novosti postupů Popis uplatnění funkčního vzorku Ekonomické aspekty Seznam použité související literatury Dedikace 13 1
5 1. Úvod Interferon-gama (IFN-γ) je jedním ze základních cytokinů výrazným způsobem ovlivňujícím funkci imunitního systému. Jeho role leží zejména v oblasti antiinfekční imunity, ale také v modulaci některých imunopatologických stavů. Jeho základním zdrojem jsou buňky imunitního systému přirození zabíječi, γδtcr-lymfocyty, ale tím zásadním producentem jsou Th1-lymfocyty. Hlavní biologickou funkcí je modulace spíše buněčného typu odpovědi, která je spojená s aktivací makrofágů (Murray, 1988). Imunitní odpověď zprostředkovaná Th1 lymfocyty je spojena s rozvojem IV. typu přecitlivělosti, který je někdy nazýván oddálený (DTH, delayed type of hypersenzitivity). Toho se v současnosti využívá pro detekci mykobakteriálních infekcí v chovech hospodářských zvířat při tuberkulinaci, která je založena na vpravení specifického antigenu (bovinního a aviárního tuberkulinu) do kůže testovaného zvířete. Výsledek reakce - detekce zduření v místě aplikace v pozitivním případě - se odečítá za hodin podle druhu zvířete. Zduření je způsobeno akumulací aktivovaných makrofágů a lymfocytů v místě aplikace. Poznání, že za rozvojem lokální reakce je Th1 typ odpovědi, vedlo k zavedení laboratorní detekce buněčné imunity pomocí tzv. interferonového testu, jehož základem je analýza produkce IFN-γ imunitními buňkami po jejich in vitro stimulaci specifickým antigenem (Rothel a kol., 1990; Wood a kol., 1991). Je to test relativně jednoduchý na provedení. Z praktického hlediska má ale dvě nevýhody je nutné pracovat s funkčními buňkami, takže vzorek nelze skladovat, a je spojen s kultivací buněk, takže vzorek je potřeba odebrat sterilně. Vzorek nesrážlivé krve (zpravidla 1 ml) se inkubuje po dobu 20 hodin s testovaným antigenem. Jako kontrola slouží vzorek krve inkubovaný bez antigenu. Po inkubaci se vzorky odstředí. Pro následné analýzy se používá plasma - buď hned, nebo je možno jí skladovat ve zmraženém stavu. Vyprodukovaný IFN-γ je následně kvantifikován pomocí sandwichové ELISA metody (obrázek 1). Za pozitivní výsledek se považuje situace, kdy ve vzorku inkubovaném s antigenem je IFN-γ více než ve vzorku bez antigenní stimulace. Tato situace ale nastane pouze v případě, že v průběhu imunitní reakce na infekci nebo vakcinaci došlo u testovaného jedince ke klonální expanzi specifických Th lymfocytů, které antigen použitý ke stimulaci rozpoznaly. Jako každý test má i interferonový test svá úskalí. Bylo například testováno, zda může být jeho výsledek ovlivněn předchozí intradermální tuberkulinací (Gormley a kol., 2004; Roberty a kol., 1995; Rothel a kol., 1992; Ryan a kol., 2000). Závěry těchto studií nejsou jednoznačné. Jednoznačné nejsou ani závěry studií zkoumajících vliv zpoždění zpracování vzorků na dosažené výsledky (Gormley a kol., 2004; Rothel a kol., 1992; Ryan a kol., 2000; Whipple a kol., 1995). Naše vlastní výsledky ukazují, např. že použití EDTA jako antikoagulační látky je naprosto nevhodné nebo že pokud není možné vzorek dopravit do laboratoře bezprostředně po odběru, je možné jej skladovat bez ovlivnění dosažených výsledků minimálně 24 hodin a lépe při chladničkové teplotě (Satinská a kol., 2013). 2
6 I když je použití interferonového testu v intravitální diagnostice v terénní praxi nejvíce studováno u mykobakteriálních infekcí přežvýkavců, tyto infekce nejsou jedinou aplikací. Mezi další choroby, u nichž je možné použít interferonový test pro jejich diagnostiku nebo pro testování vyvíjených vakcín patří i některé infekce etiologie virové - bovinní virová diarrhea, slintavka a kulhavka, infekční bovinní rhinotracheitida (Pantarollo a kol., 2002; Parida a kol., 2006; Reber a kol., 2006) nebo například trichofytóza (Faldyna a kol., 2007; Lund a kol., 2001). Metodou volby pro detekci produkovaného IFN-γ je ELISA, která se skládá z následujících komponent: vazná monoklonální protilátka potřebná pro zachycení detekovaného IFN-γ v mikrotitrační destičce, křenovou peroxidázou konjugovaná polyklonální protilátka pro vizualizaci zachyceného IFN-γ a rekombinantní IFN-γ důležitý pro kvantifikaci. Obrázek 1 Schéma využití ELISA testu pro kvantifikaci bovinního interferonu-gama v rámci tzv. interferonového testu (převzato z Faldyna, 2010) 2. Cíl metodiky Cílem metodiky bylo připravit klíčové komponenty pro sestavení a následnou validaci ELISA testu, který bude umožňovat kvantifikaci bovinního interferonu-gama. 3
7 3. Vlastní popis metodiky 3.1. Příprava komponent Příprava rekombinantního IFN-γ (rboifn-γ) Zdrojem genetického materiálu pro expresi bovinního interferonu gama byla mrna ze stimulovaných lymfocytů skotu. Extrakce mrna byla provedena NucleoSpin RNA II kit (Macherey-Nagel) kitem. Izolovaná mrna byla následně přepsána do cdna a amplifikována pomocí specifických primerů kitem QIAGEN OneStep RT-PCR Kit (Qiagen). Sekvence primerů byla navržena tak aby umožňovala klonování do pentr TM /SD/D-TOPO plazmidového vektoru (Invitrogen). Sekvence primerů použitá k amplifikaci boifn-γ genu byla: CACCTACTCCGGCCTAACTCTCTC sense primer AGGACCATTACGTTGATGCTCTCCG - antisense primer Klonování genu do plazmidového vektoru bylo provedeno dle návodu výrobce, vzniklá DNA konstrukcí byly transformovány kompetentní buňky E.coli, kmen TOP10 (Invitrogen). Následně byl genový fragment klonován do plazmidového vektoru pdest TM 17 Gateway Vector (Invitrogen) prostřednictvím rekombinační reakce zprostředkované enzymem LR Clonase TM II Enzyme Mix (Invitrogen). DNA insert byl umístěn v kontextu T7 transkripčních a translačních signálů a specifické sekvence kódující N-terminální polyhistidin. Exprese rekombinantního proteinu byla uskutečněna v bakteriálních buňkách E.coli BL21(DE3)pLysS (Invitrogen). Čerstvá noční kultura těchto buněk byla naředěna 1:50 ve 2L LB média suplementovaného ampicilinem (100 µg/ml) a kultivována při teplotě 37 C za neustálého třepání (250rpm) až do dosažení density OD Indukce exprese proteinu byla uskutečněna přidáním IPTG do koncentrace 100mM po dobu 3 hodin. Poté byly buňky odstředěny (4500g /15 min) a sediment byl uchováván při teplotě -20 C až do další manipulace. Purifikace rboifn-γ byla provedena metalochelatační afinitní chromatografií za denaturačních podmínek. Buněčný pelet byl resuspendován ve 40ml denaturačního Tris pufru (20 mm Tris ph 7.8, 1 M NaCl, 0.1 % Tween 20, 5 mm Dithiothreitol, 8M močovina) s přídavkem 10mM Imidazolu. Buněčný pelet pak byl opakovaně zamražen a rozmražen a uvolněná buněčná DNA byla rozrušena sonikací za neustálého chlazení. Po odstředění byl bakteriální lyzát smíchán s Ni- NTA agarózou (Qiagen) ekvilibrovanou denaturačním pufrem a inkubován za neustálého míchání po dobu 45 minut. Následně byla agaróza s navázaným rekombinantním proteinem opakovaně promývána denaturačním pufrem s přídavkem 40mM Imidazolu s postupně klesající koncentrací močoviny a nakonec byl protein vytěsněn 10 ml Tris pufru bez močoviny s přídavkem 250mM Imidazolu. Výtěžek a čistota získaného proteinu byly analyzovány SDS-PAGE (obrázek 2), protein pak byl skladován při -20 C. 4
8 Obrázek 2 SDS-PAGE analýza rboifn-γ získaného metodou popsanou v kapitole Příprava monoklonální protilátky Myš BALBc byla imunizovaná vnitrosvalovou aplikací 80 μg rboifn-γ na kus s kompletním Freundovým adjuvans a 3x reimunizovaná vždy po 3 týdnech s inkompletním Freundovým adjuvans. Imunizovaná myš byla usmrcena zlomením vazu a byla z ní vyjmuta slezina. Z ní byly mechanicky pomocí jehly, stříkačky a monofilu vyizolovány buňky, které byly 2x propláchnuty v bezsérovém médiu RPMI 1640 (PAA). Poté byly tyto buňky resuspendovány ve stejném médiu a spočítány. Myelomové buňky Sp2/0 byly po kultivaci v kultivačních lahvích setřepány, následně 2x promyty ve stejném médiu a spočítány. Vlastní fúze proběhla mezi slezinnými a myelomovými buňkami v bezsérovém médiu a v přítomnosti polyethylenglykolu (Sigma). Byly provedeny fúze dvě, a to A a B. Poměr slezinných a myelomových buněk byl v případě fúze A 4,3 : 1, u fúze B 4,8 : 1. Po fúzi a následném propláchnutí byly zfúzované buňky resuspendovány v médiu se sérem, fúze A v 20 ml, fúze B v 55 ml. Tyto suspenze buněk byly přeneseny na 96-jamkové kultivační destičky s plochým dnem, a to v objemu 100 µl/jamka. Kultivace probíhala v termostatu při 37 C a 5% vlhkosti. Druhý den bylo do každé jamky přikápnuto 50 µl selekčního média HAT (Sigma), jehož účelem je přežití pouze tzv. hybridomů, tj. soubuní, které vzniklo buněčnou fúzí mezi slezinnými a myelomovými buňkami. Každé 3-4 dny byla provedena kompletní výměna média opět za selekční médium HAT. Za 14 dnů po fúzi byly hybridomy převedeny ze selekčního HAT média do média bez HAT. Průběžně bylo sledováno hynutí buněk, případně růst přeživších buněk, resp. kolonií buněk. Za 14 dní po fúzi proběhlo první testování supernatantů technikou ELISA a dot-blot (viz níže) na přítomnost protilátek specifických pro rboifn-γ. Celkem bylo provedeno 14 sérií testování nově narostlých buněk, tj. otestovány byly buňky z cca 600 jamek. Vybrané pozitivní hybridomy byly naklonovány a po testování a následném výběru byl finální vybraný hybridom namnožen in vivo intraperitoneální aplikací 2 mil. buněk, které předcházela intraperitoneální aplikací 500 μl minerálního oleje. Získaná ascitická tekutina byla otestována a pomocí (NH 4 ) 2 SO 4 z ní byla vysrážena γ-frakce, která byla dále purifikována přes protein G. Takto získaný protein byl následně použit k sestavení soupravy. 5
9 Použití laboratorních myší bylo povoleno rozhodnutím resortní komise Ministerstva zemědělství ČR MZe 1218 (VÚVeL, v.v.i. č. 63/2010) Testování supernatantů metodou ELISA vazba antigenu - rboifn-γ naředěný na koncentraci 10 μg/ml ve vazném pufru o ph 9,6 byl napipetován do jamek mikrotitrační desky Maxisorp (Nunc) v objemu 100 μl / jamku - vazba přes noc při chladničkové teplotě - 4x promytí v roztoku PBS + 0,05% Tween 20 blokování nespecifických vazebných míst - napipetování roztoku PBS + 2% ovalbuminu + 10% sacharózy - inkubace po dobu 60 min při laboratorní teplotě - mechanické vyklepnutí desky a její vysušení aplikace testovaných supernatantů - aplikace neředěných testovaných supernatantů z buněk - aplikace pozitivní (myší sérum odebrané před fúzí) a negativní (myší sérum před aplikací rboifn-γ) kontroly ředěné x v ředícím roztoku (PBS+Tween 20 + kaseinový hydrolyzát) - inkubace 60 min při laboratorní teplotě - 4x promytí v roztoku PBS + 0,05% Tween 20 aplikace sekundární protilátky - aplikace křenovou peroxidázou konjugované komerčně dostupné sekundární protilátky (Donkey anti-mouse IgG firmy Jackson ImmunoResearch) v objemu 100 μl/jamku v předem otestovaném ředění 5.000x v ředícím roztoku (PBS+Tween 20 + kaseinový hydrolyzát) - inkubace 60 min při laboratorní teplotě - 4x promytí v roztoku PBS + 0,05% Tween 20 vizualizace reakce - aplikace TMB substrátu (Test Line) v objemu 100 μl /jamku - doba působení min., - zastavení reakce přidáním 2M H 2 SO 4 v objemu 50 μl/jamku - měření výsledné absorbance při 450 nm pomocí multikanálového spektrofotometru Synergy H1 (BioTek) Testování supernatantů metodou dot-blot vazba antigenu - aktivace PVDF membrány (Amersham Hybond P) jejím namočením v metanolu a promytím v H 2 O - rboifn-γ naředěný na koncentraci 25 μg/ml ve vazném pufru o ph 9,6 byl napipetován na membránu v objemu 2 μl / dot - paralelně byl na membránu napipetován přirozený IFN-γ (2 μl bovinního séra po in vitro stimulaci krevních mononukleárních buněk mitogenem Concanavalin A po dobu 20 hodin) - vysušení membrány blokování nespecifických vazebných míst - nanesení 5 % mléka 6
10 - inkubace po dobu 60 min při laboratorní teplotě - 3x opláchnutí v roztoku PBS + 0,05% Tween 20 aplikace testovaných supernatantů - aplikace neředěných testovaných supernatantů z buněk - aplikace pozitivní (myší sérum odebrané před fúzí) a negativní (myší sérum před aplikací rboifn-γ) kontroly ředěné 300x v ředícím roztoku (PBS+Tween 20 + kaseinový hydrolyzát) - inkubace 60 min při laboratorní teplotě - 4x opláchnutí v roztoku PBS + 0,05% Tween 20 aplikace sekundární protilátky - aplikace křenovou peroxidázou konjugované komerčně dostupné sekundární protilátky (Donkey anti-mouse IgG firmy Jackson ImmunoResearch) v ředění 1.000x v ředícím roztoku (PBS+Tween 20 + kaseinový hydrolyzát) - inkubace 60 min při laboratorní teplotě - 4x opláchnutí v roztoku PBS + 0,05% Tween 20 vizualizace reakce - aplikace DAB substrátu, tj. 8 mg DAB a 20 µl H 2 O 2 do 20 ml PBS (Test Line) - doba působení min., - zastavení reakce přidáním 2M H 2 SO 4 v objemu 50 μl/jamku - analýza výsledné reakce odečtením prostým okem Příprava polyklonální protilátky Králík byl imunizován podkožní aplikací 500 μg rboifn-γ na kus s kompletním Freundovým adjuvans a 2x reimunizován vždy po 3 týdnech s inkompletním Freundovým adjuvans. Králík byl v celkové anestezii vykrven a ze získaného séra byla γ-frakce vysrážena pomocí (NH 4 ) 2 SO 4. Tato byla dále purifikována pomocí proteinu G. Takto získaná protilátka byla konjugována křenovou peroxidázou pomocí LL-HRP Conjugation Kit firmy Innova Biosciences podle návodu výrobce. Specifita polyklonální protilátky byla ověřena technikou westerblot (obrázek 3). Použití laboratorních králíků bylo povoleno rozhodnutím resortní komise Ministerstva zemědělství ČR MZe 1217 (VÚVeL, v.v.i. č. 62/2010) Obrázek 3 SDS-PAGE analýza rboifn-γ získaného metodou popsanou v kapitole A prázdná dráha; B pouze anti-králičí konjugát; C negativní králičí sérum; D, E a F pozitivní králičí sérum ředěné 1.000x, 500x a 100x. 7
11 3.2. Metodika ELISA reakce vazba primární monoklonální protilátky - γ-frakce získaná z ascitické tekutiny naředěná na koncentraci 0,6 μg/ml ve vazném pufru o ph 9,6 byla napipetována do jamek mikrotitrační desky Maxisorp (Nunc) v objemu 100 μl / jamku - vazba 72 hodin při chladničkové teplotě - 4x promytí v roztoku PBS + 0,05% Tween 20 blokování nespecifických vazebných míst - napipetování roztoku PBS + 2% ovalbuminu + 10% sacharózy - inkubace po dobu 60 min při laboratorní teplotě - mechanické vyklepnutí desky a její vysušení aplikace testovaného vzorku - aplikace testovaných vzorků do příslušných jamek - aplikace sestupně ředěného rboifn-γ - inkubace 60 min při laboratorní teplotě - 4x promytí v roztoku PBS + 0,05% Tween 20 aplikace sekundární protilátky - aplikace křenovou peroxidázou konjugované připravené sekundární protilátky v objemu 100 μl/jamku v předem otestovaném ředění 1.000x v ředícím roztoku (PBS+Tween 20 + kaseinový hydrolyzát) s 5 % myšího séra - inkubace 60 min při laboratorní teplotě - 4x promytí v roztoku PBS + 0,05% Tween 20 vizualizace reakce - aplikace TMB substrátu (Test Line) v objemu 100 μl /jamku - doba působení min., - zastavení reakce přidáním 2M H 2 SO 4 v objemu 50 μl/jamku - měření výsledné absorbance při 450 nm pomocí multikanálového spektrofotometru Synergy H1 (BioTek) 3.3. Validace ELISA reakce Homogenita potažení mikrotitrační desky: Test byl proveden na jedné mikrotitrační desce dle pracovního postupu uvedeného v kapitole 3.2. Jako analyzovaný vzorek byl použit rboifn-γ o koncentraci 35 μg / ml. Vzhledem k okrajovému efektu nejsou do výpočtu zahrnuty hodnoty absorbancí krajních jamek desky. Výsledky testu jsou uvedeny v tabulce 1. Výsledek validace je vyjádřen pomocí průměrné hodnoty absorbancí vyšetřovaného analytu, směrodatné odchylky a variačního koeficientu vyjádřeného jako %. 8
12 Tabulka 1: Výsledky testu homogenity potažení mikrotitrační desky A 0,669 0,641 0,581 0,545 0,529 0,489 0,450 0,571 0,515 0,535 0,512 0,590 B 0,578 0,554 0,564 0,541 0,547 0,554 0,554 0,590 0,551 0,523 0,558 0,633 C 0,542 0,534 0,512 0,517 0,544 0,441 0,552 0,614 0,548 0,620 0,615 0,608 D 0,541 0,551 0,539 0,547 0,572 0,594 0,435 0,588 0,511 0,563 0,600 0,630 E 0,644 0,547 0,550 0,538 0,599 0,611 0,600 0,593 0,555 0,642 0,589 0,599 F 0,559 0,559 0,533 0,558 0,589 0,524 0,544 0,569 0,588 0,556 0,535 0,610 G 0,576 0,515 0,579 0,532 0,532 0,523 0,531 0,544 0,581 0,569 0,581 0,579 H 0,507 0,466 0,482 0,509 0,568 0,241 0,378 0,517 0,498 0,542 0,554 0,560 průměrná hodnota absorbance: 0,55665 směrodatná odchylka výběrová: 0,03703 variační koeficient (%): 6, Opakovatelnost (intra-assay variability): Tento test byl proveden v jedné mikrotitrační desce se 4 různě koncentrovanými vzorky 17, 35, 50 nebo 100 μg rboifn-γ dle pracovního postupu uvedeného v kapitole 3.2. Pro každý vzorek byla vypočítána průměrná hodnota absorbance, směrodatná odchylka a variační koeficient (Tabulka 2). Výsledkem analýzy je variační koeficient pro celý rozsah měření. Tabulka 2: Výsledky testu opakovatelnosti (intra-assay variability): 17 μg 35 μg 50 μg 100 μg A 0,098 0,092 0,603 0,554 0,796 0,893 1,458 1,370 B 0,102 0,105 0,709 0,610 0,886 0,878 1,358 1,356 C 0,131 0,143 0,719 0,593 0,886 0,891 1,541 1,386 D 0,153 0,110 0,786 0,599 0,940 0,955 1,487 1,434 E 0,126 0,137 0,692 0,633 0,933 0,954 1,473 1,451 F 0,130 0,198 0,704 0,633 0,954 0,867 1,500 1,470 G 0,138 0,148 0,634 0,622 0,857 0,927 1,362 1,379 H 0,113 0,143 0,599 0,572 0,823 0,842 1,454 1,434 Ø 0,1291 0,6413 0,8926 1,4320 SD 0,0264 0,0629 0,0486 0,0572 CV (%) 20,48 9,81 5,44 3,99 variační koeficient (%): 11,
13 Opakovatelnost (inter-assay variability): Tento test byl proveden v deseti mikrotitračních deskách se 4 různě koncentrovanými vzorky 17, 35, 50 nebo 100 μg rboifn-γ dle pracovního postupu uvedeného v kapitole 3.2. Testování bylo provedeno jako 10 samostatných analýz. Pro každý vzorek byla vypočítána průměrná hodnota absorbance, směrodatná odchylka a variační koeficient (Tabulka 3). Výsledkem analýzy je variační koeficient pro celý rozsah měření. Tabulka 3: Výsledky testu opakovatelnosti (inter-assay variability) číslo měření 17 μg 35 μg 50 μg 100 μg 1 0,306 0,594 0,808 1, ,302 0,583 0,789 1, ,300 0,633 0,753 1, ,319 0,587 0,853 1, ,279 0,613 0,751 1, ,294 0,629 0,808 1, ,305 0,597 0,707 1, ,334 0,642 0,642 1, ,354 0,585 0,824 1, ,278 0,584 0,870 1, ,330 0,602 0,796 1, ,272 0,595 0,813 1, ,337 0,587 0,850 1, ,302 0,580 0,790 1, ,249 0,580 0,813 1, ,281 0,607 0,768 1, ,281 0,556 0,799 1, ,297 0,586 0,798 1, ,279 0,607 0,755 1, ,328 0,635 0,721 1, ,291 0,525 0,780 1, ,315 0,550 0,756 1, ,287 0,534 0,703 0, ,386 0,640 0,638 1, ,334 0,609 0,759 1, ,349 0,543 0,725 1,067 10
14 27 0,397 0,630 0,750 1, ,419 0,509 0,681 1, ,384 0,581 0,797 1, ,421 0,524 0,699 1, ,408 0,504 0,781 1, ,380 0,528 0,675 1, ,324 0,554 0,796 1, ,292 0,610 0,886 1, ,274 0,593 0,886 1, ,297 0,599 0,840 1, ,291 0,633 0,733 1, ,315 0,633 0,754 1, ,247 0,622 0,857 1, ,280 0,572 0,823 1,234 průměrná hodnota absorbance: 0,3179 0,5868 0,7756 1,1961 směrodatná odchylka: 0,0468 0,0390 0,0584 0,1161 variační koeficient (%: 14,72 6,65 7,53 9,71 variační koeficient (%): 10, Srovnání novosti postupů V současné době existuje na globálním trhu jediný kit pro detekci hovězího IFN-gama - BOVIGAM - který v roce 1988 uvedla australská firma CSL Ltd. Nicméně, tento test není kvantitativní. 5. Uplatnění funkčního vzoru ELISA test pro kvantifikaci bovinního interferonu-gama je možno využít v laboratoři autorů k výzkumným účelům. 6. Ekonomické aspekty Metoda je na pracovišti autorů zavedena. Její další případné komerční využití závisí na zájmu terénu o tuto metodu. Podle současného stupně poznání není možné ekonomické aspekty určit. 11
15 7. Seznam použité literatury Faldyna, M., Oborilova E, Krejci J. a kol. A correlation of in vitro tests for the immune response detection: a bovine trichophytosis model. Vaccine 2007; 25 (46): Faldyna, M.: Interferonový test: od teorie do praxe. Veterinářství, 2010, 60 (9): Gormley, E., Doyle, M.B., McGill, K., et al. The effect of the tuberculin test and the consequences of a delay in blood culture on the sensitivity of a gamma-interferon assay for the detection of Mycobacterium bovis infection in cattle. Vet. Immunol. Immunopathol. 2004; 102 (4): Lund, A., Bratberg, A.M., Solbakk, I.T. In vitro release of interferon-gamma by trichophytin-stimulated whole blood cell cultures from ringworm-vaccinated and control calves experimentally inoculated with Trichophyton verrucosum. Vet. Dermatol. 2001; 12 (2): Murray, H.W. Interferon-gamma, the activated macrophage, and host defense against microbial challenge. Ann. Intern. Med. 1988; 108 (4): Parida, S., Oh, Y., Reid, S.M. a kol. Interferon-gamma production in vitro from whole blood of foot-andmouth disease virus (FMDV) vaccinated and infected cattle after incubation with inactivated FMDV. Vaccine 2006; 24 (7): Pontarollo, R.A., Babiuk, L.A., Hecker, R., Van Drunen Littel-Van Den Hurk, S. Augmentation of cellular immune responses to bovine herpesvirus-1 glycoprotein D by vaccination with CpG-enhanced plasmid vectors. J. Gen. Virol. 2002; 83 (12): Reber, A.J., Tanner, M., Okinaga, T. a kol. Evaluation of multiple immune parameters after vaccination with modified live or killed bovine viral diarrhea virus vaccines. Comp. Immunol. Microbiol. Infect. Dis. 2006; 29 (1): Roberty, M.L., Bassett, H.F., Quinn, P.J., Davis, W.C., Monaghan, M.L. Effects of dexamethasone on cellmediated immune responses in cattle sensitized to Mycobacterium bovis. Am. J. Vet. Res. 1995; 56 (10): Rothel, J.S., Jones, S.L., Corner, L.A., Cox, J.C., Wood, P.R.: A sandwich enzyme immunoassay for bovine interferon-gamma and its use for the detection of tuberculosis in cattle. Aust. Vet. J. 1990; 67 (4): Rothel, J.S., Jones, S.L., Conner, L.A., Cox, J.C., Wood, P.R. The gamma-interferon assay for diagnosis of bovine tuberculosis in cattle: conditions affecting the production of gamma-interferon in whole blood culture. Aust. Vet. J. 1992; 69 (1): 1-4. Ryan, T.J., Buddle, B.M., De Lisle, G.W. An evaluation of the gamma interferon test for detecting bovine tuberculosis in cattle 8 to 28 days after tuberculin skin testing. Res. Vet. Sci. 2000; 69 (1): Satinská, Z., Vicenová, M., Kudláčková, H., Kotlářová, E., Faldyna, M.: Praktické aspekty provedení interferonového testu. Veterinářství, (12): Whipple, D.L., Bolin, C.A., Davis, A.J. et al. Comparison of the sensitivity of the caudal fold skin test and a commercial gamma-interferon assay for diagnosis of bovine tuberculosis. Am. J. Vet. Res. 1995; 56 (4): Whipple, D.L., Palmer, M.V., Slaughter, R.E., Jones, S.L. Comparison of purified protein derivatives and effect of skin testing on results of a commercial gamma interferon assay for diagnosis of tuberculosis in cattle. J. Vet. Diagn. Invest. 2001; 13 (2): Wood, P.R., Corner, L.A., Rothel, J.S. a kol. Field comparison of the interferon-gamma assay and the intradermal tuberculin test for the diagnosis of bovine tuberculosis. Aust. Vet. J. 1991; 68 (9): Dedikace Funkční vzorek ELISA test pro kvantifikaci bovinního interferonu-gama byl vytvořen v rámci projektu Národní agentury zemědělského výzkumu (QI101A094), Ministerstva zemědělství České republiky (MZe ), projektu AdmireVet (CZ.1.05/2.1.00/ , ED0006/01/01) a projektu CEITEC Středoevropského technologického institutu (CZ.1.05/1.1.00/ ). 12
16 Vydal: Výzkumný ústav veterinárního lékařství, v.v.i. Hudcova 70, Brno Název: ELISA test pro kvantifikaci bovinního interferonu-gama Autoři: MVDr. Martin Faldyna, Ph.D. Hana Kudláčková Eva Kotlářová MVDr. Zora Smržová Mgr. Radek Tesařík, Ph.D. Mgr. Jitka Janková, Ph.D. prof. MVDr. Vladimír Celer, Ph.D. 13
Protokoly Transformace plasmidu do elektrokompetentních buněk BL21 Pracovní postup:
Protokoly Pracovní potřeby, pufry a chemikálie jsou uvedeny na konci protokolu. Pracovní postupy jsou odvozeny od těchto kitů: Champion pet160 Directional TOPO Expression Kit with Lumio Technology (Invitrogen)
Více1. Metodika. Protokol č. F1-4 Metodika: Srovnávací analýza efektivity přípravy rekombinantního proteinu ve fermentoru
Protokol č.: F1-4 Datum: 20.12.2010 Metodika: analýza efektivity přípravy výběr z výsledků ze zkušebních provozů výroby antigenů. Vypracoval: Ing. Václav Filištein, Mgr. Tereza Chrudimská, Spolupracující
VíceMakrofágy a parazitární infekce
Makrofágy a parazitární infekce Funkce makrofágů Profesionální fagocyty https://www.youtube.com/watch?v=w0-0bqoge2e Antigen-prezentující buňky (asociace s MHC II glykoproteiny) Producenti cytokinů (IL-12,
VíceFunkční vzorek. doc. RNDr. Ivan Rychlík, Ph.D. 1. Mgr. Marta Matulová, Ph.D. 1. MVDr. Marcela Faldynová, Ph.D. 1. Mgr.
Funkční vzorek 4057/2015 AEROSOLOVÁ VAKCINACE DRŮBEŽE TRIVALENTNÍ SALMONELOVOU VAKCÍNOU Autoři doc. RNDr. Ivan Rychlík, Ph.D. 1 Mgr. Marta Matulová, Ph.D. 1 MVDr. Marcela Faldynová, Ph.D. 1 Mgr. Alena
VíceNávod k použití Informace o produktech jsou dostupné na internetových stránkách: www.demeditec.com
Návod k použití Informace o produktech jsou dostupné na internetových stránkách: www.demeditec.com TPA IRMA Radioimunoanalýza pro kvantitativní stanovení cytokeratinu 8 a 18 v séru Prosím používejte pouze
VíceIzolace genomové DNA ze savčích buněk, stanovení koncentrace DNA pomocí absorpční spektrofotometrie
Izolace genomové DNA ze savčích buněk, stanovení koncentrace DNA pomocí absorpční spektrofotometrie IZOLACE GENOMOVÉ DNA Deoxyribonukleová kyselina (DNA) představuje základní genetický materiál většiny
VíceSeroPertussis TM IgA/IgM
SeroPertussis TM IgA/IgM ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) pro stanovení protilátek IgA a/ IgM proti Bordetelle Pertussis v lidském séru. Testovací souprava pro 96 stanovení. (Katalogové č. A233-01)
VíceBlueWell Intrinsic Factor IgG ELISA Cat.. IF01-96
BlueWell Intrinsic Factor IgG ELISA Cat.. IF01-96 96 D-tek s.a. rue René Descartes 19 BE-7000 Mons BELGIUM Tel. +32 65 84 18 88 Fax. +32 65 84 26 63 Email: info@d-tek.be Domovská stránka www.d-tek.be R.C.
VíceRespiratory syncytial virus IgG ELISA
Návod k použití Respiratory syncytial virus IgG ELISA ELISA test pro detekci a kvantifikaci lidských protilátek IgG proti RS viru v lidském séru nebo plazmě Kat. č.: ILE-RSV01 Skladování: +2 C až +8 C
VíceELISA test k detekci hladiny protilátek proti viru hepatitidy E u prasat
Funkční vzorek 5645/2018 ELISA test k detekci hladiny protilátek proti viru hepatitidy E u prasat Autoři Mgr. Radek Tesařík, Ph.D. MVDr. Ján Matiašovic, Ph.D. Hana Kudláčková Mgr. Jan Gebauer, Ph.D. Mgr.
VíceDEMEDITEC Bordetella pertussis IgA ELISA
DEMEDITEC Bordetella pertussis IgA ELISA Kat. č. DEBPT02 Návod k použití soupravy VÝROBCE: Demeditec Diagnostics GmbH Lise-Meitner-Straße 2 D-24145 Kiel (Germany), tel: +49 (0)431/71922-0, fax. +49 (0)431/71922-55,
VíceCA15-3 IRMA Souprava CA15-3 IRMA umožňuje přímé in-vitro kvantitativní stanovení s tumorem asociovaného antigenu CA15-3 v lidském séru
Informace o výrobku Informace o ostatních produktech jsou dostupné na www.demeditec.com Návod k použití CA15-3 IRMA Souprava CA15-3 IRMA umožňuje přímé in-vitro kvantitativní stanovení s tumorem asociovaného
VíceCHORUS CARDIOLIPIN-G
CHORUS CARDIOLIPIN-G 86046 (36 testů) Výrobce: DIESSE Diagnostica Senese Via delle Rose 10 53035 Monteriggioni (Siena) Itálie OBSAH 1 Úvod... 3 2 Princip testu... 3 3 Složení soupravy... 3 4 Další potřebné
VíceDIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIDUÁLNÍ CHOROBY U KOLOREKTÁLNÍHO KARCINOMU
Úvod IntellMed, s.r.o., Václavské náměstí 820/41, 110 00 Praha 1 DIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIDUÁLNÍ CHOROBY U KOLOREKTÁLNÍHO KARCINOMU Jednou z nejvhodnějších metod pro detekci minimální
VíceELISA test pro stanovení specifických prasečích IgA protilátek proti O-antigenům Salmonella enterica ssp. Enterica sérovar Typhimurium
Funkční vzorek ELISA test pro stanovení specifických prasečích IgA protilátek proti O-antigenům Salmonella enterica ssp. Enterica sérovar Typhimurium Autoři MVDr. Ján Matiašovic, Ph.D. Hana Kudláčková
VíceDIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIDUÁLNÍ CHOROBY U KARCINOMU PANKREATU
Úvod IntellMed, s.r.o., Václavské náměstí 820/41, 110 00 Praha 1 DIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIDUÁLNÍ CHOROBY U KARCINOMU PANKREATU Jednou z nejvhodnějších metod pro detekci minimální reziduální
VíceELISA-VIDITEST anti-hsv 1+2 IgA
ELISA-VIDITEST anti-hsv 1+2 IgA OD-283 Návod k použití soupravy VÝROBCE: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II č. 365, Vestec, 252 42 Jesenice, www.vidia.cz, tel.: +420 261 090 565 1. NÁZEV SOUPRAVY ELISA-VIDITEST
VíceVybrané parametry neurodegenerace u animálních modelů i lidí. Psychiatrické centrum Praha
Vybrané parametry neurodegenerace u animálních modelů i lidí Psychiatrické centrum Praha RNDr. Jan Říčný MUDr. Aleš Bartoš MUDr. Anna Kubešová Mgr. Michala Kolářová Mgr. Lenka Hromádková MUDr. Anna Kubešová
VíceIMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY A AGLUTINAČNÍ KOMPONENTY K DIAGNOSTICE PERTUSE A PARAPERTUSE
INFEKČNÍ SÉROLOGIE Bakteriologie IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY A AGLUTINAČNÍ KOMPONENTY K DIAGNOSTICE PERTUSE A PARAPERTUSE Bordetella pertussis Bordetella parapertussis ELISA a IMUNOBLOT soupravy jsou určeny
VíceELISA-VIDITEST anti-vca EBV IgM
ELISAVIDITEST antivca EBV IgM OD287 Návod k použití soupravy VÝROBCE: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II č. 365, Vestec, 252 42 Jesenice, www.vidia.cz, tel.: 420 261 090 565 1. NÁZEV SOUPRAVY ELISAVIDITEST
VíceInterakce viru klíšťové encefalitidy s hostitelským organismem a patogeneze infekce
Parazitologický ústav, Akademie věd České republiky Laboratoř interakcí vektor-hostitel České Budějovice Interakce viru klíšťové encefalitidy s hostitelským organismem a patogeneze infekce Daniel Růžek,
VíceZARDĚNKY IgG. ELISA test na stanovení protilátek IgG proti viru zarděnek v lidském séru. Balení Kat.č. : 51208 96 testů kompletní souprava
ZARDĚNKY IgG ELISA test na stanovení protilátek IgG proti viru zarděnek v lidském séru Balení Kat.č. : 5108 96 testů kompletní souprava Účel použití ZARDĚNKY IgG ELISA test je určen pro detekci protilátek
VíceDNA TECHNIKY IDENTIFIKACE ŽIVOČIŠNÝCH DRUHŮ V KRMIVU A POTRAVINÁCH. Michaela Nesvadbová
DNA TECHNIKY IDENTIFIKACE ŽIVOČIŠNÝCH DRUHŮ V KRMIVU A POTRAVINÁCH Michaela Nesvadbová Význam identifikace živočišných druhů v krmivu a potravinách povinností každého výrobce je řádně a pravdivě označit
VíceRapid-VIDITEST Influenza A+B
Rapid-VIDITEST Influenza A+B (Jednokrokový blisterový test pro in vitro diagnostiku viru Influenzy typu A a B z nosních výtěrů, výplachů a aspirátů) Návod k použití soupravy Výrobce: VIDIA spol. s r.o.,
VíceELISA-VIDITEST Neurofilamenta-L
RUO ELISA-VIDITEST Neurofilamenta-L OD-077 Návod k použití soupravy VÝROBCE: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II 365, Vestec, 252 42 Jesenice, ČR, tel.: +420 261 090 565, info@vidia.cz, www.vidia.cz 1.
VíceProgesteron ELISA test pro kvantitativní stanovení progesteronu v lidském séru nebo plazmě
Progesteron ELISA test pro kvantitativní stanovení progesteronu v lidském séru nebo plazmě Obj. číslo: 55020 96 testů kompletní souprava Účel použití Progesteron (pregn-4-ene-3, 20-dion) je steroidní hormon
VíceNávod k použití. Rubella IgM ELISA. ELISA test pro detekci a kvantifikaci lidských protilátek IgM proti viru zarděnek v lidském séru nebo plazmě
Návod k použití Rubella IgM ELISA ELISA test pro detekci a kvantifikaci lidských protilátek IgM proti viru zarděnek v lidském séru nebo plazmě 0197 Kat. č.: ILE-RUB03 Skladování: +2 C až +8 C Pouze pro
VíceMETODY STUDIA PROTEINŮ
METODY STUDIA PROTEINŮ Mgr. Vlasta Němcová vlasta.furstova@tiscali.cz OBSAH PŘEDNÁŠKY 1) Stanovení koncentrace proteinu 2) Stanovení AMK sekvence proteinu Hmotnostní spektrometrie Edmanovo odbourávání
VíceObjednací číslo Určení Ig-třída Substrát Formát EI 2192-9601 M Chlamydia pneumoniae IgM Ag-potažené mikrotitrační jamky
Protilátky proti Chlamydia pneumoniae (IgM) Návod na použití ELISA testu Objednací číslo Určení Ig-třída Substrát Formát EI 2192-9601 M Chlamydia pneumoniae IgM Ag-potažené mikrotitrační jamky 96 x 01
VíceIMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE CHLAMYDIOVÝCH INFEKCÍ
INFEKČNÍ SÉROLOGIE Bakteriologie IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE CHLAMYDIOVÝCH INFEKCÍ Chlamydia sp. Chlamydia pneumoniae Chlamydia trachomatis ELISA a IMUNOBLOT soupravy jsou určeny ke stanovení
VíceSeminář 6: Diagnostika
DIAGNOSTIKA AUTOIMUNITNÍCH CHOROB Seminář 6: Diagnostika autoimunitních chorob I Anamnéza plemenná predispozice, stáří (spíše zvířata středního věku), akutnost x chronicita, teplota a jiné léky (antibiotika
VíceQuantiFERON -CMV Příbalový leták 2 x 96
QuantiFERON -CMV Příbalový leták 2 x 96 Interferon-gamma test plné krve ke zjištění odpovědí na peptidové antigeny lidského cytomegaloviru 0350-0201 Cellestis, a QIAGEN Company Level 2, Office Tower 2,
VíceObjednací číslo Určení Třída IgG Substrát Formát EI 2060-9601G Tetanus toxoid IgG Ag-potažené mikrotitrační jamky
Protilátky proti toxoidu tetanu (IgG) Návod na použití ELISA testu Objednací číslo Určení Třída IgG Substrát Formát EI 2060-9601G Tetanus toxoid IgG Ag-potažené mikrotitrační jamky 96 x 01 (96) Princip
VíceDIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIUDÁLNÍ CHOROBY MRD EGFR
Úvod IntellMed, s.r.o., Václavské náměstí 820/41, 110 00 Praha 1 DIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIUDÁLNÍ CHOROBY MRD EGFR Jednou z nejvhodnějších metod pro detekci minimální reziduální choroby
VícePrůkaz viru influenzy u vakcinovaných koní v ČR v roce 2008 Souhrn Úvod
Průkaz viru influenzy u vakcinovaných koní v ČR v roce 2008 Doc. MVDr. Petr Lány, Ph.D., Mgr. Kateřina Rosenbergová, Ph.D., Mgr. Vojtěch Baláž* Ústav infekčních chorob a mikrobiologie, FVL, VFU Brno, *Ústav
VíceIMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE KLÍŠŤOVÉ ENCEFALITIDY
INFEKČNÍ SÉROLOGIE Virologie IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE KLÍŠŤOVÉ ENCEFALITIDY Virus klíšťové encefalitidy (TBEV) ELISA soupravy jsou určeny ke stanovení specifických protilátek třídy a IgM
VíceKomplement fixační antigen Influenza A (KF Ag Influenza A)
Komplement fixační antigen Influenza A (KF Ag Influenza A) OD - 109 Návod k použití soupravy VÝROBCE : VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II/365, Vestec, 252 42 Jesenice u Prahy, tel.: 261090565 www.vidia.cz
VíceCEA ELISA test pro kvantitativní stanovení karcinoembryonického antigenu (CEA) v lidském séru
CEA ELISA test pro kvantitativní stanovení karcinoembryonického antigenu (CEA) v lidském séru Obj. číslo: 52020 96 testů kompletní souprava Účel použití Karcinoembryonický antigen (CEA) je glykoprotein
VíceQUIDEL. Objednací kód: A003
QUIDEL C1-Inhibitor Objednací kód: A003 Quidel BioVendor - Laboratorní medicína a.s. MCKellar Court 10165, 92121-4201 San Diego,CA, USA Karásek 1767/1, 621 00 Brno Tel: +1-858-552-1100 Fax: ++1-858-552-7995
VíceColumn DNA Lego Kit UNIVERZÁLNÍ SOUPRAVY PRO RYCHLOU IZOLACI ČISTÉ DNA (Katalogové číslo D201 + D202)
Column DNA Lego Kit UNIVERZÁLNÍ SOUPRAVY PRO RYCHLOU IZOLACI ČISTÉ DNA (Katalogové číslo D201 + D202) Popis Column DNA Lego Kit je základ moderní stavebnicové (Lego) soupravy pro izolaci čisté DNA různého
VíceZÁSADY SPRÁVNÉ LABORATORNÍ PRAXE VYBRANÁ USTANOVENÍ PRAKTICKÉ APLIKACE
ZÁSADY SPRÁVNÉ LABORATORNÍ PRAXE VYBRANÁ USTANOVENÍ PRAKTICKÉ APLIKACE Zabezpečování jakosti v laboratorní praxi je významnou součástí práce každé laboratoře. Problematiku jakosti řeší řada předpisů, z
VíceRekombinantní protilátky, bakteriofágy, aptamery a peptidové scaffoldy pro analytické a terapeutické účely Luděk Eyer
Rekombinantní protilátky, bakteriofágy, aptamery a peptidové scaffoldy pro analytické a terapeutické účely Luděk Eyer Virologie a diagnostika Výzkumný ústav veterinárního lékařství, v.v.i., Brno Alternativní
VíceSouprava na extrakci nukleových kyselin. Uživatelská příručka
magnesia 16 Souprava na extrakci nukleových kyselin Uživatelská příručka LAB MARK, a.s. Pod Cihlenou 23 * 161 00 Praha Česká republika Tel.: 233 335 548 Fax: 224 311 830 e-mail: labmark@labmark.cz * www.labmark.cz
VíceVýzkumné centrum genomiky a proteomiky. Ústav experimentální medicíny AV ČR, v.v.i.
Výzkumné centrum genomiky a proteomiky Ústav experimentální medicíny AV ČR, v.v.i. Systém pro sekvenování Systém pro čipovou analýzu Systém pro proteinovou analýzu Automatický sběrač buněk Systém pro sekvenování
VícePraktický kurz Pokročilé biofyzikální přístupy v genomice a proteomice. 12.-13. května 2010
www.modernibiofyzika.cz Oddělení funkční genomiky a proteomiky Ústav experimentální biologie, Přírodovědecká fakulta Masarykova univerzita Praktický kurz Pokročilé biofyzikální přístupy v genomice a proteomice
VíceProtilátky proti Helicobacter pylori (IgG) Návod na použití ELISA testu
Protilátky proti Helicobacter pylori (IgG) Návod na použití ELISA testu Objednací číslo Určení Ig-třída Substrát Formát EI 2080-9601 G Helicobacter pylori IgG Ag-potažené mikrotitrační jamky 96 x 01 (96)
VíceMagPurix Blood DNA Extraction Kit 200
MagPurix Blood DNA Extraction Kit 200 Kat. č. ZP02001-48 Doba zpracování: 50-60 minut pro MagPurix 12S 50-70 minut pro MagPurix 24 Použití Souprava MagPurix Blood DNA Extraction Kit 200 je určena pro izolátor
VíceCRP. Axis - Shield. SINGLE TESTS CRP kvantitativní stanovení pomocí přístroje NycoCard Reader II
Lékařská technika a speciální zdravotní materiál Společnost je zapsána v obchodním rejstříku Městského soudu v Praze, odd. C vložka 1299 Obchodní 110, 251 70 Praha Čestlice Tel. +420 296 328 300 Fax. +420
VíceMonitorování hladiny metalothioneinu a thiolových sloučenin u biologických organismů vystavených působení kovových prvků a sloučenin
Laboratoř Metalomiky a Nanotechnologií Monitorování hladiny metalothioneinu a thiolových sloučenin u biologických organismů vystavených působení kovových prvků a sloučenin Ing. Kateřina Tmejová, Ph. D.,
VíceCattletype BHV1 gb Ab. Verze 090724. 03-101/20 (20 x 96 testů)
erologická diagnostika specifických protilátek proti Bovinnímu herpesviru 1 metodou ELIA 480 nebo 1920 reakcí Cattletype BHV1 gb Ab Verze 090724 kat. číslo: 03-101/5 (5 x 96 testů) 03-101/20 (20 x 96 testů)
VícePCV2 A SOUVISEJÍCÍ ONEMOCNĚNÍ. MVDr. Tomáš Jirásek MEVET spol. s r.o. (výhradní distribuce MERIAL pro ČR a SR)
PCV2 A SOUVISEJÍCÍ ONEMOCNĚNÍ MVDr. Tomáš Jirásek MEVET spol. s r.o. (výhradní distribuce MERIAL pro ČR a SR) +420 739 494 022 tomy.jirasek@seznam.cz www.mevet.cz MEVET SPOL. S R.O. Výhradní distribuce
VíceANALÝZA MARKERŮ OXIDAČNÍHO POŠKOZENÍ DNA, PROTEINŮ A LIPIDŮ PO IN VITRO APLIKACI LÁTEK NA BUNĚČNÉ KULTURY HEL a A549
ANALÝZA MARKERŮ OXIDAČNÍHO POŠKOZENÍ DNA, PROTEINŮ A LIPIDŮ PO IN VITRO APLIKACI LÁTEK NA BUNĚČNÉ KULTURY HEL a A549 O B S A H 1. Aplikace testovaných látek na buněčné kultury 2. Oxidační poškození DNA
VícePSA ELISA test pro kvantitativní stanovení celkového prostatického specifického antigenu (PSA) v lidském séru
PSA ELISA test pro kvantitativní stanovení celkového prostatického specifického antigenu (PSA) v lidském séru Obj. číslo: 52030 96 testů kompletní souprava Účel použití Prostatický specifický antigen (PSA)
VíceTest aktivity a cytotoxicity lymfocytů
Test aktivity a cytotoxicity lymfocytů Teorie: Proliferace je jedním z fyziologických jevů buněčné aktivace. Existuje několik způsobů zjišťování aktivity lymfocytů. Jedna z nejznámějších je použitím radioaktivně
VíceExprese rekombinantních proteinů
Exprese rekombinantních proteinů Exprese rekombinantních proteinů je proces, při kterém můžeme pomocí různých expresních systémů vytvořit protein odvozený od konkrétního genu, nebo části genu. Tento protein
VíceSure-MeDIP I. with magnetic beads and MNase. www.krd.cz
Sure-MeDIP I with magnetic beads and MNase www.krd.cz 1 Obsah soupravy a skladování MeDIP souprava obsahuje reagencie na provedení 25 reakcí. Souprava je rozdělen do dvou částí, jedna je distribuována
VíceInterakce proteinu p53 s genomovou DNA v kontextu chromatinu glioblastoma buněk
MASARYKOVA UNIVERZITA V BRNĚ Přírodovědecká fakulta Ústav experimentální biologie Oddělení genetiky a molekulární biologie Interakce proteinu p53 s genomovou DNA v kontextu chromatinu glioblastoma buněk
VíceAESKULISA. Objednací kód: 3510
AESKULISA CeliCheck Objednací kód: 3510 Aesku.Diagnostics BioVendor - Laboratorní medicína a.s. Mikroforum Ring 2, D-55234 Wendelsheim, Germany Karásek 1767/1, 621 00 Brno Tel: +49-6734-9627-0 Fax: +49-6734-9627-27
VíceIMUNITNÍ SYSTÉM OBRATLOVCŮ - MATKA PLOD / MLÁDĚ VÝVOJ IMUNITNÍHO SYSTÉMU OBRATLOVCŮ CHARAKTERISTUIKA IMUNITNÍHO SYSTÉMU OBRATLOVCU
IMUNITNÍ SYSTÉM OBRATLOVCŮ - SROVNÁVACÍ IMUNOLOGIE IMUNOLOGICKÉ VZTAHY MATKA PLOD / MLÁDĚ (FYLOGENEZE A ONTOGENEZE IMUNITNÍHO SYSTÉMU) CHARAKTERISTUIKA IMUNITNÍHO SYSTÉMU OBRATLOVCU Imunitní systém obratlovců
VíceOvěřená technologie 4796/2017
Ověřená technologie 4796/2017 Veterinární dietetický přípravek fortifikovaný vaječnou hmotou obsahující protilátky IgY specifické proti Escherichia coli a rotavirům Autoři: MVDr. Josef Krejčí MVDr. Jan
VíceObranné mechanismy organismu, imunita. Tento výukový materiál vznikl za přispění Evropské unie, státního rozpočtu ČR a Středočeského kraje
Obranné mechanismy organismu, imunita Tento výukový materiál vznikl za přispění Evropské unie, státního rozpočtu ČR a Středočeského kraje Prosinec 2010 Mgr. Radka Benešová IMUNITNÍ SYSTÉM Imunitní systém
VíceNázev: Vypracovala: Datum: 7. 2. 2014. Zuzana Lacková
Název: Vypracovala: Zuzana Lacková Datum: 7. 2. 2014 Reg.č.projektu: CZ.1.07/2.4.00/31.0023 Název projektu: Partnerská síť centra excelentního bionanotechnologického výzkumu MĚLI BYCHOM ZNÁT: informace,
VíceMycoplasma pneumoniae IgM ELISA
Mycoplasma pneumoniae IgM ELISA ELISA test pro kvalitativní stanovení IgM protilátek proti Mycoplasma pneumoniae v lidském krevním séru nebo plasmě Pouze pro diagnostické použití in vitro. 0483 Číslo výrobku:
VíceLABOSERV s.r.o. ELISA HEV IgG Stránka 1
Doc.: INS EVG.CE Strana 1 ze 6 Verze.: 09/08MS ELISA souprava - HEV IgG A. POUŽITÍ Třetí generace ELISA testu pro kvalitativní detekci IgG protilátek proti viru hepatitidy E v lidské krevní plazmě nebo
VíceMASTAZYME FSME IgG. Enzymatická imunoesej pro detekci a kvantifikaci lidských protilátek IgG proti viru TBE (Tick-borne-encephalitis) v séru a plasmě
AZYME FSME IgG Enzymatická imunoesej pro detekci a kvantifikaci lidských protilátek IgG proti viru TBE (Tick-borne-encephalitis) v séru a plasmě Návod na použití Pouze pro in vitro diagnostiku Test Kód
VíceMolekulární diagnostika
Molekulární diagnostika Odry 11. 11. 2010 Michal Pohludka, Ph.D. Buňka základní jednotka živé hmoty Všechny v současnosti známé buňky se vyvinuly ze společného předka, tedy buňky, která žila asi před 3,5-3,8
VícePraktický kurz Příprava buněčného lyzátu, izolace celkové RNA pomocí kolonek/tripure reagent, stanovení koncentrace RNA
Laboratoř Metalomiky a Nanotechnologií Praktický kurz Příprava buněčného lyzátu, izolace celkové RNA pomocí kolonek/tripure reagent, stanovení koncentrace RNA Vyučující: Mgr. Monika Holubová, Bc. Petr
VíceKras XL StripAssay. Kat. číslo 5-680. 20 testů 2-8 C
Kras XL StripAssay Kat. číslo 5-680 20 testů 2-8 C Popis stripu: Pracovní postup 1. Izolace DNA Musí být použity vhodné metody extrakce DNA, v závislosti na typu vzorku, který má být vyšetřován. Doporučení
VíceTest IFN-gamma z plné krve hodnotící reakci na peptidové antigeny ESAT-6, CFP-10 & TB7.7(p4)
QuantiFERON -TB Gold Test IFN-gamma z plné krve hodnotící reakci na peptidové antigeny ESAT-6, CFP-10 & TB7.7(p4) PŘÍBALOVÝ LETÁK Pro diagnostické použití In Vitro OBSAH 1. POUŽITÍ 2 2. SHRNUTÍ A VYSVĚTLENÍ
VíceMagnetické částice pro detekci nádorových onemocnění, založené na protilátkách Vojtěch Adam
Název: Školitel: Magnetické částice pro detekci nádorových onemocnění, založené na protilátkách Vojtěch Adam Datum: 7..203 Reg.č.projektu: CZ..07/2.4.00/3.0023 Název projektu: Partnerská síť centra excelentního
VíceFunkce imunitního systému
Téma: 22.11.2010 Imunita specifická nespecifická,, humoráln lní a buněč ěčná Mgr. Michaela Karafiátová IMUNITA je soubor vrozených a získaných mechanismů, které zajišťují obranyschopnost (rezistenci) jedince
VíceFunkční vzorek 5456/2017. Set ke stanovení minimálních inhibičních koncentrací antimikrobiálních. látek u Enterococcus spp.
Funkční vzorek 5456/2017 Set ke stanovení minimálních inhibičních koncentrací antimikrobiálních látek u Enterococcus spp. Autoři: MVDr. Kateřina Nedbalcová, Ph.D., Výzkumný ústav veterinárního lékařství,
VícePCR diagnostika lymeské borreliózy. Mgr. D. Berenová, J. Hořejší, Ing. A. Lukavská, RNDr. P. Kodym, CSc. Národní referenční laboratoř pro lymeskou borreliózu Centrum epidemiologie a mikrobiologie Státní
VíceRychlá kvalitativní detekce lidského hemoglobinu ve vzorcích stolice. Všeobecné informace použití a vyhodnocení
Rychlá kvalitativní detekce lidského hemoglobinu ve vzorcích stolice Všeobecné informace použití a vyhodnocení Použití FOB plus test na okultní krvácení je rychlý vizuální test, založený na principu imunochromatografické
VíceFunkční vzorek 5474/2017
Funkční vzorek 5474/2017 Set ke stanovení minimálních inhibičních koncentrací antimikrobiálních látek u bakteriálních anaerobních patogenů hospodářských zvířat MVDr. Kateřina Nedbalcová, Ph.D. 1 MVDr.
VíceFunkční vzorek 5473/2017
Funkční vzorek 5473/2017 Metoda detekce protilátek proti viru klíšťové encefalitidy v séru malých přežvýkavců RNDr. Jiří Salát, Ph.D. Mgr. Petra Formanová RNDr. Luděk Eyer, Ph.D. Doc. RNDr. Daniel Růžek,
VíceImunochemické metody. na principu vazby antigenu a protilátky
Imunochemické metody na principu vazby antigenu a protilátky ANTIGEN (Ag) specifická látka (struktura) vyvolávající imunitní reakci a schopná vazby na protilátku PROTILÁTKA (Ab antibody) molekula bílkoviny
VíceRuconest : imunologické analýzy září 2010
RUCONEST : IMUNOLOGICKÉ ANALÝZY, NEPROPAGAČNÍ VZDĚLÁVACÍ MATERIÁLY PRO PŘEDEPISUJÍCÍ LÉKAŘE Poznámka: Tyto informace budou poskytnuty předepisujícím lékařům. Shrnutí Ruconest (konestat alfa), rekombinantní
VíceDiagnostika moru včelího plodu a epizootologická situace v ČR
Diagnostika moru včelího plodu a epizootologická situace v ČR Zpracoval: MVDr. Jaroslav Bzdil, Ph.D., SVÚ Olomouc, Jakoubka ze Stříbra 1, 779 00 Olomouc Tel.: 585557223, e.mail: vetmed@seznam.cz Původce
VíceIMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE SYFILIS
INFEKČNÍ SÉROLOGIE Bakteriologie IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE SYFILIS Treponema pallidum ELISA a IMUNOBLOT soupravy jsou určeny ke stanovení specifických protilátek třídy IgG a IgM v lidském
VíceMagPurix Viral Nucleic Acid Extraction Kit
MagPurix Viral Nucleic Acid Extraction Kit Kat. č. ZP02003 Doba zpracování: 40-55 minut pro MagPurix 12S 40-60 minut pro MagPurix 24 Použití Souprava MagPurix Viral Nucleic Acid Extraction Kit je určena
VíceMolekulární biotechnologie č.8. Produkce heterologního proteinu v eukaryontních buňkách
Molekulární biotechnologie č.8 Produkce heterologního proteinu v eukaryontních buňkách Eukaryontní buňky se využívají v případě, když Eukaryontní proteiny syntetizované v baktériích postrádají biologickou
VíceSouhrn údajů o přípravku
Příloha č. 3 ke sdělení sp.zn. sukls93024/2010 Souhrn údajů o přípravku 1. NÁZEV PŘÍPRAVKU Isoprinosine tablety 2. KVALITATIVNÍ A KVANTITATIVNÍ SLOŽENÍ Léčivá látka: inosinum pranobexum 500 mg v 1 tabletě
VíceFragment Analyzer UNIKÁTNÍ KAPILÁROVÝ FRAGMENTAČNÍ ANALYZÁTOR VÝBORNÉ VÝSLEDKY UNIKÁTNÍ VLASTNOSTI
Fragment Analyzer UNIKÁTNÍ KAPILÁROVÝ FRAGMENTAČNÍ ANALYZÁTOR VÝBORNÉ VÝSLEDKY UNIKÁTNÍ VLASTNOSTI Výborný přístroj, výborné výsledky Fragmentační analyzátor je automatizovaný kapilárový systém s CE značkou
VíceS E M E S T R Á L N Í
Univerzita Pardubice Fakulta chemicko-technologická Katedra analytické chemie S E M E S T R Á L N Í P R Á C E Licenční studium Statistické zpracování dat při managementu jakosti Předmět Určení vnitřní
VíceFUNKČNÍ VZOREK. Metoda detekce protilátek proti složkám preparátu Improvac v séru prasat
VÝZKUMNÝ ÚSTAV VETERINÁRNÍHO LÉKAŘSTVÍ, v.v.i. FUNKČNÍ VZOREK Metoda detekce protilátek proti složkám preparátu Improvac v séru prasat Hana Kudláčková MVDr. Martin Faldyna, Ph.D. 4302 2016 Funkční vzorek
VíceCHŘIPKA KONÍ JE HROZBOU NA POKRAČOVÁNÍ
CHŘIPKA KONÍ JE HROZBOU NA POKRAČOVÁNÍ Na naší polokouli chřipka zpravidla koně nezabíjí: zabíjí události. Rychlost šíření a síla chřipkové vlny závisí na: množství nenavakcinovaných koní frekvenci přesunů
VíceWestern blotting. 10% APS 20,28 µl 40,56 µl 81,12 µl 20,28 µl 40,56 µl 81,12 µl
Western blotting 1. Příprava gelu složení aparatury hustotu gelu volit podle velikosti proteinů příprava rozdělovacího gelu: 10% 12% počet gelů 1 2 4 1 2 4 objem 6 ml 12 ml 24 ml 6 ml 12 ml 24 ml 40% akrylamid
VíceChemotaktické cytokiny (chemokiny)
Chemotaktické cytokiny (chemokiny) Mediátory, které indukují migraci a aktivaci specializovaných populací leukocytů Mediátory leukocytární infiltrace v iniciální fázi zánětlivé reakce Martin Petřek 1.12.2011
VíceSD Rapid test TnI/Myo Duo
SD Rapid test TnI/Myo Duo Návod k použití soupravy Výrobce: STANDARD DIAGNOSTICS, INC. 156-68 Hagal-dong, Giheung-gu, Yongin-si, Kyonggido, Korea. Tel: +82 31 899 2800, fax: +82 31 899 2840, www.standardia.com
VíceNÁVOD K POUŽITÍ VÁPNÍK 600 KATALOGOVÉ ČÍSLO 207
NÁVOD K POUŽITÍ VÁPNÍK 600 KATALOGOVÉ ČÍSLO 207 POUŽITÍ Souprava Vápník 600 se používá ke kvantitativnímu stanovení koncentrace vápenatých iontů v séru a moči. SOUHRN V lidském organismu je vázána převážná
VíceSD Rapid test Norovirus
SD Rapid test Norovirus Návod k použití soupravy Výrobce: STANDARD DIAGNOSTICS, INC. 156-68 Hagal-dong, Giheung-gu, Yongin-si, Kyonggido, Korea. Tel: +82 31 899 2800, fax: +82 31 899 2840, www.standardia.com
VíceIzolace nukleových kyselin
Izolace nukleových kyselin Požadavky na izolaci nukleových kyselin V nativním stavu z přirozeného materiálu v dostatečném množství požadované čistotě. Nukleové kyseliny je třeba zbavit všech látek, které
VíceLidský herpesvirus 6 biologie, diagnostika, patogeneze. K.Roubalová Vidia spol.s r.o.
Lidský herpesvirus 6 biologie, diagnostika, patogeneze K.Roubalová Vidia spol.s r.o. Zařazení, genetika HHV6B vs. HHV6A: 75% shoda genů, 62% shoda proteinů Epidemiologie Dospělá populace promořena z >
VíceVeronika Janů Šárka Kopelentová Petr Kučera. Oddělení alergologie a klinické imunologie FNKV Praha
Veronika Janů Šárka Kopelentová Petr Kučera Oddělení alergologie a klinické imunologie FNKV Praha interakce antigenu s protilátkou probíhá pouze v místech epitopů Jeden antigen může na svém povrchu nést
VíceStabilita [MIC] Příprava reagencií Pracovní promývací roztok [WASH] Vzorky Zmrazujte a rozmrazujte pouze jednou. Pracovní postup
DHEA-S ELISA test pro kvantitativní stanovení dehydroepiandrosteronsulfátu v lidském séru nebo plazmě Obj. číslo: 55060 96 testů kompletní souprava Účel použití Dehydroepiandrosteron (DHEA) je hlavní C
VíceSTANOVENÍ CYTOTOXICITY LÉČIV IN VITRO (XTT ASSAY)
STANOVENÍ CYTOTOXICITY LÉČIV IN VITRO (XTT ASSAY) LENKA BRŮČKOVÁ Univerzita Pardubice Fakulta chemicko-technologická Katedra biologických a biochemických věd Centralizovaný rozvojový projekt MŠMT č. C29:
VíceFunkční vzorek 5454/2017. Set ke stanovení minimálních inhibičních koncentrací antimikrobiálních. látek u Pseudomonas spp.
Funkční vzorek 5454/2017 Set ke stanovení minimálních inhibičních koncentrací antimikrobiálních látek u Pseudomonas spp. Autoři: MVDr. Kateřina Nedbalcová, Ph.D., Výzkumný ústav veterinárního lékařství,
VíceZÁVĚREČNÝ PROTOKOL O TESTOVÁNÍ BIOAKTIVNÍCH VLASTNOSTÍ LÁTKY CYTOPROTECT
MIKROBIOLOGICKÝ ÚSTAV Akademie věd České republiky Vídeňská 1083, 420 20 Praha 4 Krč Imunologie a gnotobiologie ZÁVĚREČNÝ PROTOKOL O TESTOVÁNÍ BIOAKTIVNÍCH VLASTNOSTÍ LÁTKY CYTOPROTECT Zadání: Na základě
VíceProtinádorová imunita. Jiří Jelínek
Protinádorová imunita Jiří Jelínek Imunitní systém vs. nádor l imunitní systém je poslední přirozený nástroj organismu jak eliminovat vlastní buňky které se vymkly kontrole l do boje proti nádorovým buňkám
Více