Creatine Kinase Liquid Reagent Kreatin kináza (CKL)

Transkript

1 Creatine Kinase Liquid Reagent Kreatin kináza () Kapalná reagencie Informace pro objednání COBAS INTEGRA 200 Tests Kat. č Creatine Kinase Systémové-ID Calibrator f.a.s ml Kat. č Calibrator f.a.s. (pro USA) 12 3 ml Kat. č Systémové-ID Precinorm U 20 5 ml Kat. č Systémové-ID Precipath U 20 5 ml Kat. č Systémové-ID Precinorm U plus 10 3 ml Kat. č Precinorm U plus (pro USA) 10 3 ml Kat. č Systémové-ID Precipath U plus 10 3 ml Kat. č Precipath U plus (pro USA) 10 3 ml Kat. č Systémové-ID Vyznačuje analyzátory, na kterých lze sadu cobas c použít Systémové informace COBAS INTEGRA Creatine Kinase () Test, test ID Použití In vitro test pro kvantitativní stanovení katalytické aktivity CK (EC ; adenosintrifosfát: kreatin N-fosfotransferáza) v lidském séru a plazmě na systémech COBAS INTEGRA. Souhrn 1,2 Enzym CK je dimer, složený z podjednotek, jejichž název je odvozen od svalu M (muscle) a mozku B (brain). Tři identifikované izoenzymy jsou označovány: MM, MB a BB. Normální CK v séru je převážně izoenzym CK-MM. Zvýšené hladiny CK v séru provázejí onemocnění kosterního svalstva, především svalovou dystrofii. Frakce CK-MB se nalézá především ve tkáni myokardu a její přítomnost je obvykle zaznamenáva v průběhu 48 hodin po nástupu infarktu myokardu. Použití stanovení celkové CK a izoenzymu CK-MB v diagnostice infarktu myokardu je nejdůležitější aplikací stanovení kreatinkinázy v klinické chemii. Aktivita CK v séru také narůstá po cerebrální ischemii, akutní mozkové příhodě a úrazu hlavy. Princip testu Metoda dle doporučení organizací - International Federation of Clinical Chemistry (IFCC), Société Française de Biologie Clinique (SFBC), Committee on Enzymes of the Scandinavian Society for Clinical Chemistry and Clinical Physiology (SCE) a Deutsche Gesellschaft für Klinische Chemie (DGKC). 3-6 Kreatin fosfát + ADP CK kreatin + ATP Reagencie - pracovní roztoky Složky Koncentrace R1 R2=SR Test Imidazol mmol/l N-Acetylcystein mmol/l EDTA mmol/l AMP 10 5 mmol/l Diadenosin pentafosfát µmol/l NADP 9,5 4,8 mmol/l Mg mmol/l D-Glukóza mmol/l Kreatin fosfát mmol/l HK (kvasinky) µkat/l ( 6 ku/l) G6PDH (mikrob.) µkat/l ( 6 ku/l) N-Metyldietanolamin mmol/l ADP 12 2 mmol/l Azid sodný 0,09 0,015 % ph 6,0 9,1 6,6 Obě reagencie obsahují nereaktivní stabilizátory. Reagencie R2 (SR) obsahuje nereaktivní detergent. Bezpečnostní opatření a varování Věnujte pozornost všem varováním a bezpečnostním opatřením uvedeným v této Příručce metod, Kapitola 1, Úvod. Zacházení s reagenciemi Připraveno pro použití. ATP + D-glukóza HK ADP + G6P G6P + NADP + G6PDH D-6-fosfoglukonát + NADPH + H + Rychlost vzniku NADPH je přímo úměrná katalytické aktivitě CK. Stanovuje se měřením nárůstu absorbance při 340 nm , V 2 CS 1 / 4

2 Enzymy Uskladnění a stabilita Doba skladování při 2 až 8 C Datum exspirace viz štítek cobas c packu Systémy COBAS INTEGRA 400/400 plus Na palubě při 10 až 15 C 8 týdnů Systémy COBAS INTEGRA 800 Na palubě při 8 C 8 týdnů Odběr vzorků a příprava Pro odběr a přípravu vzorků používejte vhodné zkumavky nebo odběrové nádobky. Pouze níže uvedené vzorky byly testovány a jsou vhodné ke stanovení: Sérum (bez hemolýzy): Sérum, získané odběrem standardní soupravou. Plazma (bez hemolýzy): Li-heparin plazma. Uvedené druhy vzorků byly testovány s vybranými typy odběrových zkumavek, které byly komerčně dostupné v té době tzn., že do testu nebyly zařazeny všechny typy zkumavek všech výrobců. Systémy odběru vzorků různých výrobců mohou obsahovat různé materiály, které mohou mít v některých případech vliv na výsledky. Při zpracování vzorků v primárních zkumavkách (systémy odběru vzorků) dodržujte pokyny jejich výrobce. Stabilita: 7 2 dny při C 7 dní při 2-8 C 4 týdny při (-15) (-25) C Vzorky, obsahující precipitáty, centrifugujte před provedením testu. Dodávaný materiál Reagencie jsou uvedeny v části "Reagencie - pracovní roztoky". Stanovení Nejvhodnějšího provedení stanovení dosáhnete, budete-li dodržovat pokyny, uvedené v dokumentaci pro analyzátory. Instrukce, specifické pro jednotlivé analyzátory, vyhledejte v návodu k použití. Aplikace pro sérum a plazmu COBAS INTEGRA 400/400 plus definice testu Způsob měření Absorbance Způsob výpočtu abs. Kinsearch Způsob reakce R1-S-SR Vlnové délky A/B 340/629 nm Výpočet první/posl. 43/60 Jednotka U/L Pipetovací parametry Diluent (H 2 O) R1 61 µl 9 µl Vzorek 3 µl 19 µl SR 20 µl 10 µl Celkový objem 122 µl COBAS INTEGRA 800 definice testu Způsob měření Absorbance Způsob výpočtu abs. Kinsearch Způsob reakce R1-S-SR Vlnové délky A/B 340/629 nm Výpočet první/posl. 61/91 Jednotka U/L Pipetovací parametry Diluent (H 2 O) R1 61 µl 9 µl Vzorek 3 µl 19 µl SR 20 µl 10 µl Celkový objem 122 µl Kalibrace Kalibrátor Typ kalibrace Opakování kalibrace Kalibrační interval Calibrator f.a.s. Jako nulový kalibrátor použijte deion. vodu. Lineární regrese Doporučen duplikát Každá šarže a jestliže to vyžaduje proces kontroly kvality. Návaznost: Tato metoda byla standardizována ručně podle originální formulace IFCC. Kontrola kvality Referenční rozmezí Patologické rozmezí Kontrolní interval Pořadí kontrol Kontrola po kalibraci Precinorm U nebo Precinorm U plus Precipath U nebo Precipath U plus Doporučeno 24 hodin Určeno uživatelem Doporučena Ke kontrole kvality použijte kontrolní materiály uvedené v části "Informace pro objednání". Jiný vhodný kontrolní materiál může být rovněž použit. Kontrolní intervaly a meze by měly být uzpůsobeny pro každou laboratoř dle individuálních požadavků. Naměřené hodnoty by se měly pohybovat v požadovaných mezích. Každá laboratoř by měla mít vypracovaný postup pro případ, že hodnoty kontrol překročí požadované meze. Sledujte příslušná vládní nařízení a lokální směrnice kontroly kvality. Výpočet Analyzátory COBAS INTEGRA automaticky vypočítají koncentraci analytu pro každý vzorek. Pro více informací čtěte Data Analysis v Online Help (analyzátory COBAS INTEGRA 400/400 plus/800). Převodní faktor: U/L 0,0167 = µkat/l Omezení - interference 8 Kritérium: Výtěžnost v rozmezí ±10% počáteční hodnoty. Sérum, plazma Ikterus Bez významných interferencí do hodnoty I indexu 15 (přibližná koncentrace konjugovaného/nekonjugovaného bilirubinu: 255 µmol/l nebo 15 mg/dl). Hemolýza Lipemie Léky Bez významných interferencí do hodnoty H indexu 100 (přibližná koncentrace hemoglobinu: 62 µmol/l nebo 100 mg/dl) Úroveň interference může kolísat v závislosti na skutečném obsahu erytrocytů. Velmi chylózní vzorky způsobují kolísání absorbance. Doporučuje se naředěný vzorek zpracovat automatickým rerunem. Při terapeutických koncentracích nebyla při použití běžných panelů léků zjištěna žádná interference 9,10 Výjimka: Dobesilát vápenatý způsobuje uměle nízké hodnoty CK při testovaných hladinách léčiv. Hydroxokobalamin (Cyanokit) může způsobit falešně nízké výsledky. 2 / , V 2 CS

3 Enzymy Ostatní Ve vzácných případech může gamapatie, především u typu IgM (Waldenströmova makroglobulinémie), způsobit nespolehlivé výsledky. Pro diagnostické účely je vždy nezbytné používat výsledky ve spojení s chorobopisem pacienta, klinickým vyšetřením a ostatními nálezy. POTŘEBNÝ KROK Programování speciálního mytí: Použití speciálních mycích cyklů je nutné při zpracovávání určitých kombinací testů na analyzátorech COBAS INTEGRA. Pro další pokyny čtěte Návody metod, Úvod, Extra mycí cykly. Tam, kde je to vyžadováno, musí být před vydáním výsledků provedeno programování speciálního mytí/zamezení přenosu mezi vzorky (carry-over). Rozsah měření U/L (0,12-33,4 µkat/l) Vzorky s vyššími koncentracemi se vyšetřují pomocí funkce rerun. Vzorky ředíme 1:10 pomocí funkce rerun. Výsledky ze vzorků, naředěných funkcí rerun, jsou automaticky vynásobeny faktorem 10. Spodní detekční limit 7 U/L (0,12 µkat/l) Detekční limit představuje nejnižší měřitelnou hladinu analytu, kterou lze odlišit od nuly. Je vypočítána jako hodnota ležící 3 standardní odchylky od vzorku s nulovou hodnotou (nulový vzorek + 3 SD, přesnost v sérii, n = 30). Očekávané hodnoty Referenční hodnoty jsou silně závislé na skupině pacientů a specifickém klinickém stavu. Pro zdravé lidi dle Kleina a kol.: 11 CK Muži U/L (0,65-5,14 µkat/l) Ženy U/L (0,43-3,21 µkat/l) Konsenzuální hodnoty 12 CK Muži <190 U/L (<3,20 µkat/l) Ženy <170 U/L (<2,85 µkat/l) CK-MB Muži/ženy <28 U/L (<0,42 µkat/l) Infarkt myokardu: Velká pravděpodobnost poškození myokardu nastává, jestliže jsou splněny tři podmínky: 13 1 CK muži >190 U/L (3,17 µkat/l) CK ženy >167 U/L (2,79 µkat/l) 2 CK-MB >24 U/L (0,40 µkat/l) 3 Aktivita CK-MB představuje 6-25% celkové aktivity CK. Dle Tietze: 14 CK Dospělí muži >19 let U/L (0,33-3,34 µkat/l) Dospělé ženy >19 let U/L (0,33-2,01 µkat/l) Referenční rozmezí podle Kleina a kol. je založeno na hodnotě 95-tého percentilu skupiny zdravých osob (202 žen a 217 mužů) s vyloučením intenzivních atletických aktivit. Pro volbu vysoké citlivosti diagnostiky onemocnění srdce jsou doporučovány hodnoty udávané Tietzem. Nedostatek diagnostické specifičnosti může být nahrazen doplňujícím vyšetřením CK-MB a nebo troponinu T. Při podezření na infarkt myokardu by mělo být postupováno při diagnostice podle konsenzuálního dokumentu evropských a amerických kardiologů. 15 Jestliže jsou nalezené hodnoty pod uvedenými limity a přesto trvá podezření na infarkt, může se jednat o nový případ. Pak by bylo vhodné opakovat stanovení po 4 hodinách. CK kolísá podle fyzické aktivity a rasy zdravého jedince. 14,16 Každá laboratoř by si měla prověřit převoditelnost očekávaných hodnot na svou populaci pacientů a je-li to nutné, stanovit si vlastní referenční rozmezí. Specifické technické údaje Reprezentativní technické údaje pro analyzátory COBAS INTEGRA jsou uvedeny níže. Výsledky, získané v různých laboratořích, se mohou lišit. Přesnost Reprodukovatelnost byla stanovena analýzou lidských vzorků a kontrol podle interního postupu (v sérii n = 20, mezi sériemi n = 20). Byly získány následující výsledky: Level 1 Level 2 Průměr 239 U/L 1641 U/L (3,97 µkat/l) (27,2 µkat/l) VK v sérii 1,1% 1,2% VK mezi sériemi 1,9% 2,0% Porovnání metod Hodnoty CK ve vzorcích lidského séra a plazmy, získané na analyzátoru COBAS INTEGRA 700 s použitím reagencie COBAS INTEGRA Creatine Kinase, byly porovnány s výsledky stanovenými komerčně dostupnými reagenciemi pro CK na analyzátoru COBAS INTEGRA a alternativními biochemickými systémy. Vzorky byly měřeny v duplikátu. Hodnoty byly v rozmezí od 5 až 1330 U/L (0,09 až 22,6 µkat/l). Analyzátor COBAS INTEGRA Alternativní systém Počet vzorků (n) Korel. koeficient (r) 0,998 0,995 (r s ) 0,998 0,997 Lin. regrese y = 1,07x - 3 U/L y = 0,99x - 0 U/L Passing/Bablok 17 y = 1,07x - 2 U/L y = 0,99x + 2 U/L Odkazy 1. Lott JA, Stang JM. Serum enzymes and isoenzymes in the diagnosis and differential diagnosis of myocardial ischemia and necrosis. Clin Chem. 1980;26: Moss DW, Henderson AR, Kachmar JF. Enzymes. In: Tietz NW, ed. Fundamentals of Clinical Chemistry. 3rd ed. Philadelphia: WB Saunders 1987: Hørder M, Elser RC, Gerhardt W, Mathieu M, Sampson EJ. IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes. Part 7. IFCC method for creatine kinase (ATP: creatine N-phosphotransferase, EC ). J Int Fed Clin Chem 1989;1: Mathieu M, Bretaudiere JP, Galteau MM, Giudollet J, Lalegerie P, Bailly M, et al. Recommendations for measuring the catalytic concentration of creatine kinase in human serum at 30 C. Ann Biol Clin 1982;40: Hørder M, Magid E, Pitkänen E, Härkönen M, Strömme JH, Theodorsen L, et al. Recommended method for the determination of creatine kinase in blood modified by the inclusion of EDTA. Scand J Clin Lab Invest 1979;39: Bergmeyer HU, Breuer H, Büttner H, Delbrück A, Laue D, Pilz W, et al. Empfehlungen der Deutschen Gesellschaft für Klinische Chemie. Standard-Methode zur Bestimmung der Aktivität der Creatin-Kinase. J Clin Chem Clin Biochem 1977;15: Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. List of Analytes; Pre-analytical Variables. Brochure in: Samples: From the Patient to the Laboratory. Darmstadt: GIT Verlag Glick MR, Ryder KW, Jackson SA. Graphical Comparisons of Interferences in Clinical Chemistry Instrumentation. Clin Chem 1986;32: Report on the Symposium Drug effects in clinical chemistry methods, Breuer J, Eur J Clin Chem Clin Biochem 1996;34: Sonntag O, Scholer A. Drug interferences in clinical chemistry: recommendation of drugs and their , V 2 CS 3 / 4

4 Enzymy concentrations to be used in drug interference studies. Ann Clin Biochem 2001;38: Klein G, Berger A, Bertholf R et al. Abstract: Multicenter Evaluation of Liquid Reagents for CK, CK-MB and LDH with Determination of Reference Intervals on Hitachi Systems. Clin Chem 2001; 47:Suppl. A Thomas L, Müller M, Schumann G, Weidemann G et al. Consensus of DGKL and VDGH for interim reference intervals on enzymes in serum. J Lab Med 2005;29: Stein W. Strategie der klinischen-chemischen Diagnostik des frischen Myokardinfarktes. Med Welt 1985;36: Wu AHB editor.tietz Clinical Guide to Laboratory Tests, 4th edition. St. Louis (MO): Saunders Elsevier 2006: Myocardial Infarction Redefined - A Consensus Document of the Joint European Society of Cardiology/American College of Cardiology Committee for the Redefinition of Myocardial Infarction. Eur Heart J 2000;21: Black HR, Quallich H, Gareleck CB. Racial differences in serum creatine kinase levels. Am J Med 1986;81: Bablok W et al. A General Regression Procedure for Method Transformation. J Clin Chem Clin Biochem 1988;26: Významné doplňky nebo změny jsou označeny pruhem podél textu Roche Diagnostics. Roche Diagnostics GmbH, D Mannheim 4 / , V 2 CS

5 V2 Creatine Kinase Vyznačuje systémy cobas c, na kterých lze reagencie použít Informace pro objednání Systémy Roche/Hitachi cobas c Creatine Kinase cobas c 311 cobas c Tests Kat. č Systémové-ID Calibrator f.a.s. (12 x 3 ml) Kat. č Kód 401 Calibrator f.a.s. (12 x 3 ml, pro USA) Kat. č Kód 401 Precinorm U plus (10 x 3 ml) Kat. č Kód 300 Precinorm U plus (10 x 3 ml, pro USA) Kat. č Kód 300 PrecipathUplus(10x3mL) Kat.č Kód 301 Precipath U plus (10 x 3 ml, pro USA) Kat. č Kód 301 PrecinormU(20x5mL) Kat.č Kód 300 PrecipathU(20x5mL) Kat.č Kód 301 Precinorm CK-MB (4 x 3 ml) Kat. č Kód 320 Precipath CK-MB (4 x 3 ml, není dostupná v USA) Kat. č Kód 356 NaCl Diluent 9% (50 ml) Kat. č Systémové-ID Česky Systémové informace : ACN 057 Použití In vitro test pro kvantitativní stanovení kreatinkinázy (CK) v lidském séruaplazmě na systémech Roche/Hitachi cobas c. Souhrn 1,2,3,4,5,6 Enzym CK je dimer, složený z podjednotek jejichž název je odvozen od svalu M (muscle) a mozku B (brain). Tři identifikované izoenzymy jsou označovány: MM, MB a BB. Normální CK v séru je převážně izoenzym CK-MM. Zvýšené hladiny CK v séru provázejí onemocnění kosterního svalstva, především svalovou dystrofii. Frakce CK-MB se nalézá především ve tkáni myokardu a její přítomnost je obvykle zaznamenáva v průběhu 48 hodin po nástupu infarktu myokardu. Použití stanovení celkové CK a izoenzymu CK-MB v diagnostice infarktu myokardu je nejdůležitější aplikací stanovení kreatinkinázy v klinické chemii. Aktivita CK v séru také narůstá po cerebrální ischemii, akutní mozkové příhodě aúrazuhlavy. Standardizovaná metoda stanovení CK prostřednictvím "obrácené" reakce a aktivace NAC byla doporučena Německou společností klinické biochemie (DGKC) a Mezinárodní federací klinické biochemie (IFCC) v roce 1977 resp Toto stanovení se drží doporučení IFCC a DGKC, bylo ale optimalizováno pro výkon a stabilitu. Princip testu UV test Kreatin fosfát + ADP ATP + D-glukóza CK HK kreatin + ATP ADP + G6P G6PDH G6P + NADP + D-6-fosfoglukonát + NADPH + H + Rychlost vzniku NADPH je přímo úměrná katalytické aktivitě CK. Stanovujeseměřením nárůstu absorbance. ekvimolární množství NADPH a ATP je vytvářeno stejnou rychlostí. Fotometricky měřená rychlost vytvářenínadphje přímo úměrná aktivitě CK. Reagencie - pracovní roztoky R1 Imidazol: 58,0 mmol/l, ph 6,00; N-acetylcystein: 40,0 mmol/l; EDTA: 3,00 mmol/l; AMP: 10,0 mmol/l, diadenosin pentafosfát: 24,0 µmol/l; NADP + : 9,5 mmol/l, Mg 2+ : 20,0 mmol/l; D-glukóza: 40,0 mmol/l; stabilizátor; konzervans R2 EDTA: 3,00 mmol/l; ph 9,1, HK (kvasinky): 600 µkat/l; G6PDH (mikrobiální): 600 µkat/l; ADP: 12,0 mmol/l; kreatin fosfát: 180 mmol/l; N-metyldietanolamin: 69,0 mmol/l; konzervans, stabilizátor, detergent Bezpečnostní opatření a varování Pro diagnostické použití in vitro. Dodržujte běžná bezpečnostní opatření, nutná pro nakládání se všemi reagenciemi. Bezpečnostní listy jsou dostupné pro odborné uživatele na vyžádání. Likvidace všech odpadních materiálů musí probíhat v souladu s místními předpisy. Zacházení s reagenciemi Připraveno pro použití. Uskladnění a stabilita Doba skladování při 2-8 C: Při použití a v chlazeném prostoru analyzátoru: 8 týdnů NaCl Diluent 9% Doba skladování při 2-8 C: Při použití a v chlazeném prostoru analyzátoru: 12 týdnů Viz datum exspirace na štítku obalu cobas c Viz datum exspirace na štítku obalu cobas c Odběr vzorků apříprava Pro odběr apřípravu vzorků používejte vhodné zkumavky nebo odběrové nádobky. Pouzenížeuvedenévzorkybylytestoványajsouvhodnékestanovení. Sérum (bez hemolýzy). Sérum bez hemolýzy je vhodným vzorkem a doporučováno IFCC. Plazma (bez hemolýzy): Li-heparin plazma. Upozornění: Rozdíly v množství hemolýzy, vznikající přiodběru krve, mohou vést k odlišným výsledkům v séru a plazmě. Uvedené druhy vzorků byly testovány s vybranými typy odběrových zkumavek, které byly komerčně dostupné v té době, tzn.žedotestunebylyzařazeny všechny typy zkumavek všech výrobců. Systémy odběru vzorků různých výrobců mohou obsahovat různé materiály, které mohou mít v některých případech vliv na výsledky. Při zpracování vzorků v primárních zkumavkách (systémy odběru vzorků) dodržujte pokyny jejich výrobce. Vzorky obsahující precipitáty centrifugujte před provedením testu. Stabilita: 7 2dnypři C 7dnípři 2-8 C 4týdnypři (-15) (-25) C Dodávaný materiál Reagencie jsou uvedeny v části "Reagencie - pracovní roztoky". Potřebný materiál (ale nedodávaný se soupravou) Viz část "Informace pro objednání". Destilovaná voda Celkové vybavení laboratoře Stanovení Optimálního výkonu stanovení dosáhnete, budete-li dodržovat pokyny uvedené v dokumentaci pro analyzátory. Instrukce specifické pro jednotlivé analyzátory vyhledejte v návodu k použití. Výkon aplikací, které nejsou schváleny Roche, je bez záruky a musí být definován uživatelem , V 2 Česky 1 / 3 systémy cobas c

6 Creatine Kinase Aplikace pro sérum a plazmu cobas c 311 definice testu Typ stanovení Rate A Reakční čas / Body stanovení 10 / Vlnová délka (sub/main) 546/340 nm Jednotky Pipetování reagencie Diluent (H 2 O) R1 61 µl 38 µl R2 20 µl Množství vzorku Vzorek Ředění vzorku Vzorek Diluent (NaCl) Běžný 3µL Zmenšený 3µL 15µL 135µL Zvýšený 6µL cobas c 501 definice testu Typ stanovení Rate A Reakční čas / Body stanovení 10 / Vlnová délka (sub/main) 546/340 nm Jednotky Pipetování reagencie Diluent (H 2 O) R1 61 µl 38 µl R2 20 µl Množství vzorku Vzorek Ředění vzorku Vzorek Diluent (NaCl) Běžný 3µL Zmenšený 3µL 15µL 135µL Zvýšený 6µL Kalibrace Kalibrátory S1: H 2 O S2: C.f.a.s. Typ kalibrace Linear Frekvence kalibrace 2-bodová kalibrace - po změně šarže reagencií - a jestliže to vyžaduje proces kontroly kvality Návaznost: Tato metoda byla standardizována podle původní přípravy IFCC pomocí kalibrovaných pipet na manuálním fotometru, stanovením absolutních hodnot a specifické absorptivity substrátu, ε. 3 Kontrola kvality Ke kontrole kvality použijte kontrolní materiály uvedené v části "Informace pro objednání". Jiný vhodný kontrolní materiál může být rovněž použit. Kontrolní intervaly a meze by měly být uzpůsobeny pro každou laboratoř dle individuálních požadavků. Naměřené hodnoty by se měly pohybovat v požadovaných mezích. Každá laboratoř by měla mít vypracovaný postup pro případ, že hodnoty kontrol překročí požadované meze. Výpočet Systémy Roche/Hitachi cobas c automaticky vypočítá aktivitu analytu každého vzorku. Převodní faktor: U/L x 0,0167 = µkat/l Omezení - interference 8 Kritérium: Výtěžnost v rámci ±10% počáteční hodnoty při aktivitě kreatinkinázy 140 U/L (2,34 µkat/l). Žloutenka: Bez významných interferencí do hodnoty I indexu 60 (přibližná koncentrace konjugovaného a nekonjugovaného bilirubinu: 1026 µmol/l (60 mg/dl)). Hemolýza: Bez významných interferencí do hodnoty H indexu 200 (přibližná koncentrace hemoglobinu: 124 µmol/l (200 mg/dl)). Kontaminace erytrocyty zvýší výsledky, protože hladina analytu v erytrocytech je vyšší než v běžném séru. Úroveň interference může kolísat v závislosti na obsahu analytu v lyzovaných erytrocytech. Lipemie (Intralipid): Bez významných interferencí do hodnoty L indexu Mezi koncentrací triglyceridů a L indexem (odpovídá zákalu) je slabá korelace. Velmi lipemické vzorky (L index >1000) způsobují kolísání absorbance. Doporučujesenaředěný vzorek zpracovat automatickým rerunem. Léky: Při použití běžných panelů léků nebyla interference zaznamenána. 9 Ve vzácných případech může gamapatie, především u typu IgM (Waldenströmova makroglobulinémie), způsobit nespolehlivé výsledky. Pro diagnostické účely je vždy nezbytné používat výsledky ve spojení s chorobopisem pacienta, klinickým vyšetřením a ostatními nálezy. Zvláštní požadavky na mytí: Je nezbytné používat speciálních mycích cyklů při zpracovávání určitých kombinací testů v systémech Roche/Hitachi cobas c. Pro informace o kombinacích testu vyžadujících speciální cyklus mytí viz poslední verzi Seznamu vyhnutí se přenosu mezi vzorky (carry-over) a příručku pro obsluhu pro další pokyny. Rozsah měření U/L (0,12-33,4 µkat/l) Vzorky s vyššími aktivitami se vyšetřují pomocí funkce rerun. Naředění vzorků pomocí funkce rerun je ředěním 1:10. Výsledky ze vzorků naředěných funkcí rerun jsou automaticky vynásobeny faktorem 10. Spodní detekční limit 7 U/L (0,12 µkat/l) Spodní detekční limit představuje nejnižší měřitelnou hladinu analytu, kterou lze odlišit od nuly. Je vypočítána jako hodnota ležící 3 standardní odchylky nad nejnižším standardem (standard SD, přesnost v sérii, n = 21). Očekávané hodnoty Referenční intervaly jsou silně závislé na skupině pacientů a specifickém klinickém stavu. Pro zdravé lidi dle Kleina a kol.: 10 Muži U/L (0,65-5,14 µkat/l) Ženy U/L (0,43-3,21 µkat/l) Pro diagnostiku infarktu myokardu použitím kombinace CK a CK-MB(akivity) a představujícím konsenzuální hodnotu CK založenou na dlohodobé praxi: 11,12 1. CK muži >190 U/L (3,17 µkat/l)* CK ženy >167 U/L (2,79 µkat/l)* 2. CK-MB >24 U/L (0,40 µkat/l)* 3. Aktivita CK-MB představuje 6-25% celkové aktivity CK. *Vypočítáno s teplotním konverzním faktorem 2,38 (25-37 C) 13 Pro hospitalizované pacienty dle Tietze: 14 Muži U/L (0,63-2,91 µkat/l) Ženy U/L (0,43-2,34 µkat/l) Referenční rozmezí podle Kleina a kol. je založeno na hodnotě 95-tého percentiluskupinyzdravýchosob(202žena217mužů) s vyloučením intenzivních atletických aktivit. Pro volbu vysoké citlivosti diagnostiky onemocnění srdce jsou doporučovány hodnoty udávané Tietzem. Nedostatek diagnostické specifity může být nahrazen doplňujícím vyšetřením CK-MB a nebo troponinu T. Při podezření na infarkt myokardu by mělo být postupováno při diagnostice podle konsenzuálního dokumentu evropských a amerických kardiologů. 15 Jestliže jsou nalezené hodnoty pod uvedenými limity a přesto trvá podezření na infarkt, může se jednat a čerstvý případ. Pak by bylo vhodné opakovat stanovení po 4 hodinách. CK kolísá podle fyzické aktivity a rasy zdravého jedince. 14,16 Každá laboratoř by si měla prověřit převoditelnost očekávaných hodnot na svou populaci pacientů a je-li to nutné, stanovit si vlastní referenční rozmezí. Specifické technické údaje Údaje typické pro analyzátory jsou uvedeny níže. Výsledky získané vrůzných laboratořích se mohou lišit. Přesnost Reprodukovatelnost byla stanovena opakovanou analýzou lidských vzorků podle interního postupu (v sérii n = 21; celkem n = 63). Byly získány následující výsledky: systémy cobas c 2/ ,V2Česky

7 V2 Creatine Kinase Vsérii Průměr SD VK % Precinorm U 174 (2,91) 1 (0,02) 0,5 Precipath U 390 (6,51) 2 (0,03) 0,5 Lidské sérum 1 49,1 (0,82) 1,1 (0,02) 2,3 Lidské sérum (11,7) 5 (0,1) 0,7 Celkem Průměr SD VK % Precinorm U 164 (2,74) 3 (0,05) 1,8 Precipath U 350 (5,85) 6 (0,10) 1,8 Lidské sérum 3 90,3 (1,51) 3,0 (0,05) 3,3 Lidské sérum (5,16) 8 (0,13) 2,5 Porovnání metod Hodnoty Kreatinkinázy pro vzorky lidského séra a plazmy získané na analyzátoru Roche/Hitachi cobas c 501 (y) byly porovnány s hodnotami stanovenými použitím stejné reagencie na analyzátoru Roche/Hitachi 917 (x). Počet vzorků (n) = 252 Passing/Bablok 17 Lineární regrese y=1,000x+7,62u/l y=0,998x+6,27u/l τ =0,957 r=0,997 Aktivita vzorků byla v rozmezí 19 až 1817 U/L (0,32 až 30,3 µkat/l). 16. Black HR, Quallich H, Gareleck CB. Racial differences in serum creatine kinase levels. Am J Med 1986;81: Bablok W et al. A General Regression Procedure for Method Transformation. J Clin Chem Clin Biochem 1988;26: Významné doplňky nebo změny jsou označeny prouhou podél textu Roche Diagnostics Roche Diagnostics GmbH, D Mannheim Odkazy 1. Lott JA, Stang JM. Serum enzymes and isoenzymes in the diagnosis and differential diagnosis of myocardial ischemia and necrosis. Clin Chem 1980;26: Moss DW, Henderson AR, Kachmar JF. Enzymes. In: Tietz NW, ed. Fundamentals of Clinical Chemistry. 3 rd ed. Philadelphia: WB Saunders 1987: Schumann G et al. IFCC Primary Reference Procedures for the Measurement of Catalytic Activity Concentrations of Enzymes at 37 C - Part 2. Reference Procedures for the Measurement of Catalytic Concentrations of Creatine Kinase. Clin Chem Lab Med 2002;40(6): Mathieu M, Bretaudiere JP, Galteau MM, Giudollet J, Lalegerie P, Bailly M, et al. Recommendations for measuring the catalytic concentration of creatine kinase in human serum at 30 C. Ann Biol Clin 1982;40: Hørder M, Magid E, Pitkänen E, Härkönen M, Strömme JH, Theodorsen L, et al. Recommended method for the determination of creatine kinase in blood modified by the inclusion of EDTA. Scand J Clin Lab Invest 1979;39: Bergmeyer HU, Breuer H, Büttner H, Delbrück A, Laue D, Pilz W, et al. Empfehlungen der Deutschen Gesellschaft für Klinische Chemie. Standard-Methode zur Bestimmung der Aktivität der Creatin-Kinase. J Clin Chem Clin Biochem 1977;15: Use of Anticoagulants in Diagnostic Laboratory Investigations. WHO Publication WHO/DIL/LAB/99.1 Rev.2. Jan Glick MR, Ryder KW, Jackson SA. Graphical Comparisons of Interferences in Clinical Chemistry Instrumentation. Clin Chem 1986;32: Breuer J Report on the Symposium Drug Effects in Clinical Chemistry Methods. Eur J Clin Chem Clin Biochem 1996;34: Klein G, Berger A, Bertholf R et al. Abstract: Multicenter Evaluation of Liquid Reagents for CK, CK-MB and LDH with Determination of Reference Intervals on Hitachi Systems. Clin Chem 2001; 47:Suppl. A Stein W. Strategie der klinisch-chemischen Diagnostik des frischen Myokardinfarktes. Med Welt 1985;36: Thomas L, Müller M, Schumann G, Weidemann G et al. Consensus of DGKL and VDGH for interim reference intervals on enzymes in serum. J Lab Med 2005;29: Zawta B, Klein G, Bablok W. Temperature Conversion in Clinical Enzymology? Klin lab 1994;40: Tietz NW. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3 rd edition. Philadelphia, Pa: WB Saunders Co, 1995: Myocardial Infarction Redefined - A Consensus Document of the Joint European Society of Cardiology/American College of Cardiology Committee for the Redefinition of Myocardial Infarction. Eur Heart J 2000;21: , V 2 Česky 3 / 3 systémy cobas c